專利名稱：通過(guò)吸附和洗脫從乳清中選擇性地提取金屬蛋白質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從乳清中選擇性地提取某些蛋白質(zhì)的方法，即提取金屬蛋白質(zhì)，尤其是固定鐵的金屬蛋白質(zhì)，例如乳鐵傳遞蛋白，乳過(guò)氧化物酶和鐵傳遞蛋白。
眾所周知，蛋白質(zhì)有好幾千種。單是乳清就含有幾百種蛋白質(zhì)，其中有的是微量的金屬蛋白質(zhì)。
所謂“金屬蛋白質(zhì)”，是指對(duì)金屬特別是對(duì)鐵具有某種良好親和性的蛋白質(zhì)，現(xiàn)在研究這些蛋白質(zhì)的人愈來(lái)愈多了，不僅因?yàn)樗鼈兙哂袪I(yíng)養(yǎng)意義，特別是作為生物學(xué)方法為乳嬰提供鐵質(zhì)(例如乳鐵傳遞蛋白)，而且更重要的還在于它們具有藥理學(xué)特性，特別是作為抗菌劑使用時(shí)更是如此。
已知有幾種提取乳清蛋白質(zhì)的方法。
在文獻(xiàn)GB-A-871，541中曾建議一般采用離子交換樹脂接觸法來(lái)提取蛋白質(zhì)，樹脂是由一種惰性基質(zhì)(硅藻土)組成，比表面積大，包被一種交換劑凝膠(苯乙烯-二乙烯基苯共聚物)。這種陳舊的技術(shù)可以大量地提取蛋白質(zhì)，但沒(méi)有選擇性。
在文獻(xiàn)FR-A-2，505，615(相應(yīng)于US-A-4，436，658)中，曾建議對(duì)所需的乳鐵傳遞蛋白和乳過(guò)氧化物酶這些金屬蛋白質(zhì)有選擇地提取，辦法是先在一種堅(jiān)硬的固體支持物上，例如二氧化硅支持物上，在弱堿性介質(zhì)(PH7.9-8.5)中滲濾乳清，然后用一種酸性溶液洗脫被吸附的蛋白質(zhì)。這種方法所得結(jié)果極佳，因?yàn)檫@是選擇性提取。可以，此方法幾乎沒(méi)有得到發(fā)展，因?yàn)樘幚磉^(guò)的乳清立刻變成一種堿性物質(zhì)，要是以后不做任何昂貴的處理，那么動(dòng)物是無(wú)法食用這種堿性物質(zhì)的。
在文獻(xiàn)FR-A-2，359，634(相應(yīng)于US-A-4，100，149)中，曾建議使乳清與一種陽(yáng)離子交換樹脂接觸來(lái)提取蛋白質(zhì)，樹脂是由一種帶孔隙的無(wú)機(jī)支持物組成的，粒度適宜(圓粒二氧化硅)，包被一層網(wǎng)狀人工合成高分子膜，膜上帶有諸如羧基，磺基和膦基之類的用酸性官能團(tuán)表示的陽(yáng)離子交換基團(tuán)。這一系統(tǒng)能夠回收金屬蛋白質(zhì)，但上面結(jié)合著相當(dāng)大比例的免疫球蛋白(參閱US-A-4，100，149，本專利的實(shí)例3和下文的實(shí)例7)。此外，金屬蛋白質(zhì)的提取收率低，據(jù)認(rèn)為這些蛋白質(zhì)的純度也不夠，要是以后不作昂貴的加工處理，則在經(jīng)濟(jì)上是不足取的。
在文獻(xiàn)FR-A-2，319，299(相應(yīng)于GB-A-1，544，867和US-A-4，673，734)中，曾主張一般地提取據(jù)說(shuō)有好幾千種的蛋白質(zhì)，辦法是把它們與一種帶孔隙的無(wú)機(jī)支持物接觸，支持物表面包被一層胺化多糖生物高分子。使用這種系統(tǒng)來(lái)純化和分離諸如γ球蛋白、血紅蛋白、清蛋白之類的生物大分子會(huì)獲得極佳的結(jié)果，但用在乳清上卻是無(wú)效的，因?yàn)檫@時(shí)結(jié)合的只是蛋白質(zhì)的主要部分，而未結(jié)合那些諸如金屬蛋白質(zhì)之類的具有陽(yáng)離子特征的蛋白質(zhì)。因此這一技術(shù)不適合于從乳清中選擇性地分離這些金屬蛋白質(zhì)。
