一種燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體公開了一種燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法，利用一個(gè)SSR(Simple Sequence Repeats，簡單重復(fù)序列)分子標(biāo)記在不同倍性燕麥屬植物中大小與拷貝數(shù)不同的特性，結(jié)合PCR擴(kuò)增技術(shù)和凝膠電泳技術(shù)，通過擴(kuò)增產(chǎn)物片段數(shù)目的不同，快速鑒定出燕麥屬植物的染色體倍性。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為能夠在事先不清楚燕麥屬植物倍性的條件下，快速地鑒定出該植物的倍性，燕麥屬植物皆可適用于本方法。
【專利說明】一種燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的 方法及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 燕麥廣泛分布于世界各地，是重要的糧食和飼草飼料作物。燕麥營養(yǎng)豐富，與 小麥、水稻、玉米等作物相比，燕麥籽粒中的蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸、維生素、礦物質(zhì)元素 等營養(yǎng)指標(biāo)均位居前列，此外，燕麥中還含有豐富的可溶性膳食纖維。國內(nèi)外大量研 究證明燕麥能夠降血脂和膽固醇且無副作用，具有調(diào)節(jié)人體免疫功能，增強(qiáng)抵抗力和 抑制糖尿病等作用[RipsinCM,KeenanJM,JacobsDR,ElmerPJ,WelchRR,VanHorn LjLiuKjTurnbullWHjThyeFWjKestinMjHegstedMjDavidsonDMjDavidsonMHjDugan LDjDemark-WahnefriedWjBelingS.Oatproductsandlipidlowering.JAmMed Assoc. 1992, 267 (24) : 3317-3325]，是谷物中最好的全價(jià)營養(yǎng)食品之一。
[0003] 在植物學(xué)分類上，燕麥屬于禾本科燕麥屬草本植物，前人通過對(duì)燕麥不同種 進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交并對(duì)親本及雜種染色體進(jìn)行觀察分析，將燕麥屬植物分為二倍體、四倍 體和六倍體3個(gè)種群，約30個(gè)種[鄭殿升.中國燕麥的多樣性.植物遺傳資源學(xué) 報(bào).2010, 11 (3) :249-252]。栽培種普通燕麥（Avenasativa)為六倍體，而野燕麥多為二倍 體和四倍體，分布廣泛，并且有些野生種和栽培種十分相似，單從形態(tài)上難以區(qū)分，對(duì)栽培 燕麥的種子生產(chǎn)和品種純度有著不良影響。
[0004]另一方面，單倍體及其加倍后的多倍體在植物細(xì)胞學(xué)、作物遺傳及育種研究上具 有重要作用，可加速育種進(jìn)程，提高選育效益，因而倍性育種是現(xiàn)代育種的一個(gè)重要組成部 分。倍性鑒定是倍性育種及其應(yīng)用的重要環(huán)節(jié)，如何應(yīng)用最簡便、有效且盡可能早期鑒定出 植株的倍性水平，可以大大減少育種的工作量及盲目性，降低成本，加速育種進(jìn)程，在農(nóng)作 物倍性育種中具有重要意義[陶抵輝，李小紅，王利群，周杰良，陳涌，霍穩(wěn)根.植物染色體 倍性鑒定方法研究進(jìn)展.生命科學(xué)研究.2009, 13 (5) :453-458]。
[0005]目前對(duì)生物染色體倍性鑒定的方法主要有兩大類型：直接鑒定法和間接鑒定法 [李懋學(xué)，張柿方.植物染色體研究技術(shù).東北林業(yè)大學(xué)出版社.1991]。
[0006] 直接法是利用一定時(shí)期一定部位的組織細(xì)胞對(duì)進(jìn)行染色體染色、計(jì)數(shù)，是最直接、 最準(zhǔn)確的倍性鑒定方法。其流程包括：培養(yǎng)材料一取材預(yù)處理一細(xì)胞固定一細(xì)胞解離一染 色劑染色，最后通過顯微鏡下觀察對(duì)染色體進(jìn)行計(jì)數(shù)。雖然染色體計(jì)數(shù)為最直接、最準(zhǔn)確的 倍性鑒定方法，但其制片要達(dá)到理想的計(jì)數(shù)結(jié)果技術(shù)要求高，對(duì)某些植物有一定難度。制片 過程中的各種處理方式方法、步驟影響因素多，要達(dá)到理想真實(shí)結(jié)果需進(jìn)行大量深入的研 究和總結(jié)。
