專利名稱：一種茶籽餅粕的生物脫毒方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種茶籽餅粕的微生物和酶相結(jié)合的生物脫毒方法。
背景技術(shù)：
油茶是我國南方丘陵地區(qū)一種重要的油料作物，占全國木本食用油料作物的80% 以上。茶籽餅，又稱茶粕，別名茶麩、茶枯，茶籽餅。呈紫褐色顆粒，是野山茶油果實(shí)榨油后剩下的殘?jiān)２枳呀?jīng)榨油后的餅粕中還含有大量的淀粉、蛋白質(zhì)、粗脂肪、可溶性糖和茶皂素等，可以再提取利用。我國油茶林面積約400萬公頃，是世界上油茶品種最多、分布最廣、產(chǎn)量最多的國家。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國采摘茶園面積約為100萬公頃，我國近年來年產(chǎn)油茶茶籽約55萬噸，油茶茶籽含油率為沈% 39%，按機(jī)榨得油率70%計(jì)算，油茶餅粕年均產(chǎn)量約40 萬噸。我國油茶林主要分布在湖南、江西、廣西三省，三省油茶茶籽產(chǎn)量占全國的80%以上。我國油茶茶籽粕和茶葉茶籽粕產(chǎn)量約為70萬噸，由此可見，我國潛在的可利用茶粕資源十分豐富。茶油茶餅粕一般含有7%的粗脂肪，149Γ15%的粗蛋白質(zhì)，33%的粗纖維，40%多的糖類，茶皂素約129Γ18%，是潛在的可利用的茶籽殘?jiān)Y源。因而，開發(fā)利用茶籽粕具有較高的經(jīng)濟(jì)效益。目前，茶籽主要采用傳統(tǒng)的壓榨法榨油工藝制油，所生產(chǎn)的茶粕中茶皂素、單寧等抗?fàn)I養(yǎng)因子含量過高，不適宜直接用于動(dòng)物飼料的生產(chǎn)，大部分被用作清塘劑、 肥料、燃料，少量用于茶皂素的提取。同時(shí)，因茶籽餅粕中含有109Γ15%溶血性茶皂素，而茶皂素的存在使飼料味苦且辛辣，并對(duì)魚類等水生動(dòng)物有很強(qiáng)的毒性，因此，限制了其在飼料工業(yè)中的應(yīng)用。但是，如果茶粕去除了有毒物質(zhì)茶皂素，其營養(yǎng)價(jià)值可與米糠媲美，且經(jīng)過微生物發(fā)酵后，可得到較高的菌體蛋白，不僅可以提高茶粕的利用價(jià)值，且可通過降解菌發(fā)酵使之成為一種較好的飼料資源。目前對(duì)茶粕的研究報(bào)道，國內(nèi)外大多專注于活性物質(zhì)茶皂素的提取，而把茶粕發(fā)酵成飼料的報(bào)道較為少見。例如，專利KR20110090215公開了一種具有確保清凈性能佳、起泡好、對(duì)皮膚刺激性小、保濕效果好的液體洗滌劑組合物，其中包括59Γ40%陰離子表面活性劑茶皂素，0. 59Γ20%非離子表面活性劑或兩性表面活性劑，0. 01°/Γ10%乳酸和皂素，剩余的為水量。專利W02011113221公開了一種由70% 80%檸檬油精、2% 10%茶皂素、1% 10% 卵磷脂、29TlO%檸檬醛和0. 59Tl%檸檬酸組成的洗滌劑，該洗滌劑不損壞汽車、涂料膜和家電玻璃。專利CN1148598公開了一種提取精制茶皂素的方法，得到98%以上的固體茶皂素。美國專利US6007822公開了一種包含山茶屬植物三萜皂苷的動(dòng)物飼料組合物在人類和動(dòng)物中具有提高免疫功能，增強(qiáng)抗菌和抗病毒活性，抗突變，抗氧化和清除自由基。關(guān)于茶籽餅粕脫毒的報(bào)道更少，如黃良柏先生的“脫毒茶粕殘留茶皂素含量的測(cè)定方法比較”一文描述了一種茶籽餅粕脫毒的工藝，將脫脂茶粕浸提，固液分離，蒸發(fā)濃縮，噴霧干燥，分別獲得飼料渣和茶皂素。該方法實(shí)質(zhì)是提取茶皂素，附帶性獲得飼料渣，屬于物理脫毒。由此看來，物理、化學(xué)溶劑浸出茶皂素法雖然可以將皂素降低，但將殘?jiān)米黠暳蠒r(shí)，會(huì)導(dǎo)致大量營養(yǎng)成分流失，而且大大增加飼料成本。