一種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測試劑盒，包括體積比為6:1的R1和R2，本發(fā)明與常用的檢測試劑盒相比，減少了R2的劑量，降低了成本，并可以有效地增強(qiáng)試劑的重復(fù)性，從而增強(qiáng)了試劑檢測的精確性可信度。同時操作方法簡單，可在醫(yī)療市場廣泛推廣。
【專利說明】—種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測試劑盒，屬體外診斷試劑【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]同型半胱氨酸(Homocysteine, HCY)是引起心血管疾病的獨(dú)立危險因子。研究表明:Hcy每升高5umol/L腦卒中風(fēng)險升高59%，缺血性心臟病風(fēng)險升高32% ；Hcy每降低5umol/L腦卒中風(fēng)險降低24%，缺血性心臟病風(fēng)險降低16%。HCY對心血管疾病的早期評價的前瞻性優(yōu)于膽固醇40倍，但由于人體HCY沒有編碼基因，食物中也不含HCY，只是蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物，使得HCY作為心血管疾病獨(dú)立危險因子具有更大優(yōu)勢和意義。
[0003]血漿中同型半胱氨酸的測定主要采用HPLC方法，是需要特殊設(shè)備，對還原型Hcy的熒光衍生物或使用電化學(xué)檢測器直接測量。由于時間和價格因素，僅在大醫(yī)院或檢驗(yàn)中心應(yīng)用。
[0004]酶聯(lián)免疫法檢測同型半胱氨酸的原理是基于小分子捕獲技術(shù)(SMT)基礎(chǔ)上，通過循環(huán)酶法使含量極低的小分子代謝物HCY檢測得以實(shí)現(xiàn)。游離型HCY與共價底物S-腺苷甲硫氨酸SAM催化反應(yīng)形成蛋氨酸(HCY的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)。SAH被SAH水解酶水解成腺苷和HCY，形成的HCY可以循環(huán)加入反應(yīng)，從而放大了檢測信號，腺苷(Ado)立即水解為次黃嘌呤和氨，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，使NADH轉(zhuǎn)化為NAD+，樣本中的HCY的濃度與NADH的變化成正比。
[0005]利用酶法對同型半胱氨酸進(jìn)行檢測的方法操作簡單，而且檢測同型半胱氨酸對臨床心血管疾病診斷有著很好指導(dǎo)意義，因此最近幾年得到了很好的推廣。但是該檢測方法，容易受到血清中丙酮酸等雜質(zhì)物質(zhì)的干擾，造成檢測的結(jié)果不準(zhǔn)確，重復(fù)性差，在與化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒比對時，結(jié)果有偏差，不利于臨床檢測應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測試劑盒。
[0007]本發(fā)明的試劑盒主要成分包括:包括體積比為6:1的Rl和R2，各組分的組成和含量如下:
Rl:
S-腺苷甲硫氨酸(SAM)0.2mM
NADH0.4mM
乙酸納0.6 mM
α 一酮戊二酸6mM
三(2羧乙 基)膦氯化氫(TCEP )0.6mM
抗壞血酸酶2 KU/L ；R2:
Hcy 甲基轉(zhuǎn)移酶(HMTase)6KU/L
谷氨酸脫氫酶(GLDH)12KU/L
S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶(SAHase)3KU/L
腺苷脫氨酶(ADA)6 KU/L
牛血清白蛋白0.5g/L 。
[0008]本發(fā)明的試劑盒采用酶法檢測，與使用昂貴HPLC (高壓液相色譜儀)檢測相比，該試劑盒適用于全自動生化分析儀，操作簡單，成本較低，適合于各大中型醫(yī)院和大部分小醫(yī)院。并且在臨床上檢測心血管病人及有心血管病家族史但無臨床癥狀的亞健康人群的血液中HCY的含量表現(xiàn)出重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)。同時，增大試劑I的用量，在不影響檢測結(jié)果的前提下減少了費(fèi)用。【具體實(shí)施方式】
[0009]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0010]實(shí)施例1
通過將樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發(fā)生酶促反應(yīng)，再將反應(yīng)物置于可見光分析儀下，檢測主波長340nm處吸光度上升的大小程度，從而測算出同型半胱氨酸的濃度。
[0011]試劑及含量如下:
Rl:
S-腺苷甲硫氨酸(SAM)0.2mM
NADH0.4mM
乙酸納0.6 mM
α 一酮戊二酸6mM
三(2羧乙基)膦氯化氫(TCEP )0.6mM
抗壞血酸酶2 KU/L ；
R2:
Hcy 甲基轉(zhuǎn)移酶(HMTase)6KU/L
谷氨酸脫氫酶(GLDH)12KU/L
S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶(SAHase)3KU/L
腺苷脫氨酶(ADA)6 KU/L
牛血清白蛋白0.5g/L 。
[0012]按照以下的使用量進(jìn)行檢測:
表1本試劑盒檢測方法
【權(quán)利要求】
1.一種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測試劑盒，其特征在于，包括體積比為6:1的Rl和R2，各組分的組成和含量如下:
Rl: S-腺苷甲硫氨酸0.2mM NADH0.4mM 乙酸納0.6 mM α 一酮戊二酸6mM 三(2羧乙基)膦氯化氫0.6mM 抗壞血酸酶2 KU/L ；
R2: Hcy甲基轉(zhuǎn)移酶6KU/L 谷氨酸脫氫酶12KU/L S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶3KU/L 腺苷脫氨酶6 KU/L 牛血清白蛋白 0.5g/L 。
【文檔編號】C12Q1/28GK103952461SQ201410202766
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月14日
【發(fā)明者】譚柏清, 葉麗華, 甘宜梧, 李靜 申請人:山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司