本發(fā)明涉及蜂膠的提取分離技術(shù)領(lǐng)域，特指采用某些烷烴與醚類物質(zhì)按照一定比例混合而成的亞臨界多元混合溶劑對(duì)蜂膠原料進(jìn)行萃取，以獲得高品質(zhì)蜂膠的方法。

背景技術(shù)：

蜂膠是由蜜蜂采集的植物樹(shù)干或幼芽上的樹(shù)脂狀分泌物，再經(jīng)過(guò)蜜蜂自身的反復(fù)咀嚼和加工，混合其上顎腺分泌物和一定比例的花粉、蜂蠟轉(zhuǎn)化而成的具有芳香氣味的天然固體膠狀物，其中含有大量對(duì)人體有益的黃酮類物質(zhì)和萜烯類物質(zhì)，是一種天然綠色保健品。然而蜂膠資源卻十分稀缺，據(jù)統(tǒng)計(jì)，一個(gè)數(shù)量為5～6萬(wàn)只的蜂群一年大約生產(chǎn)蜂膠100～150g，而我國(guó)平均年產(chǎn)蜂膠僅300t左右，因此，蜂膠被譽(yù)為“紫色黃金”。近年來(lái)，隨著我國(guó)居民生活水平提高和保健意識(shí)增強(qiáng)，高品質(zhì)的蜂膠產(chǎn)品需求量也逐年增加，因而，高品質(zhì)蜂膠的高效加工和利用就極為關(guān)鍵。蜂膠富含黃酮類、酚酸、酚酸酯、萜烯類化合物等活性成分，具有抗菌、消炎、止痛、降血脂、促進(jìn)組織再生和增強(qiáng)機(jī)體免疫能力等功能作用。因此，上述活性成分的提取率和加工保留率，是選擇加工技術(shù)的依據(jù)，而其中的黃酮類物質(zhì)含量常被作為表征蜂膠品質(zhì)優(yōu)劣的特征指標(biāo)。

目前蜂膠的生產(chǎn)方法主要有：乙醇浸提法(包括超聲波或微波輔助乙醇提取)和超臨界co2萃取法。

乙醇浸提法因其工藝簡(jiǎn)單、黃酮類物質(zhì)萃取率高而被廣泛應(yīng)用，一般工業(yè)化蜂膠提純均采用該方法。其工藝為將冷凍粉碎過(guò)的蜂膠原料投入浸拌料缸，加入一定濃度的乙醇，間歇式攪拌，浸泡一定時(shí)間后，靜置抽提上清液，離心機(jī)分離濾渣，濾液和上清夜合并過(guò)濾，然后濃縮。對(duì)于成熟的蜂膠乙醇提取加工技術(shù)，尚存在以下三點(diǎn)不足之處：

第一，浸提時(shí)間長(zhǎng)，生產(chǎn)效率低。cn200910169045.0公開(kāi)了一種蜂膠提取工藝，即為不同濃度乙醇的階段式浸提工藝，該工藝浸提時(shí)間長(zhǎng)達(dá)288h(12天)，生產(chǎn)效率很低。cn201510896833.5也公開(kāi)了一種蜂膠乙醇提取液的制備方法，該方法重點(diǎn)研究了提取工藝對(duì)黃酮的影響，雖提取時(shí)間有所優(yōu)化，但仍是一般的乙醇提取工藝，無(wú)技術(shù)難點(diǎn)的突破。為了克服浸出時(shí)間長(zhǎng)的缺點(diǎn)，雖有超聲波(cn201210227678.4)或微波輔助提取等手段，然而超聲波或微波僅限于實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)研究，目前并不適于工業(yè)化應(yīng)用。

第二，現(xiàn)有生產(chǎn)工藝過(guò)程中存在產(chǎn)品活性成分損失和萃取不徹底的風(fēng)險(xiǎn)。在酒精減壓蒸發(fā)或常壓蒸發(fā)時(shí)，芳香物質(zhì)、揮發(fā)油等蜂膠的重要成分易散失，或高溫處理容易破壞蜂膠中的熱敏性活性成分，降低其生理功效和產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。而較高的提取率依靠較長(zhǎng)的浸提時(shí)間來(lái)保障這以技術(shù)壁壘，也使得有效成分萃取不完全，易造成資源的浪費(fèi)。

第三，生產(chǎn)的蜂膠產(chǎn)品，色澤較黑(可能提取或回收乙醇期間某些成分發(fā)生氧化)，口味較差。cn201110162683.7公開(kāi)了一種含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其工藝為先乙醇提取，接著活性炭+活性白土脫色，然后酸化再提取，最后濃縮。雖產(chǎn)品品質(zhì)有所改善，但整個(gè)工藝繁瑣，且精制損失大，產(chǎn)品產(chǎn)率低，生產(chǎn)成本高。精制后的產(chǎn)品雖黃酮含量高但是總黃酮含量?jī)H是一個(gè)標(biāo)志性成分指標(biāo)，除黃酮外蜂膠還含有萜烯類和酯類等多種功效成分，總黃酮含量高并不意味其它功效成分也同比例提高，蜂膠的保健作用是多種功效成分共同作用的結(jié)果，并非只是黃酮類物質(zhì)在起作用，因此在常規(guī)蜂膠產(chǎn)品生產(chǎn)應(yīng)用方面仍需要權(quán)衡。

雖然乙醇浸提生產(chǎn)工藝存在上述缺點(diǎn)，但蜂膠國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的“蜂膠乙醇提取物ethanolextractedpropolis(乙醇萃取蜂膠產(chǎn)品后得到的物質(zhì))含量須≥95％”，這也使得蜂膠生產(chǎn)廠家一直未放棄采用該方法。

隨著蜂膠提取技術(shù)研究的發(fā)展，超臨界co2萃取技術(shù)(如cn201010145448.4一種萃取提純?cè)瓚B(tài)黃色蜂膠的方法，cn201110330992.0超臨界萃取蜂膠的方法，)逐漸被應(yīng)用到蜂膠生產(chǎn)領(lǐng)域。該方法被譽(yù)為一種“綠色、可持續(xù)發(fā)展技術(shù)”，研究表明在蜂膠有效成分的提取與分離的某些方面展現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。然而，蜂膠的超臨界co2流體萃取在工業(yè)化應(yīng)用中仍存在諸多問(wèn)題，具體如下：

第一，由于蜂膠毛料特有的質(zhì)地，超臨界co2加工工藝提取效率低。蜂膠毛料具有低溫硬脆、高溫粘稠的質(zhì)地特異性，在萃取過(guò)程中，溫度的升高使得原料產(chǎn)生板結(jié)，造成有效成分與超臨界co2流體接觸面較小，因此提取率低。為了改善提取率超臨界萃取過(guò)程中往往要加入攜帶劑(如cn03131752.9一種超臨界流體混合式萃取蜂膠的方法)，比如乙醇溶液，但改善程度有限。

第二，該技術(shù)存在處理量小，設(shè)備投入大，產(chǎn)品成本高等問(wèn)題，制約了其在蜂膠生產(chǎn)工藝中的大規(guī)模推廣。

亞臨界流體萃取是以亞臨界狀態(tài)的單一或混合溶液為溶媒，借助其分子擴(kuò)散性能強(qiáng)、傳質(zhì)速率快、低溫下易揮發(fā)的特性，溶劑在系統(tǒng)內(nèi)相繼經(jīng)過(guò)浸提、蒸發(fā)脫溶、壓縮、冷凝回收等過(guò)程，從天然產(chǎn)物中萃取獲得功能活性成分，是一種前景廣闊的萃取與分離技術(shù)。具有無(wú)毒、環(huán)保，非熱加工、不破壞熱敏性活性成分、產(chǎn)能大、效率高、可進(jìn)行工業(yè)化放大，節(jié)能、運(yùn)行成本低等優(yōu)點(diǎn)。為蜂膠的提取提供了新的思路。為了克服乙醇提取浸提時(shí)間長(zhǎng)，生產(chǎn)效率低，活性成分易損失，成色較差；超臨界co2萃取提取率低、設(shè)備投入大、產(chǎn)量低、生產(chǎn)成本高等缺點(diǎn)；針對(duì)蜂膠毛料和蜂膠這一特殊原料和產(chǎn)品，本發(fā)明提供了一種亞臨界多元混合溶劑萃取高品質(zhì)蜂膠的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服乙醇提取浸提時(shí)間長(zhǎng)，生產(chǎn)效率低，活性成分易損失，成色較差；超臨界co2萃取提取率低、設(shè)備投入大、產(chǎn)量低、生產(chǎn)成本高等缺點(diǎn)，本發(fā)明提供了一種亞臨界多元混合溶劑萃取高品質(zhì)蜂膠的方法，通過(guò)控制不同萃取階段溶劑的切換、配比及萃取時(shí)間、溫度，顯著提高了蜂膠的萃取效率和黃酮類、萜烯類化合物的溶出率和保留率，縮短了生產(chǎn)周期；同時(shí)改進(jìn)出料和供熱方式，提高了脫溶效率、減少了溶劑損失，可以顯著增加經(jīng)濟(jì)效益。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明的方法具體按照下述步驟進(jìn)行：

(1)預(yù)處理：首先篩選和挑選除去蜂膠原料中的無(wú)機(jī)雜質(zhì)，然后將蜂膠原料(毛膠料)在-10℃冰柜中冷凍過(guò)夜，機(jī)械粉碎，以蜂膠原料：輔料＝20～10:1的重量比例添加輔料，混勻，其中所述輔料為脫脂天然粗纖維或微晶纖維素；

(2)脫蠟：將經(jīng)步驟(1)預(yù)處理好的蜂膠原料裝入萃取釜中，并密封；將萃取釜抽真空(0.01～0.1mpa)，利用壓力差將溶劑罐中的亞臨界溶劑丙烷或丁烷注入萃取釜內(nèi)進(jìn)行攪拌逆流浸提，其中萃取條件為浸提次數(shù)1～3次，料液比1:1～1:10，萃取時(shí)間10～60min，攪拌速度35～100r/min，萃取溫度10～80℃，其中優(yōu)選20～45℃。萃取完成后將分離釜抽真空并注入少量丙烷或丁烷氣體，緩緩打開(kāi)萃取釜與分離釜之間的閥門(mén)，利用壓力差和過(guò)濾布將萃取釜中混合料進(jìn)行固液分離，打開(kāi)加熱循環(huán)系統(tǒng)和溶劑回收系統(tǒng)，采用蒸汽或熱水對(duì)萃取釜和分離釜進(jìn)行加熱脫溶，并攪拌，其中物料脫溶溫度15～80℃，其中優(yōu)選25～45℃，混合液脫溶溫度30～100℃其中優(yōu)選45～65℃，待萃取釜和分離釜壓力降到0.01mpa，啟用真空泵進(jìn)行負(fù)壓蒸發(fā)，直至-0.09mpa以下；氣化后的丙烷或丁烷經(jīng)壓縮、冷凝液化后，回收至溶劑儲(chǔ)罐中循環(huán)使用；采用氮?dú)獯祾叩姆绞?，打開(kāi)分離釜閥門(mén)，排出蜂蠟。

(3)蜂膠萃取：切換閥門(mén)利用壓力差將溶劑罐中的亞臨界溶劑，亞臨界溶劑中包含二甲醚，或二甲醚和丙烷的混合液，或二甲醚和丁烷的混合液，二甲醚和丙烷混合液的體積比為10:1～1:1，二甲醚和丁烷混合液的體積比為10:1～1:1，再次注入萃取釜內(nèi)進(jìn)行攪拌逆流浸提，其中萃取條件為萃取溫度0～60℃，其中優(yōu)選5～25℃，料液比1:1～1:10，萃取時(shí)間60～180min，萃取次數(shù)1～4次，整個(gè)萃取過(guò)程是在完全封閉的條件下進(jìn)行。萃取完成后按照步驟(2)的操作進(jìn)行固液分離、脫溶和溶劑回收，其中物料脫溶溫度40～80℃，混合液脫溶溫度15～80℃，其中優(yōu)選25～45℃，脫溶時(shí)間5～30min；最后打開(kāi)分離釜閥門(mén)，利用氮吹，排出黃色蜂膠。

其中步驟(1)所述將蜂膠原料添加輔料脫脂天然粗纖維或微晶纖維素是為了構(gòu)造粉碎物料的萃取微結(jié)構(gòu)，防止原料在萃取過(guò)程中結(jié)塊而影響流體的通透性和提取效率，有利于萃取的持續(xù)進(jìn)行和有效成分的溶出，保證完全提取。

其中步驟(2)(3)中溶劑的添加均通過(guò)計(jì)量罐計(jì)量；另外添加溶劑前均需進(jìn)行抽真空操作，密閉無(wú)氧，有效防止萃取過(guò)程中活性物質(zhì)的氧化，保證產(chǎn)品品質(zhì)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：

第一，本發(fā)明采用了亞臨界丙烷、丁烷及二甲醚等多元萃取溶劑對(duì)蜂膠原料進(jìn)行萃取，利用亞臨界態(tài)溶劑較強(qiáng)的擴(kuò)散性和特殊的萃取性，有效保證了蜂膠的高效、高品質(zhì)萃取，且適合大規(guī)模生產(chǎn)；

第二，本發(fā)明采用分段式和攪拌浸提式工藝進(jìn)行蜂膠的逆流重復(fù)提取，縮短了萃取時(shí)間，提高了萃取效率和產(chǎn)率，降低了生產(chǎn)成本；

第三，本發(fā)明采用了密閉無(wú)氧、低溫的萃取工藝，有效保護(hù)蜂膠產(chǎn)品中易氧化和熱敏性的活性成分，而且耗能低；

第四，本發(fā)明通過(guò)不同階段溫度控制，脫蠟時(shí)減少萜烯類物質(zhì)損失，萃取時(shí)增加黃酮類物質(zhì)和萜烯類物質(zhì)的萃取，提高了產(chǎn)品品質(zhì)。

附圖說(shuō)明

圖1為蜂膠亞臨界多元混合溶劑萃取工藝流程。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；下述實(shí)施例中所用的試劑、材料等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。

圖1所示為蜂膠亞臨界多元混合溶劑萃取工藝流程圖，其中第1流體為丙烷或丁烷；第2流體為單一二甲醚或二甲醚與第1流體混合配比。首先將冷凍粉碎處理好的蜂膠原料并添加輔料放入萃取釜中，切換亞臨界丙烷或丁烷進(jìn)行脫臘，然后在一定壓力和溫度條件下用二甲醚配比丙烷或丁烷等組成多元混合溶劑進(jìn)行攪拌恒溫萃取、低溫脫溶，生產(chǎn)高品質(zhì)蜂膠，并采用氮?dú)獯祾叩姆绞竭M(jìn)行出料；同時(shí)通過(guò)外部夾套及內(nèi)部中空攪拌漿相結(jié)合的供熱方式對(duì)萃余物進(jìn)行脫溶。

實(shí)施例1

將已篩選和挑選除去無(wú)機(jī)雜質(zhì)的蜂膠原料(毛膠料)，至于-10℃冰柜中冷凍過(guò)夜，然后機(jī)械粉碎。稱取蜂膠原料100g，以蜂膠原料：輔料＝20:1的比例添加微晶纖維素，混勻，裝入萃取罐釜中，并密封；將萃取釜抽真空-0.1mpa，利用壓力差將溶劑罐中的亞臨界溶劑丙烷注入萃取釜內(nèi)進(jìn)行攪拌逆流浸提，其中萃取條件為浸提次數(shù)1次，料液比1:10，單次萃取時(shí)間60min，攪拌速度100r/min，萃取溫度10℃。萃取完成后將分離釜抽真空并注入少量丁烷氣體，緩緩打開(kāi)萃取釜與分離釜之間的閥門(mén)，利用壓力差和過(guò)濾布將萃取釜中混合料進(jìn)行固液分離，打開(kāi)加熱循環(huán)系統(tǒng)和溶劑回收系統(tǒng)，采用熱水對(duì)萃取釜和分離釜進(jìn)行加熱脫溶，并攪拌，其中物料脫溶溫度15℃，混合液脫溶溫度30℃，待萃取釜和分離釜壓力降到0.01mpa，啟用真空泵進(jìn)行負(fù)壓蒸發(fā)，直至-0.09mpa以下；氣化后的丁烷經(jīng)壓縮、冷凝液化后，回收至溶劑儲(chǔ)罐中循環(huán)使用；采用氮?dú)獯祾叩姆绞?，打開(kāi)分離釜閥門(mén)，排出蜂蠟。切換閥門(mén)利用壓力差將溶劑罐中的亞臨界溶劑二甲醚，再次注入萃取釜內(nèi)進(jìn)行攪拌逆流浸提，其中萃取條件為萃取溫度5℃，料液比1:10，萃取時(shí)間180min，萃取次數(shù)1次，整個(gè)萃取過(guò)程是在完全封閉的條件下進(jìn)行。萃取完成后按照丙烷脫蠟的操作進(jìn)行固液分離、脫溶和溶劑回收，其中物料脫溶溫度40℃，混合液脫溶溫度45℃，脫溶時(shí)間5min；最后打開(kāi)分離釜閥門(mén)，利用氮吹，排出黃色蜂膠。最終得到蜂蠟+蜂膠總提取率為80.75％，總黃酮溶出量為75.76mg/g毛料，其中蜂膠中總黃酮含量高達(dá)32.02％，鑒定萜烯類物質(zhì)20種，含量為0.45μg/g。

實(shí)施例2

將已篩選和挑選除去無(wú)機(jī)雜質(zhì)的蜂膠原料(毛膠)，至于-10℃冰柜中冷凍過(guò)夜，然后機(jī)械粉碎。稱取蜂膠原料100g，以蜂膠原料：輔料＝10:1的比例添加脫脂天然粗纖維，混勻，裝入萃取罐釜中，并密封；將萃取釜抽真空-0.1mpa，利用壓力差將溶劑罐中的亞臨界溶劑丁烷注入萃取釜內(nèi)進(jìn)行攪拌逆流浸提，其中萃取條件為浸提次數(shù)3次，料液比1:1，單次萃取時(shí)間10min，攪拌速度35r/min，萃取溫度45℃。萃取完成后將分離釜抽真空并注入少量丁烷氣體，緩緩打開(kāi)萃取釜與分離釜之間的閥門(mén)，利用壓力差和過(guò)濾布將萃取釜中混合料進(jìn)行固液分離，打開(kāi)加熱循環(huán)系統(tǒng)和溶劑回收系統(tǒng)，采用熱水對(duì)萃取釜和分離釜進(jìn)行加熱脫溶，并攪拌，其中物料脫溶溫度45℃，混合液脫溶溫度65℃，待萃取釜和分離釜壓力降到0.01mpa，啟用真空泵進(jìn)行負(fù)壓蒸發(fā)，直至-0.09mpa以下；氣化后的丁經(jīng)壓縮、冷凝液化后，回收至溶劑儲(chǔ)罐中循環(huán)使用；采用氮?dú)獯祾叩姆绞?，打開(kāi)分離釜閥門(mén)，排出蜂蠟。切換閥門(mén)利用壓力差將溶劑罐中的亞臨界溶劑二甲醚和丁烷體積比10:1進(jìn)行配比)，再次注入萃取釜內(nèi)進(jìn)行攪拌逆流浸提，其中萃取條件為萃取溫度60℃，料液比1:1，單次萃取時(shí)間60min，萃取次數(shù)4次，整個(gè)萃取過(guò)程是在完全封閉的條件下進(jìn)行。萃取完成后按照丁烷脫蠟的操作進(jìn)行固液分離、脫溶和溶劑回收，其中物料脫溶溫度80℃，混合液脫溶溫度25℃，脫溶時(shí)間30min；最后打開(kāi)分離釜閥門(mén)，利用氮吹，排出黃色蜂膠。最終得到蜂蠟+蜂膠提取率為81.75％，總黃酮溶出量為74.86mg/g毛料，其中蜂膠中總黃酮含量高達(dá)34.11％，鑒定萜烯類物質(zhì)21種，含量為0.52μg/g。

實(shí)施例3

將已篩選和挑選除去無(wú)機(jī)雜質(zhì)的蜂膠原料(毛膠)，至于-10℃冰柜中冷凍過(guò)夜，然后機(jī)械粉碎。稱取蜂膠原料100g，以蜂膠原料：輔料＝5:1的比例添加脫脂天然粗纖維，混勻，裝入萃取罐釜中，并密封；將萃取釜抽真空-0.1mpa，利用壓力差將溶劑罐中的亞臨界溶劑丁烷注入萃取釜內(nèi)進(jìn)行攪拌逆流浸提，其中萃取條件為浸提次數(shù)2次，料液比1:5，單次萃取時(shí)間30min，攪拌速度60r/min，萃取溫度80℃。萃取完成后將分離釜抽真空并注入少量丁烷氣體，緩緩打開(kāi)萃取釜與分離釜之間的閥門(mén)，利用壓力差和過(guò)濾布將萃取釜中混合料進(jìn)行固液分離，打開(kāi)加熱循環(huán)系統(tǒng)和溶劑回收系統(tǒng)，采用熱水對(duì)萃取釜和分離釜進(jìn)行加熱脫溶，并攪拌，其中物料脫溶溫度80℃，混合液脫溶溫度100℃，待萃取釜和分離釜壓力降到0.01mpa，啟用真空泵進(jìn)行負(fù)壓蒸發(fā)，直至-0.09mpa以下；氣化后的丁經(jīng)壓縮、冷凝液化后，回收至溶劑儲(chǔ)罐中循環(huán)使用；采用氮?dú)獯祾叩姆绞剑蜷_(kāi)分離釜閥門(mén)，排出蜂蠟。切換閥門(mén)利用壓力差將溶劑罐中的亞臨界溶劑二甲醚和丁烷體積比5:1進(jìn)行配比)，再次注入萃取釜內(nèi)進(jìn)行攪拌逆流浸提，其中萃取條件為萃取溫度0℃，料液比1:5，單次萃取時(shí)間120min，萃取次數(shù)1次，整個(gè)萃取過(guò)程是在完全封閉的條件下進(jìn)行。萃取完成后按照丁烷脫蠟的操作進(jìn)行固液分離、脫溶和溶劑回收，其中物料脫溶溫度60℃，混合液脫溶溫度80℃，脫溶時(shí)間15min；最后打開(kāi)分離釜閥門(mén)，利用氮吹，排出黃色蜂膠。最終得到蜂蠟+蜂膠提取率為71.75％，總黃酮溶出量為68.76mg/g毛料，其中蜂膠中總黃酮含量高達(dá)40.21％，鑒定萜烯類物質(zhì)18種，含量為0.42μg/g。

實(shí)施例4

將已篩選和挑選除去無(wú)機(jī)雜質(zhì)的蜂膠原料(毛膠)，至于-20℃冰柜中冷凍過(guò)夜，然后機(jī)械粉碎，備用。

(1)蜂膠的乙醇提取

稱取蜂膠原料50g，以蜂膠原料：輔料＝10:1的比例添加微晶纖維素，混勻，并至于玻璃容器中，加入75％的乙醇500ml，密封攪拌，浸泡過(guò)夜處理后，減壓過(guò)濾，收集濾液；再次加入75％的乙醇500ml攪拌過(guò)夜，減壓過(guò)濾并收集濾液，合并兩次濾液進(jìn)行減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到乙醇萃取物。

(2)蜂膠的超臨界co2萃取

稱取蜂膠原料100g，參考cn201110330992.0超臨界萃取蜂膠的方法實(shí)例3的萃取條件即為超臨界co2萃取，其萃取壓力為30mpa，萃取溫度為35℃；萃取時(shí)間為3.5小時(shí)；萃取流程為一級(jí)萃取，二級(jí)分離：一級(jí)分離罐壓力為6mpa，溫度為35℃；二級(jí)分離罐為4mpa，溫度為20℃，收集分離產(chǎn)物，完成對(duì)蜂膠的萃取。

(3)蜂膠的亞臨界流體萃取

稱取蜂膠原料100g，以蜂膠原料：輔料＝10:1的比例添加微晶纖維素，混勻，裝入萃取罐釜中，并密封；將萃取釜抽真空-0.1mpa，利用壓力差將溶劑罐中的亞臨界溶劑丙烷注入萃取釜內(nèi)進(jìn)行攪拌逆流浸提，其中萃取條件為浸提次數(shù)3次，料液比1:10，單次萃取時(shí)間60min，攪拌速度100r/min，萃取溫度45℃。萃取完成后將分離釜抽真空并注入少量丙烷氣體，緩緩打開(kāi)萃取釜與分離釜之間的閥門(mén)，利用壓力差和過(guò)濾布將萃取釜中混合料進(jìn)行固液分離，打開(kāi)加熱循環(huán)系統(tǒng)和溶劑回收系統(tǒng)，采用熱水對(duì)萃取釜和分離釜進(jìn)行加熱脫溶，并攪拌，其中物料脫溶溫度25℃，混合液脫溶溫度45℃，待萃取釜和分離釜壓力降到0.01mpa，啟用真空泵進(jìn)行負(fù)壓蒸發(fā)，直至-0.09mpa以下；氣化后的丙烷經(jīng)壓縮、冷凝液化后，回收至溶劑儲(chǔ)罐中循環(huán)使用；采用氮?dú)獯祾叩姆绞?，打開(kāi)分離釜閥門(mén)，排出蜂蠟。切換閥門(mén)利用壓力差將溶劑罐中的亞臨界溶劑二甲醚和丙烷體積比1:1進(jìn)行配比)，再次注入萃取釜內(nèi)進(jìn)行攪拌逆流浸提，其中萃取條件為萃取溫度25℃，料液比1:3，單次萃取時(shí)間60min，萃取次數(shù)2次，整個(gè)萃取過(guò)程是在完全封閉的條件下進(jìn)行。萃取完成后按照丙烷脫蠟的步驟操作進(jìn)行固液分離、脫溶和溶劑回收，其中物料脫溶溫度80℃，混合液脫溶溫度15℃，脫溶時(shí)間30min；最后打開(kāi)分離釜閥門(mén)，利用氮吹，排出黃色蜂膠。

稱量并計(jì)算以上三種方法的蜂蠟+蜂膠提取率，并以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)物采用分光光度法測(cè)定總黃酮含量，并根據(jù)提取率折算總黃酮溶出量，三種方法比對(duì)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1三種萃取方式對(duì)有效成分提取率及其總黃酮溶出量的差異性影響

從表1中可以看出亞臨界流體萃取相比乙醇提取和超臨界co2萃取，能夠更好的溶出蜂膠毛料中的有效成分，產(chǎn)量高，從而降低了生產(chǎn)成本。