一種益生菌片劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種益生菌片劑及其制備方法，以植物乳桿菌等益生菌粉劑為主要原料，科學(xué)復(fù)配改性膳食纖維、果蔬粉、低聚糖、植物提取物、蛋白粉、茶葉提取物、中草藥提取物等，提高了對益生菌群具有真正意義的可溶性纖維素的含量，增強了纖維素的生理活性，進而在增加腸道益生菌菌群種類的同時，顯著增強了內(nèi)源和外源益生菌在人體腸道內(nèi)的定植能力及定植時間，有效抑制了腸道有害菌尤其是革蘭氏陰性菌的生長及繁殖，充分調(diào)節(jié)了腸道益生菌菌群的組成，制備的益生菌片劑生物活性高、在人體腸道定植時間長、減肥效果顯著并且適宜人群廣泛。
CGMCC NO.9405
20140702
【專利說明】_種益生菌片劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及益生菌片劑，具體涉及一種具有減肥作用的益生菌片劑及其制備方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 益生菌（Probiotics)，又稱益生素、促生素、生菌素、活菌素等，即是指某種微生 物制劑或發(fā)酵制品，通過調(diào)節(jié)宿主黏膜與系統(tǒng)免疫功能以及改善腸道營養(yǎng)與菌群平衡，對 宿主產(chǎn)生有益的生理作用，通過定植作用改變宿主某一部位菌群的組成，從而產(chǎn)生有利于 宿主健康作用的單一或組成明確的混合微生物。迄今為止，科學(xué)家已發(fā)現(xiàn)的益生菌大體上 可分成三大類，其中包括：①乳桿菌類（如嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、保加利亞乳桿菌、胚 牙乳桿菌等）；②雙歧桿菌類（如長雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌 等）；③革蘭氏陽性球菌（如糞鏈球菌、乳球菌、中介鏈球菌等）。作為一個新領(lǐng)域，近年 來，益生菌的特殊生理活性在食品中應(yīng)用廣泛，除應(yīng)用于發(fā)酵乳制品外，也正逐步被應(yīng)用于 開發(fā)各種功能性食品。目前，益生菌主要用于食品、功能性食品、膳食補充劑、藥用生物制 品及飼料等領(lǐng)域。把含有益生菌的食品統(tǒng)稱為益生菌食品，主要包括直接添加益生菌的食 品和經(jīng)益生菌發(fā)酵的食品。益生菌在食品領(lǐng)域中最普遍的應(yīng)用仍是乳制品領(lǐng)域，包括發(fā)酵 乳、活性乳酸菌飲料、干酪、酸奶油、酸乳酒，果汁、谷類食品、餅干等。用的益生菌菌種有 雙歧桿菌（Bifidobateria)、乳酸桿菌和一些鏈球菌，其中，乳酸桿菌常用的有嗜酸乳桿菌 (Lactobicullus acidophilus)、干酪乳桿菌（L.casei)、保加利亞乳桿菌（L.bulgaricus) 等。
[0003] 目前，關(guān)于益生菌片劑的研宄較多：中國專利CN 101700253 B公開了一種益生菌 片劑及其制備方法，以葡萄糖、乳糖、微晶纖維素、脫脂奶粉等輔料為原料制備顆粒，再混合 活性成份益生菌粉末及硬脂酸鎂進行壓片，最終得到益生菌片劑的生產(chǎn)方法以及應(yīng)用該種 方法生產(chǎn)的一種活菌存活率高的益生菌片劑，優(yōu)點在于：制備的益生菌片劑因其活菌存活 率高，服用方便，便于吸收，治療效果明顯，并且本發(fā)明提供的干法造粒技術(shù)具有成本低、出 料速度快、工藝條件穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、益生菌存活率高等優(yōu)點，適合規(guī)?；a(chǎn)。中國專利 CN 103876145 A公開了一種益生菌微生態(tài)片劑及其制備方法，屬于保健食品及加工的技術(shù) 領(lǐng)域。益生菌微生態(tài)片劑按質(zhì)量計為益生菌菌90 %?98 %，低聚果糖1 %?9 %，硬脂酸鎂 0. 1%?1%。制備是將雙歧桿菌進行活化，并制備開菲爾發(fā)酵劑；再將二者經(jīng)混合發(fā)酵低 溫濃縮干燥、混料壓片制得?；旌习l(fā)酵是將益生菌混合菌種進行接種，28?36°C條件下發(fā) 酵16?24小時，混合菌種中開菲爾發(fā)酵劑與雙歧桿菌的比例1?3:1。本發(fā)明將開菲爾 發(fā)酵劑和雙歧桿菌進行高密度混合發(fā)酵，菌種多樣，儲存穩(wěn)定，片劑中的活菌數(shù)分別達到20 億cfu/g以上；不僅可以提高消化能力，同時還增強了益生菌在腸道中的定植能力；具有營 養(yǎng)價值高，風(fēng)味獨特等能力。申請公布號為CN 102348388 A的中國專利公開了一種穩(wěn)定的 益生菌顆粒及其制備方法，涉及用于人和/或動物食品與保健品的益生菌組合物領(lǐng)域。本 發(fā)明尤其涉及與包含益生菌微生物的組合物相關(guān)的制粒方法，用于生產(chǎn)含有穩(wěn)定的益生菌 顆粒的組合物，所述益生菌顆粒在生產(chǎn)用于最終用途的片劑或顆粒期間保持穩(wěn)定。本發(fā)明 申請人:的工作結(jié)果顯示，制粒期間益生菌微生物的死亡率與制粒操作條件和所選的微生物 的特性密切相關(guān)。所述工作建立了用于限定酵母特性與方法參數(shù)的數(shù)學(xué)表達式，使得制粒 后微生物損失小于顆粒食品的Ilog CFU/g。中國專利CN 10155908 A公開了一種降血脂 及調(diào)節(jié)腸道菌群的益生菌制劑的制備方法，其步驟為（1)將Kefir源植物乳桿菌MA2進行 高密度培養(yǎng)，得到發(fā)酵液，其菌體密度不小于10 8cfu/mL;(2)上述發(fā)酵液經(jīng)離心收集獲得 菌體，加入保護劑，凍干成菌粉；（3)在凍干的菌粉中加入低聚糖混合物，混合均勻即得益 生菌制劑成品。該品具有降血脂功能的同時還具有調(diào)節(jié)腸道菌群的生理功能，可以治療和 預(yù)防高血脂癥狀和調(diào)節(jié)腸道菌群，且無毒、安全、保存期長，可制成膠囊、微膠囊、沖劑、片劑 等。
[0004] 上述公開的專利主要集中在以增加益生菌種類、提高片劑活菌含量、治療心血管 疾病、美容養(yǎng)顏、提高穩(wěn)定性等為目的的產(chǎn)品和制備方法上，雖然各有特色，但所使用的微 晶纖維素主要是以木材、棉花、棉短絨、麥草、稻草、蘆葦、麻、桑皮、楮皮和甘蔗渣等為原料 經(jīng)制漿、漂白、機械分散、粉碎等工業(yè)化合成方法制備，存在較大的食品安全隱患，同時具有 減肥功能的益生菌產(chǎn)品研宄較少，目前，肥胖對人類健康的影響越來越顯著，因此研宄肥胖 的發(fā)生機理和治療策略十分必要。研宄表明，腸道菌群能夠幫助宿主從飲食中的多糖成分 中獲得更多的卡路里，并儲藏在脂肪細胞中備用。腸道菌群還可以通過關(guān)閉Fiaf基因和增 加 ChREBP/SREBP、Accl和Fas的表達來增加脂肪在脂肪組織和肝臟中的儲存。并且，腸道 中革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的脂多糖LPS，引發(fā)了全身慢性低水平炎癥反應(yīng)，然后導(dǎo)致肥胖。因此， 通過益生菌、益生元或抗生素修飾腸道菌群有望成為未來治療肥胖的有效方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有益生菌片劑的不足，以植物乳桿菌等益生菌 粉劑為主要原料，科學(xué)復(fù)配改性膳食纖維、果蔬粉、低聚糖、植物提取物、蛋白粉、茶葉提取 物、中草藥提取物等，提高了對益生菌群具有真正意義的可溶性纖維素的含量，增強了纖維 素的生理活性，進而在增加腸道益生菌菌群種類的同時，顯著增強了內(nèi)源和外源益生菌在 人體腸道內(nèi)的定植能力及定植時間，有效抑制了腸道有害菌尤其是革蘭氏陰性菌的生長及 繁殖，充分調(diào)節(jié)了腸道益生菌菌群的組成，制備出一種生物活性高、在人體腸道定植時間 長、減肥效果顯著并且適宜人群廣泛的益生菌片劑。