本發(fā)明改正了這些缺陷。它涉及一種從乳清中提取金屬蛋白質(zhì)的方法，特別是通過(guò)吸附在某些固體支持物上，然后再將已吸附的蛋白質(zhì)進(jìn)行洗脫，提取結(jié)合鐵的蛋白質(zhì)。更為特別的是，本發(fā)明涉及這樣一種方法，它具有選擇性、經(jīng)濟(jì)性，且便于操作，尤其是它能真正選擇性地和經(jīng)濟(jì)地從乳清中回收金屬蛋白質(zhì)，而不使乳清本身發(fā)生改變，就是說(shuō)使乳清本身完全仍可利用，特別是既可以作為營(yíng)養(yǎng)素，又可以作為能量供應(yīng)體用于動(dòng)物飼料，這些都是人們迄今尚未實(shí)現(xiàn)的。
通過(guò)把蛋白質(zhì)吸附于顆粒狀的，帶孔隙的一種無(wú)機(jī)支持物上，然后使用一些溶液洗脫如此吸附的蛋白質(zhì)，從乳清中提取這些金屬蛋白質(zhì)的這一方法，其特征在于所述顆粒表面包被了一層胺化多糖，該多糖具有酸性官能團(tuán)。
在以后的描述和權(quán)利要求書中，我們用“胺化多糖”來(lái)表示具有某種陽(yáng)離子特征的一種胺化的生物高分子，例如葡聚糖、淀粉、纖維素、瓊脂糖，以及其它糖類。根據(jù)本發(fā)明，這些生物高分子還具有一些酸性官能團(tuán)，特別是具有像羧基或磺基之類的官能團(tuán)。
換句話說(shuō)，本發(fā)明為了要從已知含有幾百種蛋白質(zhì)的乳清中特異提取金屬蛋白質(zhì)，主要在于選擇一種帶孔隙的無(wú)機(jī)支持物，例如二氧化硅，其主要特征是，一方面它不是用人工合成高分子包被的，而是用一種特定的生物高分子，即用一種胺化多糖包被的，而已知(FR-A-2，319，299)這一類型具有陽(yáng)離子特征的生物高分子是不適用于這類提取的;另一方面，它具有某些酸性基團(tuán)，而人們從另一文獻(xiàn)(FR-A-2，359，634)得知這些酸性基團(tuán)從工業(yè)方面看，所導(dǎo)致的選擇性極差，因?yàn)榛厥章屎图兌炔粔颉?br> 先有技術(shù)迫使人們一度放棄使用某些生物高分子，而本發(fā)明恰巧就在這時(shí)以完全意料不到的方式證實(shí)，利用特異性生物高分子，在這種情況下既然是通過(guò)酸性基團(tuán)鍵合的，那么它就不僅可以選擇性地提取乳清中的金屬蛋白質(zhì)，而且尤其還可以將此金屬蛋白質(zhì)與免疫球蛋白很好地分開，最后有可能使回收率和蛋白質(zhì)純度有明顯的改進(jìn)，且操作條件可與工業(yè)加工過(guò)程相適合。這一選擇尤其出人意料，事實(shí)上技術(shù)現(xiàn)狀絲毫未使專業(yè)人員產(chǎn)生把具有陽(yáng)離子特征的材料和另一種具有陰離子特征的材料結(jié)合起來(lái)的想法，因?yàn)檫@些特點(diǎn)從本質(zhì)上說(shuō)是對(duì)立的。
更出人意料的是，人們是用與酸性基團(tuán)鍵合的多糖來(lái)包被帶孔隙的二氧化硅顆粒才能成功，并且這是為了取得這樣一種選擇性。而已知具有酸性官能團(tuán)的這一類型的陽(yáng)離子交換樹脂據(jù)說(shuō)曾一度被拒絕(參閱上文述及的FR-A-2，359，654第1頁(yè)第17行及下文)作為陽(yáng)離子交換樹脂用于蛋白質(zhì)(根據(jù)失敗的技術(shù)范疇所作的預(yù)測(cè))。
因此，本發(fā)明在于一種獨(dú)具特色的選擇，以便在一個(gè)大類中進(jìn)行精確的選擇，這樣一種選擇本可以有利和經(jīng)濟(jì)地解決某一個(gè)問(wèn)題，降低制造成本，提高生產(chǎn)力，然而先有技術(shù)卻迫使人們放棄這樣的挑選。
