專利名稱：用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物顆粒的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，特別是一種將電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法應(yīng)用
于藥效學(xué)研究的方法。
背景技術(shù)：
藥效學(xué)主要研究藥物的作用及作用機(jī)理、藥物的不良反應(yīng)和影響藥物作用的因素
等。其研究范圍包括研究藥物的作用和藥理效應(yīng)、藥物作用的兩重性(治療作用和不良反
應(yīng))、藥物的量效關(guān)系(劑量與量反應(yīng)/質(zhì)反應(yīng)的關(guān)系)以及對(duì)藥物安全性的評(píng)價(jià)。藥效學(xué)
研究的方法很多，隨著藥物處置對(duì)象和藥物的不同而不同。下面以抗腫瘤藥物的藥效學(xué)分
析為例，說(shuō)明本專利所敘述的測(cè)定系統(tǒng)在藥物藥效學(xué)研究和藥物篩選中的應(yīng)用。 惡性腫瘤是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病，多年來(lái)人類一直在不斷地研究和開發(fā)
新的藥物以有效地抑制惡性腫瘤的生長(zhǎng)，使得抗腫瘤藥物的篩選成為一個(gè)重要的研究領(lǐng)
域。檢測(cè)抗腫瘤藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)代謝的影響從而對(duì)藥物的敏感性做出預(yù)測(cè)是評(píng)估化療
藥物藥效的一條重要途徑。 目前常用的抗腫瘤藥物體外篩選方法如MTT、SRB、CCK-8、結(jié)晶紫、胎盤藍(lán)等介入性 染色實(shí)驗(yàn)方法存在毒性、操作繁瑣和需要大樣本量的生物樣品等問(wèn)題。此外，一旦對(duì)一批 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞樣本采用了 MTT或類似的介入性方法加以作用，則會(huì)在檢測(cè)細(xì)胞增殖程度時(shí)對(duì) 細(xì)胞造成不可逆的破壞性影響，即細(xì)胞在被染色后生理狀態(tài)及理化性質(zhì)已徹底改變，以致 無(wú)法在以后的過(guò)程中繼續(xù)使用這批樣本考察藥物的作用，不可用于進(jìn)一步的分析及研究， 而必須要采用新的樣本。這樣，由于生物樣本固有的多樣性，在藥物作用中采用不同的樣本 時(shí)，在統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)中用于比較的方差就加入了樣本批間的差異方差，使得檢驗(yàn)差異的功效降 低。 電旋轉(zhuǎn)是一種非破壞性、可用于單細(xì)胞測(cè)量的新型生物物理學(xué)和電生物學(xué)測(cè)量技
術(shù)，是檢測(cè)細(xì)胞生理活性的一種很靈敏的方法，將其用于對(duì)細(xì)胞和其他生物顆粒的電動(dòng)力
學(xué)表征和選擇性的操控已經(jīng)成為了一個(gè)活躍的研究領(lǐng)域。使用這種技術(shù)操作簡(jiǎn)便，應(yīng)用靈
活，不僅能夠克服MTT法等以染色為基礎(chǔ)的相關(guān)測(cè)量方法中存在的缺點(diǎn)，還由于其非介入
性的特點(diǎn)從而可用同一批實(shí)驗(yàn)用樣本對(duì)藥物作用的整個(gè)過(guò)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)，適于研究種類繁多
的各類生物顆粒類型，已成為目前生物微粒操控領(lǐng)域的一項(xiàng)重要技術(shù)。已采用電旋轉(zhuǎn)技術(shù)
觀察過(guò)包括病毒、原核細(xì)胞、真核細(xì)胞及部分非生物體在內(nèi)的不同顆粒類型。 目前，對(duì)于細(xì)胞在射頻下介電性質(zhì)的研究日趨廣泛，并已產(chǎn)生很多新的實(shí)際應(yīng)用，
包括生物量的在線測(cè)定以及新的對(duì)單個(gè)細(xì)胞的電動(dòng)力學(xué)分離、操控和表征用的技術(shù)。盡管
國(guó)內(nèi)外的研究者在運(yùn)用電旋轉(zhuǎn)技術(shù)探索生物顆粒的介電特性方面已經(jīng)取得了一定的成果，
但尚沒(méi)有報(bào)道將電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法應(yīng)用于藥效學(xué)研究。采用本專利所敘述的測(cè)定系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行
