專利名稱:一種由纖維素酶和碳酸氫鈉組成的飼料添加劑、飼料及其應(yīng)用和雞球蟲病活卵囊疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由纖維素酶和碳酸氫鈉組成的飼料添加剤、飼料及其應(yīng)用、和雞球蟲病活卵囊疫苗。
背景技術(shù)：
雞球蟲病是ー種原生動物寄生蟲病，由柔嫩艾美爾球蟲、堆形艾美爾球蟲、巨型艾美爾球蟲、毒害艾美爾球蟲、和緩艾美爾球蟲、布氏艾美爾球蟲、早熟艾美爾球蟲的ー種或ー種以上引起。它們在雞的腸道各部位寄生，引起腸道的炎癥、出血和雞的死亡，給養(yǎng)雞業(yè) 造成巨大的經(jīng)濟損失。
長期以來，該病的防治以藥物為主。由于藥物殘留影響食品安全和人類健康，加上球蟲對藥物容易產(chǎn)生抗藥性，該病的防治越來越依靠免疫手段。
目前使用的雞球蟲病疫苗主要是活卵囊疫苗，例如先靈葆雅PARAC0X和C0CCIVAC、加拿大維泰克的IMMUC0X、梅里亞的LIVAC0X，其中C0CCIVAC和IMMUC0X為強毒
活卵囊疫苗。
在制造雞球蟲病活卵囊疫苗時，需要將活的疫苗卵囊從雞的糞便中分離出來，得到相對純凈的疫苗液。已知固形物的存在影響雞球蟲活卵囊疫苗的外觀和內(nèi)在質(zhì) 量，現(xiàn)有的技術(shù)主要采用過濾、離心、超濾等手段除去疫苗液中的固形物。如公開號為CN102174408A的專利所描述的方法。由于固形物在比重和大小等方面比較接近疫苗卵嚢，因而現(xiàn)有技術(shù)不容易將固形物全部除去，如何進ー步除去疫苗液中的固形物，是ー個需要解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種由纖維素酶和碳酸氫鈉組成的飼料添加劑、飼料及其應(yīng)用、和雞球蟲病活卵囊疫苗。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案
一種飼料添加剤，它由纖維素酶和碳酸氫鈉組成。
所述碳酸氫鈉與纖維素酶的比例為I克碳酸氫鈉20U的纖維素酶。
纖維素酶和碳酸氫鈉在雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中減少疫苗液中固形物含量的應(yīng)用。
添加的碳酸氫鈉與纖維素酶的比例為I克碳酸氫鈉20U的纖維素酶。
纖維素酶和碳酸氫鈉在制備雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中用于減少疫苗液中固形物含量的飼料中的應(yīng)用。
所述纖維素酶酶的添加量為200 —1000 U/kg飼料；添加的碳酸氫鈉的數(shù)量為每公斤飼料10—50克。添加的碳酸氫鈉與纖維素酶的比例為I克碳酸氫鈉20U的纖維素酶。
一種用于雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中的飼料，制備疫苗所用雞的飼料中包括纖維素酶和碳酸氫鈉。
所述纖維素酶酶的添加量為200—1000 U/kg飼料。添加的碳酸氫鈉的數(shù)量為每公斤飼料10 — 50克。碳酸氫鈉與纖維素酶的比例為I克碳酸氫鈉20U的纖維素酶。
所述纖維素酶為經(jīng)過包被的飼料纖維素酶。上述的飼料在雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中減少疫苗液中固形物含量的應(yīng)用。
一種雞球蟲病活卵囊疫苗，其是以下步驟制成的
(1)配制飼料在常規(guī)雞飼料中添加纖維素酶和碳酸氫鈉，所述纖維素酶酶的添加量為200—1000 U/kg飼料。添加的碳酸氫鈉的數(shù)量為每公斤飼料10 — 50克。碳酸氫鈉與纖維素酶的比例為I克碳酸氫鈉20U的纖維素酶；