[0006] 為了達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0007] -種益生菌片劑，由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0008] 益生菌粉劑50-60份，改性膳食纖維38-42份，果蔬粉25-35份，低聚糖20-30份， 植物提取物25-30份，蛋白粉18-25份，茶葉提取物15-20份，中草藥提取物10-15份，甜味 劑2-5份，硬脂酸鎂0. 2-0. 5份；
[0009] 所述益生菌粉劑益生菌活菌含量為：7xl012-9xl012cfu/g ;
[0010] 進一步地，所述益生菌粉劑包括但不限于以下益生菌粉劑中的一種或多種：例如： 植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum)、兩岐雙岐桿菌（Bifidobacterium bifidum)、 嬰兒雙岐桿菌（B. infantis)、長雙岐桿菌（B. longum)、短雙岐桿菌（B. breve)、青春雙 岐桿菌（B. adolescentis)、保加利亞乳桿菌（Lactobacillus. Bulgaricus)、嗜酸乳桿 菌（L. acidophilus)、干酪乳桿菌（Lactobacillus casei)、嗜熱鏈球菌（Streptococcus thermophi lus);也包括用于保健食品的真菌粉劑中的一種或多種，例如：釀酒酵 母（Saccharomyces cerevisiae)、產(chǎn)I元假絲酵母（Cadida atilis)、乳酸克魯維酵母 (Kluyveromyces Iactis)、卡氏酵母（Saccharomyces carlsbergensis)、蝙蝠蛾擬青霉 (Paecilomyces hepiali Chen et Dai, sp. nov)、蝙蝠蛾被毛抱（Hirsutella hepiali Chen et Shen)、靈芝（Ganoderma Iucidum)、紫芝（Ganoderma sinensis)、松杉靈芝（Ganoderma tsugae)、紅曲霉（Monacus anka)、紫紅曲霉（Monacus purpureus)；
[0011] 優(yōu)選地，所述益生菌粉劑由以下重量份數(shù)的粉劑均勻混合而成：植物乳桿菌 45-55份，長雙歧桿菌35-45份，兩岐雙岐桿菌25-35份，嬰兒雙岐桿菌25-35份，青春雙岐 桿菌15-20份，保加利亞乳桿菌15-20份，嗜酸乳桿菌10-15份，干酪乳桿菌8-10份，嗜熱 鏈球菌8-10份、釀酒酵母5-10份，產(chǎn)朊假絲酵母菌4-6份；
[0012] 優(yōu)選地，所述植物乳桿菌粉劑是由植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum) tlj-2014制備，該菌株已于2014年7月2日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微 生物中心（簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號.中國科學(xué)院微生物研 宄所.郵編：100101)，保藏編號為CGMCC NO. 9405,分類命名為：植物乳桿菌Lactobacillus pIantarum〇
[0013] 進一步地，所述改性膳食纖維是將膳食纖維經(jīng)物理、化學(xué)或生物的方法處理而得 到的，可溶性纖維素含量高、生物活性強、對腸道益生菌群有重要的、積極作用的纖維素，與 普通膳食纖維相比，其生物活性作用更強大：1)可溶性纖維素含量高，更容易被益生菌利 用，可提高益生菌在腸道的生長及繁殖能力，增加益生菌菌群的種類和數(shù)量，降低大腸 PH 值，改善腸道微生態(tài)環(huán)境；2)強大的吸附能力，經(jīng)改性后，纖維素的比表面積增大，網(wǎng)格結(jié) 構(gòu)豐富，吸附力增強，螯合、吸附膽固醇和膽汁酸類的有機分子能力更強、抑制人體對它們 的吸收；3)離子交換能力增強，對金屬元素，特別是重金屬元素吸附效果更強；3)持水性、 膨脹性、增稠性更強且不受酸、堿、鹽的影響；
[0014] 優(yōu)選地，所述改性纖維是由菊粉、蘋果纖維、燕麥纖維、小麥纖維、米糠、麩皮中的 一種或多種經(jīng)生物酶酶解而得到的；
[0015] 更優(yōu)選地，所述改性膳食纖維的制備方法包括以下步驟：將菊粉、蘋果纖維、燕麥 纖維、小麥纖維、米糠、麩皮按質(zhì)量比7-12:6-9:3-5:2-4:1-3:1-2均勻混合，加入其質(zhì)量 3- 7倍的水，室溫200-300W、35-40KHz條件超聲提取10-15min，同時于電場強度20-40kV/ cm，脈沖時間400-500 μ s，脈沖頻率200-300HZ條件下進行高壓脈沖電場提??；用乳酸調(diào)節(jié) pH值為4. 5-6. 5,加入混合物質(zhì)量0. 1-0. 3%的生物酶，于45-55°C酶解20-48min ;酶解液 減壓濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎至粒徑為0. 1-0. 3_即得改性膳食纖維；
[0016] 所述生物酶為木聚糖酶、纖維素酶、漆酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比 4- 7:3-5:2-4:1-3:1-3 均勻混合。
[0017] 進一步地，所述果蔬粉為針葉櫻桃粉、檸檬粉、韭菜粉、黃瓜粉、白蘿卜粉、冬瓜粉、 綠豆芽粉、草莓粉、胡蘿卜粉、芹菜粉、木瓜粉、菠蘿粉、桔子粉、柑橘粉、甜橙粉、椰漿粉、蔓 越莓粉、藍莓粉中的一種或幾種均勻混合；
[0018] 優(yōu)選地，所述果蔬粉的質(zhì)量百分比組成為：針葉櫻桃粉15%、檸檬粉13%、韭菜粉 10 %、芹菜粉7 %、冬瓜粉7 %、草莓粉5 %、胡蘿卜粉5 %、木瓜粉5 %、菠蘿粉5 %、綠豆芽粉 5 %、桔子粉3 %、柑橘粉3 %、甜橙粉3 %、椰漿粉4%、蔓越莓粉3 %、黃瓜粉3 %、白蘿卜粉 2%、藍莓粉2% ;
[0019] 優(yōu)選地，所述每一種果蔬粉的制備方法為：將果蔬放入裝有1. 2%碳酸氫鈉溶液 的超聲波清洗機中于200W、40KHz清洗10-15min，瀝干，切分成相等規(guī)格，長、寬為5-10mm， 厚度3-5mm的片或丁，置微波干燥機中于功率3000W、頻率2000Hz、溫度50-60°C條件下進行 微波干燥6-12min，直到水分含量降至5-8%，然后于20-30°C、粉碎至粒徑0. 1-0. 3mm，密封 包裝即得果蔬粉。
[0020] 進一步地，所述低聚糖為低聚果糖、水蘇糖、棉子糖、低聚木糖、低聚半乳糖、大豆 低聚糖、低聚異麥芽糖、低聚麥芽糖中至少一種；
[0021] 優(yōu)選地，所述低聚糖重量份數(shù)組成為低聚果糖40-50份，水蘇糖30-40份，棉子糖 20-40份，低聚木糖16-18份，低聚半乳糖10-15份，大豆低聚糖10-15份，低聚異麥芽糖 10-15份，低聚麥芽糖8-12份。
[0022] 進一步地，所述植物提取物是以能夠顯著促進乳酸菌生長，增加乳酸菌活菌含量 的天然植物及瘦素含量較高的食品原料經(jīng)科學(xué)提取而制得；
