專利名稱：調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及菌群的分離富集方法，特別涉及一種調(diào)味品中大腸菌群分離富集方 法。
背景技術(shù)：
在食品行業(yè)，大腸菌群的含量是一項(xiàng)重要的衛(wèi)生指標(biāo)。對(duì)于蠔油、黃豆醬等粘稠狀 調(diào)味品，由于蠔油、黃豆醬等調(diào)味品成分復(fù)雜，存在干擾菌體生理狀態(tài)、影響檢測(cè)結(jié)果的物 質(zhì)，因此，在檢測(cè)前需要先進(jìn)行菌體分離富集，以去除干擾物質(zhì)。目前，在對(duì)調(diào)味品的大腸菌群進(jìn)行檢測(cè)前，對(duì)大腸菌群的分離方法包括如下幾種 一是在營(yíng)養(yǎng)瓊脂等培養(yǎng)材料上對(duì)菌體12小時(shí)培養(yǎng)，獲得可見單菌落，然后分離菌體，該種 方法的缺點(diǎn)是時(shí)間長(zhǎng)，有些不可培養(yǎng)菌體難于獲得；二是采用免疫學(xué)方法分析菌體，該方法 受到食品物料性質(zhì)等因素影響，對(duì)于食品中的痕量微生物難于分離，并且由于免疫學(xué)方法 本身的不足，不能分離所有菌體；其他方法如簡(jiǎn)單的膜過濾方法易于受到食品中小顆粒物 質(zhì)的影響使分離比較困難；離心沉淀方法易于受到食品中膠體類物質(zhì)的干擾，難于分離。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，分離速度快、分離 效果好。為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是，一種調(diào)味品中大腸菌群分離富集方 法，包括如下步驟1)取調(diào)味品樣品；2)將樣品以無菌生理鹽水稀釋5 40倍，得到稀釋溶液，加入助濾劑；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過28 32 μ m的一級(jí)濾膜；4)取濾后液過0. 2 0. 45 μ m的二級(jí)濾膜；5)用無菌生理鹽水多次洗滌二級(jí)濾膜，大腸菌體截留在二級(jí)濾膜上。在此技術(shù)方 案中，加入助濾劑，能夠促進(jìn)過濾、去除色素；通過一級(jí)過濾，去除大顆粒渣粒，通過二級(jí)過 濾，去除干擾物去除小分子干擾物質(zhì)，達(dá)到菌體分離富集。其中，步驟3)中，一級(jí)濾膜的材質(zhì)為聚丙烯、聚氯乙烯、纖維素酯類、聚碳酸酯類、 聚四氟乙烯中的任一種。其中，步驟4)中，二級(jí)濾膜的材質(zhì)為聚丙烯、聚氯乙烯、纖維素酯類、聚碳酸酯類、 聚四氟乙烯中的任一種。其中，步驟5)中，洗滌次數(shù)為2 3次。其中，步驟2)中，所述助濾劑為吐溫-60或吐溫-80，所述助濾劑占稀釋溶液的重 量百分比為千分之0. 5 千分之2。其中，步驟2)中，將樣品利用無菌生理鹽水稀釋15 20倍。其中，步驟3)中，所述一級(jí)濾膜的孔徑為30 μ m。
其中，步驟4)中，所述二級(jí)濾膜的孔徑為0. 3 0. 4 μ m。其中，步驟5)中，所述無菌生理鹽水的用量為20 50ml。其中，所述調(diào)味品為蠔油或豆醬。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，采用分級(jí)過濾，逐級(jí) 去除干擾物，同時(shí)添加助濾劑，對(duì)菌體友好，能夠快速分離菌體并且不會(huì)影響大腸菌群的活 性，保證蠔油、黃豆醬等調(diào)味品中大腸菌群的高效快速分離。


圖1是本發(fā)明調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法的流程圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的基本構(gòu)思是，將蠔油、黃豆醬等調(diào)味品稀釋并經(jīng)多級(jí)過濾，同時(shí)添加助濾 齊U，使得大腸菌群快速富集、分離。下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步描述。參見圖1，圖1是本發(fā)明調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法的流程圖。本發(fā)明的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法包括如下步驟Si、取調(diào)味品樣品；S2、將樣品以無菌生理鹽水稀釋5 40倍，得到稀釋溶液，加入助濾劑；S3、將稀釋溶液以真空過濾法濾過28 32 μ m的一級(jí)濾膜；S4、取濾后液過0. 2 0. 45 μ m的二級(jí)濾膜；S5、用無菌生理鹽水多次洗滌二級(jí)濾膜，大腸菌體截留在二級(jí)濾膜上。下面，以6個(gè)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法進(jìn)行說明。