專(zhuān)利名稱(chēng)：紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物晚期胚胎富集蛋白及其編碼基因與應(yīng)用，特別是涉及一種紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
晚期胚胎發(fā)生豐富蛋白(Late Embryogenesis Abundant Protein)是生物體中廣泛存在的一類(lèi)與滲透調(diào)節(jié)有關(guān)的家族蛋白。研究發(fā)現(xiàn)在植物胚胎發(fā)育晚期，LEA蛋白表達(dá)量十分豐富，D7LEA蛋白在成熟棉花胚細(xì)胞中占非細(xì)胞器胞質(zhì)蛋白質(zhì)的4%，且在環(huán)境脅迫如干旱、低溫、鹽脅迫、ABA、紫外輻射和NaHCO3等條件下LEA蛋白mRNA也會(huì)大量累積，被認(rèn)為是在脅迫過(guò)程中對(duì)植物起保護(hù)作用的物質(zhì)之一。LEA蛋白在細(xì)胞中分布廣泛，參與蛋白穩(wěn)定、分子保護(hù)、離子結(jié)合和防止氧化及參與細(xì)胞膜連接、折疊和穩(wěn)定等作用。這些是通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)或軟件預(yù)測(cè)蛋白結(jié)構(gòu)得到的單個(gè)LEA蛋白的功能，對(duì)多種LEA蛋白的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和蛋白之間的相互作用的研究越來(lái)越受到關(guān)注。不管在植物，動(dòng)物還是微生物中，LEA蛋白并不是唯一的親水蛋白，還有很多親水糖和與脫水相關(guān)的溶質(zhì)等。因此研究LEA蛋白與它們之間的相互作用也有非常重要的意義。許多研究已經(jīng)報(bào)道，LEA蛋白可以在多種脅迫如干旱、 低溫、鹽脅迫、ABA、紫外輻射和NaHCO3等條件下大量積累從而提高了植物的抗性，因此對(duì)未知LEA基因的克隆和表達(dá)鑒定也是非常必要的。紫花苜蓿是一種重要的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)牧草，對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展起著重要的作用。通過(guò) RACE方法克隆得到MsLEA3-l基因全長(zhǎng)，對(duì)其編碼蛋白進(jìn)行分析，探討該基因在提高轉(zhuǎn)基因植物抗干旱、低溫、鹽脅迫等方面提供一定的支持。MsLEA3-l基因作為一個(gè)潛在的抗逆候選基因，其全基因的克隆與功能分析以及對(duì)植物的遺傳轉(zhuǎn)化對(duì)于培育高抗逆的植物品種將具有一定的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白，來(lái)源于紫花苜蓿(Medicago sativa)，是1)具有序列表中序列2所示氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)；或2)是將序列2所示氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與序列2所示氨基酸殘基序列相同活性的由序列2所示蛋白質(zhì)衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白，其中所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的氨基酸序列如序列表中的序列2所示。本發(fā)明所提供的紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因，是下列DNA分子之一1)其核苷酸序列為序列表中的序列1自5’端第157到第1465位所示；2)編碼序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的DNA分子；3)5’端非編碼區(qū)為序列表中序列3，從5’端第397到第805位所示；
4) 3’ RACE產(chǎn)物序列為序列表中序列4，從5’端第419位到第17 位所示；5) 5’ RACE產(chǎn)物序列為序列表中序列5，從5’端第1位到第434位所示；6)與序列表中序列1所示的DNA分子具有90%以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA分子。本發(fā)明的紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因，其中所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因如序列表中的序列1所示。本發(fā)明還提供了含有所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因的表達(dá)載體。本發(fā)明還提供了含有所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因的細(xì)胞系。