[0023] 優(yōu)選地，所述植物提取物的制備方法為：按重量份數(shù)計，準(zhǔn)確稱取菊芋30-50份， 山藥30-40份，苦瓜20-40份，杏仁20-40份，牛蒡20-30份，蓮子15-25份，決明子15-20 份，洋蔥10-15份，蘆筍5-10份，粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加 混合物5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然后降溫至50°C，加入混合物料總重量8%的 混合酶制劑進行酶解，用蘋果醋調(diào)節(jié)PH值為6. 2,酶解3h，最后添加混合物料1. 8倍重量乙 醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為1:2,控制溫度至70°C保持4h，過濾，濾液 減壓濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎至粒徑0. 1-0. 3_，然后添加粉碎物質(zhì)量0. 01-0. 03 %的維 生素 D，混合均勻即得植物提取物；
[0024] 所述混合酶的重量份數(shù)組成為：木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，葡聚糖酶15份， 脂肪酶15份，普魯蘭酶10份，酸性蛋白酶12份，果膠酶12份，甘露糖酶12份，葡萄糖氧化 酶6份，酸性磷酸酶8份；
[0025] 所述乙醇濃度為75%。
[0026] 進一步地，所述蛋白粉為酸奶粉、大豆蛋白、酪蛋白、乳清蛋白中的一種或幾種；
[0027] 優(yōu)選地，所述蛋白粉重量百分比組成為：酸奶粉40 %，乳清蛋白35 %，大豆蛋白 15%，酪蛋白10% ;
[0028] 所述酸奶粉為市購商品，乳酸菌活菌含量為3X10n-5 X10nCfU/g。
[0029] 進一步地，所述茶葉提取物的制備方法依次包括如下步驟：將市售茶葉放入裝有 0.8%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于2001、401(取清洗10-151^11，然后于0.25-0.351〇^ 壓力下表面均勻噴涂質(zhì)量百分比濃度0.5-1. 5%的無菌麥芽糊精水溶液，茶葉與麥芽 糊精水溶液的質(zhì)量比為：1 〇 〇: 〇. 5 -15，密封，室溫下復(fù)水2 - 8 h ;然后于-21-- 2 5 °C冷凍 10-30min ;立即進行粉碎，粒徑為0. l-2mm ;粉碎后的茶葉置于配料缸中，添加茶葉質(zhì)量 5-10倍的無菌水，室溫200W、40KHz條件超聲提取10-15min ;同時于電場強度20-40kV/cm， 脈沖時間400-500 μ s，脈沖頻率200-300HZ條件下進行高壓脈沖電場提?。蛔詈髮⑸鲜鎏?取液用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4. 5-6. 5,加入混合物質(zhì)量0. 5-1. 5%的復(fù)合酶，于35-45°C低溫酶 解4-12h ;酶解液過濾、濾液減壓濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎至粒徑為0. 1-0. 3_即得茶葉提 取物；
[0030] 所述復(fù)合酶為果膠酶、纖維素酶、單寧酶、蛋白酶中的一種或多種；
[0031] 優(yōu)選地，所述果膠酶、纖維素酶、單寧酶和蛋白酶混合的質(zhì)量比為 1-2:2-4:2-4:1-3〇
[0032] 進一步地，所述中草藥提取物的制備方法為：按重量份數(shù)計，準(zhǔn)確稱取艾葉50-55 份，大蒜50-55份，馬齒筧45-55份，魚腥草45-55份，黃芩30-45份，黃柏30-40份，山楂 30-40份，甘草25-35份，苦參15-25份，澤瀉8-10份，虎杖6-8份，大黃2-5份，白芥子2-5 份，首烏1-3份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添 加混合物5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然后降溫至50°C，加入混合物料總重量8% 的復(fù)配酶進行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6. 2,酶解3h，最后添加混合物料1. 8倍重量乙醇 和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為1:2,控制溫度至70°C保持4h，過濾，得第一 濾液；添加濾渣2倍重量的水，控制溫度90°C保持2h，然后降溫至30°C，過濾，得第二濾液； 將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量比2. 5:1. 5合并，減壓濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎至粒徑為 0. 1-0. 3mm即得中草藥提取物；
[0033] 所述復(fù)配酶的重量份數(shù)組成為：內(nèi)β -葡聚糖酶20份，夕卜β -葡聚糖酶18份， β -葡萄糖苷酶12份，木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，普魯蘭酶25份，β -淀粉酶12份， 酸性蛋白酶12份，果膠酶12份，甘露糖酶12份，葡萄糖氧化酶6份，酸性磷酸酶8份，脂肪 酶6份；
[0034] 所述乙醇濃度為75%。
[0035] 進一步地，所述甜味劑為赤蘚糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、山梨糖醇、甜菊糖、羅漢果 甙、阿斯巴甜中的一種或幾種以任意比例混合。
[0036] 所述益生菌片劑的制備方法，包括如下步驟：按上述配方準(zhǔn)確稱取各組份原料，首 先將益生菌粉劑和改性膳食纖維均勻混合20-30min，然后依次加入中草藥提取物、茶葉提 取物、蛋白粉、植物提取物、低聚糖、果蔬粉均勾混合l〇-15min，將混合料加入干法造粒機造 粒，收集10-100目的顆粒，依次加入甜味劑、硬脂酸鎂混合后得到可直接壓片的原料，投入 壓片機壓片，調(diào)節(jié)壓力為10-40kn，得到益生菌片劑。
[0037] 上述制備方法中益生菌片劑可以壓成直徑6?12mm、片重0. 3?0. 5g、硬度8? 10kg/cm2的片劑。
[0038] 所述益生菌片劑益生菌活菌含量為：6xlOn-8xlO ncfu/g。
[0039] 本發(fā)明益生菌片劑可用于日常補充人體益生菌，也可作為肥胖癥患者減肥輔助食 品，還可以作為食品原料使用。
[0040] 本發(fā)明另一目的是所述益生菌片劑在減肥中的應(yīng)用。
[0041] 使用說明：
[0042] L 產(chǎn)品規(guī)格：32 片 X 0· 4g ;
[0043] 2.日常益生菌補充：溫開水口服，一次0.4-0. 8克，一日2次。
[0044] 3.肥胖癥患者：溫開水沖服，成人一次0. 8-2克，一日三次。
[0045] 4.適宜人群：尚未發(fā)現(xiàn)不適宜人群。
[0046] 本發(fā)明植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum) tl j-2014 已于 2014 年 7 月 2 日 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址為：中國北京市 朝陽區(qū)北辰西路1號院3號.中國科學(xué)院微生物研宄所.郵編：100101)，保藏編號為CGMCC NO. 9405,分類命名為：植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum。
[0047] 所述植物乳桿菌菌株特點如下：在顯微鏡下觀察，該菌株為短桿狀，革蘭氏染色呈 陽性，無鞭毛，不產(chǎn)芽孢；在固體培養(yǎng)基上，該菌菌落為白色，表面光滑，致密，形態(tài)為圓形， 邊緣較整齊。
