專利名稱：一種利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取食品防腐劑的方法。
背景技術(shù)：
隨著生活水平的不斷提高，消費(fèi)意識(shí)的不斷明確，健康問(wèn)題已經(jīng)是生活中每天必然談?wù)摰脑掝}，然而目前的食品中主要添加的還是苯甲酸鈉、山梨酸鉀、亞硝酸鹽等化學(xué)防腐劑，這些化學(xué)防腐劑雖然有較好的防腐保鮮的功效，但是不易代謝消化，隨著在體內(nèi)殘留量的不斷升高，容易引起機(jī)體細(xì)胞功能的紊亂，造成機(jī)體病變，嚴(yán)重的誘發(fā)癌變。目前研究人員在L-乳酸菌發(fā)酵的酸菜水中發(fā)現(xiàn)了一種可以使未經(jīng)滅菌的酸菜在常溫下存放1.5年之久的物質(zhì)，這種物質(zhì)經(jīng)鑒定是一種在食品中具有高效高活力防腐作用，而在體內(nèi)可被分解為氨基酸的高安全小肽類物質(zhì)，它就是小分子肽，抑菌范圍、抑菌活力、安全性和適用范圍等方面均比化學(xué)防腐劑突出。而且在中性條件下仍有很好的抑菌效果，是應(yīng)用范圍更廣的天然防腐劑，完全無(wú)害。在關(guān)于“酸菜水分離提取小肽類天然防腐劑”的報(bào)道中，利用相關(guān)技術(shù)方法和設(shè)備初步提取了這種小分子肽，但畢竟是初步初級(jí)實(shí)驗(yàn)技術(shù)提純手段，整個(gè)工藝比較粗糙，導(dǎo)致產(chǎn)品在純度、顏色、抑菌效果、產(chǎn)率等方面還達(dá)不到要求，無(wú)法實(shí)現(xiàn)廣譜抑菌效果。技術(shù)缺點(diǎn)①酸菜發(fā)酵液45°C下的濃縮液過(guò)于濃稠，鹽析沉淀效果較差；②鹽析(NH4)2S04濃度梯度變化不明顯，僅采用了 30%和60%兩個(gè)濃度；③離心轉(zhuǎn)數(shù)不夠，僅是15000r/min，不能使有效成分完全沉淀；④凍干粉采用稀鹽酸稀釋，稀釋劑本身就有抑菌效果，因此不能得出產(chǎn)品本身有效的抑菌直徑；⑤沒(méi)有進(jìn)行抑菌效價(jià)鑒定，不能準(zhǔn)確確定提純物質(zhì)的有效抑菌效力；⑥冷凍干燥技術(shù)的使用，導(dǎo)致產(chǎn)品的部分活性變性喪失；⑦凝膠層析洗脫液體積不夠， 不能保證有效物質(zhì)完全被洗脫。食品工業(yè)飛速發(fā)展，小分子肽將會(huì)在二十一世紀(jì)具有廣闊的應(yīng)用前景，也必將創(chuàng)造出極大地社會(huì)效益與經(jīng)濟(jì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有的酸菜水分離提取小肽類天然防腐劑的方法存在工藝不完善，產(chǎn)品的純度、顏色、抑菌效果和產(chǎn)率不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題，而提供了一種利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法。利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法按以下步驟進(jìn)行一、取 500ml酸菜水在常溫下5000 6000r/min離心處理30min，取上清液，采用抽真空水浴式旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40°C減壓濃縮5倍，得濃縮液；二、向IOOml濃縮液中加入質(zhì)量濃度為30%的硫酸銨并不斷攪拌，鹽析沉淀完全后于4°C下靜止4h，然后4°C下30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為30%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于 4°C下加入質(zhì)量濃度為40%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下300001·/ min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為40%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于4°C下加入質(zhì)量濃度為50%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為50%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于4°C下加入質(zhì)量濃度為60%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下 30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為60%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑；三、收集步驟二中四次鹽析抑菌效果最佳的離心管中的沉淀，加入到截留相對(duì)分子質(zhì)量1200 1700的透析袋內(nèi)，以Tris-H3PO4為透析內(nèi)液，蒸餾水作透析外液，4°C下透析，同時(shí)用氯化鋇檢測(cè)透析袋內(nèi)沒(méi)有BaSO4產(chǎn)生，即完成透析，獲得透析后樣品；四、CM Sephadex C_25層析凝膠經(jīng)預(yù)處理后裝入層析柱，將透析后樣品用 Tris-H3PO4稀釋上樣后，洗脫液使用順序是先用40ml的HAC-NaAC緩沖液，再用60ml濃度為0. 02mol/L的KCl溶液，收集洗脫液；五、將收集的洗脫液在^Onm下測(cè)定紫外吸光值，選擇紫外吸光值彡0. 