專利名稱：檢測特定dna序列的方法和裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基于生物-化學(xué)-物理轉(zhuǎn)換方法和超聲微生物檢測裝置，通過采用互補DNA序列和與纖維蛋白原裂解酶連接的特定DNA序列的結(jié)合檢測微生物的特定DNA序列的存在，從而檢測樣品中微生物的存在。
背景技術(shù)：
生物分析物的存在的檢測存在很多方法，例如，酶免疫分析法(EIA)、放射免疫檢定法(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、實時PCR(RT-PCR)等。這些方法已經(jīng)用于測量激素水平、抗原、抗體、酶、蛋白質(zhì)、藥物、DNA的特定片段和污染物等。在這些方法中，最常用的方法是PCR和RT-PCR，在這兩種方法中，提取含有感興趣的微生物的樣品的DNA。然后，將基因組的雙鏈DNA加熱至94-96°C并保持1_9分鐘，以便 DNA鏈的互補堿基對之間的氫鍵斷裂，生成單鏈DNA。為了檢測樣品中感興趣的微生物的存在，添加互補的DNA寡聚核苷酸引物(例如F#1與R#1分別代表正向序列與反向序列)，與 DNA序列的相鄰片段相結(jié)合，該DNA序列的相鄰片段位于感興趣的DNA (單鏈DNA)的這一特定片段(序列#1)的上游或下游。當(dāng)引物序列與模板序列密切匹配時，穩(wěn)定的DNA-DNA氫鍵將形成，這一過程被稱為退火。然后，在保持20-40s前，將反應(yīng)溫度降至50-65°C。添加脫氧三磷酸核苷，通過DNA聚合酶的作用(例如Taq聚合酶)，將生成與感興趣的DNA這一特定片段(序列#1)互補的、表明感興趣的微生物存在的DNA片段(稱為序列#2)。序列#1 稱為被轉(zhuǎn)錄，序列#2形成。這稱為延伸/延長步驟。隨著升溫(90°C )與降溫(50-60°C ) 的重復(fù)循環(huán)，在最終的延長步驟(70-75°C持續(xù)15分鐘)前，序列#1將多次被轉(zhuǎn)錄(通常 30-35次)。這確保任一剩余的單鏈DNA充分延伸。采用PCR方法，使用瓊脂糖凝膠的瓊脂糖凝膠電泳將溶解含有特定DNA的轉(zhuǎn)錄片段的混合物。這些DNA片段和引物將根據(jù)他們的分子量溶解(resolve)。在紫外光(UV)下通過添加溴化乙錠實現(xiàn)DNA片段的可視化。如果感興趣的微生物存在于樣品中，在PCR步驟后，與互補DNA(序列#2)分子大小相同(right)的吸收紫外線的DNA帶將出現(xiàn)。隨后，在宿主細菌(例如大腸桿菌)中表達前， 將這一 PCR產(chǎn)物(假設(shè)序列#2)插入噬菌體載體系統(tǒng)(例如I^gem-Τ)中。然后可以使用傳統(tǒng)的雙脫氧法研究這一 DNA帶的DNA序列(例如序列#2)。如果以及當(dāng)獲得的這一 PCR產(chǎn)物(實驗性獲得的序列#2)的測序結(jié)果與序列#1的測序結(jié)果互補時，該試驗被認(rèn)為是肯定的。另一方面，采用RT-PCR方法，在起始的加熱步驟，將DNA結(jié)合染料(比如花青綠色染料) 加入到反應(yīng)混合物中(與所有其他試劑)。采用與PCR方法類似的實驗條件，如果DNA(序列#1)的特定片段存在于樣品中，它將被存在的DNA聚合酶轉(zhuǎn)錄。重復(fù)轉(zhuǎn)錄將產(chǎn)生多個序列#2。隨著DNA序列的增加和DNA結(jié)合染料的存在，與DNA結(jié)合的染料的數(shù)量將增加。這一染料具有唯一的熒光特性，當(dāng)其與DNA結(jié)合時將發(fā)熒光。因此，增加的熒光不僅表明這一互補DNA序列(序列#2)的存在，而且表明感興趣的微生物中DNA的這一片段的復(fù)制數(shù)目， 所述互補DNA序列表明這一感興趣的微生物的序列(序列#1)的存在因此表明感興趣的微生物的存在。