[0048] 理化特征為：過氧化氫酶（_)，明膠液化（_)，吲哚實驗（+)，運動性（_)，發(fā)酵產(chǎn)氣 (-)，亞硝酸鹽還原（-)，發(fā)酵產(chǎn)氣（-)，產(chǎn)硫化氫氣體（-)，pH4. OMRS培養(yǎng)基中生長（+)。
[0049] 所述植物乳桿菌采用下述流程進行選育：
[0050] 原始出發(fā)菌種一試管活化一硫酸二乙酯（DES)誘變一亞硝基胍（NTG)誘變一等離 子體誘變一平板初篩一搖瓶復(fù)篩一傳代穩(wěn)定性試驗。
[0051] 所述出發(fā)菌株在MRS葡萄糖培養(yǎng)基中，其乳酸的生產(chǎn)速率為1.5g/L/d，當(dāng)培養(yǎng)基 pH為3. 5時幾乎停止生長，對亞硝酸鈉的分解速率為0. 34mg/h/kg白菜。出發(fā)菌株為李政 采集于寧夏鹽池縣育肥羊場的青儲飼料，采集時間2013年9月15日。
[0052] 為了提高其乳酸生產(chǎn)速率、耐酸能力和亞硝酸鹽的分解速率，依次采用DES和NTG 技術(shù)對該菌種進行誘變，誘變后菌株采用MRS碳酸鈣平板進行初篩，然后采用500mL搖瓶發(fā) 酵，生物傳感器分析儀對高產(chǎn)菌進行復(fù)篩，選育優(yōu)良的植物乳桿菌菌株，然后做傳代實驗， 評價其遺傳穩(wěn)定性。
[0053] 植物乳桿菌tlj-2014遺傳穩(wěn)定性結(jié)果表明：經(jīng)過連續(xù)傳代十次，各項性能指標(biāo)都 比較穩(wěn)定，遺傳性較好，性狀沒有回復(fù)，因此把植物乳桿菌tlj-2014作為選育得到的目的 菌株。
[0054] 經(jīng)驗證發(fā)現(xiàn)：該誘變菌株的乳酸生產(chǎn)速率可以達到35g/L/d，該菌株經(jīng)過71小時 發(fā)酵后乳酸濃度達到95g/L ;能夠在pH為1. 80的條件下存活。降解亞硝酸鹽速度快，分解 能力達到9. 8mg/h/kg (自然發(fā)酵過程亞硝酸鹽積累的速率大約為I. lmg/h/kg)，能夠耐1 % 膽鹽。
[0055] 因此采用該菌種生產(chǎn)泡菜，整個發(fā)酵過程中亞硝酸鹽濃度在5mg/kg以下，遠低于 國家標(biāo)準(zhǔn)GB2714-2003中規(guī)定的含量（20mg/kg)。
[0056] 有益效果：
[0057] 本發(fā)明益生菌片劑以植物乳桿菌等益生菌粉劑為主要原料，科學(xué)復(fù)配改性膳食纖 維、果蔬粉、低聚糖、植物提取物、蛋白粉、茶葉提取物、中草藥提取物等，提高了對益生菌群 具有真正意義的可溶性纖維素的含量，增強了纖維素的生理活性，進而在增加腸道益生菌 菌群種類的同時，顯著增強了內(nèi)源和外源益生菌在人體腸道內(nèi)的定植能力及定植時間，有 效抑制了腸道有害菌尤其是革蘭氏陰性菌的生長及繁殖，充分調(diào)節(jié)了腸道益生菌菌群的組 成，制備的益生菌片劑生物活性高、在人體腸道定植時間長、減肥效果顯著并且適宜人群廣 泛。
[0058] 尤其是本發(fā)明改性膳食纖維的強大網(wǎng)格結(jié)構(gòu)和吸附力，將益生菌粉包裹其中， 再加上中草藥提取物的抑菌作用、茶葉提取物的抗氧化作用等增強了益生菌片劑的穩(wěn)定 性，提高了片劑的益生菌活菌存活率，在25°C的溫度下密閉保存，放置12個月后按照常 規(guī)方法檢測片劑中活菌數(shù)并計算存活率為83-89%，比現(xiàn)有的益生菌片劑活菌存活率提 高24-30% ;通過耐熱試驗、模擬胃液及腸液耐受試驗、模擬膽鹽耐受試驗表明，片劑中的 益生菌能保持較高的活菌存活率，其活菌存活率可達到88-99%，益生性顯著；經(jīng)小鼠腸道 性能試驗表明：益生菌片劑治療組小鼠體重平均增長率（53.31% )顯著高于自然恢復(fù)組 (32. 14% );飼喂片劑溶液后腸道大腸桿菌數(shù)量顯著下降，降低80. 89%，顯著低于自然恢 復(fù)組（24. 78% )，表明本發(fā)明益生菌片劑中的益生菌在小白鼠腸道內(nèi)迅速定植，形成優(yōu)勢 菌群，并有效抑制大腸桿菌等病原菌的生長繁殖，并且定植時間長，持續(xù)、有效改善了腸道 性能；適宜人群廣泛，減肥效果好，服用一個周期（30天）后，體重降低I-IOkg以上的人數(shù) 為95人，減肥效果達到了 95%以上，其中體重降低l-5kg、5-10kg、10kg以上分別為53%、 26%和16% ;減肥效果較顯著的年齡段是25-50歲以上，其中體重降低IOkg以上的人群主 要為25-30歲，其次為30-50歲人群；50歲以上的人群體重降低主要在IOkg以下，可見， 本發(fā)明益生菌片劑可適合各種不同年齡的肥胖者食用，并具有顯著的減肥效果；同時，降低 IOkg以上的嚴(yán)重肥胖者占37. 5%，中度肥胖者占37. 5%，輕度肥胖者占25% ;降低l-5kg 的嚴(yán)重肥胖者占5. 66%，中度肥胖者占26. 42%，輕度肥胖者占67. 92%，說明本發(fā)明益生 菌片劑對中度及嚴(yán)重肥胖者的減肥效果更佳。
[0059] 具體表現(xiàn)在：
[0060] 1.本發(fā)明益生菌片劑益生菌種類多，其中的植物乳桿菌CGMCC NO. 9405乳酸生產(chǎn) 速率可以達到35g/L/d，該菌株經(jīng)過71小時發(fā)酵后乳酸濃度達到95g/L ;能夠在pH為1. 80 的條件下存活。降解亞硝酸鹽速度快，分解能力達到9. 8mg/h/kg(自然發(fā)酵過程亞硝酸鹽 積累的速率大約為I. lmg/h/kg)，能夠耐1%膽鹽，其益生性能更加優(yōu)越。
[0061] 2.本發(fā)明的改性膳食纖維將超聲提取、高壓脈沖電場提取和生物酶解科學(xué)結(jié)合， 所得改性膳食纖維可溶性纖維素含量高，更容易被益生菌利用，提高益生菌在腸道的生長 及繁殖能力，增加益生菌菌群的種類和數(shù)量，降低大腸 PH值，改善腸道微生態(tài)環(huán)境；吸附能 力強，經(jīng)改性后，纖維素的比表面積增大，網(wǎng)格結(jié)構(gòu)豐富，吸附力增強，螯合、吸附膽固醇和 膽汁酸類的有機分子能力更強、抑制人體對他們的吸收；離子交換能力增強，對金屬元素， 特別是重金屬元素吸附效果更強，有效防止了人體重金屬中毒；持水性、膨脹性、增稠性更 強且不受酸、堿、鹽的影響。
[0062] 3.本發(fā)明中草藥提取物以顯著抑制革蘭氏陰性菌的中草藥為原料，采用水提醇沉 和生物酶解而制得，有效成分含量高，有效替代了抗生素的運用，提高了人體免疫力，加強 了巨噬細胞對有害菌的吞噬作用，抑制了腸道有害菌的生長和繁殖，同時也為益生菌的生 長和繁殖提供了保障。
[0063] 4.本發(fā)明果蔬粉將微波干燥和低溫粉碎相結(jié)合，最大限度地保留了高纖維果蔬的 本身色澤和纖維素、維生素、果糖等營養(yǎng)物質(zhì)，較其他果蔬粉的生產(chǎn)質(zhì)量好、生產(chǎn)周期短、效 率高，有利于益生菌利用和增強腸道蠕動，有利于將有害菌和有毒物質(zhì)排出體外，防止便秘 及腹瀉癥狀的發(fā)生。
[0064] 5.本發(fā)明植物提取物是以能夠顯著促進乳酸菌生長，增加乳酸菌活菌含量的天然 植物及瘦素含量較高的食品原料經(jīng)水提醇沉和生物酶解而制得，運用蘋果醋調(diào)節(jié)PH值，采 用最科學(xué)的提取方法，最大限度地保留了其中的有效成分，用食品原料代替瘦素，以抑制食 欲，增強自我調(diào)節(jié)能力，減少脂肪的體外攝入和體內(nèi)合成，增強了減肥效果，同時也為腸道 益生菌提供了全面、豐富的營養(yǎng)物質(zhì)。
[0065] 6.本發(fā)明茶葉提取物不僅可提供有效的減肥因子，而且含有豐富的天然抗氧化物 質(zhì)，提高了人體的抗氧化能力，消除自由基，提高機體免疫力，延緩機體衰老，減緩腸道菌群 的抗衰老負(fù)擔(dān)，有利于腸道菌群健康成長。