[0007] 間接法包括形態(tài)指標(biāo)鑒定法，流式細(xì)胞分析法，雜交鑒定法，分子鑒定法等。形 態(tài)指標(biāo)法利用不同倍性的種間形態(tài)差異來區(qū)分倍性，這種方法受環(huán)境影響大且依賴鑒定 人員的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。流式細(xì)胞分析法利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞DNA含量判定倍性，快速準(zhǔn) 確方便，不受外界環(huán)境影響，但需要有較昂貴的專門設(shè)備，并且維護(hù)人員需較高的專業(yè)水 平以及儀器操作復(fù)雜。雜交鑒定法通過與已知倍性的種雜交，通過后代存活率及育性 判定物種倍性，更加費(fèi)時(shí)費(fèi)力。分子鑒定法指利用RFLP[SaikiRK，ScharfS，F(xiàn)aloona F,MullisKB,ErlichHA,ArnheimN.Enzymaticamplificationofbeta-globingenomic sequencesandrestrictionsiteanalysisfordiagnosisofsicklecellanemia. Science. 1985,230(4732) :1350-1354],AFLP[VosP1HogersR1BleekerM1Reijans M,vandeLeeT,HornesM,FrijtersA,PotJ,PelemanJ,KuiperM.AFLP:anew techniqueforDNAfingerprinting.NucleicAcidsRes. 1995, 23(21):4407-4414]、 RAPD[WilliamsJG,KubelikAR,LivakKJ,RafalskiJA,TingeySV.DNApolymorphisms amplifiedbyarbitraryprimersareusefulasgeneticmarkers.NucleicAcids Res. 1990, 18(22):6531-6535]>SSR[Jarne,PandLagoda,PJ.Microsatellites,from moleculestopopulationsandback.TrendsEcolEvol. 1996, 11 (10) :424-429]等分 子標(biāo)記技術(shù)對(duì)物種進(jìn)行倍性鑒定的方法。前人利用AFLP標(biāo)記對(duì)不同倍性西瓜分子遺傳變 異進(jìn)行了比較，鑒定出了 2倍體、3倍體和4倍體西瓜的特異標(biāo)記[劉文革，王鳴，閻志 紅.西瓜二倍體及同源多倍體遺傳差異的AFLP分析.果樹學(xué)報(bào).2004, 21 (I) :46-49];而 利用RAH)標(biāo)記對(duì)金魚草的研究也表明不同倍性金魚草基因組DNA存在有分子差異[吳 福川，胡秀，鄭思鄉(xiāng).不同倍性金魚草基因組DNA隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性研究.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué) 報(bào).2005, 20 (4) : 482-485]。這些研究表明不同倍性的種間基因組DNA存在分子差異，可以 通過現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)將其區(qū)分開來。
[0008] 綜上所述，作為倍性鑒定的直接方法，染色體制片法雖然直觀可信，但操作過程比 較繁瑣，工作量大，費(fèi)時(shí)費(fèi)力且需要較高的細(xì)胞學(xué)操作技術(shù)，難以大規(guī)模量化，所以人們一 直在探索簡便、快速、準(zhǔn)確鑒定染色體倍性的方法?，F(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展能根據(jù)不同倍性種 間基因組DNA的不同，利用分子標(biāo)記鑒別出這些差異，從而達(dá)到倍性鑒定的目的，但在燕麥 中尚無此類研究的報(bào)道，因而發(fā)展一種能夠快速鑒定燕麥屬植物倍性的方法對(duì)于燕麥種質(zhì) 資源的鑒定利用、分子育種、品種純度檢測(cè)以及燕麥屬植物的起源進(jìn)化研究具有十分重要 的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明依據(jù)不同倍性燕麥屬植物以特異引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增后電泳得到的擴(kuò)增 產(chǎn)物大小與拷貝數(shù)不同的特性，提供一種燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法及其應(yīng) 用。