實(shí)施例一1)取蠔油為樣品；2)將蠔油樣品加無菌生理鹽水稀釋5倍，得到稀釋溶液，在稀釋溶液中添加吐 溫-60，添加濃度為稀釋溶液的千分之1 ；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過30 μ m的一級(jí)濾膜，該一級(jí)濾膜為聚丙烯濾膜；4)取濾后液過0. 2 μ m的二級(jí)濾膜，該二級(jí)濾膜為聚氯乙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級(jí)濾膜兩次，大腸菌體截留在二級(jí)濾膜上。以上分離過程所需時(shí)間20分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中干擾物較 少，因此，本實(shí)施例的分離速度快、分離精度高。實(shí)施例二1)取黃豆醬為樣品；2)將黃豆醬樣品加無菌生理鹽水稀釋10倍，得到稀釋溶液，在稀釋溶液中添加吐 溫-80，添加后的濃度為稀釋溶液的千分之2 ；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過32 μ m的一級(jí)濾膜，該一級(jí)濾膜為聚氯乙烯濾 膜；4)取濾后液過0. 3 μ m的二級(jí)濾膜，該二級(jí)濾膜為聚丙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級(jí)濾膜三次，大腸菌體截留在二級(jí)濾膜上。以上分離過程所需時(shí)間15分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中干擾物較少，因此，本實(shí)施例的分離速度快、分離精度高。實(shí)施例三1)取黃豆醬為樣品；
2)將黃豆醬樣品加無菌生理鹽水稀釋20倍，得到稀釋溶液；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過31 μ m的一級(jí)濾膜，該一級(jí)濾膜為聚氯乙烯濾 膜，在稀釋溶液中添加吐溫-60，添加后的濃度為稀釋溶液的千分之0. 5 ；4)取濾后液過0.4μπι的二級(jí)濾膜，該二級(jí)濾膜為聚四氟乙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級(jí)濾膜三次，大腸菌體截留在二級(jí)濾膜上。以上分離過程所需時(shí)間14分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中干擾物較 少，因此，本實(shí)施例的分離速度快、分離精度高。實(shí)施例四1)取蠔油為樣品；2)將蠔油樣品加無菌生理鹽水稀釋30倍，得到稀釋溶液，在稀釋溶液中添加吐 溫-60，添加后的濃度為稀釋溶液的千分之1 ；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過29 μ m的一級(jí)濾膜，該一級(jí)濾膜為聚四氟乙烯濾 膜；4)取濾后液過0. 45 μ m的二級(jí)濾膜，該二級(jí)濾膜為聚四氟乙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級(jí)濾膜三次，大腸菌體截留在二級(jí)濾膜上。以上分離過程所需時(shí)間10分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中干擾物較 少，因此，本實(shí)施例的分離速度快、分離精度高。實(shí)施例五1)取蠔油為樣品；2)將蠔油樣品加無菌生理鹽水稀釋40倍，得到稀釋溶液，在稀釋溶液中添加吐 溫-80，添加后的濃度為稀釋溶液的千分之1. 5 ；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過30 μ m的一級(jí)濾膜，該一級(jí)濾膜為聚四氟乙烯濾 膜；4)取濾后液過0.4μπι的二級(jí)濾膜，該二級(jí)濾膜為聚四氟乙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級(jí)濾膜二次，大腸菌體截留在二級(jí)濾膜上。以上分離過程所需時(shí)間為20分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中干擾物 較少，因此，本實(shí)施例的分離速度快、分離精度高。實(shí)施例六1)取黃豆醬為樣品；2)將蠔油樣品加無菌生理鹽水稀釋35倍，得到稀釋溶液在稀釋溶液中添加吐 溫-60，添加后的濃度為稀釋溶液的千分之2 ；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過28 μ m的一級(jí)濾膜，該一級(jí)濾膜為聚四氟乙烯濾 膜；4)取濾后液過0. 35 μ m的二級(jí)濾膜，該二級(jí)濾膜為聚四氟乙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級(jí)濾膜三次，大腸菌體截留在二級(jí)濾膜上。以上分離過程所需時(shí)間18分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中干擾物較少，因此，本實(shí)施例的分離速度快、分離精度高。 