[0066] 7.本發(fā)明益生菌片劑的益生效果和減肥效果的顯著并非各組分功能的簡單結(jié)合， 而是科學(xué)復(fù)配、協(xié)同作用的綜合體現(xiàn)，主要從增加益生菌種類和數(shù)量、增加益生菌營養(yǎng)物 質(zhì)、抑制有害菌生長及增加人體免疫力方面修飾腸道菌群，提高產(chǎn)品的益生性和減肥效果。
[0067] 8.本發(fā)明改性膳食纖維的強大網(wǎng)格結(jié)構(gòu)和吸附力，將益生菌粉包裹其中，再加上 中草藥提取物的抑菌作用、茶葉提取物的抗氧化作用等增強了益生菌片劑的穩(wěn)定性，提高 了片劑的益生菌活菌存活率。

【具體實施方式】
[0068] 下面通過具體的實施方案敘述本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段 均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實施方案應(yīng)理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的 范圍，本發(fā)明的實質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本 發(fā)明實質(zhì)和范圍的前提下，對這些實施方案中的物料成分和用量進行的各種改變或改動也 屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0069] 實施例1原料制備
[0070] 1.植物乳桿菌粉劑的制備：
[0071] (1) -級種子培養(yǎng)：將植物乳桿菌CGMCC NO. 9405菌種接入500毫升搖瓶中，種子 培養(yǎng)基裝量100毫升，培養(yǎng)溫度37°C，培養(yǎng)時間24小時；
[0072] (2)二級種子培養(yǎng)：將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中， 培養(yǎng)條件與一級種子相同；
[0073] (3)三級種子培養(yǎng)：將二級種子以10%接種量接入5000暈升三級種子搖瓶中，種 子培養(yǎng)基裝量1000毫升，培養(yǎng)溫度37°C，培養(yǎng)時間24小時；
[0074] (4) -級種子罐培養(yǎng)：將三級種子以5 %接種量接入總?cè)莘e為150L的一級種子罐， 發(fā)酵培養(yǎng)基裝量100L，培養(yǎng)溫度37°C，罐壓0. 05MPa，培養(yǎng)時間18小時；
[0075] (5)發(fā)酵罐培養(yǎng)：將一級種子罐菌種以5%接種量接入總?cè)莘e為3噸二級種子罐， 發(fā)酵培養(yǎng)基裝量2噸，培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度37°C，罐壓0. 05MPa，培養(yǎng)時間22小時。發(fā)酵完畢 發(fā)酵液靜置沉淀、離心得到沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量〇. 8倍的載體，混合均勻，50°C流 化床干燥即得植物乳桿菌粉劑，載體重量組成為：酸奶粉25份，糊精12份。
[0076] 所述種子培養(yǎng)基質(zhì)量組成為：酪蛋白1%，牛肉膏1%，酵母浸膏0.5%，葡萄 糖 0· 5 %，乙酸鈉 0· 5 %，檸檬酸二胺 0· 2 %，Tween 800. 1 %，K2HPO4O. 2 %，MgSO4. 7H20 0· 02%，MnSO4. H2O 0· 005%，CaC032%，余量為水，ρΗ6· 8。
[0077] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)量組成為：大豆蛋白1%，牛肉提取物1%，酵母提取物0.5%， 葡萄糖 0· 5 %，乙酸鈉 0· 5 %，檸檬酸二胺0.2%，1(2冊040.2%，]\%504.7!1 20 0.02%，]\11^04· H2O 0· 005%，CaC032%，余量為水，ρΗ6· 8。
[0078] 所述植物乳桿菌粉劑中活菌含量為9xl012cfU/g。
[0079] 2.改性膳食纖維的制備
[0080] 所述改性膳食纖維的制備方法包括以下步驟：將菊粉、蘋果纖維、燕麥纖維、小麥 纖維、米糠、麩皮按質(zhì)量比10:7:4:3:2:1. 5均勻混合，加入其質(zhì)量5倍的水，室溫250W、 40KHz條件超聲提取12min，同時于電場強度30kV/cm，脈沖時間500 μ s，脈沖頻率250Hz 條件下進行高壓脈沖電場提?。挥萌樗嵴{(diào)節(jié)pH值為5. 5,加入混合物質(zhì)量0. 2%的生物酶， 于50°C酶解30min ;酶解液減壓濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎至粒徑為0. 2mm即得改性膳食纖 維；
[0081] 所述生物酶為木聚糖酶、纖維素酶、漆酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比6:4:3:2:2均 勻混合。
[0082] 3.果蔬粉的制備
[0083] 所述果蔬粉的質(zhì)量百分比組成為：針葉櫻桃粉15%、檸檬粉13%、韭菜粉10%、芹 菜粉7 %、冬瓜粉7 %、草莓粉5 %、胡蘿卜粉5 %、木瓜粉5 %、菠蘿粉5 %、綠豆芽粉5 %、桔 子粉3 %、柑橘粉3 %、甜橙粉3 %、椰漿粉4 %、蔓越莓粉3 %、黃瓜粉3 %、白蘿卜粉2 %、藍 莓粉2% ;
[0084] 上述果蔬粉均勻混合即得果蔬粉；
[0085] 所述每一種果蔬粉的制備方法為：將果蔬置裝有1. 2%碳酸氫鈉溶液的超聲波清 洗機中于200W、40KHz清洗12min，瀝干，切分成相等規(guī)格，長、寬為6mm，厚度4mm的片或丁， 置微波干燥機中于功率3000W、頻率2000Hz、溫度55°C條件下進行微波干燥7min，直到水分 含量降至 6%，然后于25°C、粉碎至粒徑0. 2_，密封包裝即得果蔬粉。
[0086] 4.植物提取物的制備
[0087] 所述植物提取物的制備方法為：按重量份數(shù)計，準(zhǔn)確稱取菊芋40份，山藥35份，苦 瓜30份，杏仁30份，牛蒡25份，蓮子20份，決明子18份，洋蔥12份，蘆筍8份，粉碎至粒 徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然后 降溫至50°C，加入混合物料總重量8%的混合酶制劑進行酶解，用蘋果醋調(diào)節(jié)pH值為6. 2， 酶解3h，最后添加混合物料1. 8倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為 1:2,控制溫度至70°C保持4h，過濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎至粒徑0. 2mm，然后 添加粉碎物質(zhì)量〇. 02%的維生素 D，混合均勻即得植物提取物；
[0088] 所述混合酶的重量份數(shù)組成為：木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，葡聚糖酶15份， 脂肪酶15份，普魯蘭酶10份，酸性蛋白酶12份，果膠酶12份，甘露糖酶12份，葡萄糖氧化 酶6份，酸性磷酸酶8份；
[0089] 所述乙醇濃度為75%。
[0090] 5.茶葉提取物的制備
[0091] 所述茶葉提取物的制備方法為：將市售茶葉置裝有0. 8%碳酸氫鈉溶液的超聲波 清洗機中于200W、40KHz清洗15min，然后于0. 30MPa壓力下表面均勻噴涂質(zhì)量百分比濃度 1 %的無菌麥芽糊精水溶液，茶葉與麥芽糊精水溶液的質(zhì)量比為：100:5,密封，室溫下復(fù)水 5h ;然后于-21°C冷凍20min ;立即進行粉碎，粒徑為Imm ;粉碎后的茶葉置于配料缸中，添 加茶葉質(zhì)量8倍的無菌水，室溫200W、40KHz條件超聲提取15min ;同時于電場強度30KV/ cm，脈沖時間500 μ S，脈沖頻率300Hz條件下進行高壓脈沖電場提?。蛔詈髮⑸鲜鎏崛∫河?乳酸調(diào)節(jié)pH值為5. 5,加入混合物質(zhì)量1 %的復(fù)合酶，于40°C低溫酶解8h ;酶解液過濾、濾 液減壓濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎至粒徑為0. 2mm即得茶葉提取物；