藥物的藥效學(xué)研究，可以針對(duì)同一批實(shí)驗(yàn)對(duì)象檢測(cè)其在藥物作用下電旋轉(zhuǎn)譜的變化，得到 整個(gè)藥物作用過(guò)程中的藥效作用曲線，從而使藥效學(xué)研究的效率得到了提高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于將電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法應(yīng)用于藥效學(xué)研究中，能夠檢測(cè)生物顆粒在
受到藥物作用后電旋轉(zhuǎn)譜圖上的變化，從而對(duì)藥物的敏感性做出預(yù)測(cè)，以解決上述背景技
術(shù)中存在的檢測(cè)具有毒性和操作繁瑣等技術(shù)問(wèn)題。 —種用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，包括如下步驟 (1)向電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池內(nèi)充滿已知電導(dǎo)率的液體介質(zhì)，并保持灌流； (2)將藥物作用前后的待測(cè)生物樣品顆粒加入到電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池中； (3)通過(guò)施加均勻的旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)使樣品顆粒發(fā)生電旋轉(zhuǎn)行為，觀察位于電旋轉(zhuǎn)測(cè)量
池中心區(qū)域的單個(gè)樣品顆粒； (4)獲得有關(guān)樣品顆粒電旋轉(zhuǎn)的信息，并制作電旋轉(zhuǎn)譜圖。
其中，步驟(1)中的灌流速度設(shè)定為0. 002mL/min至4mL/min。
其中，所述灌流速度為0. 16mL/min。 其中，步驟(3)中施加均勻的旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)為在電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池的四周均勻分布的多個(gè) 微電極上施加均勻的正弦電壓信號(hào)。 其中，該微電極為四個(gè)，該正弦電壓信號(hào)依次為Ul = U。cos("t) ， u2 = U0cos(wt+90° ) ， u3 = U0cos(wt+180° )禾口 u4 = U。cos (w t+270° )的正弦電壓信號(hào)。
其中，所述微電極為鉑絲電極。 其中，該中心區(qū)域?yàn)殡娦D(zhuǎn)測(cè)量池中心直徑為0. 3x的圓形區(qū)域，其中x為各微電 極尖端之間的距離。 其中，步驟(3)中僅對(duì)相互間分開至少三個(gè)直徑距離的樣品顆粒作電旋轉(zhuǎn)觀察。
其中，該生物樣品顆粒為病毒、原核細(xì)胞或真核細(xì)胞。 本發(fā)明利用電旋轉(zhuǎn)分析方法來(lái)進(jìn)行藥效學(xué)研究，其操作簡(jiǎn)便，不需要染色等步驟， 也沒(méi)有應(yīng)用到毒性有機(jī)試劑?？捎糜趧?dòng)態(tài)跟蹤監(jiān)測(cè)細(xì)胞不同生理狀態(tài)，用于藥物篩選、細(xì)胞 周期與細(xì)胞凋亡和細(xì)胞生理狀態(tài)監(jiān)測(cè)等眾多研究領(lǐng)域。 本發(fā)明提供的一種用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，可以給出關(guān)于生物顆粒群 體中單個(gè)個(gè)體的信息，且這種微型化裝置所需的樣品體積比常規(guī)監(jiān)測(cè)方法中所需的少得
多，即不需大量生物顆粒作為研究對(duì)象，僅使用非常少量的樣品和試劑及很少的檢測(cè)時(shí)間
便可完成整個(gè)檢測(cè)過(guò)程，使得它成為研究少量生物體的理想工具，可用來(lái)進(jìn)行快速和低耗
的生物診斷。其本身可以用來(lái)作為一種芯片上實(shí)驗(yàn)室的傳感和分析組件，也可以與如同介
電泳和行波介電泳那樣的其他電動(dòng)力學(xué)技術(shù)結(jié)合，用來(lái)對(duì)生物顆粒進(jìn)行快速分析。 電旋轉(zhuǎn)技術(shù)另一優(yōu)于其他常規(guī)技術(shù)的特點(diǎn)是出于其非介入性的特點(diǎn)，使其不僅能