油茶籽殼中糠醛含量是所有農(nóng)作物中最高的， 約為19%，接近或超過現(xiàn)今用于制糠醛的如玉米芯(19. 00% )、棉籽(17. 50% )和稻谷殼(12. 00%)等主要原料。因此，可以用油茶籽殼提取糠醛，油茶籽殼的糠醛理論產(chǎn)量約為 47%。目前，在湖南、江西、浙江和福建等省已有企業(yè)利用油茶籽殼生產(chǎn)糠醛，其得率為3% 10%。此外，油茶籽殼中含有的30%左右的多縮戊糖，是制取木糖醇的理想原料。如果能將油茶籽殼生產(chǎn)出高純度的木糖醇，是高效利用油茶籽殼的良好思路?？傊?，在動(dòng)物飼料生產(chǎn)中科學(xué)合理地使用茶粕發(fā)酵產(chǎn)品有利于緩解我國飼料資源緊缺的局面。。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種茶籽餅粕的生物脫毒方法，該方法工藝簡單、成本和能耗低、適應(yīng)性強(qiáng)、易于批量生產(chǎn)、脫毒效果穩(wěn)定， 為微生物與酶學(xué)方法相結(jié)合的茶籽餅粕脫毒方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案，其特征為“一種茶籽餅粕的生物脫毒方法”，該方法包括以下幾個(gè)步驟
(1)制備液體菌種將德氏乳桿菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于乳酸桿菌液體培養(yǎng)基中，在37、1°C厭氧培養(yǎng)6 12 h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度分別達(dá)到10『109 cfu/mL ；將枯草芽孢桿菌1株分別接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液體擴(kuò)大肉湯營養(yǎng)培養(yǎng)基中，在35 37°C， 200 r/min^300 r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)12 24 h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度分別達(dá)到10『109 cfu/mL ；將1株酵母菌屬酵母接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于酵母液體培養(yǎng)基中，在 3(T34°C，150 r/min^250 r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)M 36 h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到10『109 cfu/mL，將該三種種子培養(yǎng)液按1:1:1混合即得液體菌種，作為固體菌種的生產(chǎn)菌種；
(2)制備固體菌種按重量百分比取麥麩4.09Γ6. 0%、葡萄糖1. 09Γ2. 0%、磷酸氫二鉀 1. 09Γ1. 5%、氯化鎂0. 29Π). 3%、及茶籽餅粕50% 60%混勻，調(diào)節(jié)含水重量為35% 40%，制成固體菌種培養(yǎng)基，12(Tl3(TC滅菌3(T40 min，冷卻至35 40°C，按1. 0% 1. 5%接種重量接入液體菌種，于35、0°C恒溫堆積培養(yǎng)4飛天后于45飛5°C干燥制得；
