專利名稱：一種馬尾松根際解磷真菌泡盛曲霉及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于微生物技術領域，具體涉及一種馬尾松根際解磷真菌泡盛曲霉(Aspergillus awamori)及其應用。
背景技術：
解憐微生物(phosphate-solubilizingmicroorganisms, PSMs)是土壤中能夠?qū)㈦y溶磷轉(zhuǎn)化成植物能夠吸收利用的可溶性磷的一類特殊的微生物功能類群 >包括解磷真菌、解磷細菌和解磷放線菌等。解磷真菌(Solubilizing phosphorus fungus)雖然在數(shù)量和種類上都少于解磷細菌，但有研究表明解磷真菌的溶磷能力一般要強于細菌，有時甚至是細菌的幾十倍，而且遺傳性狀更加穩(wěn)定。迄今為止，發(fā)現(xiàn)的解磷微生物主要是集中在農(nóng)作物和土壤中，少量報道有來自林地或牧草等生態(tài)系統(tǒng)。且目前對解磷微生物的研究主要是集中在解磷細菌方面，對于解磷細菌的分布、解磷能力以及解磷機制等都已較為清楚。而解磷真菌研究較少。馬尾松作為森林演替的先鋒樹種，是我國南方最具代表性的森林類型之一，同時也是我國南方森林系統(tǒng)結構中面積最大的退化類型。造成這種現(xiàn)象的主要誘因是土壤地力衰退。在馬尾松林地衰退的過程中，磷素的供應不足是突出而具普遍性的問題。在林業(yè)方面，磷對苗木質(zhì)量影響較大，尤其是針葉樹種更加明顯。磷有利于植物從營養(yǎng)生長順利的轉(zhuǎn)入生殖生長，促進繁殖器官的形成，可以提早開花結實。磷有效地促進根系的發(fā)育，增強苗木根的吸收能力，加速苗木的生長，并在一定程度上提高苗木的抗逆性及抗病性。解磷微生物不僅能改善植物磷素營養(yǎng)，還能促進土壤中有益微生物的代謝活動，顯著改善植物根部營養(yǎng)，達到增產(chǎn)效果。利用微生物來提高土壤固態(tài)磷的利用率，無疑是行之有效的方法。目前，如何利用解磷微生物開發(fā)和利用被土壤固定的磷素是我國農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)中急需解決的問題，也是國內(nèi)外土壤肥料及植物營養(yǎng)學界研究的熱點之一。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的針對現(xiàn)有技術中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供馬尾松根際解磷真菌泡盛曲霉JP-NJ1，其具有較強的解磷能力。本發(fā)明的另一目的是提供一種馬尾松根際解磷真菌泡盛曲霉JP-NJl在促進馬尾松生長中的應用。技術方案為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術方案如下一種馬尾松根際解磷真菌泡盛曲霉，其分類命名為泡盛曲霉(Aspergillusawamori) JP-NJl,已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC NO :M2012166，保藏日期為2012年5月14日，保藏地址為中國武漢武漢大學。泡盛曲霉JP-NJl，是從南京林業(yè)大學校內(nèi)的30-40年生馬尾松的根際土壤中篩選獲得的。JP-NJl的生物學特征如圖I所示，菌落在PDA培養(yǎng)基上生長迅速，25°C培養(yǎng)I天直徑在65mm左右，菌落呈黑色，菌落具有輻射狀溝紋，質(zhì)地絲絨狀；菌落反面稍微呈現(xiàn)淡黃色。分生孢子器幼時多呈輻射狀，直徑70-150um，老時疏松，直徑約為300-500um;分生孢子結構大量產(chǎn)生，在菌落中間位置最為密集，呈黑褐色。分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì)，孢子梗約600-800umX IOum,老時帶淡褐色,全部表面可育；產(chǎn)孢子結構雙層，分生孢子球形或近球形，直徑3. 5-5um，壁平滑。如圖2所示，該菌株在NB RIP培養(yǎng)基上，生長較緩慢，25°C培養(yǎng)7天，直徑35_40mm之間，溶磷圈直徑46-65mm之間,質(zhì)地絲絨狀,菌絲較稀疏，分生孢子產(chǎn)生較少，菌落中間最為密集，呈黑色。菌落反面無色，溶磷圈大而透明。JP-NJl菌株18SrDNA ITS序列，見SEQ ID NO. I所示。將序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進行BLAST比對。結果表明，JP-NJl菌株與Aspergillus awamori的相似度為99%o結合形態(tài)特征和18SrDNA ITS序列分析,鑒定為泡盛曲霉(Aspergillus awamori)。上述的泡盛曲霉JP-NJl對磷酸三鈣具有很強的解磷能力，在促進馬尾松苗生長中有很好的應用。JP-NJl菌劑盆栽接種試驗表明，該菌劑可以明顯的促進馬尾松苗的生長。有益效果本發(fā)明的泡盛曲霉JP-NJl具有的優(yōu)勢包括對難溶性的無機磷酸鹽磷酸三鈣具有很強的溶解能力；通過盆栽試驗證實菌劑接種馬尾松苗可以明顯的促進馬尾松的生長。因此，本發(fā)明的泡盛曲霉JP-NJl能為開發(fā)微生物菌肥提供優(yōu)良的菌株資源，并具有良好的應用開發(fā)前景。