夠在分析過(guò)程中保持生物顆粒完整的、與實(shí)驗(yàn)前狀態(tài)一樣的狀況和活性，使得該生物顆粒
樣品可用來(lái)進(jìn)行進(jìn)一步的整體或破壞性分析；并且采用這種方法能夠用同一批生物顆粒完
成整個(gè)藥效學(xué)研究的過(guò)程，增加藥效統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)的靈敏度，從而更有利于獲取藥效研究的信
息。此外，它還是一種通用的分析技術(shù)，可以用來(lái)觀察許多不同類型的有機(jī)體。并且由于使
用了灌流裝置，還可實(shí)時(shí)地檢測(cè)和研究細(xì)胞等生物顆粒在藥物作用下的變化情況，即在藥
效學(xué)檢驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)給藥，用作一種新的藥物篩選方法具有很大的優(yōu)勢(shì)和潛在用途。


圖la為本發(fā)明提供的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法所用的檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)俯 視圖； 圖lb為本發(fā)明用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法的檢測(cè)系統(tǒng)立體結(jié)構(gòu)示意圖； 圖2為處于不同電導(dǎo)率的甘氨酸/PBS介質(zhì)中的HeLa細(xì)胞的電旋轉(zhuǎn)譜圖； 圖3為應(yīng)用電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法得到的順鉑作用不同時(shí)間后的HeLa細(xì)胞的電旋轉(zhuǎn)譜
圖(在電導(dǎo)率為600iiS/cm的甘氨酸/PBS介質(zhì)中，順鉑濃度為15iig/mL); 圖4為應(yīng)用電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法得到的不同濃度順鉑作用后的HeLa細(xì)胞的電旋轉(zhuǎn)譜
圖(在電導(dǎo)率為600iiS/cm的甘氨酸/PBS介質(zhì)中，順鉑作用時(shí)間為48h); 圖5為用MTT法測(cè)得的不同濃度順鉑在不同時(shí)間對(duì)HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制曲線。 附圖標(biāo)記說(shuō)明 1-電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池；2_微電極；3_基板；4_圍堰；5_進(jìn)水管；6_出水管。
具體實(shí)施例方式
為了使本發(fā)明的特點(diǎn)能夠更好地被理解，以下將列舉較佳實(shí)施例并結(jié)合附圖進(jìn)行 詳細(xì)說(shuō)明。 本發(fā)明的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，其原理為 —個(gè)生物顆粒在受到外電場(chǎng)的作用時(shí)會(huì)發(fā)生電極化，可極化性用于衡量外界電場(chǎng) 扭曲一個(gè)分子中電荷分布的難易程度。活細(xì)胞的極化率與它們的組成、形態(tài)和顯型(有機(jī) 體上可觀察到的物理或生化特征，由遺傳組成或環(huán)境影響決定)有很大關(guān)系，與施加電場(chǎng) 的頻率也有很強(qiáng)的關(guān)系。電旋轉(zhuǎn)技術(shù)是交流電動(dòng)力學(xué)技術(shù)中的一部分，根據(jù)電旋轉(zhuǎn)理論，當(dāng) 一個(gè)生物顆粒懸浮于一定量的流體中，借助一組施加了交變電場(chǎng)的微電極受到均勻的旋轉(zhuǎn) 電場(chǎng)作用時(shí)，會(huì)獲得誘導(dǎo)的電偶極矩。這個(gè)偶極矩和電場(chǎng)相互作用，能夠產(chǎn)生力矩，使這個(gè) 生物顆粒發(fā)生旋轉(zhuǎn)。旋轉(zhuǎn)的速率和方向是生物顆粒以及它所處的懸浮介質(zhì)的介電性質(zhì)(電 導(dǎo)率和介電常數(shù))的敏感函數(shù)。通過(guò)測(cè)量電旋轉(zhuǎn)的速率與所施加旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)頻率間的關(guān)系可 以得到生物顆粒的電旋轉(zhuǎn)譜圖，借以獲知其介電特性，實(shí)現(xiàn)對(duì)生物顆粒的表征，從而洞察該 生物顆粒的活力、生理狀態(tài)以及藥物對(duì)其的藥效作用。 