⑶茶籽餅粕發(fā)酵脫毒按重量百分比取茶籽餅粕709Γ80%、麥麩5 9Γ10%、淀粉 1. 0°/Γ . 5%、硫酸銨0. 39ΓΟ. 5%、磷酸氫二鉀1. 09Γ1. 5%、及濃度為200(T4000 U/g的酸性纖維素酶0. 059Γ0. 1%混勻后，再調(diào)節(jié)含水重量為209Γ30%，制成茶籽餅粕脫毒發(fā)酵培養(yǎng)基；再將發(fā)明內(nèi)容步驟⑵制得的固體菌種以29Γ4%的接種重量接種到該茶籽餅粕脫毒發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合均勻，堆積成高0.7 1.0 mX寬10.0 20.0 mX長20. 0 30. 0 m的茶籽餅粕堆隴，上面覆蓋塑料或稻草，避雨，堆隴中心溫度5(T70°C下發(fā)酵，當(dāng)發(fā)酵7 10天、茶籽餅粕堆隴中心溫度達(dá)60°C以上時(shí)，用人工或機(jī)械翻堆一次，當(dāng)發(fā)酵1(Γ15天后，茶籽餅粕堆隴中心溫度低于60°C以下時(shí)，干燥后即得脫毒茶籽餅粕。上述發(fā)明內(nèi)容步驟⑴中的乳酸桿菌液體培養(yǎng)基為蛋白陳5. (Γ10. 0 g、牛肉膏 5. 0^10.0 g、酵母粉4.0 6.0 g、葡萄糖10.0 20.0 g、吐溫80 0. 5 1. 0 mL、磷酸氫二鉀 1·0 2·0 g、乙酸鈉3.0 5.0 g、檸檬酸三銨2. (Γ5. 0 g、氯化鎂0.2 0.4 g、硫酸錳0. 05 g、 蒸餾水1000 mL的比例混勻后，在115°C下滅菌15 20 min，冷卻至室溫而成。上述發(fā)明內(nèi)容步驟⑴中的液體擴(kuò)大肉湯營養(yǎng)培養(yǎng)基為葡萄糖10.(T20.0 g、蛋白胨5·0 8·0 g、3.0 5.0 g牛肉膏、及氯化鈉3. (Γ5. 0 g、水1000 mL的比例混勻，在0. IMPa 壓力下滅菌25 30 min，冷卻至室溫而成。
上述發(fā)明內(nèi)容步驟⑴中的酵母液體培養(yǎng)基葡萄糖30. (Γ50. 0 g、酵母浸膏3. (Γ5. 0 g、氯化鈉2. 0 3· 0 g、及磷酸二氫鉀5. 0 8· 0 g、水1000 mL的比例混勻，在0. IMPa壓力下滅菌25 30 min，冷卻至室溫而成。本發(fā)明中用到的菌種均為現(xiàn)有技術(shù)，德氏乳桿菌(L^tohciBM)可以選用已公開的保藏號(hào)分別為CGMCC 1.2142、CGMCC 1. 2625、或CGMCC 1. 2132的菌株、或使用實(shí)驗(yàn)室自行保藏的菌株；枯草芽孢桿菌OfeciBm subtilis)可以選用已公開的保藏號(hào)分別為CGMCC2492、CGMCC3877的菌株或購買商業(yè)化菌株，例如購自中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏號(hào)分別為AS1. 108，或使用實(shí)驗(yàn)室自行保藏的菌株；酵母屬酵母菌(5^4<3了0耶^>5):可以選用已公開的06110 1147、CGMCC 0702、或 CGMCC 0133 的菌株、或使用實(shí)驗(yàn)室自行保藏的菌株。本發(fā)明提及的斜面菌種細(xì)胞中的菌種分別是與本發(fā)明中用到的德氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌和酵母菌相對(duì)應(yīng)的，即德氏乳桿菌所接種的斜面菌種細(xì)胞中的菌種為德氏乳桿菌，其它類推。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)
(1)在本發(fā)明方法的處理過程中，選用芽孢桿菌作為主要發(fā)酵脫毒菌種。因?yàn)榘l(fā)酵脫毒菌種的芽孢具有極強(qiáng)的抗逆性，選用的菌種在生長過程中不僅可以降低茶籽餅粕中的茶皂素，還可產(chǎn)生蛋白酶，一般水解茶籽粕中蛋白類物質(zhì)，產(chǎn)生游離氨基酸，乳酸桿菌和酵母菌在茶籽餅粕發(fā)酵中后期厭氧環(huán)境中能發(fā)揮益生菌的作用，可改善原有茶籽餅粕適口性不好的問題；