本申請(qǐng)人以一種完全出乎人們意料的方式證實(shí)，選擇這些特異的帶孔隙的無(wú)機(jī)物顆?？梢砸环矫娲蟠蟾倪M(jìn)提取收率(兩倍以上);
另一方面也是更主要的方面，特異地，選擇性地并且是方便地從乳清中提取所要的金屬蛋白質(zhì)，同時(shí)又不使它與其它蛋白質(zhì)混合，而提取收率和純度也有很明顯的改進(jìn)(省時(shí)，省力，提高了生產(chǎn)率);
最后是，經(jīng)過(guò)如此處理過(guò)的乳清不受影響，仍完全適于食用，保存了全部的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
這種選擇還可以在接近中性PH的條件下操作，特別是可以在允許選擇性地和經(jīng)濟(jì)地收集所述的可溶狀態(tài)金屬蛋白質(zhì)的某些條件下操作。
可以認(rèn)為本發(fā)明中的選擇是先有技術(shù)的綜合。這些技術(shù)一方面是相互對(duì)立的，另一方面也是更重要的方面，已知某種化學(xué)產(chǎn)品不是它的不同組分的混合物。
實(shí)際操作時(shí)優(yōu)先使用包被無(wú)機(jī)物顆粒表面的多糖是葡聚糖或葡聚糖衍生物，例如一種胺化衍生物;
最好使用二乙胺乙基葡聚糖(DEAE)型的化合物，分子量至少為104道爾頓，最好為105-106道爾頓;
酸性基團(tuán)是羧基或磺基;這些酸性基團(tuán)最好通過(guò)二價(jià)烴基結(jié)合于糖類生物高分子上，尤其是通過(guò)諸如亞甲基或亞丙基之類的亞烷基結(jié)合于糖類生物高分子上。
帶孔隙的無(wú)機(jī)物顆粒優(yōu)先采用無(wú)機(jī)氧化物，例如最好采用二氧化硅球形顆粒，特別是經(jīng)過(guò)熱解獲得的二氧化硅球粒;
二氧化硅顆粒采用的是球粒，其特征為·粒度在10-1000μm之間，最好在100-300μm之間;
·比表面積在1-400m2/g之間，最好在15-200m2/g之間;
·平均孔徑在5-200nm之間;
在一個(gè)變通辦法中，處理乳清時(shí)，首先使它流經(jīng)上文談及的第一組型號(hào)的二氧化硅顆粒，此第一組型號(hào)含有弱陽(yáng)離子交換劑酸性基團(tuán)，特別是羧基，這是為了截留乳鐵傳遞蛋白;然后在第二階段將處理過(guò)的乳清分批地流經(jīng)第二組型號(hào)的二氧化硅顆粒，此第二組型號(hào)含有強(qiáng)陽(yáng)離子交換劑酸性基團(tuán)，特別是磺酸基團(tuán)，這是為了截留乳過(guò)氧化物酶;
乳清是一種新鮮乳清，就是說(shuō)，其PH值在6.3-6.6之間;在一個(gè)變通辦法中，可以使用一種酸性乳清，就是說(shuō)，其PH值在4.3-4.6之間。
用于實(shí)施本發(fā)明的方法，以及由此而顯示出的優(yōu)點(diǎn)都將在下文敘述的已實(shí)現(xiàn)的實(shí)例中一再得到重復(fù)，下列實(shí)例有示范意義，但無(wú)限制性，附圖
則簡(jiǎn)要表示了一種適于實(shí)施本發(fā)明方法的裝置。
實(shí)例一在貯罐(1)中盛入400升干酪制備過(guò)程中得到的新鮮乳清(2)(PH6.4)。輕輕攪拌使之均勻。按已知方法將此乳清重新冷卻至3-8℃之間。此乳清(2)約含有74.6mg/l乳鐵傳遞蛋白和50.5mg/l乳過(guò)氧化物酶。
在另一貯罐(3)中盛入20升第一種溶液(4)，此溶液約含有3g/l氯化鈉(PH中性)。