[0010] 本發(fā)明的燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法，其為利用SSR分子標(biāo)記的特異 引物對(duì)，對(duì)燕麥屬植物的DNA樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增和電泳，通過電泳條帶顯示的擴(kuò)增產(chǎn)物片段 數(shù)目的不同，鑒定出燕麥屬植物樣品的染色體倍性；
[0011] 所述特異引物對(duì)的核苷酸序列為：
[0012] 上游引物：5' -AGCGTCTGCTTCAAAATCTGTT-3'（如SEQIDNO. 1 所示）
[0013]下游引物：5' -TTTCTTCCTGCCGCGTTAAGTT-3'（如SEQIDNO. 2 所示）。
[0014] 所述PCR擴(kuò)增，其反應(yīng)體系如下：
[0015] 特異引物對(duì) 2μ1 DNA樣品 0.1-1 1〇χ PCR Buffer 5 μ? IOmM的dNTP 1 μ? Taq酶 1 μ? ddH20 36μ1
[0016] 反應(yīng)體系總體積為50μ1。
[0017] 所述PCR擴(kuò)增，其反應(yīng)條件為：94°C預(yù)變性5min;94°C變性20sec，55°C復(fù)性 30sec，72°C延伸lmin，35 個(gè)循環(huán)；72°C延伸 7min。
[0018] 所述電泳為凝膠電泳，優(yōu)選為聚丙烯酰胺凝膠電泳。
[0019] 所述DNA樣品為基因組DNA樣品。
[0020] 所述鑒定出燕麥屬植物樣品的染色體倍性，其標(biāo)準(zhǔn)為：按照電泳條帶顯示的擴(kuò)增 產(chǎn)物片段的數(shù)量鑒定，數(shù)量為一條的是二倍體，數(shù)量為兩條的是四倍體，數(shù)量為三條的是六 倍體。
[0021] 本發(fā)明還提供用于所述燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定方法的特異引物對(duì)，其核 苷酸序列為：
[0022]上游引物：5' -AGCGTCTGCTTCAAAATCTGTT-3'（如SEQIDNO. 1 所示）
[0023]下游引物：5' -TTTCTTCCTGCCGCGTTAAGTT-3'（如SEQIDNO. 2 所示）。
[0024] 本發(fā)明還提供所述燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法在燕麥屬植物中的應(yīng) 用。
[0025] 本發(fā)明的燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法，利用一個(gè)SSR(Simple SequenceR印eats，簡單重復(fù)序列）分子標(biāo)記在不同倍性燕麥屬植物中大小與拷貝數(shù)不同 的特性，結(jié)合PCR擴(kuò)增技術(shù)和凝膠電泳技術(shù)，通過擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小及數(shù)目的不同，快速鑒 定出燕麥屬植物的染色體倍性。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為能夠在事先不清楚燕麥屬植物倍性的條件 下，快速地鑒定出該植物的倍性，燕麥屬植物皆可適用于本方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例3對(duì)不同倍性燕麥屬植物DNA擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果照片。
[0027]圖2為本發(fā)明實(shí)施例4燕麥二倍體植物的細(xì)胞染色體照片及核型圖。
[0028]圖3為本發(fā)明實(shí)施例4燕麥四倍體植物的細(xì)胞染色體照片及核型圖。
[0029]圖4為本發(fā)明實(shí)施例4燕麥六倍體植物的細(xì)胞染色體照片及核型圖。