但是，雖然這些PCR與RT-PCR方法能夠現(xiàn)場用于室外操作，但是由于他們依靠熒光檢測和定量存在的分析物的水平，他們需要相對較重的儀器。因此，這些使用相對較重的儀器的方法不適合現(xiàn)場室外操作。本發(fā)明不需要熒光源以檢測感興趣的微生物的存在。另外，圖1中所示的每一部件可以僅僅為幾厘米大。就這一點而言，微生物檢測裝置的體積相對地可以是小的(例如在我們的樣機中為18cm長、8cm寬和5cm高)。另外，微生物檢測裝置可以全部是電池驅(qū)動。 因此，該裝置可以在沒有常規(guī)的電源供給的遠端位置操作。由于它的輕重量、可攜帶性和操作的簡單性，該裝置適合于手持現(xiàn)場室外操作。通過本發(fā)明，克服了現(xiàn)有檢測方法和裝置的缺點，可認(rèn)識到其在生物分析物的分析領(lǐng)域中的優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供嵌入裝置中檢測樣品中微生物的存在的方法，所述裝置包括殼體，其包括與第一 DNA引物固定的基底，所述第一 DNA引物具有與感興趣的微生物的特定DNA序列互補的核苷酸序列；與第二DNA引物結(jié)合的纖維蛋白原分裂劑， 所述第二 DNA引物具有同樣與感興趣的微生物的DNA序列互補的核苷酸序列；用于用于清洗所述殼體的清洗單元；用于向所述殼體添加纖維蛋白原的纖維蛋白原添加單元以便纖維蛋白原與纖維蛋白原分裂劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生粘性物質(zhì)；用于向所述殼體發(fā)射超聲信號的超聲發(fā)射器；以及用于接收來自于所述殼體的超聲信號并將接收的超聲信號傳送給超聲分析器的超聲接收器，其中所述超聲分析器基于接收的超聲信號確定樣品中是否存在感興趣的微生物。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供檢測樣品中微生物的存在的方法，所述方法包括固定第一 DNA引物與殼體中的基底，所述第一 DNA引物具有與感興趣的微生物的DNA序列互補的核苷酸序列；結(jié)合纖維蛋白原分裂劑與第二DNA引物，所述第二DNA引物具有與感興趣的微生物的DNA序列互補的核苷酸序列；通過緩沖液清洗所述殼體；向所述殼體添加纖維蛋白原以便纖維蛋白原與纖維蛋白原分裂劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生粘性物質(zhì)；影響從超聲發(fā)射器向超聲分析器的超聲信號的傳輸，其中，所述超聲分析器內(nèi)的算法基于接收的超聲信號確定樣品中是否存在微生物。從以下將參照附圖介紹的示例性實施例，本發(fā)明的進一步的特點和方面是顯而易見的。


說明書中包含的且作為說明書一部分的附圖示出本發(fā)明的實施例，并與具體實施例一起解釋本發(fā)明的原理。圖1是依據(jù)本發(fā)明的實施例的超聲微生物檢測裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是DNA引物一端與殼體206固定、另一端從201至205與感興趣的微生物的互補DNA固定的實例的示意圖；感興趣的微生物上互補DNA的另一段與第二組DNA引物連接，在所述第二套DNA引物中，其自身通過雙功能的化學(xué)鍵與纖維蛋白原分裂劑連接；圖3A是具有多個孔的塑料(包括聚苯乙烯)微孔板的實例的示意圖，在所述孔中，所述第一組DNA引物與所述殼體結(jié)合；所述微孔板的孔不限于圓形；
圖:3B是微孔板的孔的實例的示意圖；所述孔包含DNA引物的(第一)鏈與感興趣的微生物的互補DNA的一段，這一微生物的DNA的另一段與互補的DNA引物的(第二)鏈結(jié)合，所述DNA引物與纖維蛋白原分裂劑連接；圖4是采用時間對信號繪制的圖形的實例的示意圖，所述信號是超聲接收器中接收的以接收的電壓或振幅量化的信號；圖5是根據(jù)本發(fā)明的實施例的示例性流程圖。