抗癌藥物應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞后，使得細(xì)胞各層面的介電性質(zhì)發(fā)生變化，并在電旋轉(zhuǎn) 譜上造成可觀測(cè)到的改變。具體來(lái)說(shuō)，生物顆粒的介電性質(zhì)與其物理化學(xué)性質(zhì)相關(guān)， 一個(gè)活 性顆粒的膜能夠讓離子和其他各類物質(zhì)選擇性地通過(guò)；而當(dāng)細(xì)胞趨向死亡的時(shí)候，細(xì)胞的 主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制逐漸喪失，跨膜梯度隨之消散，內(nèi)部的電荷分布和介電參數(shù)都發(fā)生了改變；細(xì) 胞會(huì)越來(lái)越多地與外面的懸浮介質(zhì)自由地交換物質(zhì)，導(dǎo)致非活性細(xì)胞內(nèi)部的電導(dǎo)率降低， 從而造成電旋轉(zhuǎn)譜圖的顯著差異。此外，活性和活性下降的細(xì)胞其介電常數(shù)之間也存在差 別。以上機(jī)制說(shuō)明了電旋轉(zhuǎn)譜圖形狀的變化確實(shí)是由于生理狀態(tài)差別所致，從而提供了一 種簡(jiǎn)單和快速的體外藥效學(xué)研究方法。 對(duì)于一個(gè)處在強(qiáng)度為E的電場(chǎng)中的球形顆粒來(lái)說(shuō)，誘導(dǎo)偶極矩(A(^))可由下式表 示 A(咖4兀sm/(s:,f:)^歸 (i) 其中R是顆粒的半徑，em是介質(zhì)的介電常數(shù)，f( ep*， e m*)是Clausius-Mossotti因數(shù)
<formula>formula see original document page 6</formula> (2) 參數(shù)￡ *p和￡ *m分別代表顆粒和介質(zhì)的復(fù)介電常數(shù)，形為 * = f, _ 乂O"i /ffl (3) 其中下標(biāo)i分別代表顆粒(p)、介質(zhì)(m) ， o為電導(dǎo)率，j = (_l)1/2。 所觀察到的顆粒的電旋轉(zhuǎn)是誘導(dǎo)偶極矩與旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)間相互作用的結(jié)果。依賴于電
場(chǎng)頻率的扭矩(r 與誘導(dǎo)偶極矩(見式1)之間有如下關(guān)系 ro) = ^o)￡ (4) 觀察到的電旋轉(zhuǎn)由Clausius-Mossotti因數(shù)的虛部決定，它與懸浮介質(zhì)和顆粒的 相對(duì)電導(dǎo)率和介電常數(shù)都有關(guān)，還與施加的電場(chǎng)強(qiáng)度及其頻率有關(guān)。當(dāng)Im(f ( e *p， e *J) > 0時(shí)(見式2及5)，感生偶極子滯后施加的電場(chǎng)不到半個(gè)周期，于是就有反場(chǎng)的轉(zhuǎn)動(dòng)扭矩作 用到顆粒上。相反，當(dāng)Im(f(^p， e*J) <0時(shí)，感生偶極子滯后施加的電場(chǎng)超過(guò)半個(gè)周期， 于是就有順場(chǎng)的扭矩作用到顆粒上。 觀察到的旋轉(zhuǎn)速度(R("))的本質(zhì)是作用到顆粒上的扭矩和在一個(gè)特定介質(zhì)中 的粘滯力平衡的結(jié)果，可由下式加以定義,) = -^^Im(/( )) (5) 2〃其中n是介質(zhì)的動(dòng)態(tài)粘滯系數(shù)。因?yàn)殡妶?chǎng)是以相移電壓的形式施加的，所以
R(")也可表示為i ( ) = -^^Im(/(<,《)) (6) 其中k是一個(gè)與所施加RMS電壓(V)、電極的幾何形狀和顆粒位置等有關(guān)的比例常 數(shù)。 具體的，實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法的檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)如圖 la和圖lb所示，包括微電極電路板的基板3，該基板3的材質(zhì)可以為聚乙烯、聚丙烯、聚氯 乙烯、聚苯乙烯、丙烯腈_ 丁二烯_苯乙烯共聚合物、聚酰胺、聚砜、聚甲醛、聚碳酸酯、改性 聚苯醚、甲基戊烯聚合物、乙烯醇共聚物、聚氨基雙馬來(lái)酰胺、聚三嗪、交聯(lián)聚酰亞胺、聚醚 砜、聚苯硫醚、聚酰亞胺、聚醚醚酮、氟塑料和有機(jī)硅材料其中之一。 該基板3的中央設(shè)有圍堰4以防止液體流出。