(2)飼喂和接種將配制的飼料飼喂待接種雞，自由采食；且給待接種雞接種球蟲弱毒株孢子化卵囊；
(3)收糞和卵囊分離接種后96小時，收集雞的糞便，經(jīng)60目篩過濾所收集雞糞，得濾液；離心濾液得到沉淀物；加鹽水到該沉淀，攪拌均勻并離心，收集表面部分鹽水，其中含有大量卵囊；收集表層鹽水后，向其中加入10倍體積的水，攪勻后離心，得到沉淀；向沉淀中再加入水并攪拌離心，如此3次，得到最終沉淀物，加適量水到最終沉淀物中得到疫苗液。
為了最大限度地減少疫苗液中的固形物，現(xiàn)有技術(shù)主要采用過濾、離心、沉淀、鹽水漂浮、超濾等方法，使用設(shè)備包括振動篩、離心機、超濾機等。本發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)，給制造疫苗所用雞的飼料中添加纖維素酶和碳酸氫鈉可以進ー步減少疫苗液中固形物的含量，該飼料用于疫苗生產(chǎn)可提高疫苗質(zhì)量。上述的纖維素酶可以是單ー的纖維素酶，或是纖維素酶與其他酶的復(fù)合物。我們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)酶的添加量為10，100，400，500，1000，5000 U/kg飼料時，添加的碳酸氫鈉的數(shù)量為每公斤飼料10 — 50克時，最終制得的疫苗液中的固形物依次降低。其中添加200— 1000U/kg飼料，能降低固形物20— 25%。
本發(fā)明的有益效果是該酶和碳酸氫鈉的添加能減少疫苗中固形物的含量。
具體實施方式
下面通過具體實例對本發(fā)明進行進ー步的闡述，應(yīng)該說明的是，下述說明僅是為了解釋本發(fā)明，并不對其內(nèi)容進行限定。
實施例I :
配制兩種飼料。玉米75公斤、大豆柏20公斤、預(yù)混料5公斤，混合均勻，此為飼料甲。飼料こ的配方與甲相同，但另外添加了纖維素酶，添加量為每公斤飼料200U，另外添加碳酸氫鈉的量為姆公斤飼料10克。
I、飼喂和接種。21日齡蛋雞200只，雌雄各半，均分為甲、こ兩組。甲組喂飼料甲，こ組喂飼料こ。自由采食。給甲、こ兩組雞每只接種堆形艾美爾球蟲弱毒株孢子化卵囊50000 個。
2、收糞和卵囊分離。(I)接種后96小時，收集甲、こ兩組雞的糞便各1000克。(2)經(jīng)60目篩過濾所收集甲、こ雞糞，得濾液各10000毫升。(3)離心甲、こ濾液得到甲、こ沉淀物。(4)加鹽水到該甲、こ沉淀，攪拌均勻并離心,收集表面部分鹽水,其中含有大量卵囊。(5)收集甲、こ兩種表層鹽水后，向其中加入10倍體積的水，攪勻后離心并去掉上清液，得到甲、こ兩種沉淀。向沉淀中再加入水并攪拌離心并去掉上清液,如此重復(fù)3次(指加水、攪拌離心并掉上清液的步驟)，得到甲、こ兩種最終沉淀物，加適量水到最終沉淀物中得到甲、こ兩種疫苗液各1000 ■升。
3、疫苗液中固形物的測定。將甲、こ疫苗液搖勻，各取100毫升離心，得到離心沉淀物，烘干沉淀物并稱重，所稱重量即為疫苗液中固形物的重量。結(jié)果，甲疫苗液100毫升含固形物0. 44克，こ疫苗液100毫升含固形物0. 35克。
4、卵囊含量和活力測定。用血球計數(shù)板計算甲、こ兩種疫苗液中卵囊總數(shù)。將兩種疫苗液在28度通氣培養(yǎng)48小時，測量兩種疫苗液的孢子化率。喂甲種飼料得到的疫苗共有卵囊9870萬個，孢子化率為95% ;喂こ種飼料得到卵囊10000萬個，孢子化率為96%。
5、結(jié)論
在飼料中添加纖維素酶，能降低疫苗液中固形物的含量，不影響收獲卵囊的數(shù)量和活力。
實施例2
配制兩種飼料。玉米75公斤、大豆柏18公斤、魚粉2公斤、預(yù)混料5公斤，混合均勻，此為飼料甲。飼料こ的配方與甲相同，但另外添加了纖維素酶和碳酸氫鈉，添加量為每公斤飼料纖維素酶1000U，碳酸氫鈉的量為每公斤飼料50克。