[0092] 所述復(fù)合酶由果膠酶、纖維素酶、單寧酶和蛋白酶按質(zhì)量比I. 5:3:3:2均勻混合。
[0093] 6.中草藥提取物的制備
[0094] 所述中草藥提取物的制備方法為：按重量份數(shù)計，準(zhǔn)確稱取艾葉53份，大蒜52份， 馬齒筧50份，魚腥草49份，黃芩40份，黃柏35份，山楂35份，甘草30份，苦參20份，澤瀉 9份，虎杖7份，大黃4份，白芥子3份，首烏2份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以 下，然后于容器中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然后降溫至50°C， 加入混合物料總重量8%的復(fù)配酶制劑進行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6. 2,酶解3h，最后添 加混合物料1. 8倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為1:2,控制溫度至 70°C保持4h，過濾，得第一濾液；添加濾渣2倍重量的水，控制溫度90°C保持2h，然后降溫 至30°C，過濾，得第二濾液；將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量比2. 5:1. 5合并，減壓濃縮、 冷凍干燥、低溫粉碎至粒徑為〇. 2_即得中草藥提取物；
[0095] 所述復(fù)配酶的重量份數(shù)組成為：內(nèi)β -葡聚糖酶20份，夕卜β -葡聚糖酶18份， β -葡萄糖苷酶12份，木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，普魯蘭酶25份，β -淀粉酶12份， 酸性蛋白酶12份，果膠酶12份，甘露糖酶12份，葡萄糖氧化酶6份，酸性磷酸酶8份，脂肪 酶6份；
[0096] 所述乙醇濃度為75%。
[0097] 實施例2
[0098] 一種益生菌片劑，由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0099] 益生菌粉劑55份，改性膳食纖維40份，果蔬粉30份，低聚糖25份，植物提取物28 份，酸奶粉22份，茶葉提取物18份，中草藥提取物12份，甜味劑4份，硬脂酸鎂0. 3份； [0100] 所述益生菌粉劑由以下重量份數(shù)的粉劑均勻混合而成：植物乳桿菌50份，長雙歧 桿菌40份，兩岐雙岐桿菌30份，嬰兒雙岐桿菌30份，青春雙岐桿菌18份，保加利亞乳桿菌 18份，嗜酸乳桿菌12份，干酪乳桿菌9份，嗜熱鏈球菌9份、釀酒酵母8份，產(chǎn)朊假絲酵母菌 5份；上述除植物乳桿菌粉劑外，其它均為市購商品，活菌含量為：9 X1012cfu/g ;
[0101] 所述植物乳桿菌粉劑、改性膳食纖維、果蔬粉、植物提取物、茶葉提取物、中草藥提 取物均為實施例1制備；
[0102] 所述低聚糖重量份數(shù)組成為低聚果糖45份，水蘇糖35份，棉子糖30份，低聚木糖 17份，低聚半乳糖12份，大豆低聚糖12份，低聚異麥芽糖12份，低聚麥芽糖10份；
[0103] 所述酸奶粉為市購商品，乳酸菌活菌含量為5xlOnCfU/g ;
[0104] 所述甜味劑為赤蘚糖醇、木糖醇、阿斯巴甜以任意比例混合；
[0105] 所述益生菌片劑的制備方法，包括如下步驟：按上述配方準(zhǔn)確稱取各組份原料，首 先將益生菌粉劑和改性膳食纖維均勻混合25min，然后依次加入中草藥提取物、茶葉提取 物、蛋白粉、植物提取物、低聚糖、果蔬粉均勻混合12min，將混合料加入干法造粒機造粒，收 集15-50目的顆粒，依次加入甜味劑、硬脂酸鎂混合后得到可直接壓片的原料，投入壓片機 壓片，調(diào)節(jié)壓力為30kn，得到益生菌片劑，在25°C的溫度下密閉保存，放置12個月后按照常 規(guī)方法檢測片劑中活菌數(shù)并計算存活率為89%。
[0106] 實施例3
[0107] 一種益生菌片劑，由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0108] 益生菌粉劑50份，改性膳食纖維38份，果蔬粉25份，低聚糖20份，植物提取物25 份，蛋白粉18份，茶葉提取物15份，中草藥提取物10份，甜味劑2份，硬脂酸鎂0. 2份；
[0109] 所述益生菌粉劑由以下重量份數(shù)的粉劑均勻混合而成：植物乳桿菌45份，長雙歧 桿菌35份，兩岐雙岐桿菌25份，嬰兒雙岐桿菌25份，青春雙岐桿菌15份，保加利亞乳桿菌 15份，嗜酸乳桿菌10份，干酪乳桿菌8份，嗜熱鏈球菌8份、釀酒酵母5份，產(chǎn)朊假絲酵母菌 4份；上述除植物乳桿菌粉劑外，其它均為市購商品，活菌含量為：8 X1012cfu/g ;
[0110] 所述植物乳桿菌粉劑、改性膳食纖維、果蔬粉、植物提取物、茶葉提取物、中草藥提 取物均為實施例1制備；
[0111] 優(yōu)選地，所述低聚糖重量份數(shù)組成為低聚果糖40份，水蘇糖30份，棉子糖20份， 低聚木糖16份，低聚半乳糖10份，大豆低聚糖10份，低聚異麥芽糖10份，低聚麥芽糖8份；
[0112] 所述蛋白粉重量百分比組成為：酸奶粉40 %，乳清蛋白35 %，大豆蛋白15 %，酪蛋 白 10% ;
[0113] 所述酸奶粉為市購商品，乳酸菌活菌含量為3X10ncfu/g ;
[0114] 所述甜味劑為赤蘚糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、山梨糖醇、甜菊糖、羅漢果甙、阿斯巴 甜以任意比例混合；
[0115] 所述益生菌片劑的制備方法同實施例2,在25°C的溫度下密閉保存，放置12個月 后按照常規(guī)方法檢測片劑中活菌數(shù)并計算存活率為85%。
[0116] 實施例4
[0117] 一種益生菌片劑，由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0118] 益生菌粉劑60份，改性膳食纖維42份，果蔬粉35份，低聚糖30份，植物提取物30 份，蛋白粉25份，茶葉提取物20份，中草藥提取物15份，甜味劑5份，硬脂酸鎂0. 5份；
[0119] 所述益生菌粉劑由以下重量份數(shù)的粉劑均勻混合而成：植物乳桿菌55份，長雙歧 桿菌45份，兩岐雙岐桿菌35份，嬰兒雙岐桿菌35份，青春雙岐桿菌20份，保加利亞乳桿菌 20份，嗜酸乳桿菌15份，干酪乳桿菌10份，嗜熱鏈球菌10份、釀酒酵母10份，產(chǎn)朊假絲酵 母菌6份；上述除植物乳桿菌粉劑外，其它均為市購商品，活菌含量為 ：7X1012cfU/g ;
[0120] 所述植物乳桿菌粉劑、改性膳食纖維、果蔬粉、植物提取物、茶葉提取物、中草藥提 取物均為實施例1制備；
[0121] 所述低聚糖重量份數(shù)組成為低聚果糖50份，水蘇糖40份，棉子糖40份，低聚木糖 18份，低聚半乳糖15份，大豆低聚糖15份，低聚異麥芽糖15份，低聚麥芽糖12份；
[0122] 所述蛋白粉重量百分比組成為：酸奶粉40 %，乳清蛋白35 %，大豆蛋白15 %，酪蛋 白 10% ;
[0123] 所述酸奶粉為市購商品，乳酸菌活菌含量為4X10ncf U/g。
[0124] 所述甜味劑為甜菊糖、羅漢果甙、阿斯巴甜以任意比例混合；
[0125] 所述益生菌片劑的制備方法同實施例2,在25°C的溫度下密閉保存，放置12個月 后按照常規(guī)方法檢測片劑中活菌數(shù)并計算存活率為85%。