圍堰4中央為電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池1，電旋 轉(zhuǎn)測(cè)量池1的直徑范圍為500 ii m至2mm，待測(cè)微粒位于該電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池1內(nèi)。電旋轉(zhuǎn)測(cè)量 池1的四周均勻分布有多個(gè)微電極2，在本實(shí)施例中微電極2為四個(gè)，直徑100iim，該微電 極2優(yōu)選的為鉑絲電極，各微電極2之間的間距為100 ii m至lmm。 在圍堰4上設(shè)有灌流裝置，該灌流裝置包括灌流用毛細(xì)管進(jìn)水管5和出水管6，及 與進(jìn)水管5和出水管6相連接的蠕動(dòng)泵，毛細(xì)管進(jìn)出水管的內(nèi)徑為250微米。通過(guò)該灌流 裝置使介質(zhì)溶液流通于電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池l，達(dá)到冷卻電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池1內(nèi)介質(zhì)并保持其成份穩(wěn) 定的目的，同時(shí)避免由于水份蒸發(fā)造成的介質(zhì)電導(dǎo)率的增加。 已經(jīng)知道電解質(zhì)溶液在電場(chǎng)作用下發(fā)熱不僅會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生影響甚至使細(xì)胞因過(guò)
6熱而致死，還會(huì)改變介質(zhì)的濃度及粘度使得測(cè)得的結(jié)果中帶有非藥物作用的效應(yīng)。本發(fā)明 中通過(guò)毛細(xì)管進(jìn)、出水管使介質(zhì)溶液流通于電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池l，達(dá)到冷卻電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池1內(nèi)液 體的目的，同時(shí)避免由于水份蒸發(fā)造成的介質(zhì)電導(dǎo)率的增加。此外灌流用毛細(xì)管內(nèi)的溶液 成份還能夠在電旋轉(zhuǎn)測(cè)定過(guò)程中隨時(shí)變更，在藥效學(xué)檢驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)給藥。調(diào)節(jié)適宜的泵 流速以保證為生物顆粒提供新鮮液體環(huán)境，同時(shí)不影響生物顆粒的電旋轉(zhuǎn)行為。
微電極電路板的基板3上具有兩個(gè)引出端子，正弦電壓信號(hào)發(fā)生器通過(guò)導(dǎo)線連接 到所述的兩個(gè)引出端子上。正弦電壓信號(hào)發(fā)生器產(chǎn)生多路相位差均勻的正弦電壓信號(hào)，正 弦電壓信號(hào)(1 y Hz至20MHz，4mV卯至20Vpp)的頻率和振幅可控，通過(guò)基板3將多路正弦 電壓信號(hào)均勻分配到多個(gè)微電極2上，使電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池內(nèi)產(chǎn)生均勻的旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)。雙通道數(shù) 字存儲(chǔ)示波器(RIGOL DS-5022M)連接正弦電壓信號(hào)發(fā)生器，以監(jiān)測(cè)波形情況。由于生物顆 粒在電場(chǎng)中不僅經(jīng)受均勻的旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)，還可能經(jīng)受介電泳力，使得它們向電極或遠(yuǎn)離電極 的方向移動(dòng)，所以對(duì)于可靠的電旋轉(zhuǎn)測(cè)定提出的一個(gè)要求是旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)應(yīng)該是越均勻越好。
圖la和圖lb所示為本發(fā)明用于藥效學(xué)研究測(cè)試時(shí)，一個(gè)顆粒p懸浮在四個(gè)電極 相位差為9(T的正弦電壓形成的旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)E中間。取決于顆粒與懸浮介質(zhì)的介電性質(zhì)加 上電場(chǎng)的頻率，生物顆粒將以與電場(chǎng)旋轉(zhuǎn)的方向相同(共場(chǎng))或相反(反場(chǎng))的方向旋轉(zhuǎn)。 在圖la中所示的是反場(chǎng)旋轉(zhuǎn)。 應(yīng)用以上用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)方法具體如下所述，為描述方 便起見，以順鉑作用于HeLa細(xì)胞的藥效學(xué)研究為例加以說(shuō)明。本發(fā)明的檢測(cè)方法應(yīng)用于藥 效學(xué)檢測(cè)其他藥物試劑作用于其他生物樣品顆粒對(duì)象如病毒、原核細(xì)胞和真核細(xì)胞等時(shí)的 方法，與檢測(cè)順鉑作用于HeLa細(xì)胞的藥效學(xué)檢測(cè)方法相同，故不再贅述。
本實(shí)施例中應(yīng)用的模型生物顆粒是HeLa細(xì)胞(人類子宮頸癌細(xì)胞)。對(duì)照組采用 在含10%熱滅火的胎牛血清，100U/mL青霉素，100U/mL鏈霉素，3的DMEM培養(yǎng)基中常 規(guī)培養(yǎng)條件(37°C，5% (A，飽和濕度)下培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組采用的是在順鉑濃度 分別為2. 5， 5， 10， 15， 20和25 ii g/mL，各自作用12， 24， 48小時(shí)后的HeLa細(xì)胞。即待細(xì)胞進(jìn) 入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)接種于96孔培養(yǎng)板(100 y L/孔)，每孔3 X 103個(gè)細(xì)胞，恒溫培養(yǎng)4小時(shí)后 實(shí)驗(yàn)孔加入預(yù)先配制好的抗腫瘤藥物順鉑的O. 9% NaCl (25 y L/孔)溶液，令每孔順鉑的終 濃度分別為2. 5， 5， 10， 15， 20和25 y g/mL，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)至所需作用時(shí)間；對(duì)照孔則加入 等量的匿EM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
用電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法檢測(cè)時(shí)，具體包括如下步驟 步驟1 :通過(guò)灌流裝置使電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池1內(nèi)充滿一定量已知電導(dǎo)率的液體介質(zhì)，并 在實(shí)驗(yàn)中保持灌流。 通過(guò)與進(jìn)出水管相連的蠕動(dòng)泵調(diào)節(jié)進(jìn)出水管的流速。灌流用毛細(xì)管進(jìn)出水管的內(nèi) 徑為250微米，電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池1內(nèi)的溶液成份能夠在電旋轉(zhuǎn)測(cè)定過(guò)程中隨時(shí)變更，在藥效學(xué) 檢驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)給藥。蠕動(dòng)泵的流量范圍為0. 002mL/min至4mL/min，調(diào)節(jié)適宜的泵流速以 保證為生物顆粒提供新鮮液體環(huán)境，同時(shí)不影響生物顆粒的電旋轉(zhuǎn)行為。
經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，灌流速度設(shè)定為1. Orpm(O. 16mL/min)時(shí)為最優(yōu)。在此流速下可以保證 測(cè)量池內(nèi)的液體為生物顆粒提供新鮮液體環(huán)境，同時(shí)不影響生物顆粒的電旋轉(zhuǎn)行為。
本實(shí)驗(yàn)中對(duì)已知電導(dǎo)率的液體介質(zhì)的選取以甘氨酸為懸浮介質(zhì)，通過(guò)加入磷酸 鹽緩沖液(PBS)來(lái)調(diào)節(jié)電導(dǎo)率，用DDSJ-308A型電導(dǎo)率儀及雷磁DJS-1C型電導(dǎo)電極進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定頻率時(shí)選擇10kHz ， 50kHz ， 100kHz ， 200kHz ， 400kHz ， 800kHz ， 1MHz ， 2MHz ， 4MHz ， 8MHz ， 10MHz，15MHz，20MHz等一系列頻率，得到處于不同電導(dǎo)率的甘氨酸/PBS介質(zhì)中的HeLa細(xì)胞 的信息，并據(jù)此使用軟件生成電旋轉(zhuǎn)譜圖(圖2)。 如所預(yù)期，發(fā)現(xiàn)介質(zhì)的電導(dǎo)率對(duì)于電旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)是重要的參數(shù)。由圖中可以