圖I是泡盛曲霉JP-NJl菌株在PDA培養(yǎng)基上的菌落特征；圖2是泡盛曲霉JP-NJl菌株在NBRIP培養(yǎng)基上的溶磷圈；其中，左圖為背面，右圖為正面；圖3是泡盛曲霉JP-NJl菌株在搖瓶中培養(yǎng)時解磷能力和pH值的動態(tài)變化結果圖；圖4是泡盛曲霉JP-NJl菌株對馬尾松苗生長的影響結果圖；圖5是泡盛曲霉JP-NJl菌株制成的菌劑對馬尾松生長的影響的結果圖。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步的說明。以下實例中，PDA培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯20g，蔗糖20g，瓊脂18g，蒸餾水IOOOmL0磷酸鹽生長培養(yǎng)基(NBRIP)的配方為葡萄糖10g, Ca3 (PO4)2 5g，MgCl2. 6H20 5g，KCl 0. 2g, MgSO4. 7H20 0. 25g, (NH4)2SO4 0. lg，蒸餾水 IOOOmL, pH7. 0。實施例I馬尾松根際解磷真菌泡盛曲霉(Aspergillus awamori) JP-NJ1,是從南京林業(yè)大學校內(nèi)的30-40年生馬尾松的根際土壤中篩選獲得。如圖I所示，菌落在PDA培養(yǎng)基上生長迅速，25°C培養(yǎng)7天直徑在65mm左右，菌落呈黑色，菌落具有輻射狀溝紋，質(zhì)地絲絨狀；菌落反面稍微呈現(xiàn)淡黃色。分生孢子器幼時多呈輻射狀，直徑70-150um，老時疏松，直徑約為300-500um ;分生孢子結構大量產(chǎn)生，在菌落中間位置最為密集，呈黑褐色。分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì)，孢子梗約600-800umX IOum,老時帶淡褐色,全部表面可育；產(chǎn)孢子結構雙層，分生孢子球形或近球形，直徑3.5-5um，壁平滑。
如圖2所示，該菌株在NBRIP培養(yǎng)基上，生長較緩慢，25°C培養(yǎng)7d，直徑35-40mm之間，溶磷圈直徑46-65mm之間，質(zhì)地絲絨狀,菌絲較稀疏,分生孢子產(chǎn)生較少，菌落中間最為密集，呈黑色。菌落反面無色，溶磷圈大而透明。實施例2將泡盛曲霉JP-NJl接種到NBRIP平板上，25°C培養(yǎng)，7 IOd后，觀察是否仍有溶菌圈，測定菌落(D)和溶菌圈(d)的直徑，并計算溶菌圈直徑與菌落直徑的比值(d/D)，可以初步的估計解磷真菌的解磷能力。一般比值越大，說明真菌的解磷能力越強。依據(jù)表1，解磷能力為“++”的認為其解磷能力較強。按上述方法測定泡盛曲霉JP-
權利要求
1.一種馬尾松根際解磷真菌泡盛曲霉，其分類命名為泡盛曲霉awaaori)] -^]!,已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC NO M 2012166，保藏日期為2012年5月14日，保藏地址為中國武漢武漢大學。
2.權利要求I所述的馬尾松根際解磷真菌泡盛曲霉JP-NJl在促進馬尾松苗生長中的應用。
3.權利要求I所述的馬尾松根際解磷真菌泡盛曲霉JP-NJl在溶解難溶性無機磷酸鹽磷酸鈣中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種馬尾松根際解磷真菌泡盛曲霉及其應用，其分類命名為泡盛曲霉(Aspergillusawamori)JP-NJ1，已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC NOM 2012166，保藏日期為2012年5月14日。本發(fā)明的泡盛曲霉JP-NJ1對難溶性磷酸鹽磷酸鈣的溶解能力強；通過溫室盆栽試驗證實，JP-NJ1菌劑能夠明顯促進馬尾松苗木的生長。因此，本發(fā)明公開的泡盛曲霉JP-NJ1為開發(fā)馬尾松促生菌肥提供了優(yōu)良的菌株資源，具有較好的應用開發(fā)前景。
文檔編號C12R1/665GK102732435SQ20121023518
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月6日 優(yōu)先權日2012年7月6日
發(fā)明者葉建仁, 吳小芹, 魏偉 申請人:南京林業(yè)大學