具體實施例方式本發(fā)明的各個實施例將在以下參照附圖描述。圖1是根據(jù)本發(fā)明的實施例的超聲微生物檢測裝置100的示意圖。檢測裝置包括殼體110、超聲發(fā)射器105、超聲接收器106、加熱/冷卻板103、一或多個溫度傳感器108、試劑傳遞管101與試劑移除管102和磁力攪拌機構(gòu)104。殼體110用于確定其中的樣品中是否存在微生物。殼體110包含聚合物基底，比如塑料(包括聚苯乙烯)(例如用于制造酶標(biāo)板)。所述殼體的形狀不限于矩形、圓柱形或圓形。所述殼體可以是任意適合于容納液體并允許DNA引物固定的封閉結(jié)構(gòu)。另外，殼體 110適合于經(jīng)過其中的超聲傳播。“樣品”指用于測試感興趣的微生物的存在的物質(zhì)。例如，樣品可以是取白水庫、湖泊、河流、水潭、海洋、食物表面、任意容器表面、生物流體、組織勻漿或空氣樣品的物質(zhì)(例如，來自感興趣的病原菌的DNA)。合適的過濾器將用于容納(trap)及濃縮樣品中的微生物，以通過本發(fā)明作進一步分析?？梢允褂脧暮线m的營養(yǎng)瓊脂或細胞生長的細胞培養(yǎng)板直接獲得的微生物的菌落并將其直接加入殼體110中。通過加熱/冷卻板103加熱至大約 95 0C，微生物的DNA成分將釋放。圖2是DNA引物和樣品中感興趣的目標(biāo)微生物的結(jié)合的例子的示意圖。在這一例子中，塑料聚合物207(例如聚苯乙烯)用于構(gòu)成所述殼體110的基底，并且它也與DNA引物201結(jié)合。DNA引物201與基底207化學(xué)結(jié)合(206)。DNA引物201的鏈可能通過共價結(jié)合或非共價結(jié)合與塑料基底(比如聚苯乙烯)固定，結(jié)合方式取決于塑料(例如聚苯乙烯底部)和DNA引物間的反應(yīng)。DNA引物201可能是具有6_30堿基長的核酸鏈，比如化學(xué)合成的寡聚核苷酸。它包含與感興趣的目標(biāo)微生物的部分DNA序列205互補的特定核苷酸序列。雖然僅僅闡述了 DNA引物的單鏈，但是DNA引物的多個鏈可能以相似的方式固定在塑料基底上(例如聚苯乙烯)。所述殼體還包括與第二 DNA引物202通過雙功能化學(xué)鍵203結(jié)合的纖維蛋白原分裂劑204(例如，各種類型的毒液包括拉塞爾蝰蛇的毒液中的凝血酶或活性組分，或其他天然的或合成的纖維蛋白原分裂化學(xué)制劑或酶)。DNA引物202也包含與樣品中感興趣的目標(biāo)微生物的另一部分DNA序列(205)互補的特定核苷酸序列。雖然僅僅闡述了 DNA引物202 的單鏈，但是DNA引物的多個鏈可能以相似的方式與纖維蛋白原分裂劑結(jié)合。塑料基底207可能是例如，圖3A所示的微孔板孔300的形式或矩形或其他形狀。 微孔板包含唯一的或多個孔310。微孔板的每一個孔包含至少如圖:3B中所所示的DNA引物的單鏈。以示意性為目的，具有與DNA引物互補的DNA序列的微生物如圖;3B中所示。因此，樣品中感興趣的微生物的DNA的鏈與兩個DNA引物結(jié)合。
本發(fā)明還包括攪拌機構(gòu)104，比如通過磁力攪拌器攪拌。所述磁攪拌器能夠輕輕地混合殼體110中的混合物。就這一點而言，該移動使得DNA樣品的鏈與DNA引物的鏈雜交與退火。加熱/冷卻板103能夠加熱或冷卻殼體以便殼體內(nèi)部的混合物在期望的適合于化學(xué)反應(yīng)的溫度范圍內(nèi)(例如96°C至室溫)運行。加熱/冷卻板103可進一步包括監(jiān)控殼體溫度的溫度傳感器108，以便殼體在期望的溫度運行。如果DNA樣品205與DNA引物201互補，(樣品中)微生物的DNA205鏈將如圖2 中所示與DNA引物201雜交(結(jié)合)。同樣，DNA205鏈的另一部分將與DNA引物202雜交 (結(jié)合)。換言之，形成了由DNA引物201、加上感興趣的目標(biāo)微生物的互補DNA、加上另一互補的DNA引物、加上雙功能化學(xué)鍵203、加上纖維蛋白原分裂劑204組成的復(fù)合體。整個復(fù)合體與塑料基底207(例如，聚苯乙烯)共價或非共價連接206。但是，如果DNA樣品的鏈與DNA引物不互補，雜交將不會發(fā)生并且將不會形成復(fù)合體。其后，混合物經(jīng)歷水浴處理，該水浴處理清洗掉沒有與DNA引物附著的過多的微生物。水浴可包含通過試劑管開口 101進入的PH常數(shù)水溶性緩沖液。如前所述，與DNA引物不互補的DNA鏈將不會與DNA引物結(jié)合。在這一水浴處理過程中，沒有結(jié)合的DNA鏈、纖維蛋白原分裂劑和其他松散物質(zhì)被清洗掉并通過試劑管開口 102從殼體離開。就這一點而言，只有成功雜交的DNA鏈(例如，以復(fù)合體的形式)將保留在殼體中。在水浴處理后，純化的纖維蛋白原溶液或包含天然纖維蛋白原或合成的類纖維蛋白原物質(zhì)的混合物通過試劑管開口 101添加至殼體110中。繼水浴處理之后，如果纖維蛋白原分裂劑仍然保留在殼體110中(由于與復(fù)合體連接，目標(biāo)微生物是所述復(fù)合體中的部分)，纖維蛋白原分裂劑將將天然的或合成的纖維蛋白原化學(xué)轉(zhuǎn)換為粘性類型的混合物的纖維蛋白凝塊(或膠體)。一般而言，化學(xué)反應(yīng)處理取決于樣品量的數(shù)量，需要幾分鐘來完成。然后，超聲發(fā)射器發(fā)出超聲信號(或波)穿過殼體110。雖然超聲發(fā)射器/接收器可能在纖維蛋白原的添加之前或之后的任一時間被激活，但是超聲發(fā)射器/接收器必須在殼體的混合物成為粘性的之前被激活。超聲發(fā)射器包含一或多個產(chǎn)生超聲信號的超聲換能器。發(fā)射的超聲信號由如圖1中所示的在殼體110另一端的超聲接收器接收。接收的超聲信號傳輸至超聲分析器(未示出)用于分析。圖4是在示波器上顯示的典型的接收的超聲信號的示意圖。如圖中所示，接收的電壓形式的超聲信號在10分鐘后顯著減少至大約0. 25V。因此，在短的一段時間內(nèi)，可以確定存在復(fù)合體的粘度的改變。當(dāng)超聲信號穿過凝塊時，超聲信號幅度將顯著降低。基于粘度的變化，可以確定感興趣的目標(biāo)微生物是否存在于混合物中。超聲中的衰減根據(jù)穿過介質(zhì)的距離測量超聲信號的幅度的下降。接收的超聲信號的衰減可以通過以下方程計算衰減=20 (log (V 接收的/V傳輸?shù)?/d(dB/cm) (1)，胃中，V接收的是接收的超聲電壓，是傳輸?shù)某曤妷?，以及d是超聲發(fā)射器和接收器之間的距離?；谒p值，可以確定殼體110內(nèi)部的內(nèi)容物是否具有增強的粘度。當(dāng)衰減值顯著減少時，例如低于10dB，可以確定殼體110內(nèi)部的內(nèi)容物具有增強的粘度。本發(fā)明不限制衰減范圍。圖5中闡述了檢測感興趣的目標(biāo)微生物的DNA序列的示范性處理流程圖。在步驟 S501中，設(shè)置殼體110的溫度條件。殼體110包括與DNA引物的鏈結(jié)合的塑料聚合物基底(包括聚苯乙烯)207，所述DNA引物與特定類型的微生物的DNA序列互補。通過激活加熱 /冷卻板103，將殼體110調(diào)整至合適的溫度(例如，在大約90°C)。其后，在步驟502中添加樣品至殼體110。可通過試劑管101的開口添加樣品。然后，樣品在殼體中被混合，例如， 通過磁攪拌機構(gòu)104攪拌。一般而言，整個混合物允許混合10分鐘。隨后，在添加DNA引物的鏈至殼體110前，將殼體110冷卻至大約56°C或更低，所述DNA引物與與纖維蛋白原分裂劑結(jié)合的特定類型的微生物的DNA序列互補。