⑵本發(fā)明方法使用的酸性纖維素酶，能有效地水解茶籽餅粕中茶皂素的糖苷鍵，從而協(xié)同微生物進(jìn)一步發(fā)酵茶籽餅粕，達(dá)到脫毒的目的；
(3)本發(fā)明是農(nóng)產(chǎn)品下腳料廢棄物深度利用，具有生產(chǎn)工藝簡單、無三廢、投資小、易于規(guī)模化生產(chǎn)等特點(diǎn)；
⑷以我國現(xiàn)有工藝生產(chǎn)的未脫毒茶籽餅粕為原料，采用本發(fā)明方法進(jìn)行脫毒，其茶皂素含量可降低90%以上；產(chǎn)品蛋白質(zhì)含量達(dá)到159Γ20%，提高5%以上；游離氨基酸含量大于 5%，提高了 25%以上；還原糖含量達(dá)5%以上，可直接作為飼料原料使用。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1
所用的菌種為德氏乳酸桿菌1株、枯草芽孢桿菌1株、酵母屬酵母菌1株。其步驟為 (1)液體菌種制備取蛋白陳5.0 g、牛肉膏5.0 g、酵母粉4.0 g、葡萄糖10.0 g、吐溫 80 0.5 mL、磷酸氫二鉀1.0 g、乙酸鈉3.0 g、檸檬酸三銨2.0 g、氯化鎂0.2 g、硫酸錳0.05 g、蒸餾水1000 mL的比例混勻后，在115°C下滅菌15min，組成乳酸桿菌液體培養(yǎng)基，冷卻至室溫后，再接入培養(yǎng)成熟的斜面菌種，分別于41°C厭氧搖床培養(yǎng)12 h;取葡萄糖10.0 g、蛋白胨5.0 g、牛肉膏3.0 g、及氯化鈉3.0 g、水1000 mL的比例混勻，在0.1 MPa壓力下滅菌 25 min，冷卻至室溫后接入培養(yǎng)的枯草桿菌斜面菌種，于35°C、200 r/min下，搖床培養(yǎng)Mh ； 取葡萄糖50. 0 g、酵母浸膏3.0 g、氯化鈉2.0 g、及磷酸二氫鉀5.0 g、水1000 mL的比例混勻，在0.1 MI^a壓力下滅菌25 min，冷卻至室溫組成酵母菌培養(yǎng)基，冷卻至室溫后接種酵母菌，于30°C、150 r/min下，搖床培養(yǎng)M h ；取上述三種種子培養(yǎng)液按1 1 1混合得液體菌種，作為固體菌種的生產(chǎn)菌種；
⑵固體菌種制備取5 kg麥麩、2 kg淀粉、1.5 kg硫酸銨、200 kg茶籽餅粕混勻，用自來水調(diào)節(jié)含水重量為40%，制成茶籽餅粕發(fā)酵脫毒培養(yǎng)基，125°C滅菌30 min，冷卻至37°C 后，按重量接入1. 5%的液體菌種(各菌種的比例為1:1:1)，37°C恒溫培養(yǎng)7天，50°C條件下干燥，作為發(fā)酵脫毒固體菌種；
(3)取茶籽餅粕20000 kg、麥麩1000 kg、淀粉250 kg、硫酸銨0. 3%、磷酸氫二鉀1. 0%、 及濃度為2000 U/g的酸性纖維素酶0. 1%混勻后，再調(diào)節(jié)含水重量為30%，制成茶籽餅粕脫毒發(fā)酵培養(yǎng)基；再將本實(shí)施案例步驟⑵制得的固體菌種以2、的接種重量接種到該茶籽餅粕脫毒發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合均勻，堆積成高1. OmX寬10. OX長20. Om的茶籽餅粕堆隴，上面覆蓋塑料或稻草，避雨，50°C下發(fā)酵，當(dāng)發(fā)酵8天后、茶籽餅粕堆隴中心溫度達(dá)60°C，用人工或機(jī)械翻堆一次，當(dāng)發(fā)酵12天后，茶籽餅粕堆隴中心溫度低于60°C，干燥后即得脫毒茶籽餅粕。取樣分析茶籽餅粕中茶皂素含量為0.9%，脫毒率為92.2%，蛋白質(zhì)含量18. 4% (提高5. 8%)，游離氨基酸含量5. 7% (提高30. 4%)。實(shí)施例2:
所用的菌種為德氏乳酸桿菌1株、枯草芽孢桿菌1株、酵母屬酵母菌1株。其步驟為 (1)液體菌種制備取蛋白陳7.0 g、牛肉膏7.0 g、酵母粉5.0 g、葡萄糖10.0 g、吐溫 80 0. 8 mL、磷酸氫二鉀1. 0 g、乙酸鈉3. 0 g、檸檬酸三銨2. 0g、氯化鎂0. 3 g、硫酸錳0. 06 g、蒸餾水1000 mL的比例混勻后，在115°C下滅菌20 min，組成乳酸桿菌液體培養(yǎng)基，冷卻至室溫后，再接入培養(yǎng)成熟的斜面菌種，分別于43°C厭氧搖床培養(yǎng)8 h;取葡萄糖15.0 g、 蛋白胨6.0 g、牛肉膏4.0 g、及氯化鈉4.0 g、水1000 mL的比例混勻，在0.1 MPa壓力下滅菌25 min，冷卻至室溫后接入培養(yǎng)的枯草桿菌斜面菌種，于37°C、200 r/min下，搖床培養(yǎng) 20 h;取葡萄糖60. 0 g、酵母浸膏4.0 g、氯化鈉2. 5 g、及磷酸二氫鉀6.0 g、水1000 mL的比例混勻，在0.1 MI^a壓力下滅菌25 min，冷卻至室溫組成酵母菌培養(yǎng)基，冷卻至室溫后接種酵母菌，于32°C、150 r/min下，搖床培養(yǎng)20 h ；取上述三種種子培養(yǎng)液按1 1 1混合得液體菌種，作為固體菌種的生產(chǎn)菌種；
⑵固體菌種制備取15 kg麥麩、5 kg淀粉、3kg硫酸銨、300 kg茶籽餅粕混勻，用自來水調(diào)節(jié)含水重量為35%，制成茶籽餅粕發(fā)酵脫毒培養(yǎng)基，125°C滅菌30 min，冷卻至37°C后， 按重量接入1%的液體菌種(各菌種的比例為1:1:1)，35°C恒溫培養(yǎng)8天，50°C條件下干燥， 作為發(fā)酵脫毒固體菌種；
(3)取茶籽餅粕30000 kg、麥麩2000 kg、淀粉320 kg、硫酸銨0. 4%、磷酸氫二鉀1. 5%、 及濃度為3000 U/g的酸性纖維素酶0. 1%混勻后，再調(diào)節(jié)含水重量為25%，制成茶籽餅粕脫毒發(fā)酵培養(yǎng)基；再將本實(shí)施案例步驟⑵制得的固體菌種以1%的接種重量接種到該茶籽餅粕脫毒發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合均勻，堆積成高0. 8 mX寬15. OmX長27. Om的茶籽餅粕堆隴，上面覆蓋塑料或稻草，避雨，50°C下發(fā)酵，當(dāng)發(fā)酵7天后、茶籽餅粕堆隴中心溫度達(dá)60°C，用人工或機(jī)械翻堆一次，當(dāng)發(fā)酵15天后，茶籽餅粕堆隴中心溫度低于60°C，干燥后即得脫毒茶籽餅粕。取樣分析茶籽餅粕中茶皂素含量為1.0%，脫毒率為91.2%，蛋白質(zhì)含量20. 1% (提高6. 5%)，游離氨基酸含量5. 3% (提高29. 3%)。實(shí)施例3:
所用的菌種為德氏乳酸桿菌1株、枯草芽孢桿菌1株、酵母屬酵母菌1株。其步驟為(1)液體菌種制備取蛋白陳10.0 g、牛肉膏5.0 g、酵母粉3.0 g、葡萄糖12.0 g、吐溫 80 0.5 mL、磷酸氫二鉀1.0 g、乙酸鈉3.0 g、檸檬酸三銨2.0 g、氯化鎂0.2 g、硫酸錳0.05 g、蒸餾水1000 mL的比例混勻后，在115°C下滅菌15 min，組成乳酸桿菌液體培養(yǎng)基，冷卻至室溫后，后接入培養(yǎng)成熟的斜面菌種，分別于40°C厭氧搖床培養(yǎng)10 h;取葡萄糖12.0 g、 蛋白胨5.0 g、牛肉膏3.0 g、及氯化鈉3.0 g、水1000 mL的比例混勻，在0.1 MPa壓力下滅菌25 min，冷卻至室溫后接入培養(yǎng)的枯草桿菌斜面菌種，于35°C、200 r/min下，搖床培養(yǎng) 24 h;取葡萄糖60. 0 g、酵母浸膏4.0 g、氯化鈉2.0 g、及磷酸二氫鉀5.0 g、水1000 mL的比例混勻，在0.1 MI^a壓力下滅菌25 min，冷卻至室溫組成酵母菌培養(yǎng)基，冷卻至室溫后，于 30°C、160 r/min下，搖床培養(yǎng)20 h ；取上述三種種子培養(yǎng)液按1 1 1混合得液體菌種，作為固體菌種的生產(chǎn)菌種；
⑵固體菌種制備取8 kg麥麩、1 kg淀粉、1.0 kg硫酸銨、150 kg茶籽餅粕混勻，用自來水調(diào)節(jié)含水重量為30%，制成茶籽餅粕發(fā)酵脫毒培養(yǎng)基，125°C滅菌25 min，冷卻至37°C 后，按重量接入1. 5%的液體菌種(各菌種的比例為1:1:1)，37°C恒溫培養(yǎng)6天，50°C條件下干燥，作為發(fā)酵脫毒固體菌種；
⑶取茶籽餅粕10000 kg、麥麩800 kg、淀粉100 kg、硫酸銨0.4%、磷酸氫二鉀1.0%、及濃度為4000 U/g的酸性纖維素酶0. 1%混勻后，再調(diào)節(jié)含水重量為20%，制成茶籽餅粕脫毒發(fā)酵培養(yǎng)基；再將本實(shí)施案例步驟⑵制得的固體菌種以2、的接種重量接種到該茶籽餅粕脫毒發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合均勻，堆積成高1. OmX寬12. OX長20. Om的茶籽餅粕堆隴，上面覆蓋塑料或稻草，避雨，50°C下發(fā)酵，當(dāng)發(fā)酵7天后、茶籽餅粕堆隴中心溫度達(dá)60°C，用人工或機(jī)械翻堆一次，當(dāng)發(fā)酵14天后，茶籽餅粕堆隴中心溫度低于60°C，干燥后即得脫毒茶籽餅粕。取樣分析茶籽餅粕中茶皂素含量為0. 85%，脫毒率為93. 3%，蛋白質(zhì)含量17. 8%(提高 5. 1%)，游離氨基酸含量5. 0% (提高28. 5%)。
權(quán)利要求
1.一種茶籽餅粕的生物脫毒方法，其特征包括以下幾個(gè)步驟(1)制備液體菌種將德氏乳桿菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于乳酸桿菌液體培養(yǎng)基中，在37、1°C厭氧培養(yǎng)6 12 h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度分別達(dá)到1(Τ109 cfu/mL ；將枯草芽孢桿菌1株分別接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液體擴(kuò)大肉湯營養(yǎng)培養(yǎng)基中，在35 37°C， 200 r/min^300 r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)12 24 h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度分別達(dá)到10『109CfU/mL ；將1株酵母菌屬酵母接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于酵母液體培養(yǎng)基中，在 3(T34°C，150 r/min^250 r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)M 36 h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到10『109cfU/mL，將該三種種子培養(yǎng)液按1:1:1混合即得液體菌種，作為固體菌種的生產(chǎn)菌種；(2)制備固體菌種按重量百分比取麥麩4.09Γ6. 0%、葡萄糖1. 09Γ2. 0%、磷酸氫二鉀 1. 09Γ1. 5%、氯化鎂0. 29Π). 3%、及茶籽餅粕50% 60%混勻，調(diào)節(jié)含水重量為35% 40%，制成固體菌種培養(yǎng)基，12(Tl3(TC滅菌3(T40 min，冷卻至35 40°C，按1. 0% 1. 5%接種重量接入液體菌種，于35、0°C恒溫堆積培養(yǎng)4飛天后于45飛5°C干燥制得；⑶茶籽餅粕發(fā)酵脫毒按重量百分比取茶籽餅粕709Γ80%、麥麩5 9Γ10%、淀粉 1. 