[0030] 其中，圖1中PCR產(chǎn)物電泳條帶序號(hào)代表的依次為M:20bp ladder Takara ;1-3:Α· strigosa；4-6:A. hispanica；7-9:A. brevis；10-12:A. nudabrevis；13-15:A. maroccana； 16-18:A. murphy；19-21:A. magna；22-24:A. sativa；25-27:A. fatua；28-30:A. sterilis； 31_33:A. chinensis。

【具體實(shí)施方式】
[0031] 以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn) 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中，燕麥屬植物材料均取自國家作物種質(zhì) 庫，所用的液氮購自北京綠氧天罡科技開發(fā)有限公司、CTAB緩沖液購自北京鼎國昌盛生物 技術(shù)有限責(zé)任公司、氯仿購自北京化學(xué)試劑公司（分析純）、異戊醇購自北京化學(xué)試劑公 司（分析純）、異丙醇購自北京化學(xué)試劑公司（分析純）、乙醇購自北京化學(xué)試劑公司（分 析純）、無菌水購自大連寶生物工程有限公司、TE緩沖液購自大連寶生物工程有限公司、 PCRBuffer購自大連寶生物工程有限公司、dNTP購自大連寶生物工程有限公司、Tag酶 購自大連寶生物工程有限公司、CldH2O購自大連寶生物工程有限公司、特異引物對(duì)由上海 invitrogen生物技術(shù)有限公司合成、TBE緩沖液購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公 司、Acr-Bis購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司、四甲基二乙胺（TEMED)購自北京 鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司、過硫酸銨（APS)購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公 司、瓊脂糖購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司（分析純）、冰醋酸購自北京化學(xué)試劑 公司（分析純）4 8勵(lì)3購自北京化學(xué)試劑公司（分析純）、NaOH購自北京化學(xué)試劑公司（分 析純）、甲醛購自北京化學(xué)試劑公司（分析純）。
[0032] 實(shí)施例1燕麥屬植物基因組DNA的提取
[0033]本實(shí)施例以燕麥屬植物A.strigosa(砂燕麥）、A.hispanica(西班牙燕麥）、 A.brevis(短燕麥）、A.nudabrevis(小粒裸燕麥）、A.maroccana(馬羅卡燕麥）、 A.murphy(墨菲燕麥）、A.magna(大燕麥）、A.sativa(普通栽培燕麥）、A.fatua(普通野燕 麥）、A.sterilis(野紅燕麥）和A.chinensis(莜麥）作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
[0034]以上述燕麥屬植物的幼嫩葉片分別作為材料，利用CTAB法提取燕麥DNA，具體方 法如下：取材料0.lg，加液氮后迅速研磨。將研磨好的材料轉(zhuǎn)入I. 5ml離心管中，立即加入 600μ1預(yù)熱的2XCTAB緩沖液，顛倒混勻，65°C下保溫10_20min，其中不時(shí)搖動(dòng)。加入等體 積的氯仿/異戊醇（體積比1/1，下同），輕緩顛倒混勻，室溫下12,OOOr/min離心10-20min。 取上清轉(zhuǎn)至另一離心管中，加入等體積氯仿/異戊醇，輕緩顛倒混勻，室溫下12,OOOr/min 離心10_20min。取上清，加入等體積異丙醇，_20°C下放置30min。3, 500-4,OOOr/min離心 5-10min，去上清，體積百分含量70%的乙醇溶液洗沉淀，干燥后，加入30μITE緩沖液溶 解沉淀（可以無菌水替代）。
[0035] 實(shí)施例2對(duì)燕麥屬植物基因組DNA的PCR擴(kuò)增
[0036] 對(duì)實(shí)施例1中提取的各種燕麥基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，方法如下：
[0037] 取一支干凈無菌的0.21111離心管，向其中加入以下試劑：(1(1!1 20,36 4 1;10\?〇1? Buffer，5yI;dNTP(10mMeach)，ly1 ;特異引物對(duì)的上游引物（SPl)/下游引物（SP2)， 2μ1 ;燕麥基因組DNA，0. 1_1μg;Taq酶，1μ1。