整個混合物允許再混合10分鐘。其后，在步驟503中，殼體用pH常數(shù)的水溶性緩沖液清洗以清洗掉未與DNA引物雜交的任意材料。在清洗后，再次激活加熱/冷卻板(培養(yǎng)箱)103以將殼體110帶至合適的溫度，所述合適的溫度用于纖維蛋白原裂解酶運轉(zhuǎn)和阻止纖維蛋白原的快速降解(例如，在大約37°C)。隨后，添加纖維蛋白原溶液至殼體110(步驟S505)。另外，激活超聲發(fā)射器105以發(fā)射超聲信號穿過殼體110(步驟S504)。請注意，可能在纖維蛋白原的添加之前或之后激活超聲發(fā)射器/接收器。所述系統(tǒng)允許混合物與添加的纖維蛋白原(天然的或合成的類纖維蛋白原物質(zhì)) 化學(xué)反應(yīng)一段預(yù)定的時間。然后，超聲接收器接收傳輸?shù)某曅盘柌⒔邮盏某曅盘杺鬏斨脸暦治銎?09，用于分析。超聲分析器可能安裝在超聲微生物檢測裝置中或通過有線或無線連接與超聲微生物檢測裝置外部連接。其后，在步驟S506中，超聲分析器基于接收的來自于超聲接收器的超聲信號幅度，確定殼體110中是否有粘度變化。如果有粘度變化(步驟S506中的YEQ，超聲分析器確定微生物存在于樣品中(S508)。另一方面，在一段預(yù)定的時間后，如果復(fù)合體的粘度未改變(步驟S507中的NO)，超聲分析器確定微生物不存在于樣品中(S507)。然后，處理結(jié)束。本發(fā)明可能還包括基于接收的超聲信號、表明微生物是否存在于樣品中的顯示器 (例如，IXD顯示器)。例如，如果有粘度變化，超聲分析器109確定微生物存在并且顯示器將表明微生物存在。另一方面，在一段預(yù)定的時間后，如果殼體110內(nèi)部的內(nèi)容物的粘度未改變，超聲分析器109確定微生物不存在并且顯示器將表明微生物不存在。超聲分析器109的操作可能通過確定是否有粘度變化的計算機可執(zhí)行程序代碼實現(xiàn)。計算機可執(zhí)行程序代碼可能存儲在超聲分析器109的計算機可讀存儲媒介中。例如， 可以以系統(tǒng)、裝置、方法、程序、記錄媒介等的形式實現(xiàn)體積可以很小的本發(fā)明。通過使用本檢測方法和裝置，通過使用相應(yīng)組的DNA引物可以檢測各種微生物， 所述DNA引物具有與感興趣的目標(biāo)微生物的DNA序列互補的DNA序列。另外，本超聲微生物檢測裝置的用戶不需要具有生物化學(xué)和分子生物學(xué)的廣博知識，其對于執(zhí)行基于熒光的檢測方法(例如，PCR和RT-PCR)是必須的。雖然本發(fā)明參照示范性實施例描述，應(yīng)該明白的是本發(fā)明并不受限于公開的示范性實施例。以下的權(quán)利要求的范圍被認(rèn)為是對本發(fā)明的最寬廣的解釋，以包括所有的改變和等同的結(jié)合和功能。
權(quán)利要求
1.一種檢測樣品中微生物的存在的裝置，其特征在于，包括 殼體，所述殼體包括與第一 DNA引物固定的基底，所述第一 DNA引物具有與感興趣的微生物的DNA序列互補的核苷酸序列；與第二 DNA引物結(jié)合的纖維蛋白原分裂劑，所述第二 DNA引物具有與感興趣的微生物的DNA序列互補的核苷酸序列； 用于清洗所述殼體的清洗單元；用于向所述殼體添加纖維蛋白原的纖維蛋白原添加單元，以便添加的纖維蛋白原與纖維蛋白原分裂劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生粘性物質(zhì)；用于向所述殼體發(fā)射超聲信號的超聲發(fā)射器；以及用于接收來自于所述殼體的超聲信號并將接收的超聲信號傳輸至超聲分析器的超聲接收器，其中所述超聲分析器基于接收的超聲信號確定樣品中是否存在感興趣的微生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測樣品中微生物的存在的裝置，其特征在于，所述基底是塑料，所述塑料包括聚苯乙烯或其他聚合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測樣品中微生物的存在的裝置，其特征在于，所述基底是具有一或多個孔的微孔板。