將4千克帶孔隙的二氧化硅球狀顆粒(6)裝入柱(5)，這種顆粒是IBF-Biotechnics公司銷售的，注冊(cè)商標(biāo)為“CM-SPHERODEX-LS”，粒度在100-300μm之間，乳徑約為100nm，比表面積約為25m2/g，孔壁包被一層薄薄的不留空隙的二乙胺乙基葡聚糖，它具有羧酸基團(tuán)。
在第一階段首先使貯罐(1)中的乳清(2)用4.5小時(shí)的時(shí)間流經(jīng)二氧化硅(6)。
把處理過(guò)的乳清(7)收集到另一個(gè)貯罐(8)中，然后把它泵入(9)中按常規(guī)法進(jìn)行濃縮和干燥處理。這種PH未發(fā)生變化的乳清仍然含有大部分蛋白質(zhì)。這樣便可以將它用于動(dòng)物飼料，作為營(yíng)養(yǎng)添加劑使用。
一旦所有的乳清(2)通過(guò)了二氧化硅(6)，開啟閥門(10)，以便將20升第一種中性PH的洗滌溶液(4)送至吸附柱中，用左上角編號(hào)(11)表示。
二氧化硅(6)已吸附乳清(2)中的所需的金屬蛋白質(zhì)。
一旦洗滌溶液(4)通過(guò)柱，即往貯罐(3)泵入15升第二種鹽溶液(12)，每升溶液含氯化鈉13克。
待到此第二種溶液(12)自由地流過(guò)吸附柱(11)，再開啟閥門，把洗滌液收集到水槽(14)中。隨后使用14升第三種鹽溶液(32)洗滌被吸附的二氧化硅(6，11)，此第三種鹽溶液來(lái)自貯罐(3)，每升溶液含氯化鈉45克。將它們回收在另一個(gè)水槽(15)內(nèi)。
將水槽(14)中的溶液移入到另一個(gè)水槽(20)內(nèi)，然后再?gòu)哪抢镆迫胍粋€(gè)超濾器(21)中，超濾器內(nèi)注入一部分透析水(31)以便減小礦物質(zhì)含量。使內(nèi)容物流經(jīng)有機(jī)膜(33)，膜孔徑相應(yīng)于104道爾頓，溫度在12-50℃之間。
然后將水槽(15)中的內(nèi)容物移入水槽(20)中，方法同上。
把得到的滲透液回收到(34)中，用于在其它洗脫步驟中重新利用。
截留物(22)在超濾器(21)的出口回收。借助一個(gè)閥門(23)可以將這些截留物移到
冷凍干燥器(24)，從中回收到大量所需的金屬蛋白質(zhì);
干燥塔(35)，從中也回收到大量所需的金屬蛋白質(zhì);
最好是一種分級(jí)分離裝置(25)，在IBFBIOTECHNIX公司出售的，注冊(cè)商標(biāo)為“SP-TRISACRYLLS”市售型號(hào)的有機(jī)凝膠上進(jìn)行離子交換層析，把所需的兩種蛋白質(zhì)進(jìn)行分級(jí)分離，它們分別是乳鐵傳遞蛋白(26)和乳過(guò)氧化物酶(27)。
隨后用來(lái)自貯罐(3)的水(29)洗滌二氧化硅(6)。經(jīng)過(guò)這次洗滌后，再進(jìn)行一次酸洗(1/10N鹽酸溶液)。最后通過(guò)用20升PH5.5的醋酸鈉溶液滲濾，使二氧化硅(6)再生。
于是，從初始的400升乳清(2)中得到一方面，幾乎400升乳清提取液，適合直接用于動(dòng)物飼料中，它保存有全部的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值;
另一方面·23·6克乳鐵傳遞蛋白，即79%的提取比率，其純度與此溶液中的其它蛋白質(zhì)比較，至少為80%;
·2·8克乳過(guò)氧化物酶，即14%的提取比率，其純度高于50%。
實(shí)例二重復(fù)實(shí)例一，在透析水(31)中加入2g/l用抗壞血酸穩(wěn)定的硫酸亞鐵銨。這樣便使所需的蛋白質(zhì)達(dá)到鐵飽和狀態(tài)，這就提高了蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)功效。