本發(fā)明還提供了擴(kuò)增所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因中任一片段的引物。本發(fā)明的所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因可用在苜蓿耐鹽分子機(jī)制研究中。本發(fā)明的所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因可用在植物耐鹽性狀改良中。本發(fā)明的紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因?qū)檐俎Ｄ望}分子機(jī)制研究，以及對(duì)植物耐鹽性狀的改良打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，具有重要意義。


圖1為MsLEA3_l基因3' -RACE擴(kuò)增的片斷。圖2為MsLEA3_l基因5' -RACE擴(kuò)增的結(jié)果。圖3為紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白與其它植物晚期胚胎富集蛋白的同源性分析。圖4為紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白與其他植物晚期胚胎富集蛋白的氨基酸序列進(jìn)化樹(shù)分析。圖5為MsLEA3_l蛋白親水性圖分析。圖6為MsLEA3_l蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、(一 )紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白編碼基因的獲得紫花苜蓿品種中苜一號(hào)(Medicago sativa L. v. zhongmu No. 1)種子在下催芽2d后，在光照培養(yǎng)，每天光照12h，至兩葉一心期開(kāi)始用250mmol/L NaCl脅迫處理 Oh, 0. 5h, lh, 3h, 6h, 12h, 24h 以備提取總 RNA。RNA提取參照張勁松等人的方法進(jìn)行(張勁松，等.中國(guó)科學(xué)，B輯，1995，25 (5) 659 669)，苜蓿葉片在液氮中研碎，懸于抽提液(4mol/L硫氰酸胍中鈉，5g/l十二烷基肌氨酸，25mmol/L檸檬酸鈉，0. lmol/L^巰基乙醇)，混合物用酸性苯酚、氯仿抽提，上清中加入無(wú)水乙醇沉淀總RNA，再經(jīng)4mol/LLiCl懸浮RNA沉淀、氯仿抽提1次，然后用乙酸鈉/乙醇沉淀總RNA，最后將RNA溶于水中，貯存于_20°C備用，用0. 8%的瓊脂糖檢測(cè)RNA的完整性。通過(guò)反向Northern斑點(diǎn)雜交技術(shù)，對(duì)一個(gè)紫花苜蓿鹽誘導(dǎo)抑制消減雜交cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選。獲得一個(gè)在鹽誘導(dǎo)條件下表達(dá)量上調(diào)的克隆。通過(guò)測(cè)序獲得了 409bp的cDNA 片段。以獲得的cDNA片段序列為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增3’端和5端’特異引物GSP 1 :5，-AAGATAAGGACACCACCACCACT-3，GSP2 :5， -TCAGTGGTGGTGGTGTCCTTATC-3，按照SMART RACE cDNAAmplif ication Kit (Clontech, Cat. no. K1811-1)的方法作 RT-PCR。3，端的擴(kuò)增的循環(huán)參數(shù)為94 V變性k，68°C退火IOs，72°C延伸anin，35個(gè)循環(huán)。產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)出一 1200bp左右的DNA片斷(如圖1所示，圖1中 1:1: MSLEA3-1基因3'末端擴(kuò)增片斷；M :DN2000DNA分子量標(biāo)準(zhǔn))。5，端的擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)為94°C變性5s，72°C延伸;3min，5個(gè)循環(huán)；94°C變性k， 70°C退火10s，72°C延伸3min，5個(gè)循環(huán)；94°C變性5s，68°C退火10s，72°C延伸2min，25個(gè)循環(huán)。產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)出一 500bp左右的DNA片段(如圖2所示，圖2中5 μ 1 巢式PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果；M :DN2000DNA分子量標(biāo)準(zhǔn))。產(chǎn)物回收純化，連接，轉(zhuǎn)化，測(cè)序，測(cè)序結(jié)果MsLEA3-l基因3'末端擴(kuò)增片斷序列為SEQID Na 4, MsLEA3-l基因5'末端擴(kuò)增片斷為SEQ ID Na :5。