[0038] 特異引物對(duì)的核苷酸序列為：
[0039]上游引物（SPl) :5' -AGCGTCTGCTTCAAAATCTGTT-3'（如SEQIDNO. 1 所示）
[0040]下游引物（SP2) :5' -TTTCTTCCTGCCGCGTTAAGTT-3'（如SEQIDNO. 2 所示）。
[0041]按如下反應(yīng)條件進(jìn)行擴(kuò)增：94°C5min;94°C20sec, 55°C30sec, 72°Clmin, 35cycle s;72°C7min。
[0042] 實(shí)施例3擴(kuò)增結(jié)果的聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)
[0043] 對(duì)實(shí)施例2得到的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，具體方法如下：
[0044]膠的制備：取IOOml燒杯，向其中加入ddH20 18ml，5XTBE6ml，40 %Acr-Bis 6ml，TEMED30μ1，10%APS300μ1，混合均勻備用。將玻璃板裝配好，用質(zhì)量百分比10% 的瓊脂糖封底，待瓊脂糖凝住，把配好的膠沿縫隙輕輕灌進(jìn)兩玻璃板間，防止出現(xiàn)氣泡。插 入梳子靜置半個(gè)小時(shí)以待膠凝結(jié)。
[0045] 電泳：將制好的板拔去梳子后，組裝到電泳槽上，上、下槽緩沖液為1.0ΧΤΒΕ。在 擴(kuò)增樣品中加入3μIloadingbuffer,混勻，吸入2. 5μ1的樣加入點(diǎn)樣孔中，恒電壓220V 電泳120min。電泳結(jié)束后，小心分開兩塊玻璃板，將膠剝離下來，等待銀染。
[0046] 顯影：將剝離下的膠放入在塑料盒中，加入200mlCldH2O漂洗膠塊后倒棄，加入 90mlddH20、10ml乙醇和500μ1冰醋酸固定，輕搖3-5min，加入Iml的質(zhì)量百分含量20% AgNO3溶液染色7-10min，倒掉染色液，用CldH2O快速洗2次，倒掉ddH20。在塑料盒中加入 IOOml的質(zhì)量百分含量3%NaOH溶液和500μ1甲醛顯影，輕搖直至條帶顯示清楚，倒掉顯 影液，加入CldH2O清洗，取出膠平鋪照相。
[0047] 電泳結(jié)果見圖1，其中PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳條帶序號(hào)代表的依次是： M:20bpladderTakara；1-3:A.strigosa；4-6:A.hispanica；7-9:A.brevis；l〇-12:A. nudabrevis；13-15:A.maroccana；16-18:A.murphy；19-21:A.magna；22-24:A.sativa； 25_27:A.fatua;28_30:A.sterilis;31_33:A.chinensis。
[0048]可從電泳結(jié)果中判讀出A.strigosa、A.hispanica、A.brevis和A.nudabrevis有 一條清晰的條帶，為二倍體，A.maroccana、A.murphy和A.magna有兩條清晰的條帶，為四倍 體，A.sativa、A.fatua、A.sterilis和A.chinensis有三條清晰的條帶，為六倍體。
[0049] 實(shí)施例4燕麥屬植物染色體倍性的觀察鑒定
[0050] 參考劉偉等的方法[劉偉，張宗文，吳斌.加拿大引進(jìn)的二倍體燕麥種質(zhì)的核型鑒 定.植物遺傳資源學(xué)報(bào).2013, 14 (1) : 141-145]，對(duì)實(shí)施例1-3所涉及的燕麥屬植物的染色 體倍性進(jìn)行觀察鑒定，具體方法如下：
[0051] 取籽粒飽滿的燕麥種子放在潔凈的培養(yǎng)皿中，加水浸沒種子，置于2 3 °C恒溫培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)直到露白，將露白種子放在潔凈的墊有已滅菌浸水濾紙的培養(yǎng)皿中，置于4°C冰箱 48h，然后置于23°C恒溫培養(yǎng)箱中長根，待根長至I. 0-2.Ocm時(shí)，剪取新生粗壯根尖于冰水 中預(yù)處理48h，接著將根尖轉(zhuǎn)入卡諾氏固定液（無水乙醇：冰乙酸=3 : 1，V/V)中在4°C 下進(jìn)行固定24h，然后用lmol/L鹽酸在60°C下解離10min，最后用改良的苯酚品紅進(jìn)行染 色10min，進(jìn)行常規(guī)壓片，制好的片子在光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照，具體見圖2、圖3、圖4 : A.strigosa、A.hispanica、A.brevis和A.nudabrevis為二倍體，A.maroccana、A.murphy 和A.magna為四倍體，A.sativa、A.fatua、A.sterilis和A.chinensis為六倍體。