I、飼喂和接種。21日齡蛋雞200只，雌雄各半，均分為甲、こ兩組。甲組喂飼料甲，こ組喂飼料こ。自由采食。給甲、こ兩組雞每只接種堆形艾美爾球蟲弱毒株孢子化卵囊50000 個。
2、收糞和卵囊分離。(I)接種后96小時，收集甲、こ兩組雞的糞便各1000克。(2)經(jīng)60目篩過濾所收集甲、こ雞糞，得濾液各10000毫升。(3)離心甲、こ濾液得到甲、こ沉淀物。(4)加鹽水到該甲、こ沉淀，攪拌均勻并離心,收集表面部分鹽水,其中含有大量卵囊。(5)收集甲、こ兩種表層鹽水后，向其中加入10倍體積的水，攪勻后離心并去掉上清液，得到甲、こ兩種沉淀。向沉淀中再加入水并攪拌離心并去掉上清液，如此重復(fù)3次，得到甲、乙兩種最終沉淀物，加適量水到最終沉淀物中得到甲、こ兩種疫苗液各1000毫升。
3、疫苗液中固形物的測定。將甲、こ疫苗液搖勻，各取100毫升離心，得到離心沉淀物，烘干沉淀物并稱重，所稱重量即為疫苗液中固形物的重量。結(jié)果，甲疫苗液100毫升含固形物0. 49克，こ疫苗液100毫升含固形物0. 33克。
4、卵囊含量和活力測定。用血球計數(shù)板計算甲、こ兩種疫苗液中卵囊總數(shù)。將兩種疫苗液在28度通氣培養(yǎng)48小時，測量兩種疫苗液的孢子化率。喂甲種飼料得到的疫苗共有卵囊9770萬個，孢子化率為95% ;喂こ種飼料得到卵囊10500萬個，孢子化率為96%。
5、結(jié)論
在飼料中添加纖維素酶，能降低疫苗液中固形物的含量，不影響收獲卵囊的數(shù)量和活力。
實施該專利方法，舉例3
配制兩種飼料。玉米75公斤、大豆柏18公斤、花生柏2公斤、預(yù)混料5公斤，混合均勻，此為飼料甲。飼料こ的配方與甲相同，但另外添加了纖維素酶，添加量為每公斤飼料600U，另外添加碳酸氫鈉的量為每公斤飼料30克。
I、飼喂和接種。21日齡蛋雞200只，雌雄各半，均分為甲、こ兩組。甲組喂飼料甲，こ組喂飼料こ。自由采食。給甲こ兩組雞每只接種堆形艾美爾球蟲弱毒株孢子化卵囊10000個。
2、收糞和卵囊分離。(I)接種后96小時，收集甲、こ兩組雞的糞便各1000克。(2)經(jīng)60目篩過濾所收集甲、こ雞糞，得濾液各10000毫升。(3)離心甲、こ濾液得到甲、こ沉淀物。(4)加鹽水到該甲、こ沉淀，攪拌均勻并離心,收集表面部分鹽水,其中含有大量卵囊。
(5)收集甲、こ兩種表層鹽水后，向其中加入10倍體積的水，攪勻后離心并去掉上清液，得到甲、こ兩種沉淀。向沉淀中再加入水并攪拌離心并去掉上清液，如此重復(fù)3次。最終得到甲、こ兩種最終沉淀物，加適量水到最終沉淀物中得到甲、こ兩種疫苗液各1000毫升。
3、疫苗液中固形物的測定。將甲、こ疫苗液搖勻，各取100毫升離心，得到離心沉淀物，烘干沉淀物并稱重，所稱重量即為疫苗液中固形物的重量。結(jié)果，甲疫苗液100毫升含固形物0. 49克，こ疫苗液100毫升含固形物0. 36克。
4、卵囊含量和活力測定。用血球計數(shù)板計算甲、こ兩種疫苗液中卵囊總數(shù)。將兩種疫苗液在28度通氣培養(yǎng)48小時，測量兩種疫苗液的孢子化率。喂甲種飼料得到的疫苗共有卵囊9056萬個，孢子化率為93% ;喂こ種飼料得到卵囊11000萬個，孢子化率為94%。
5、結(jié)論
在飼料中添加纖維素酶，能降低疫苗液中固形物的含量，不影響收獲卵囊的數(shù)量和活
力。、
權(quán)利要求
1.一種飼料添加剤，它由纖維素酶和碳酸氫鈉組成。
2.如權(quán)利要求
I所述的飼料添加剤，其特征是所述碳酸氫鈉與纖維素酶的比例為I克碳酸氫鈉20U的纖維素酶。
3.纖維素酶和碳酸氫鈉在雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中減少疫苗液中固形物含量的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求