借助DNA拼接軟件contig，獲得該基因的cDNA的完整序列，該序列全長(zhǎng)為 1728bp，具有SEQ IDNa :1的DNA序列，157_1465bp為其完整編碼區(qū)域，編碼的蛋白含有435 個(gè)氨基酸殘基，具有SEQ ID No 2的氨基酸殘基序列。( 二)紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的功能分析(1)序列比較分析運(yùn)用BLAST和DNAMAN軟件對(duì)紫花苜蓿MsLEA3_l蛋白序列進(jìn)行比較分析。其氨基酸序列與大豆的種子成熟蛋白的同源性E值為le-108，與已知的其他LEA蛋白也有較強(qiáng)的同源性，圖3顯示與MsLEA3-l蛋白比對(duì)E值在Ie-IO以上的氨基酸序列同源比對(duì)結(jié)果，涂色部分為同源序列。圖4顯示各氨基酸序列的進(jìn)化樹(shù)關(guān)系。結(jié)果表明紫花苜蓿MsLEA3-l 蛋白與大豆的兩個(gè)LEA蛋白同源性最高(AAA91965，CAA80491)，親緣關(guān)系最近。從LEA蛋白和多肽的同源比對(duì)結(jié)果和進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果顯示，登錄號(hào)為NP 001024042和CAF32327兩個(gè)多肽與其他多肽之間序列同源性很低，這主要是由于第3組LEA蛋白序列除了有11個(gè)氨基酸的重復(fù)結(jié)構(gòu)之外，其序列特異性較高有關(guān)。其他7個(gè)物種之間LEA蛋白在N端有較高的同源性，而C端同源性較低，事實(shí)上這7種LEA蛋白為一類(lèi)LEA蛋白，都為第3組LE蛋白。(2)表達(dá)載體的構(gòu)建設(shè)計(jì)引物用于構(gòu)建植物表達(dá)載體LEAl :5，-GCTCTAGAATGGTGATGGCTCCAAGATTGGTT-3‘LEA2 :5， -GCAAGCTTTTAAAGCTCAGGATCTCGGCGTTGTC-3’其中下劃線部分分別表示Hindlll，XbaI酶切位點(diǎn)。提取苜蓿的總RNA，用oligo (dl%8作反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物用引物L(fēng)EA1，LEA2進(jìn)行 PCR，得到含有MsLEA3-l完整開(kāi)放閱讀框的DNA片段，連接到pMD_18T載體上，獲得重組克隆載體，命名為PMD-LEA。轉(zhuǎn)化大腸桿菌，并送到華大基因生物公司測(cè)序。對(duì)于含有正確序列的菌株，搖菌提取質(zhì)粒，用HindIII和^CbaI分別雙酶切pMD-LEA和pKYLX7載體，回收、純化酶切產(chǎn)物。按照載體插入片段為1 7的比例，取適量線性化載體pKYLX7和MsLEA3-l 的純化片段混合，用T4DNA連接酶于16°C連接過(guò)夜，從而獲得含有MsLEA3-l編碼序列的重組表達(dá)載體，命名為PKYLX7-LEA。挑取農(nóng)桿菌LBA4404單菌落接種到^iil YEB液體培養(yǎng)基(含鏈霉素125ug/ml)中， 振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。將過(guò)夜培養(yǎng)物500ul接種于50ml的YEB液體培養(yǎng)基中，285000g，4°C
離心5min，收集菌體200rmp振蕩培養(yǎng)至0D600為0. 5左右。5000g，4°C離心5min，收集菌體。于冰上加入IOml 0. 15M的Nacl溶液懸浮細(xì)胞。5000g，4°C離心5min，收集菌體。加入預(yù)冷的Iml 20mMCaCl重懸。取200ul感受態(tài)細(xì)胞，加入lug pKYLX7_LEA，冰浴30min，液氮中凍Imin0 37°C熱激。加入Iml的YEB液體培養(yǎng)基，28°C振蕩培養(yǎng)4h，IOOOOg離心30s，加入IOOul的YEB重懸細(xì)胞。菌液涂布于含有l(wèi)OOug/mlkan和125ug/ml鏈霉素的YEB固體選擇培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)過(guò)夜得到LBA4404-LEA。(3) LBA4404-LEA葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化煙草用5 IOmm打孔器制備葉盤(pán)外植體；獲得的外植體在LBA4404-LEA菌液中浸泡 8min ；用無(wú)菌濾紙吸干植物材料表面的菌液，轉(zhuǎn)入上鋪一層濾紙的共培養(yǎng)培養(yǎng)基，28°C 暗培養(yǎng)；3d后，將材料轉(zhuǎn)到含有抗生素的誘導(dǎo)愈傷組織形成及誘芽培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；待抗性芽生長(zhǎng)至2-3cm高時(shí)轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根；待煙草長(zhǎng)出根，轉(zhuǎn)移到花盤(pán)中，待種子成熟，收集種子。(4)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株的篩選制備MS (0.43% MS鹽，3%蔗糖，瓊脂，用KOH調(diào)pH至5. 7)選擇培養(yǎng)基。T1代轉(zhuǎn)基因種子表面消毒(70%乙醇浸泡anin，0. 5%次氯酸鈉浸泡lOmin，無(wú)菌水清洗aiiinX 5 次)。平鋪于含相應(yīng)抗生素(40 μ g/ml Kan和50 μ g/ml的頭孢霉素)的MS選擇培養(yǎng)基中， 密度為100-200粒種子/皿。4°C春化3天，移入生長(zhǎng)箱中(22°C恒溫二4小時(shí)光照，光強(qiáng)為 30-40 μ mol. m_2. s-1)。7天后挑選轉(zhuǎn)化體，表現(xiàn)為真葉健康呈深綠色，根伸長(zhǎng)至培養(yǎng)基中。將轉(zhuǎn)化體轉(zhuǎn)至正常的MS培養(yǎng)基中，10天后轉(zhuǎn)入土壤。收獲T2代種子，備用觀察，并做生理生化鑒定。(5)轉(zhuǎn)基因植株耐鹽性的鑒定材料處理當(dāng)轉(zhuǎn)基因再生植株高8 10cm、根長(zhǎng)4 5cm以上時(shí)，移栽到直徑為 12cm花盆內(nèi)，于溫室中培養(yǎng)。每天每盆加50mLHOagland營(yíng)養(yǎng)液(pH值為6. 5)，培養(yǎng)30d后， 分別用濃度為100mmol/L、200mmol/L、M0mmol/L和300mmol/L的NaCl溶液脅迫處理，在處理后Od和4d取樣備用。葉片相對(duì)含水量先測(cè)T2代轉(zhuǎn)基因植株葉片鮮重Wf，再將葉片浸入蒸餾水中數(shù)小時(shí)，使葉片吸水成飽和狀態(tài)。取出用吸水紙吸取表面的水分，立即放入已知重量的稱(chēng)瓶中稱(chēng)重，再放入蒸餾水中一段時(shí)間后取出吸干外面水分，再稱(chēng)重，直至重量不再增加為止。此時(shí)即為葉片吸水飽和時(shí)的重量Wt，再將樣品烘干，求得組織干重W，從而計(jì)算葉片相對(duì)含水量(RWC)。相對(duì)含水量(RWC)= (fff-ffd)/(Wt) X 100%T2代轉(zhuǎn)基因植株L2和L8分別比非轉(zhuǎn)基因植株的相對(duì)含水量高10. 0% (P < 0. 05)和8. 5%，T2代轉(zhuǎn)基因植株L1、L5和L6分別比非轉(zhuǎn)基因植株高23. 7% (P < 0. 05) ,22. 5% 和21. 5%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，外源MsLEA3-l基因的轉(zhuǎn)入可能阻止了轉(zhuǎn)基因植株葉片水分損失，提高了植物的保水能力。夕卜滲率取不同處理植株葉片，流水沖洗后再用蒸餾水沖洗3次，吸干；剪成約Icm2的小葉片(或用直徑為Icm的打孔器鉆取小圓片)，注意除掉大葉脈。然后用電子天平稱(chēng)取3份， 每份1. 0g，放入小燒杯中，準(zhǔn)確加入20mL重蒸餾水，振蕩30s，用真空抽氣泵抽氣5次，使細(xì)胞中的空氣被抽出，使葉片全部浸入重蒸餾水中，在室溫下靜置池，然后用雷磁DDSJ2308A 型電導(dǎo)儀測(cè)定溶液的電導(dǎo)率R，再將其置于沸水浴中煮沸15min，冷卻后測(cè)定其電導(dǎo)率R。。外滲率(％ )=處理電導(dǎo)率R/煮沸電導(dǎo)率RtlX 100實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，240mmol NaCl脅迫下，T2代轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)基因植株的差異達(dá)到顯著水平，T2代轉(zhuǎn)基因植株的電導(dǎo)率明顯低于非轉(zhuǎn)基因植株。丙二醛(MDA)含量采用巴比妥酸(TBA)顯色法，剪取各不同處理的植株葉片中部0. 5g，放入研缽中， 加入5%三氯乙酸(TCA) 2. OmL，少量石英砂研磨，研磨液倒入離心管中。另取3. OmL的TCA 用來(lái)清洗研缽，清洗液也倒入離心管中，在3000r/min的離心機(jī)中離心lOmin。分別取上清液2mL各3份，各放入IOmL管中，每管中加入2mL 0. 67%硫代巴比妥酸(TBA)，混合后在 100°C水浴中煮沸30min。反應(yīng)溶液冷卻后在離心機(jī)中以3000r/min離心lOmin，最后分別在450，532和600nm處測(cè)定上清液的吸光度。按公式C = 6. 45X (A532-A600) -0. 56A450， 計(jì)算MDA含量并進(jìn)行換算。在鹽脅迫下，各株系的MDA含量都增加了，但是T2代轉(zhuǎn)基因植株的增加量明顯低于對(duì)照。說(shuō)明，外源MsLEA3-l基因起到保護(hù)抗氧化系統(tǒng)的作用，提高了轉(zhuǎn)基因煙草的抗氧化能力。脯氨酸含量根據(jù)Bates等人的方法，稱(chēng)取不同處理的植物葉片各0. 5g，分別置大試管中，然后向各管分別加入5ml 3%的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中提取IOmin (提取過(guò)程中要經(jīng)常搖動(dòng))，冷卻后過(guò)濾于干凈的試管中，濾液即為脯氨酸的提取液。吸取2ml提取液置于帶塞試管中，加入2ml冰醋酸及aiil 2. 