[0052] 結(jié)果顯示，實(shí)施例1-3的方法鑒定得到的燕麥屬植物染色體倍性與使用實(shí)施例4 的方法鑒定得到的結(jié)果相一致，說明實(shí)施例1-3的方法可準(zhǔn)確鑒定燕麥屬植物染色體倍 性，且其具有所得到的條帶清晰、判斷方法簡單的優(yōu)點(diǎn)。
[0053] 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾 也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法，其特征在于，其為利用SSR分子標(biāo)記 的特異引物對(duì)，對(duì)燕麥屬植物的DNA樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增和電泳，通過電泳條帶顯示的擴(kuò)增產(chǎn) 物片段數(shù)目的不同，鑒定出燕麥屬植物樣品的染色體倍性； 所述特異引物對(duì)的核苷酸序列為： 上游引物：5' -AGCGTCTGCTTCAAAATCTGIT-3'（如 SEQ ID NO. 1 所示） 下游引物：5' -TITCTTCCTGCCGCGTTAAGIT-3'（如 SEQ ID NO. 2 所示）。
2. 如權(quán)利要求1所述的燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法，其特征在于，所述PCR 擴(kuò)增，其反應(yīng)體系如下：
反應(yīng)體系總體積為50 ii 1。
3. 如權(quán)利要求1所述的燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法，其特征在于，所述PCR 擴(kuò)增，其反應(yīng)條件為：94°C預(yù)變性5min ;94°C變性20sec，55°C復(fù)性30sec，72°C延伸lmin， 35個(gè)循環(huán)；72°C延伸7min。
4. 如權(quán)利要求1所述的燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法，其特征在于，所述電 泳為凝膠電泳。
5. 如權(quán)利要求1所述的燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法，其特征在于，所述電 泳為聚丙烯酰胺凝膠電泳。
6. 如權(quán)利要求1所述的燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法，其特征在于，所述DNA 樣品為基因組DNA樣品。
7. 如權(quán)利要求1所述的燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法，其特征在于，所述鑒 定出燕麥屬植物樣品的染色體倍性，其標(biāo)準(zhǔn)為：按照電泳條帶顯示的擴(kuò)增產(chǎn)物片段的數(shù)量 鑒定，數(shù)量為一條的是二倍體，數(shù)量為兩條的是四倍體，數(shù)量為三條的是六倍體。
8. 用于權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定方法的特異引物對(duì)， 其特征在于，其核苷酸序列為： 上游引物：5' -AGCGTCTGCTTCAAAATCTGIT-3'（如 SEQ ID NO. 1 所示） 下游引物：5' -TITCTTCCTGCCGCGTTAAGIT-3'（如 SEQ ID NO. 2 所示）。
9. 權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的燕麥屬植物染色體倍性快速鑒定的方法在燕麥屬植物 鑒定中的應(yīng)用。
10. 權(quán)利要求8所述的特異引物對(duì)在燕麥屬植物鑒定中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK104357577SQ201410709524
【公開日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】吳斌, 張宗文 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所