3所述的應(yīng)用，其特征是，所述碳酸氫鈉與纖維素酶的比例為I克碳酸氫鈉20U的纖維素酶。
5.纖維素酶和碳酸氫鈉在制備雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中用于減少疫苗液中固形物含量的飼料中的應(yīng)用，所述纖維素酶酶的添加量為200 —1000 U/kg飼料；添加的碳酸氫鈉的數(shù)量為每公斤飼料10 — 50克，碳酸氫鈉與纖維素酶的比例為I克碳酸氫鈉20U 的纖維素酶。
6.一種用于雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中的飼料，其特征是，制備疫苗所用雞的飼料中包括纖維素酶和碳酸氫鈉。
7.如權(quán)利要求
6所述的飼料，其特征是，所述纖維素酶酶的添加量為200—1000 U/kg飼料；添加的碳酸氫鈉的數(shù)量為每公斤飼料10 — 50克，碳酸氫鈉與纖維素酶的比例為I克碳酸氫鈉20U的纖維素酶。
8.如權(quán)利要求
7所述的飼料，其特征是，所述纖維素酶為經(jīng)過包被的飼料纖維素酶。
9.權(quán)利要求
6-8任一項所述的飼料在雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中減少疫苗液中固形物含量的應(yīng)用。
10.一種雞球蟲病活卵囊疫苗，其特征是，其是以下步驟制成的 (1)配制飼料在常規(guī)雞飼料中添加纖維素酶和碳酸氫鈉，所述纖維素酶酶的添加量為200—1000 U/kg飼料；添加的碳酸氫鈉的數(shù)量為每公斤飼料10—50克，碳酸氫鈉與纖維素酶的比例為I克碳酸氫鈉20U的纖維素酶； (2)飼喂和接種將配制的飼料飼喂待接種雞，自由采食；且給待接種雞接種球蟲孢子化卵囊； (3)收糞和卵囊分離接種后96小時，收集雞的糞便，經(jīng)60目篩過濾所收集雞糞，得濾液；離心濾液得到沉淀物；加鹽水到該沉淀，攪拌均勻并離心，收集表面部分鹽水，其中含有大量卵囊；收集表層鹽水后，向其中加入10倍體積的水，攪勻后離心并去掉上清液，得到沉淀；向沉淀中再加入水并攪拌離心并去掉上清液,如此3次，得到最終沉淀物，加適量水到最終沉淀物中得到疫苗液。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種由纖維素酶和碳酸氫鈉組成的飼料添加劑、飼料及其應(yīng)用、和雞球蟲病活卵囊疫苗。飼料添加劑由纖維素酶和碳酸氫鈉組成。纖維素酶和碳酸氫鈉在雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中減少疫苗液中固形物含量的應(yīng)用。纖維素酶和碳酸氫鈉在制備雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中用于減少疫苗液中固形物含量的飼料中的應(yīng)用。用于雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中的飼料。上述的飼料在雞球蟲病活卵囊疫苗制備過程中減少疫苗液中固形物含量的應(yīng)用。雞球蟲病活卵囊疫苗，其是以下步驟制成的配制飼料在常規(guī)雞飼料中添加纖維素酶和碳酸氫鈉；飼喂和接種；收糞和卵囊分離。本發(fā)明的有益效果是該酶和碳酸氫鈉的添加能減少疫苗中固形物的含量。
文檔編號A23K1/18GKCN102726617SQ201210229824
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月5日
發(fā)明者王江青, 郝言芝 申請人:煙臺青大生物制藥有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan