專利名稱：一種酶法水解制備杠柳苷元的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備杠柳苷元的方法，尤其是涉及一種酶法水解制備杠柳苷元的方法。
背景技術(shù)：
香力口皮(Cortex Periplocae )是蘿摩科(Ascl印iadaceae)植物杠柳/^ri/^oca sepium Bunge的干燥根皮，具有祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨的功效，是臨床常用中藥，用于風(fēng)寒濕痹，腰膝酸軟，心悸氣短，下肢浮腫。杠柳苷元為(3beta, 5beta)_3, 5，14-trihydroxycard_20 (22)-enolide，分子式 C23H34O5,分子量390. 5131，分子結(jié)構(gòu)
杠柳苷元為強(qiáng)心苷元，不僅具有強(qiáng)心作用，還具有抗炎、抗腫瘤等藥理作用。顧為等發(fā)表的“杠柳苷元對(duì)肥大細(xì)胞脫顆粒及釋放組胺影響的研究”和韓宇博等發(fā)表的“杠柳苷元的抗腫瘤作用研究”都對(duì)杠柳苷元做了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。杠柳苷元在中藥香加皮中含量較低，制備難度較大，多是以杠柳毒苷為原料水解得來(lái)。杠柳毒苷又叫蘿蘑毒苷，五加皮苷G，分子式是C36H56O13,分子量為696. 82，是一種具有留核和不飽和五元內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)的甲型強(qiáng)心苷，結(jié)構(gòu)式含杠柳苷元-D-(加拿大麻糖)-D-(葡萄糖)，Ig溶于大約20ml沸水，而在25°C時(shí)，大約為1 2500。易溶于乙醇，幾乎不溶于乙醚、氯仿?，F(xiàn)有從香加皮中水解制備杠柳苷元方法，多是酸水解法制備。如專利(申請(qǐng)?zhí)?200610013621. 9) “一種杠柳苷元的制備方法”，該專利公開(kāi)的方法是對(duì)含有杠柳毒苷的提取物進(jìn)行酸水解和收集，得到中間體A，將中間體A進(jìn)行柱層析，濃縮干燥后得到中間體B， 將中間體B重結(jié)晶或高效液相制備得杠柳苷元。該法在酸水解產(chǎn)生大量的酸水，污染環(huán)境， 柱層析過(guò)程樣品損失較多，同時(shí)也產(chǎn)生大量硅膠和氧化鋁廢棄物，造成環(huán)境污染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足和缺陷，提供一種酶法水解制備杠柳苷元的方法，該方法能夠提高產(chǎn)品收率，減少污染。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的
一種酶法水解制備杠柳苷元的方法，其特征在于包含以下步驟
1)取香加皮藥材粉碎，加入3-8倍量80-90%甲醇溶液超聲提取，提取液回收甲醇，加適量水共沸，趁熱離心，得離心液；
2)上述離心液調(diào)節(jié)pH4.5-5. 5，加入生物酶保溫酶解18-32小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得粗品；
3 )上述粗品用高速逆流色譜儀制備，收集流分，干燥得杠柳苷元。所述的調(diào)節(jié)pH的酸為檸檬酸或鹽酸中的一種。所述的生物酶可選蝸牛酶、纖維素酶和苦杏仁酶中的一種，用量為原料的1-5%。。
所述的保溫酶解溫度為47_55°C。所述的高速逆流色譜制備條件為溶劑系統(tǒng)選用氯仿/甲醇/水(4/3/ 體系， 上相為固定相，轉(zhuǎn)速700-1200r/min，流動(dòng)相流速Uml/min。在步驟1)中共沸時(shí)要充分?jǐn)嚢瑁x心過(guò)濾可以加適量硅藻土提高效率。步驟3)中粗品溶解可以氯仿溶解也可以流動(dòng)相溶解。本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于
1.工藝采用超聲提取，提取效率高，雜質(zhì)溶出少。2.工藝采用生物酶解，酶解條件溫和，不造成分子結(jié)構(gòu)異化，同時(shí)廢水容易處理。3.工藝采用高速逆流色譜分離，產(chǎn)品無(wú)損失，無(wú)廢棄物產(chǎn)生。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
香加皮藥材粉碎，取lOOOg，加入8L90%甲醇溶液超聲提取60min，濾過(guò)液體再加3L90% 甲醇超聲提取30min，合并提取液回收甲醇，加500ml蒸餾水共沸1小時(shí)，加適量硅藻土趁熱離心，收集離心液，檸檬酸調(diào)節(jié)PH4. 5，加熱至50°C，加入Ig蝸牛酶保溫酶解32小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得粗品12g。取氯仿、甲醇、水按4 :3 3比例混合，取上相注入色譜柱作固定相，開(kāi)啟高速逆流色譜儀，調(diào)整轉(zhuǎn)速800r/min，注入流動(dòng)相，平衡后，調(diào)整流速2ml/min， 氯仿溶解粗品，進(jìn)樣，通過(guò)檢測(cè)儀定時(shí)收集流分，流分回收試劑干燥，連續(xù)制備，得杠柳苷元 6. 2g，含量 96. 6%ο實(shí)施例2
香加皮藥材粉碎，取lOOOg，加入5L80%甲醇溶液超聲提取40min，提取3次，合并提取液回收甲醇，加600ml蒸餾水共沸1小時(shí)，加適量硅藻土趁熱離心，收集離心液，鹽酸調(diào)節(jié) PH5，加熱至55°C，加入5g纖維素酶保溫酶解18小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得粗品10g。取氯仿、甲醇、水按4 :3:3比例混合，取上相注入色譜柱作固定相，開(kāi)啟高速逆流色譜儀，調(diào)整轉(zhuǎn)速900r/min，注入流動(dòng)相，平衡后，調(diào)整流速3ml/min，流動(dòng)相溶解粗品，進(jìn)樣，通過(guò)檢測(cè)儀定時(shí)收集流分，流分回收試劑干燥，連續(xù)制備，得杠柳苷元5. 6g，含量98. 1。實(shí)施例3:
香加皮藥材粉碎，取lOOOg，加入6L85%甲醇溶液超聲提取60min，提取2次，合并提取液回收甲醇，加500ml蒸餾水共沸1小時(shí)，加適量硅藻土趁熱離心，收集離心液，檸檬酸調(diào)節(jié) PH5，加熱至50°C，加入3g苦杏仁酶保溫酶解沈小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得粗品12g。取氯仿、甲醇、水按4 :3 3比例混合，取上相注入色譜柱作固定相，開(kāi)啟高速逆流色譜儀，調(diào)整轉(zhuǎn)速1200r/min，注入流動(dòng)相，平衡后，調(diào)整流速％il/min，流動(dòng)相溶解粗品，進(jìn)樣，通過(guò)檢測(cè)儀定時(shí)收集流分，流分回收試劑干燥，連續(xù)制備，得杠柳苷元6. 9g，含量97. 1%。
權(quán)利要求
1.一種酶法水解制備杠柳苷元的方法，其特征在于包含以下步驟1)取香加皮藥材粉碎，加入3-8倍量80-90%甲醇溶液超聲提取，提取液回收甲醇，加適量水共沸，趁熱離心，得離心液；2)上述離心液調(diào)節(jié)pH4.5-5. 5，加入生物酶保溫酶解18-32小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得粗品；3 )上述粗品用高速逆流色譜儀制備，收集流分，干燥得杠柳苷元。
2.如權(quán)利要求1所述一種酶法水解制備杠柳苷元的方法，其特征在于步驟2)所述的調(diào)節(jié)PH的酸為檸檬酸或鹽酸中的一種。
3.如權(quán)利要求1所述一種酶法水解制備杠柳苷元的方法，其特征在于步驟2)所述的生物酶可選蝸牛酶、纖維素酶和苦杏仁酶中的一種，用量為原料的1-5%。。
4.如權(quán)利要求1所述一種酶法水解制備杠柳苷元的方法，其特征在于步驟2)所述的保溫酶解溫度為47-55°C。
5.如權(quán)利要求1所述一種酶法水解制備杠柳苷元的方法，其特征在于步驟3)所述的高速逆流色譜制備條件為溶劑系統(tǒng)選用氯仿/甲醇/水(4/3/ 體系，上相為固定相，轉(zhuǎn)速 700-1200r/min,流動(dòng)相流速 l_4ml/min。
全文摘要
本發(fā)明涉及了一種酶法水解制備杠柳苷元的方法，其特征在于包含以下步驟1)取香加皮藥材粉碎，加入3-8倍量80-90%甲醇溶液超聲提取，提取液回收甲醇，加適量水共沸，趁熱離心，得離心液；2)上述離心液調(diào)節(jié)pH4.5-5.5，加入生物酶保溫酶解18-32小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得粗品；3)上述粗品用高速逆流色譜儀制備，收集流分，干燥得杠柳苷元。本方法具有低污染、高收率的優(yōu)點(diǎn)，適合工業(yè)化制備。
文檔編號(hào)C12P33/20GK102352401SQ20111021063
公開(kāi)日2012年2月15日 申請(qǐng)日期2011年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月26日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請(qǐng)人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司