實(shí)例三重復(fù)實(shí)例一，并做下列變動(dòng)。
首先是不用二氧化硅(6)，而用注冊(cè)商標(biāo)為SP-SPHERODEX-LS的市售型號(hào)的帶孔隙二氧化硅顆粒，用量相同，顆粒壁包被一層二乙胺乙基葡聚糖，它是用磺基丙基鍵合的，其物理性質(zhì)接近實(shí)例一的顆粒。
處理306升來(lái)自干酪制備過(guò)程的新鮮乳清，PH為6.4，含乳鐵傳遞蛋白46.2mg/l和乳過(guò)氧化物酶44.7mg/l。把流量調(diào)至100升/小時(shí)。在貯罐(3)中盛入17升含氯化鈉3g/l的第一種溶液(4)。
洗脫液(12)由28升鹽溶液組成，氯化鈉濃度為15g/l，此洗脫液能回收1.23克乳鐵傳遞蛋白和0.6克乳過(guò)氧化物酶于(14)中。
第二種洗脫液(32)由27升濃度為45g/l氯化鈉的溶液組成，此洗脫液能回收2.7克乳鐵傳遞蛋白和5.1克乳過(guò)氧化物酶于(15)中。
最后，用另一種洗脫液(30)處理，它由21升濃度為60克/升的氯化鈉溶液組成。獲得4.0克乳鐵傳遞蛋白。
于是就能回收·7.93克乳鐵傳遞蛋白(收率為57%)·5.7克乳過(guò)氧化物酶(收率為42%)實(shí)例四重復(fù)實(shí)例一，不用干酪制造中的新鮮乳清，代替它的是198升PH4.5的酪蛋白生產(chǎn)中的酸性乳清，乳鐵傳遞蛋白的含量為84.0mg/l，乳過(guò)氧化物酶含量為37.0mg/l。
乳清在含羧基的二氧化硅顆粒上面的流量調(diào)至100升/小時(shí)。
同前，用20升氯化鈉濃度為3g/l的溶液(4)洗滌。
第一次洗脫(12)用20升氯化鈉濃度為15g/l的溶液進(jìn)行。獲得2.08克乳鐵傳遞蛋白和1.6克乳過(guò)氧化物酶。
第二次洗脫(32)用31升氯化鈉濃度為45g/l的溶液進(jìn)行。獲得3.7克乳鐵傳遞蛋白。
于是回收到·5.78克乳鐵傳遞蛋白(收率為35%)，·1.6克乳過(guò)氧化物酶(收率為22%)。
實(shí)例五重復(fù)實(shí)例三，用180升酪蛋白生產(chǎn)中的PH4.5的酸性乳清，乳鐵傳遞蛋白的含量為87mg/l，乳過(guò)氧物化酶含量為33mg/l。
含鹽洗滌液(4)的氯化鈉濃度為3g/l，共12升。
第一次洗脫(12)用38升氯化鈉濃度為15g/l的溶液進(jìn)行。獲得1.3克乳鐵傳遞蛋白和0.16克乳過(guò)氧化物酶。
第二次洗脫(32)用28升氯化鈉濃度為45g/l的溶液進(jìn)行。獲得3.0克乳鐵傳遞蛋白和3.9克乳過(guò)氧化物酶。
于是便回收到·4.3克乳鐵傳遞蛋白(收率為27%)，·4.06克乳過(guò)氧化物酶(收率為69%)。
實(shí)例六這個(gè)實(shí)例說(shuō)明按本發(fā)明所進(jìn)行囊恢執(zhí)?，荚~雇蝗榍辶骶礁齟鬧扛鮒骱恢植煌偷畝躉榪帕?，茲≡x渙艘徊惆坊嗵恰 第一個(gè)柱含有4千克與實(shí)例一相同的(羧基)CMSPHERODEXLS二氧化硅顆粒，用2.5小時(shí)滲濾250升干酪制造中的新鮮乳清，乳清中的乳鐵傳遞蛋白含量為81.5mg/l，乳過(guò)氧化物酶的含量為52.0mg/l。
把經(jīng)過(guò)如此處理的乳清盛入一個(gè)適當(dāng)?shù)馁A罐內(nèi)，然后用15升氯化鈉濃度為3g/l的水溶液(4)洗滌二氧化硅(6，11)。
接著先用15升氯化鈉濃度為13g/l的第一種溶液(12)洗脫，所收集的溶液中含1.87克乳過(guò)氧化物酶和0.85克乳鐵傳遞蛋白，然后再用16升氯化鈉濃度為45g/l的溶液進(jìn)行第二次洗脫(32)，這時(shí)就可以收集到19.0克乳鐵傳遞蛋白。
如此收集到·19.85克乳鐵傳遞蛋白(收率為98%)·1.87克的乳過(guò)氧化物酶(收率為14%)。
第二個(gè)柱盛有2.5千克與實(shí)例三相同的SPSPHERODEXLS顆粒(磺基丙基)，用此柱滲濾250升經(jīng)處理過(guò)的貯存乳清，乳清的流量為100升/小時(shí)。
這種乳清實(shí)際上不再含有乳鐵傳遞蛋白，但還含有乳過(guò)氧化物酶，含量為42.1mg/l。
經(jīng)過(guò)滲濾后，用20.5升氯化鈉濃度為3g/l的溶液洗柱。
然后再用37升氯化鈉濃度為15g/l的溶液洗脫，獲得1.7克乳過(guò)氧化物酶。
接著用18升氯化鈉濃度為45g/l的溶液洗脫，獲得9.3克乳過(guò)氧化物酶。
結(jié)果，第二次處理獲得11克乳過(guò)氧化物酶，幾乎等于初始乳清中的總量(每升含13克中就被洗脫出11+1.87＝12.87克)。
換言之，在兩種型號(hào)不同的二氧化硅顆粒上連續(xù)兩次乳清滲濾操作，有可能從初始乳清中提取到幾乎全部的乳鐵傳遞蛋白和乳過(guò)氧化物酶。
實(shí)例七重復(fù)實(shí)例一，不用“CM-SPHERODEX-LS”二氧化硅，代替它的是一種“親水性的”帶孔隙二氧化硅，其物理性質(zhì)實(shí)例一所示相同。在這種親水性帶孔隙的二氧化硅上包被著一層鍵合了羧甲基酸性基團(tuán)的人工合成丙烯聚合物，符合序言中提到的FR-A-2，359，634的技術(shù)。
用300升PH6.4的新鮮乳清流過(guò)2.5千克的這種二氧化硅，流量為75升/小時(shí)，乳清中乳鐵傳遞蛋白含量為50.2mg/l，乳過(guò)氧化物酶含量為33.8mg/l。
洗脫后，獲得一方面，300升乳清(9)，可用作供家畜食用的營(yíng)養(yǎng)素;
另一方面·120克各類蛋白質(zhì)，主要含有免疫球蛋白，·7.1克乳鐵傳遞蛋白(對(duì)照實(shí)例一79%的收率，此處為47%)，對(duì)照80%的純度，此處為不足40%，·0.9克乳過(guò)氧化物酶(對(duì)照14.9%的收率，此處為9%)，對(duì)照實(shí)例一50%的純度，此處的純度低于30%。
這樣，這種乳鐵傳遞蛋白和這種乳過(guò)氧物化酶便與比例頗大的免疫球蛋白混合在一起，因此，必須把它們分離開來(lái)。
換言之，這種先有技術(shù)用于金屬蛋白質(zhì)時(shí)，不僅收率明顯低，而且這些金屬蛋白質(zhì)的純度也較差，于是這就需要以后進(jìn)行一些純化操作。
實(shí)例八重復(fù)實(shí)例一，使用與實(shí)例1相同的帶孔隙二氧化硅，但包被的是IBF-BIOTECHNICS公司銷售的二乙胺乙基葡聚糖膜，商品名為DEAESPHERODEX-LS(專利US-A-4，673，734的技術(shù))。
乳清中的主要蛋白質(zhì)部分被結(jié)合，不包括所要的乳鐵傳遞蛋白和乳過(guò)氧化物酶，它們是與乳清(9)一起流走的。
最后這兩個(gè)實(shí)例很好地說(shuō)明，按本發(fā)明所做的選擇有出人意料的效果。
利用包被了一種胺化的但沒(méi)有被鍵合的生物高分子，就得不到所需結(jié)果，即不能特異地提取乳鐵傳遞蛋白和乳過(guò)氧化物酶。
這樣，二氧化硅球粒雖然相同，但這里用的球粒上面包被了一層具有酸性官能團(tuán)的人工合成高分子，使用這些二氧化硅球粒就可以收集到金屬蛋白質(zhì)，但結(jié)合有其它蛋白質(zhì)，收率和純度也都明顯不夠(參閱上文實(shí)例七)。
本發(fā)明的提取乳鐵傳遞蛋白和乳過(guò)氧化物酶的方法，與迄今所提出的方法是不同的，其區(qū)別主要表現(xiàn)在選擇性地提取這兩種蛋白質(zhì)，這是一直難以提取的，因?yàn)檫@類蛋白質(zhì)的數(shù)量極少，而且是與其它蛋白質(zhì)混合在一起的;
操作簡(jiǎn)便;
提取收率特別高，與先有技術(shù)收率相比，差不多高出兩倍(主要參閱實(shí)例七和八)。
提取到的金屬蛋白質(zhì)純度高，無(wú)疑這是由于提取的特異性較高。
這樣回收的金屬蛋白質(zhì)，即主要是如乳鐵傳遞蛋白和乳過(guò)氧化物酶這樣的結(jié)合鐵的金屬蛋白質(zhì)，可以成功地用于已知的應(yīng)用中，例如動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)，以保護(hù)消化道和起到生長(zhǎng)因子的作用;
獸醫(yī)領(lǐng)域，有抗腸道和乳房感染的活性;
人類飲食和營(yíng)養(yǎng)，主要起運(yùn)載鐵的作用;
制藥領(lǐng)域眼科學(xué)、胃腸學(xué)、牙科學(xué)、皮膚病學(xué)，婦科學(xué)等。
權(quán)利要求
1.從乳清中選擇性地提取金屬蛋白質(zhì)的方法，在一種粒狀帶孔隙無(wú)機(jī)支持物上進(jìn)行吸附，然后用一些溶液洗脫所吸附的金屬蛋白質(zhì)，其特征在于，所述顆粒的壁的表面包被了一層具有酸性官能團(tuán)的胺化多糖。
2.權(quán)利要求1的方法，其特征在于包被無(wú)機(jī)顆粒壁的多糖生物高分子是葡聚糖。
3.權(quán)利要求2的方法，其特征在于葡聚糖是二乙胺乙基葡聚糖。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其特征在于酸性基團(tuán)是羧基或磺酸基。
5.權(quán)利要求4的方法，其特征在于酸性基團(tuán)是通過(guò)二價(jià)烴基結(jié)合在糖類生物高分子上。
6.權(quán)利要求5的方法，其特征在于二價(jià)烴基是亞烷基。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其特征在于帶孔隙無(wú)機(jī)顆粒是二氧化硅球粒，其性質(zhì)如下粒度在10-1000μm之間;比表面積在1-400m2/g之間;平均孔徑在5-200nm之間。
8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的方法，其特征在于，處理乳清，首先使之流經(jīng)二氧化硅顆粒，顆粒壁表面包被了一層具有羧基的胺化多糖;其特征還在于經(jīng)過(guò)如此處理過(guò)的乳清，批量地流經(jīng)二氧化硅顆粒，粒壁表面包被了另一層表面具有磺酸基的胺化多糖。
9.權(quán)利要求1的方法，其特征在于乳清是新鮮乳清。
10.實(shí)施權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的方法獲得的乳鐵傳遞蛋白和乳過(guò)氧化物酶。
全文摘要
從乳清中選擇性提取金屬蛋白質(zhì)的方法，包括在顆粒狀無(wú)機(jī)支持物上進(jìn)行吸附，然后用某些溶液洗脫所吸附的金屬蛋白質(zhì)，其特征在于，所述顆粒的壁在其表面包被了一層具有酸性官能團(tuán)的胺化的多糖。
文檔編號(hào)A23L1/08GK1030005SQ8810362
公開日1989年1月4日 申請(qǐng)日期1988年6月17日 優(yōu)先權(quán)日1987年6月19日
發(fā)明者雅克·法蘭金內(nèi), 安德烈·佩羅澤, 弗朗索瓦·斯普林 申請(qǐng)人:昂特勒芒股份有限公司, 埃爾夫阿奎坦國(guó)家石油公司