[0126] 實施例5
[0127] -種益生菌片劑，由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0128] 益生菌粉劑60份，改性膳食纖維38份，果蔬粉35份，低聚果糖20份，植物提取物 30份，乳清蛋白18份，茶葉提取物20份，中草藥提取物15份，阿斯巴甜2份，硬脂酸鎂0. 5 份；
[0129] 所述益生菌粉劑由以下重量份數(shù)的粉劑均勻混合而成：植物乳桿菌55份，長雙歧 桿菌35份，兩岐雙岐桿菌35份，嬰兒雙岐桿菌25份，青春雙岐桿菌20份，保加利亞乳桿菌 15份，嗜酸乳桿菌15份，干酪乳桿菌10份，嗜熱鏈球菌10份、釀酒酵母10份，產(chǎn)朊假絲酵 母菌6份；上述除植物乳桿菌粉劑外，其它均為市購商品，活菌含量為：9X1012cf U/g ;
[0130] 所述植物乳桿菌粉劑、改性膳食纖維、果蔬粉、植物提取物、茶葉提取物、中草藥提 取物均為實施例1制備；
[0131] 所述益生菌片劑的制備方法同實施例2在25°C的溫度下密閉保存，放置12個月后 按照常規(guī)方法檢測片劑中活菌數(shù)并計算存活率為83%。
[0132] 實施例6益生菌片劑的益生性試驗
[0133] 將本發(fā)明實施例2制備的益生菌片劑，用無菌水制備成活菌數(shù)為2X 101(lCFU/mL的 益生菌溶液，于4°C保存?zhèn)溆茫?br> [0134] 1、取保存好的IOmL益生菌溶液注入到試管1中，采用十倍逐級稀釋至10Λ取ImL 稀釋液在平板上，將滅菌后冷卻至45°C的MRS瓊脂培養(yǎng)基傾注在平板（滅菌）上，迅速搖 勻。再將裝有IOmL益生菌溶液的試管2置于80-90°C水浴鍋中加熱15-25min，取加熱后的 益生菌溶液進行十倍逐級稀釋至1〇_ 8,取ImL稀釋液在平板上，將滅菌后冷卻至45°C的MRS 瓊脂培養(yǎng)基傾注在平板（滅菌）上并迅速搖勻。最后將加熱前和加熱后的平板均在35°C條 件下培養(yǎng)24h，計算加熱前后的數(shù)量。
[0135] 結(jié)果表明，活菌存活率達到了 88%。
[0136] 2、模擬胃液及腸液的耐受試驗：取100g/L的鹽酸16. 4mL加蒸餾水稀釋，使pH值 分別為I. 5、2. 5和3. 5,取IOOmL稀鹽酸溶液，分別加入Ig胃蛋白酶，使其充分溶解，得模擬 胃液，微孔濾膜除菌（0. 22 μ m)備用。取磷酸二氫鉀6. 8g，加水500mL使溶解，用0. ImoL/ L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 8 ;另取胰蛋白酶10g，加水IOOmL使溶解，將兩液混合后， 加水稀釋至1000ml，得模擬腸液，微孔濾膜除菌（0.22ym)備用。取ImL保存好的益生菌 溶液加入到9mL的模擬胃液中（即十倍逐級稀釋），并迅速在振蕩器上充分混勻，然后置于 30-45°C靜置培養(yǎng)2-4h。分別在lh、2h、3h、4h的時候取出培養(yǎng)液并立即計數(shù)殘存活菌數(shù)，與 原活菌數(shù)進行比較，結(jié)果表明，活菌存活率為97%。然后取在人工胃液中消化不同時間的培 養(yǎng)液各lmL，分別接種于9mL pH值為6. 8的人工腸液中，置于30-45°C靜置培養(yǎng)2-4h，并分 別在0、3、6、24h取樣，測定其活菌數(shù)，與原活菌數(shù)進行比較，結(jié)果表明活菌存活率為99%。
[0137] 3、模擬膽鹽的耐受試驗：用胰液素制成lg/L的溶液，并在溶液中加入0. 8%的豬 膽鹽，用10%的NaOH調(diào)整pH為8. 0,然后用0. 45 μ m微濾膜過濾并除菌。將0. 5mL保存好 的益生菌溶液接種到4. 5mL模擬膽鹽中，培養(yǎng)24h后得到培養(yǎng)液，計數(shù)殘存的活菌數(shù)。將培 養(yǎng)液在滅菌生理鹽水中十倍逐級稀釋至1〇_8,并用MRS傾注，然后置于35°C靜置培養(yǎng)24h。 結(jié)果表明活菌存活率為99%。
[0138] 實施例7果蔬益生菌片小鼠腸道性能試驗
[0139] 將本發(fā)明實施例2制備的益生菌片劑，用無菌水制備成活菌數(shù)為2X 101(lCFU/mL的 益生菌溶液，于4°C保存?zhèn)溆茫?br> [0140] 選取普通昆明小白鼠60只，雌雄各半，18-20g，常規(guī)詞養(yǎng)。從中隨機挑選40只，每 天早晨9:00灌胃鹽酸林可霉素0. 2mL (20mg) /只，其它作為對照組，每天同一時間灌胃等量 滅菌生理鹽水，連續(xù)一周，制備腸道菌群失調(diào)的小鼠模型。模型組小鼠飲食下降，未出現(xiàn)死 亡和明顯的腹瀉現(xiàn)象，排軟糞，外形正常含水分較多，墊料潮濕。將40只腸道菌群失調(diào)小 鼠，隨機分為2組，一組20只作為治療組，每天灌胃保存好的益生菌溶液0. 5ml (2 X IOltlCfu/ ml) /只，另20只作為自然恢復(fù)組，每天同一時間灌胃等量滅菌生理鹽水，連續(xù)兩周。整個試 驗期21天，每天觀察小白鼠的生長和排便情況，于第8、21天對益生菌片劑治療組和自然恢 復(fù)組的小鼠進行稱重，計算各組體重平均增長率，結(jié)果如表1 ;每5天測各組小鼠糞便大腸 桿菌數(shù)量，計算平均數(shù)，結(jié)果如表2。取小鼠糞便約0. lg，于無菌操作臺內(nèi)加入3粒玻璃珠 (以〇. Ig糞樣加〇. 5mL稀釋液），稀釋并接種麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，計算每克濕便中的大腸桿 菌數(shù)。
[0141] 表1小鼠增重情況
[0142]

【權(quán)利要求】
1. 一種益生菌片劑，由以下重量份數(shù)的原料制備：益生菌粉劑50-60份，改性膳食纖維 38-42份，果蔬粉25-35份，低聚糖20-30份，植物提取物25-30份，蛋白粉18-25份，茶葉提 取物15-20份，中草藥提取物10-15份，甜味劑2-5份，硬脂酸鎂0. 2-0. 5份； 所述改性纖維是由菊粉、蘋果纖維、燕麥纖維、小麥纖維、米糠、麩皮中的一種或多種經(jīng) 生物酶酶解而得到的； 所述植物提取物是以能夠促進乳酸菌生長且瘦素含量較高的的天然植物經(jīng)提取而制 得。
2. 如權(quán)利要求1所述的益生菌片劑，其特征在于，所述益生菌粉劑由以下重量份數(shù)的 粉劑均勾混合而成：植物乳桿菌45-55份，長雙歧桿菌35-45份，兩岐雙岐桿菌25-35份，嬰 兒雙岐桿菌25-35份，青春雙岐桿菌15-20份，保加利亞乳桿菌15-20份，嗜酸乳桿菌10-15 份，干酪乳桿菌8-10份，嗜熱鏈球菌8-10份、釀酒酵母5-10份，產(chǎn)朊假絲酵母菌4-6份。
3. 如權(quán)利要求2所述的益生菌片劑，其特征在于，所述植物乳桿菌粉劑的制備方法包 括如下步驟：將植物乳桿菌CGMCC NO. 9405菌種經(jīng)一、二、三級搖瓶及一級種子罐擴大培養(yǎng) 得到一級種子罐菌種；以5%接種量接入二級種子罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝量為罐容的三分之二， 培養(yǎng)條件為溫度37°C，罐壓0. 05MPa，培養(yǎng)時間22小時，發(fā)酵液靜置沉淀、離心得到沉淀物， 然后添加沉淀物質(zhì)量0. 8倍的載體，混合均勻，50°C流化床干燥即得植物乳桿菌粉劑，載體 重量組成為：酸奶粉25份，糊精12份。