0°/Γ . 5%、硫酸銨0. 39ΓΟ. 5%、磷酸氫二鉀1. 09Γ1. 5%、及濃度為200(T4000 U/g的酸性纖維素酶0. 059Γ0. 1%混勻，調(diào)節(jié)含水重量為209Γ30%，制成茶籽餅粕脫毒發(fā)酵培養(yǎng)基；再將本項(xiàng)權(quán)利要求步驟⑵制得的固體菌種以29Γ4%的接種重量接種到該茶籽餅粕脫毒發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合均勻，堆積成高0.7 1.0 mX寬10.0 20.0 mX長20. 0 30. 0 m的茶籽餅粕堆隴，上面覆蓋塑料或稻草，避雨，堆隴中心溫度5(T70°C下發(fā)酵，當(dāng)發(fā)酵7 10天、茶籽餅粕堆隴中心溫度達(dá)60°C以上時(shí)，用人工或機(jī)械翻堆一次，當(dāng)發(fā)酵1(Γ15天后，茶籽餅粕堆隴中心溫度低于60°C以下時(shí)，干燥后即得脫毒茶籽餅粕。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶籽餅粕的生物脫毒方法，所述步驟⑴中的乳酸桿菌液體培養(yǎng)基為蛋白陳5.0 10.0 g、牛肉膏5.0 10.0 g、酵母粉4.0 6.0 g、葡萄糖10. 0 20. 0 g、吐溫80為0. 5 1. 0 mL、磷酸氫二鉀1. 0 2· 0 g、乙酸鈉3. 0 5· 0 g、檸檬酸三銨2. 0 5· 0 g、 氯化鎂0. 2^0. 4 g、硫酸錳0. 05 g、蒸餾水1000 mL的比例混勻后，在0. 1 MPa壓力下滅菌 15 20 min，冷卻至室溫而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶籽餅粕的生物脫毒方法，所述步驟⑴中的液體擴(kuò)大肉湯營養(yǎng)培養(yǎng)基為葡萄糖10. (Γ20. 0 g、蛋白胨5.0 8.0 g、牛肉膏3.0 5.0 g、氯化鈉3.0 5.0 g、 水1000 mL的比例混勻，在0.1 MPa壓力下滅菌25 30 min，冷卻至室溫而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶籽餅粕的生物脫毒方法，所述步驟⑴中的酵母液體培養(yǎng)基葡萄糖30.0 50.0 g、酵母浸膏3.0 5.0 g、氯化鈉2.0 3.0 g、及磷酸二氫鉀5. 0 8. 0 g、水 1000 mL的比例混勻，在0.1 MPa壓力下滅菌25 30 min，冷卻至室溫而成。
全文摘要
一種茶籽餅粕的生物脫毒方法，該方法是在粉碎的茶籽餅粕中加入磷酸氫二鉀、氯化鎂、2000~4000U/g的酸性纖維素酶、及微生物菌種等，攪拌均勻后，在40~50℃下利用微生物和酸性纖維素酶的共同作用10~15天，然后烘干粉碎即為產(chǎn)品；所得產(chǎn)品茶皂素含量低于飼料規(guī)定的安全指標(biāo)，其營養(yǎng)價(jià)值高于未經(jīng)發(fā)酵的茶籽餅粕，產(chǎn)品蛋白質(zhì)含量達(dá)到15%~20%，提高了5%以上；游離氨基酸含量高于5%，提高了25%以上；還原糖含量高于5%，皂素含量低于1.0%，脫毒率大于90%；可直接作為飼料原料使用，較好地解決了現(xiàn)有技術(shù)存在的茶籽餅粕中毒問題，是一種工藝簡單、效果好、能提供達(dá)到飼料標(biāo)準(zhǔn)要求的無毒茶籽餅粕的生產(chǎn)方法。
文檔編號(hào)A23L1/015GK102488087SQ201110441650
公開日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月26日
發(fā)明者吳永堯, 李海翔, 林元山 申請(qǐng)人:林元山