以上僅 是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出的是，上述優(yōu)選實(shí)施方式不應(yīng)視為對(duì) 本發(fā)明的限制，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)當(dāng)以權(quán)利要求所限定的范圍為準(zhǔn)。對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的 普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改 進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
一種調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，其特征在于，包括如下步驟1)取調(diào)味品樣品；2)將樣品以無菌生理鹽水稀釋5～40倍，得到稀釋溶液，加入助濾劑；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過28～32μm的一級(jí)濾膜；4)取濾后液過0.2～0.45μm的二級(jí)濾膜；5)用無菌生理鹽水多次洗滌二級(jí)濾膜，大腸菌體截留在二級(jí)濾膜上。
2.如權(quán)利要求1的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，其特征在于，步驟3)中，一級(jí)濾膜 的材質(zhì)為聚丙烯、聚氯乙烯、纖維素酯類、聚碳酸酯類、聚四氟乙烯中的任一種。
3.如權(quán)利要求1的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，其特征在于，步驟4)中，二級(jí)濾膜 的材質(zhì)為聚丙烯、聚氯乙烯、纖維素酯類、聚碳酸酯類、聚四氟乙烯中的任一種。
4.如權(quán)利要求1的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，其特征在于，步驟5)中，洗滌次數(shù) 為2 3次。
5.如權(quán)利要求1的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，其特征在于，步驟2)中，所述助濾 劑為吐溫-60或吐溫-80，所述助濾劑占稀釋溶液的重量百分比為千分之0. 5 千分之2。
6.如權(quán)利要求1的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，其特征在于，步驟2)中，將樣品利 用無菌生理鹽水稀釋15 20倍。
7.如權(quán)利要求1的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，其特征在于，步驟3)中，所述一級(jí) 濾膜的孔徑為30 μ m。
8.如權(quán)利要求1的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，其特征在于，步驟4)中，所述二級(jí) 濾膜的孔徑為0. 3 0.4 μ m。
9.如權(quán)利要求1的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，其特征在于，步驟5)中，所述無菌 生理鹽水的用量為20 50ml。
10.如權(quán)利要求1的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，其特征在于，所述調(diào)味品為蠔油 或豆醬。
全文摘要
本發(fā)明公開一種調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，包括如下步驟1)取調(diào)味品樣品；2)將樣品以無菌生理鹽水稀釋5～40倍，得到稀釋溶液，加入助濾劑；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過28～32μm的一級(jí)濾膜；4)取濾后液過0.2～0.45μm的二級(jí)濾膜；5)用無菌生理鹽水多次洗滌二級(jí)濾膜，大腸菌體截留在二級(jí)濾膜上。本發(fā)明的調(diào)味品中大腸菌群分離富集方法，采用分級(jí)過濾，同時(shí)添加助濾劑，對(duì)菌體友好，能夠快速分離菌體并且不會(huì)影響大腸菌群的活性，保證蠔油、黃豆醬等調(diào)味品中大腸菌群的高效快速分離。
文檔編號(hào)C12R1/19GK101864384SQ20101017327
公開日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2010年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月11日
發(fā)明者嚴(yán)守雷, 吳俊 , 潘思軼, 繆素娜, 鄧少雅, 黃文彪 申請(qǐng)人:佛山市海天調(diào)味食品有限公司;佛山市海天(高明)調(diào)味食品有限公司