4. 如權(quán)利要求1所述的益生菌片劑，其特征在于，所述改性膳食纖維的制備 方法包括以下步驟：將菊粉、蘋果纖維、燕麥纖維、小麥纖維、米糠、麩皮按質(zhì)量比 7-12:6-9:3-5:2-4:1-3:1-2 均勻混合，加入其質(zhì)量 3-7 倍的水，室溫 200-300W、35-40KHz 條件超聲提取l〇_15min，同時于電場強度20-40kV/cm，脈沖時間400-500 y s，脈沖頻率 200-300HZ條件下進行高壓脈沖電場提取；用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4. 5-6. 5,加入混合物質(zhì)量 0. 1-0. 3%的生物酶，于45-55°C酶解20-48min ;酶解液減壓濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎至粒 徑為0. 1-0. 3_即得改性膳食纖維； 所述生物酶為木聚糖酶、纖維素酶、漆酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比 4-7:3-5:2-4:1-3:1-3 均勻混合。
5. 如權(quán)利要求1所述的益生菌片劑，其特征在于，所述果蔬粉的質(zhì)量百分比組成為： 針葉櫻桃粉15%、檸檬粉13%、韭菜粉10%、芹菜粉7%、冬瓜粉7%、草莓粉5%、胡蘿卜 粉5 %、木瓜粉5 %、菠蘿粉5 %、綠豆芽粉5 %、桔子粉3 %、柑橘粉3 %、甜橙粉3 %、椰漿粉 4%、蔓越莓粉3%、黃瓜粉3%、白蘿卜粉2%、藍莓粉2% ;所述每一種果蔬粉的制備方法 為：將果蔬放入裝有1.2%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于2001、401(抱清洗10-151^11， 瀝干，切分成相等規(guī)格，長、寬為5-10mm，厚度3-5mm的片或丁，置微波干燥機中于功率 3000W、頻率2000Hz、溫度50-60°C條件下進行微波干燥6-12min，直到水分含量降至5-8%， 然后于20-30°C、粉碎至粒徑0. 1-0. 3_，密封包裝即得果蔬粉。
6. 如權(quán)利要求1所述的益生菌片劑，其特征在于，所述植物提取物的制備方法為：按 重量份數(shù)計，準(zhǔn)確稱取菊芋30-50份，山藥30-40份，苦瓜20-40份，杏仁20-40份，牛蒡 20-30份，蓮子15-25份，決明子15-20份，洋蔥10-15份，蘆筍5-10份，粉碎至粒徑為2毫 米以下，然后于容器中均勻混合并添加混合物5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然后 降溫至50°C，加入混合物料總重量8%的混合酶制劑進行酶解，用蘋果醋調(diào)節(jié)pH值為6. 2， 酶解3h，最后添加混合物料1. 8倍重量濃度為75%乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合 的質(zhì)量比為1:2,控制溫度至70°C保持4h，過濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎至粒徑 0. 1-0. 3mm，然后添加粉碎物質(zhì)量0. 01-0. 03%的維生素 D，混合均勻即得植物提取物； 所述混合酶的重量份數(shù)組成為：木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，葡聚糖酶15份，脂肪 酶15份，普魯蘭酶10份，酸性蛋白酶12份，果膠酶12份，甘露糖酶12份，葡萄糖氧化酶6 份，酸性磷酸酶8份。
7. 如權(quán)利要求1所述的益生菌片劑，其特征在于，所述蛋白粉重量百分比組成為：酸奶 粉40 %，乳清蛋白35 %，大蛋白15 %，酷蛋白10 %。
8. 如權(quán)利要求1所述的益生菌片劑，其特征在于，所述中草藥提取物的制備方法為：按 重量份數(shù)計，準(zhǔn)確稱取艾葉50-55份，大蒜50-55份，馬齒筧45-55份，魚腥草45-55份，黃 芩30-45份，黃柏30-40份，山楂30-40份，甘草25-35份，苦參15-25份，澤瀉8-10份，虎 杖6-8份，大黃2-5份，白芥子2-5份，首烏1-3份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米 以下，然后于容器中均勻混合并添加混合物5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然后降溫 至50°C，加入混合物料總重量8 %的復(fù)配酶進行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6. 2,酶解3h，最 后添加混合物料1. 8倍重量濃度為75%的乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比 為1:2,控制溫度至70°C保持4h，過濾，得第一濾液；添加濾渣2倍重量的水，控制溫度90°C 保持2h，然后降溫至30°C，過濾，得第二濾液；將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量比2. 5:1. 5 合并，減壓濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎至粒徑為〇. 1-0. 3_即得中草藥提取物； 所述復(fù)配酶的重量份數(shù)組成為：內(nèi)0 -葡聚糖酶20份，外0 -葡聚糖酶18份，0 -葡萄 糖苷酶12份，木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，普魯蘭酶25份，0 -淀粉酶12份，酸性蛋白 酶12份，果膠酶12份，甘露糖酶12份，葡萄糖氧化酶6份，酸性磷酸酶8份，脂肪酶6份。
9. 如權(quán)利要求1-8任一所述益生菌片劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： 按照配方準(zhǔn)確稱取各組份原料，首先將益生菌粉劑和改性膳食纖維均勻混合20-30min， 然后依次加入中草藥提取物、茶葉提取物、蛋白粉、植物提取物、低聚糖、果蔬粉均勻混合 10-15min，將混合料加入干法造粒機造粒，收集10-100目的顆粒，依次加入甜味劑、硬脂酸 鎂混合后得到可直接壓片的原料，投入壓片機壓片，調(diào)節(jié)壓力為10_40kn，得到益生菌片劑。
10. 如權(quán)利要求9所述益生菌片劑的制備方法，其特征在于，所述茶葉提取物的制備 方法依次包括如下步驟：將市售茶葉放入裝有0. 8%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于 200W、40KHz清洗10-15min，然后于0. 25-0. 35MPa壓力下表面均勻噴涂質(zhì)量百分比濃度 0. 5-1. 5%的無菌麥芽糊精水溶液，茶葉與麥芽糊精水溶液的質(zhì)量比為：100:0. 5-15,密封， 室溫下復(fù)水2-8h ;然后于-21 25°C冷凍l〇-30min ;立即進彳丁粉碎，粒徑為0. l-2mm ;粉 碎后的茶葉置于配料缸中，添加茶葉質(zhì)量5-10倍的無菌水，室溫200W、40KHz條件超聲提取 10-15min ;同時于電場強度20-40kV/cm，脈沖時間400-500 y s,脈沖頻率200-300HZ條件 下進行高壓脈沖電場提取；最后將上述提取液用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4. 5-6. 5,加入混合物質(zhì) 量0. 5-1. 5%的復(fù)合酶，于35-45°C低溫酶解4-12h ;酶解液過濾、濾液減壓濃縮、冷凍干燥、 低溫粉碎至粒徑為0. 1-0. 3_即得茶葉提取物； 所述復(fù)合酶為果膠酶、纖維素酶、單寧酶、蛋白酶按質(zhì)量比1-2:2-4:2-4:1-3均勻混 合。
【文檔編號】A23L1/308GK104432092SQ201410709383
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月30日
【發(fā)明者】邵素英 申請人:邵素英