一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及無菌環(huán)境的檢測，尤其涉及一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿及其制備方法，所述的抗生素為β-內(nèi)酰胺類抗生素，在培養(yǎng)基平皿內(nèi)設(shè)置培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中添加了與所述的β-內(nèi)酰胺類抗生素相對應(yīng)的β-內(nèi)酰胺酶，β-內(nèi)酰胺酶的添加量為10萬～800萬單位/皿。本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，有益效果為：1.本發(fā)明新型無菌培養(yǎng)基平皿結(jié)構(gòu)簡潔，使用方便，可實現(xiàn)大規(guī)模連續(xù)化生產(chǎn)，且成本較低；2.每包平皿均為獨立密封，使用數(shù)量較為靈活；3.平皿經(jīng)過輻照滅菌后，在4℃～20℃條件下保質(zhì)期可長達半年。保質(zhì)期內(nèi)培養(yǎng)基仍保持無菌性以及對菌體的促生長性，并且添加的β-內(nèi)酰胺酶能夠一直保持較高的活性。
【專利說明】一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及無菌環(huán)境的檢測，尤其涉及一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]藥品的生產(chǎn)、制造都必須在潔凈環(huán)境下完成。藥品生產(chǎn)中的主要污染來自于微生物污染，如何高效、準確地監(jiān)測藥品生產(chǎn)環(huán)境中的微生物負荷，是每個藥品生產(chǎn)企業(yè)必須的
曰常工作。
[0003]無菌培養(yǎng)基平皿作為一種傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)以及檢測方法在科研和制藥生產(chǎn)中使用十分普遍，例如微生物培養(yǎng)鑒定、無菌環(huán)境監(jiān)測等等。目前，無論在學(xué)校、科研單位、醫(yī)院、生產(chǎn)制藥企業(yè)還是各類生產(chǎn)車間，微生物檢驗使用的無菌培養(yǎng)基平皿的消耗量十分龐大。據(jù)統(tǒng)計，一般生物制藥企業(yè)的一個生產(chǎn)周期或車間每月定期環(huán)境監(jiān)測一次就需要約100個培養(yǎng)基平皿。傳統(tǒng)的自制無菌培養(yǎng)基平皿不僅工序繁瑣、數(shù)量少，還很耗時，不足以應(yīng)付突發(fā)事件以及快速的需要，并且存在較大的人為染菌風(fēng)險。
[0004]然而，普通的無菌培養(yǎng)基平皿難以應(yīng)付β -內(nèi)酰胺類抗生素生產(chǎn)車間的無菌環(huán)境監(jiān)測。由于β_內(nèi)酰胺類抗生素能抑制微生物的生長，普通的無菌培養(yǎng)基平皿會造成微生物檢驗中的假陰性結(jié)果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明的一個目的是提供種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿，使用該無菌培養(yǎng)基平皿方法簡單、高效，可以準確的檢驗內(nèi)酰胺類抗生素生產(chǎn)車間潔凈區(qū)域的微生物負荷，避免微生物檢驗中的假陰性結(jié)果。本發(fā)明的另外一個目的是提供上述的無菌培養(yǎng)基平皿的制備方法。
[0006]為了實現(xiàn)上述的第一個目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案:
一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿，所述的抗生素為內(nèi)酰胺類抗生素，在培養(yǎng)基平皿內(nèi)設(shè)置培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中添加了與所述的β_內(nèi)酰胺類抗生素相對應(yīng)的β -內(nèi)酰胺酶，β -內(nèi)酰胺酶的添加量為10萬~800萬單位/皿。
[0007]作為優(yōu)選，所述的培養(yǎng)基平皿采用塑料材質(zhì)，培養(yǎng)基平皿的底板直徑為90 mm，培養(yǎng)基厚度為3~4 mm。
[0008]作為優(yōu)選，所述的培養(yǎng)基選用TSA培養(yǎng)基、NA培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。
[0009]作為優(yōu)選，所述的內(nèi)酰胺酶為青霉素酶、頭孢菌素酶和金屬酶中的一種或多種混合。
[0010] 作為優(yōu)選，所述的β-內(nèi)酰胺酶為青霉素酶，青霉素酶的添加量為100萬~500萬
單位/皿。[0011 ] 作為優(yōu)選，所述的β -內(nèi)酰胺酶為頭孢菌素酶，頭孢菌素酶的添加量為50萬~200萬單位/皿。
[0012] 作為優(yōu)選，所述的β -內(nèi)酰胺酶為金屬酶，金屬酶的添加量為50萬~200萬單位/皿。
[0013]為了實現(xiàn)上述的第二個目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案:
一種制備上述的無菌培養(yǎng)基平皿的方法，該方法包括以下的步驟:
步驟A:配制培養(yǎng)基，11(T13(TC高壓滅菌10-30分鐘；
步驟B:培養(yǎng)基冷卻至55飛5°C，加入具有酶活性的β -內(nèi)酰胺酶，混合均勻，并水浴保溫培養(yǎng)基在55~65°C ；
步驟C:在無菌操作室，用灌裝機將培養(yǎng)基均勻平鋪于平皿底板，冷卻凝固；
步驟D:培養(yǎng)基凝固后，蓋上蓋板，然后按包裝規(guī)格疊好，真空密封，最后包裝裝箱后經(jīng)60Co- Y射線滅菌。
[0014]作為優(yōu)選，步驟C中，培養(yǎng)基以20 mL/皿的體積裝入平皿底板。
[0015]作為優(yōu)選，步驟D中，包裝規(guī)格為10皿/袋。
[0016]本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，有益效果為:
1.本發(fā)明新型無菌培養(yǎng)基平皿結(jié)構(gòu)簡潔，使用方便，可實現(xiàn)大規(guī)模連續(xù)化生產(chǎn)，且成本較低；
2.每包平皿均為獨立密封，使用數(shù)量較為靈活；
3.平皿經(jīng)過輻照滅菌后，在4°C~20°C條件下保質(zhì)期可長達半年。保質(zhì)期內(nèi)培養(yǎng)基仍保持無菌性以及對菌體的促生長性，并且添加的內(nèi)酰胺酶能夠一直保持較高的活性；
4.此生產(chǎn)工藝可以應(yīng)用到多種固體培養(yǎng)基上，除以上所述的TSA培養(yǎng)基和NA培養(yǎng)基外，還可應(yīng)用于MH瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基等等。
【具體實施方式】
[0017]實施例1
配制TSA固體培養(yǎng)基，其中胰蛋白胨15.0 8/1，大豆蛋白胨5.0 8/1，氯化鈉5.0 g/L，瓊脂 14 g/L，pH 值 7.5。
[0018]將配置好的培養(yǎng)基于121°C下高壓滅菌20分鐘，待其冷卻至60°C，加入青霉素酶，混合均勻，使得青霉素酶溶解在TSA培養(yǎng)基中的濃度為25萬單位/mL。
[0019]在無菌操作室，用灌裝機將20 mL的TSA加酶培養(yǎng)基均勻平鋪于平皿底板，冷卻凝固，蓋上平皿上蓋。
[0020]按照10皿/袋的包裝規(guī)格疊好，真空密封，最后包裝裝箱后經(jīng)6tlCo-Y射線滅菌，輻照劑量為20 kGY。
[0021]得到的成品即青霉素酶活性為500萬單位/皿的實用新型加酶TSA培養(yǎng)基平皿。
[0022]實施例2
配制NA固體培養(yǎng)基，其中胰蛋白胨10.0 8/1，牛肉膏5.0 8/1，氯化鈉5.0 g/L，瓊脂14 8/1，？!1值7.5。
[0023]將配置好的培養(yǎng)基于121°C下高壓滅菌20分鐘，待其冷卻至60°C，加入頭孢菌素酶，混合均勻，使得頭孢菌素酶溶解在NA培養(yǎng)基中的濃度為5萬單位/mL。[0024]在無菌操作室，用灌裝機將20 mL的NA加酶培養(yǎng)基均勻平鋪于平皿底板，冷卻凝固，蓋上平皿上蓋。
[0025]按照10皿/袋的包裝規(guī)格疊好，真空密封，最后包裝裝箱后經(jīng)6tlCo-Y射線滅菌，輻照劑量為20 kGY。
[0026]得到的成品即頭孢菌素酶活性為100萬單位/皿的實用新型加酶NA培養(yǎng)基平皿。
[0027]最后，還需注意的是，以上諸實施案例僅供說明本發(fā)明之用，而非本發(fā)明的限制，本發(fā)明還可以有許多變形。本領(lǐng)域的有關(guān)技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變換和變化，均應(yīng)認為是本 發(fā)明的保護范疇。
【權(quán)利要求】
1.一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿，其特征在于:所述的抗生素為β-內(nèi)酰胺類抗生素，在培養(yǎng)基平皿內(nèi)設(shè)置培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中添加了與所述的β-內(nèi)酰胺類抗生素相對應(yīng)的β -內(nèi)酰胺酶，β -內(nèi)酰胺酶的添加量為10萬~800萬單位/皿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿，其特征在于:培養(yǎng)基平皿采用塑料材質(zhì)，培養(yǎng)基平皿的底板直徑為90 mm，培養(yǎng)基厚度為3~4 mm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿，其特征在于:培養(yǎng)基選用TSA培養(yǎng)基、NA培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿，其特征在于內(nèi)酰胺酶為青霉素酶、頭孢菌素酶和金屬酶中的一種或多種混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿，其特征在于:β -內(nèi)酰胺酶為青霉素酶，青霉素酶的添加量為100萬~500萬單位/皿。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿，其特征在于:β -內(nèi)酰胺酶為頭孢菌素酶，頭孢菌素酶的添加量為50萬~200萬單位/皿。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種抗生素生產(chǎn)車間環(huán)境監(jiān)測用無菌培養(yǎng)基平皿，其特征在于:β -內(nèi)酰胺酶為金屬酶，金屬酶的添加量為50萬~200萬單位/皿。
8.一種制備權(quán)利要求1~7任意一項權(quán)利要求所述的無菌培養(yǎng)基平皿的方法，其特征在于該方法包括以下的步驟: 步驟A:配制培養(yǎng)基，110~130C高壓滅菌10-30分鐘； 步驟B:培養(yǎng)基冷卻至55飛5°C，加入具有酶活性的β -內(nèi)酰胺酶，混合均勻，并水浴保溫培養(yǎng)基在55~65°C ； 步驟C:在無菌操作室，用灌裝機將培養(yǎng)基均勻平鋪于平皿底板，冷卻凝固； 步驟D:培養(yǎng)基凝固后，蓋上蓋板，然后按包裝規(guī)格疊好，真空密封，最后包裝裝箱后經(jīng)60Co- Y射線滅菌。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的無菌培養(yǎng)基平皿的制備方法，其特征在于:步驟C中，培養(yǎng)基以20 mL/皿的體積裝入平皿底板。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的無菌培養(yǎng)基平皿的制備方法，其特征在于:步驟D中，包裝規(guī)格為10皿/袋。
【文檔編號】C12M1/22GK103937663SQ201410192279
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年5月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月8日
【發(fā)明者】張加慧, 沈祝飛, 周冰 申請人:杭州北望生物技術(shù)有限公司