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測樣品中微生物的存在的裝置，其特征在于，所述裝置還包括控制所述殼體的溫度的加熱/冷卻板和一或多個溫度傳感器。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測樣品中微生物的存在的裝置，其特征在于，所述超聲分析器基于接收的來自于超聲接收器的超聲信號幅度確定粘度改變是否發(fā)生。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測樣品中微生物的存在的裝置，其特征在于，所述裝置還包括用于混合所述殼體內(nèi)部的物質(zhì)的磁攪拌機構(gòu)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測樣品中微生物的存在的裝置，其特征在于，所述裝置是便攜式的且可用于現(xiàn)場操作。
8.—種檢測樣品中微生物的存在的方法，其特征在于，包括固定第一 DNA引物與殼體中的基底，所述第一 DNA引物具有與感興趣的微生物的DNA 序列互補的核苷酸序列；結(jié)合纖維蛋白原分裂劑與第二 DNA引物，所述第二 DNA引物具有與目的微生物的DNA 序列互補的核苷酸序列；添加包含感興趣的微生物的樣品以形成混合物； 在預(yù)定的持續(xù)時間內(nèi)，培養(yǎng)所述混合物； 通過緩沖液清洗所述殼體；向所述殼體添加天然的或合成的纖維蛋白原，以便纖維蛋白原與纖維蛋白原分裂劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生粘性物質(zhì)； 向所述殼體發(fā)射超聲信號；接收來自于所述殼體的超聲信號并將接收的超聲信號傳輸至超聲分析器， 其中所述超聲分析器基于接收的超聲信號確定樣品中是否存在微生物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測樣品中微生物的存在的方法，其特征在于，所述基底是由聚苯乙烯或其他聚合物制成的塑料基底。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測樣品中微生物的存在的方法，其特征在于，所述超聲分析器基于接收的來自于接收的超聲信號的超聲信號幅度確定粘度改變是否已發(fā)生。
全文摘要
檢測樣品中微生物的存在的裝置包括殼體，所述殼體包括與第一DNA引物固定的基底，所述第一DNA引物具有與感興趣的微生物的特定DNA序列互補的核苷酸序列；與第二DNA引物結(jié)合的纖維蛋白原分裂劑，所述第二DNA引物具有同樣與目的微生物的DNA序列互補的核苷酸序列；用于清洗所述殼體的清洗單元；用于向所述殼體添加纖維蛋白原的纖維蛋白原添加單元以便纖維蛋白原與纖維蛋白原分裂劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生粘性物質(zhì)；用于向所述殼體發(fā)射超聲信號的超聲發(fā)射器；以及用于接收來自于所述殼體的超聲信號并將接收的超聲信號傳輸至超聲分析器的超聲接收器，其中所述超聲分析器基于接收的超聲信號確定是否存在感興趣的微生物。
文檔編號C12M1/34GK102329723SQ20111015500
公開日2012年1月25日 申請日期2011年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月10日
發(fā)明者盧俊立, 柯少榮 申請人:香港理工大學(xué)