5%酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱30min，溶液即呈紅色。冷卻后加入細(xì)1甲苯，搖蕩30秒鐘，靜置片刻，取上層液至IOml離心管中，在3000r/ min離心5min。用吸管輕輕吸取上層脯氨酸紅色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液為空白對(duì)照，在520mm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(A)值。在鹽脅迫下，脯氨酸在T2代轉(zhuǎn)基因植株中的積累極顯著高于對(duì)照。T2代轉(zhuǎn)基因植株L1、L2和L7中的脯氨酸含量比對(duì)照高出4倍，而T2代轉(zhuǎn)基因植株L3、L4、L5、L6和L8比對(duì)照高5倍。綜上所述，外源MsLEA3-l基因可以提高轉(zhuǎn)基因煙草的抗鹽性。以上的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白，是1)具有序列表中序列2所示氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)；或2)是將序列2所示氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與序列2所示氨基酸殘基序列相同活性的由序列2所示蛋白質(zhì)衍生的蛋白質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)，其特征在于所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的氨基酸序列如序列表中的序列2所示。
3.紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因，是下列DNA分子之一1)其核苷酸序列為序列表中的序列1自5’端第157到第1465位所示；2)編碼序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的DNA分子；3)5’端非編碼區(qū)為序列表中序列3，從5’端第397到第805位所示；4)3’ RACE產(chǎn)物序列為序列表中序列4，從5’端第419位到第17 位所示；5)5'RACE產(chǎn)物序列為序列表中序列5，從5’端第1位到第434位所示；6)與序列表中序列1所示的DNA分子具有90%以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的 DNA分子。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基因，其特征在于所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因如序列表中的序列1所示。
5.含有權(quán)利要求3或4所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因的表達(dá)載體。
6.含有權(quán)利要求3或4所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因的細(xì)胞系。
7.擴(kuò)增權(quán)利要求3或4所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因中任一片段的引物。
8.權(quán)利要求3或4所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因在苜蓿耐鹽分子機(jī)制研究中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求3或4所述紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白的編碼基因在植物耐鹽性狀改良中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白，是具有序列表中序列2所示氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)，或者是將序列2所示的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與序列2的所示氨基酸殘基序列相同活性的由序列2所示蛋白質(zhì)衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的紫花苜蓿晚期胚胎富集蛋白及其編碼基因?qū)⒃谲俎Ｄ望}分子機(jī)制研究、豆科植物耐鹽性狀改良中發(fā)揮重要作用。
文檔編號(hào)C12N15/29GK102477087SQ20101055756
公開(kāi)日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年11月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月24日
發(fā)明者孫彥, 康俊梅, 張鐵軍, 楊青川, 白永琴 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所