2的洗脫液，然后進(jìn)行噴霧干燥，獲得成品干粉，即完成利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑；其中步驟二中測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，抑菌效果不明顯的均是指抑菌圈直徑小于其空白試驗(yàn)的抑菌圈直徑；步驟三中抑菌效果最佳的是指抑菌圈直徑大于其空白試驗(yàn)的抑菌圈直徑。本發(fā)明利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑，所得成品干粉，產(chǎn)率達(dá)標(biāo)，純度高達(dá)92.6%，顏色呈淺乳白色，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌如葡萄球菌、腸球菌、芽孢桿菌、利斯特氏菌、梭狀芽胞桿菌、枯草芽孢桿菌，革蘭氏陰性菌如沙門氏菌以及大腸桿菌均具有抑菌效果；本發(fā)明所得小肽類天然食品防腐劑避免了大量化學(xué)防腐劑的使用對(duì)人類健康帶來(lái)巨大傷害這一本質(zhì)問(wèn)題，同時(shí)輔助性延長(zhǎng)食品包藏時(shí)間，避免因保藏時(shí)間短過(guò)期即銷毀的資源浪費(fèi)嚴(yán)重現(xiàn)象，有利于低碳減排，同時(shí)突破以往小分子肽類食品防腐劑的研究方法，更新技術(shù)指標(biāo)，完善技術(shù)路線，細(xì)化工藝，使產(chǎn)品顏色純度方面達(dá)到市場(chǎng)要求，實(shí)現(xiàn)了廣譜抑菌效果。本發(fā)明利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法，優(yōu)點(diǎn)①酸菜發(fā)酵液40°C下的濃縮液黏度適中，顏色較淺，利于(NH4)2SO4鹽析；②鹽析 (NH4) 2S04濃度梯度變化明顯，采用了 30 %、40 %、50 %、60 %四個(gè)濃度，逐級(jí)沉淀了相關(guān)蛋白代謝產(chǎn)物；③離心轉(zhuǎn)數(shù)30000r/min，使有效成分大幅度沉淀；④凝膠層析洗脫液體積加倍， 保證有效物質(zhì)完全被洗脫；⑤采用噴霧干燥技術(shù)，保持產(chǎn)品活性。


圖1為具體實(shí)施方式
五中凝膠電泳圖，其中1泳道表示Nisin標(biāo)準(zhǔn)樣品(3500Da)， 2和3泳道表示成品干粉，4泳道表示標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白系列Mark。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法按以下步驟進(jìn)行一、取500ml酸菜水在常溫下5000 6000r/min離心處理30min，取上清液，采用抽真空水浴式旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40°C減壓濃縮5倍，得濃縮液；二、向IOOml濃縮液中加入質(zhì)量濃度為30%的硫酸銨并不斷攪拌，鹽析沉淀完全后于4°C下靜止4h，然后4°C下30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為30%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于 4°C下加入質(zhì)量濃度為40%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下300001·/ min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為40%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于4°C下加入質(zhì)量濃度為50%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為50%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于4°C下加入質(zhì)量濃度為60%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下 30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為60%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑；三、收集步驟二中四次鹽析抑菌效果最佳的離心管中的沉淀，加入到截留相對(duì)分子質(zhì)量1200 1700的透析袋內(nèi)，以Tris-H3PO4為透析內(nèi)液，蒸餾水作透析外液，4°C下透析，同時(shí)用氯化鋇檢測(cè)透析袋內(nèi)沒(méi)有BaSO4產(chǎn)生，即完成透析，獲得透析后樣品；四、CM Sephadex C_25層析凝膠經(jīng)預(yù)處理后裝入層析柱，將透析后樣品用 Tris-H3PO4稀釋上樣后，洗脫液使用順序是先用40ml的HAC-NaAC緩沖液，再用60ml濃度為0. 02mol/L的KCl溶液，收集洗脫液；五、將收集的洗脫液在^Onm下測(cè)定紫外吸光值，選擇紫外吸光值彡0. 2的洗脫液，然后進(jìn)行噴霧干燥，獲得成品干粉，即完成利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑；其中步驟二中測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，抑菌效果不明顯的均是指抑菌圈直徑小于其空白試驗(yàn)的抑菌圈直徑；步驟三中抑菌效果最佳的是指抑菌圈直徑大于其空白試驗(yàn)的抑菌圈直徑。本實(shí)施方式步驟一中離心的目的是棄除酸菜水下層雜質(zhì)(主要為酸菜水細(xì)泥沙、 大分子量蛋白、纖維素)和死亡菌體(乳酸菌)的泥狀混合物。本實(shí)施方式步驟一中抽真空水浴式旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀型號(hào)為Rotavapor R-210，購(gòu)買自大連三杰科技發(fā)展有限公司。本實(shí)施方式步驟二鹽析沉淀中的沉淀是指達(dá)到等電點(diǎn)后沉淀的蛋白混合物。
本實(shí)施方式步驟二中4°C下靜止過(guò)夜，目的均是為了達(dá)到最佳鹽析效果。本實(shí)施方式步驟四中收集洗脫液采用的標(biāo)準(zhǔn)為Iml/管。本實(shí)施方式步驟五中選擇紫外吸光值>0.2的洗脫液，這樣的洗脫液蛋白含量高，濃度大，不宜透光，光吸收較多。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中取500ml酸菜水在常溫下5500r/min離心處理30min。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟三中加入到截留相對(duì)分子質(zhì)量1500的透析袋內(nèi)。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟四中 CMSephadex C-25層析凝膠經(jīng)預(yù)處理的過(guò)程為蒸餾水浸泡lh，然后在80 100°C下加熱 2h，再用蒸餾水?dāng)嚢柘礈欤詈笤?00°C下加熱蒸煮30min。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法按以下步驟進(jìn)行一、取500ml酸菜水在常溫下6000r/min離心處理30min，取上清液， 采用抽真空水浴式旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40°C減壓濃縮5倍，得濃縮液；二、向IOOml濃縮液中加入質(zhì)量濃度為30 %的硫酸銨并不斷攪拌，鹽析沉淀完全后于4°C下靜止4h，然后4°C下30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為30%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于 4°C下加入質(zhì)量濃度為40%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下300001·/ min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為40%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于4°C下加入質(zhì)量濃度為50%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為50%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于4°C下加入質(zhì)量濃度為60%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下 30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為60%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑；三、收集步驟二中四次鹽析抑菌效果最佳的離心管中的沉淀，加入到截留相對(duì)分子質(zhì)量1500的透析袋內(nèi)，以Tris-H3PO4為透析內(nèi)液，蒸餾水作透析外液，4°C下透析，同時(shí)用氯化鋇檢測(cè)透析袋內(nèi)沒(méi)有BaSO4產(chǎn)生，即完成透析，獲得透析后樣品；四、CM Sephadex C_25層析凝膠經(jīng)預(yù)處理后裝入層析柱，將透析后樣品用 Tris-H3PO4稀釋上樣后，洗脫液使用順序是先用40ml的HAC-NaAC緩沖液，再用60ml濃度為0. 02mol/L的KCl溶液，收集洗脫液；五、將收集的洗脫液在^Onm下測(cè)定紫外吸光值，選擇紫外吸光值彡0. 2的洗脫液，然后進(jìn)行噴霧干燥，獲得成品干粉，即完成利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑；
其中步驟二中測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，抑菌效果不明顯的均是指抑菌圈直徑小于其空白試驗(yàn)的抑菌圈直徑；步驟三中抑菌效果最佳的是指抑菌圈直徑大于其空白試驗(yàn)的抑菌圈直徑。本實(shí)施方式步驟五中所得成品干粉，用濃度為0. 05mol/L的Tris-H3PO4溶解稀釋成lmg/ml，以枯草芽孢桿菌為指示菌進(jìn)行效價(jià)及抑菌活性檢測(cè)，同時(shí)濃度為0. 05mol/L的 Tris-H3PO4做空白實(shí)驗(yàn)。觀察抑菌圈，抑菌圈直徑為15. 54mm，可見(jiàn)本實(shí)施方式步驟五中所得成品干粉具有純度高、菌圈透亮、抑菌效果明顯等優(yōu)點(diǎn)；以濃度為IO6CfuAiL的枯草芽孢桿菌為指示菌，測(cè)得的小肽類抑菌物質(zhì)的效價(jià)為1.57X 104IU/g，抑菌效力顯著；采用上述方法對(duì)葡萄球菌、腸球菌、芽孢桿菌、利斯特氏菌、梭狀芽胞桿菌、枯草芽孢桿菌、沙門氏菌以及大腸桿菌分別進(jìn)行抑菌活性檢測(cè)，結(jié)果均為抑菌效力顯著；本實(shí)施方式步驟五中所得成品干粉，使用垂直板穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀，結(jié)合 toea-SDS-PAGE凝膠電泳法測(cè)定分子量，結(jié)合制膠藥劑配方(配方及用量見(jiàn)表1)分別制取分離膠和濃縮膠，經(jīng)過(guò)電泳分析后，樣品出現(xiàn)兩條明顯譜帶，分子量分別為3510Da和 22000Da左右，即圖1中黑框所指示譜帶；與Nisin(乳鏈菌肽，它是由乳酸鏈球菌的某些菌株產(chǎn)生的一種小肽，命名為Nisin。由34個(gè)氨基酸組成，分子式為C143H228N42O37S7,但是其抑菌效果有限，只對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有作用，不廣譜抗菌)相似，具備蛋白質(zhì)性質(zhì)且分子量較小，屬于肽類物質(zhì)，有抑菌活性。表 權(quán)利要求
1.一種利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法，其特征在于利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法按以下步驟進(jìn)行一、取500ml酸菜水在常溫下5000 6000r/min離心處理30min，取上清液，采用抽真空水浴式旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40°C減壓濃縮5倍，得濃縮液；二、向IOOml濃縮液中加入質(zhì)量濃度為30%的硫酸銨并不斷攪拌，鹽析沉淀完全后于 4°C下靜止4h，然后4°C下30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為30%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于4°C下加入質(zhì)量濃度為40%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)， 同時(shí)用質(zhì)量濃度為40 %的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于4°C下加入質(zhì)量濃度為50%的硫酸銨并不斷攪拌，于 4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為50%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，將抑菌效果不明顯的離心管中的上清液于4°C下加入質(zhì)量濃度為60%的硫酸銨并不斷攪拌，于4°C下靜止過(guò)夜，然后4°C下30000r/min離心處理15min，分別標(biāo)記離心管，然后取每管上清液和沉淀，分別采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，同時(shí)用質(zhì)量濃度為60%的硫酸銨溶液做空白試驗(yàn)，測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑；三、收集步驟二中四次鹽析抑菌效果最佳的離心管中的沉淀，加入到截留相對(duì)分子質(zhì)量1200 1700的透析袋內(nèi)，以Tris-H3PO4為透析內(nèi)液，蒸餾水作透析外液，4°C下透析，同時(shí)用氯化鋇檢測(cè)透析袋內(nèi)沒(méi)有BaSO4產(chǎn)生，即完成透析，獲得透析后樣品；四、CMSephadex C-25層析凝膠經(jīng)預(yù)處理后裝入層析柱，將透析后樣品用Tris-H3PO4 稀釋上樣后，洗脫液使用順序是先用40ml的HAC-NaAC緩沖液，再用60ml濃度為0. 02mol/ L的KCl溶液，收集洗脫液；五、將收集的洗脫液在^Onm下測(cè)定紫外吸光值，選擇紫外吸光值>0.2的洗脫液， 然后進(jìn)行噴霧干燥，獲得成品干粉，即完成利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑；其中步驟二中測(cè)定上清液和沉淀的抑菌圈直徑，抑菌效果不明顯的均是指抑菌圈直徑小于其空白試驗(yàn)的抑菌圈直徑；步驟三中抑菌效果最佳的是指抑菌圈直徑大于其空白試驗(yàn)的抑菌圈直徑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法，其特征在于步驟一中取500ml酸菜水在常溫下5500r/min離心處理30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法，其特征在于步驟三中加入到截留相對(duì)分子質(zhì)量1500的透析袋內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法，其特征在于步驟四中CM Sephadex C_25層析凝膠經(jīng)預(yù)處理的過(guò)程為蒸餾水浸泡 lh，然后在80 10(TC下加熱2h，再用蒸餾水?dāng)嚢柘礈欤詈笤?00°C下加熱蒸煮30min。
全文摘要
一種利用酸菜發(fā)酵液分離提取小肽類天然食品防腐劑的方法，它涉及一種提取食品防腐劑的方法。它解決了現(xiàn)有的酸菜水分離提取小肽類天然防腐劑的方法存在工藝不完善，產(chǎn)品的純度、顏色、抑菌效果和產(chǎn)率不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題。方法一、制備酸菜水濃縮液；二、濃縮液鹽析沉淀；三、鹽析抑菌效果最佳的沉淀，進(jìn)行透析，獲得透析后樣品；四、裝柱層析后收集洗脫液；五、收集的洗脫液測(cè)定紫外吸光值，選擇紫外吸光值≥0.2的洗脫液，噴霧干燥獲得成品干粉，即完成。本發(fā)明突破以往小分子肽類食品防腐劑的研究方法，更新技術(shù)指標(biāo)，完善技術(shù)路線，細(xì)化工藝，產(chǎn)率達(dá)標(biāo)，純度高，顏色呈淺乳白色，具有廣譜抑菌效果。
文檔編號(hào)A23L3/3472GK102334721SQ20111020125
公開(kāi)日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2011年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月19日
發(fā)明者原韜, 趙曉龍, 陳兵 申請(qǐng)人:陳兵