清楚地看到外部介質(zhì)電導(dǎo)率的增加會(huì)導(dǎo)致電旋轉(zhuǎn)的特征頻率，即反場(chǎng)旋轉(zhuǎn)峰值頻率f。的
增加?？梢钥吹剑?dāng)介質(zhì)電導(dǎo)率為200iiS/cm時(shí)特征頻率為100kHz ;而當(dāng)介質(zhì)電導(dǎo)率為
1000 S/cm時(shí)特征頻率為lMHz。此外，旋轉(zhuǎn)速度也發(fā)生了明顯變化。事實(shí)上外部介質(zhì)電導(dǎo)
率的增加會(huì)減少使生物顆粒膜荷電的時(shí)間，以致電旋轉(zhuǎn)的特征頻率增加。 在本實(shí)施例中選定電導(dǎo)率為600 S/cm的甘氨酸/PBS介質(zhì)作為測(cè)定給藥前后細(xì)
胞的理想介質(zhì)，以便生物顆粒在我們所選定的頻率范圍內(nèi)具有便于測(cè)定的旋轉(zhuǎn)速率。在檢
測(cè)其他生物顆粒的實(shí)驗(yàn)中，根據(jù)檢測(cè)的生物顆粒的性質(zhì)選擇不同液體介質(zhì)及其電導(dǎo)率，電
導(dǎo)率的選擇以使所檢測(cè)的生物顆粒在所選定的頻率范圍內(nèi)具有便于測(cè)定的旋轉(zhuǎn)速率為準(zhǔn)。 步驟2 :將懸浮于相同液體介質(zhì)中的待測(cè)樣品用移液槍加入到微電極電路板上的
圓形電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池中。 在本實(shí)施例中是將約2ii L懸浮于相同介質(zhì)中的待測(cè)HeLa細(xì)胞樣品用移液槍加入 到微電極電路板上的圓形電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池中。 步驟3 :通過(guò)施加均勻的旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)使之發(fā)生電旋轉(zhuǎn)行為，觀察位于電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池 中心區(qū)域的單個(gè)樣品顆粒。 需要說(shuō)明的是，在進(jìn)行電旋轉(zhuǎn)測(cè)量時(shí)，所得到的電旋轉(zhuǎn)譜圖的形狀和幅度受到生 物顆粒在測(cè)量池中的位置以及顆粒表面上存在碎片的影響，所以僅對(duì)位置在電極的中心區(qū) 域內(nèi)的樣品顆粒進(jìn)行觀察，并測(cè)量細(xì)胞電旋轉(zhuǎn)譜。中心區(qū)域是指電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池中心直徑為 0.3x(其中x為各電極尖端之間的距離)所規(guī)定的圓圈范圍內(nèi)的區(qū)域。因此如果細(xì)胞的位 置在測(cè)量池中心三分之一的區(qū)域以外，或者在記錄的過(guò)程中移動(dòng)了它們直徑的三倍以上， 或者其表面上有碎片，就要將它們排除在分析對(duì)象外。除此之外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)附近的旋轉(zhuǎn)顆粒 所誘導(dǎo)的偶極造成的場(chǎng)的非均勻性會(huì)造成顆粒之間的介電泳力，影響待測(cè)顆粒的電旋轉(zhuǎn)響 應(yīng)。為了將這種影響降低到最小，僅對(duì)相互間分開至少三個(gè)直徑距離的樣品顆粒作電旋轉(zhuǎn) 觀察。這些小心的選擇標(biāo)準(zhǔn)都保證了數(shù)據(jù)的可靠性和穩(wěn)定性。 步驟4 :用與顯微鏡連接的攝像頭錄制視頻，然后通過(guò)細(xì)胞分析軟件對(duì)所錄制的
視頻加以分析，從而獲得有關(guān)樣品顆粒電旋轉(zhuǎn)的信息，并制作電旋轉(zhuǎn)譜圖。 在甘氨酸/PBS介質(zhì)(600iiS/cm)中采集電旋轉(zhuǎn)譜圖。通過(guò)觀察和記錄HeLa細(xì)胞
在給藥前后電旋轉(zhuǎn)角速度隨頻率的變化曲線的不同，來(lái)檢測(cè)抗癌藥物順鉑的藥效作用。對(duì)
給藥前后細(xì)胞電旋轉(zhuǎn)的觀察以及細(xì)胞旋轉(zhuǎn)角度的測(cè)量是用CFM-500型倒置熒光顯微鏡及
CF-2000XB生物細(xì)胞分析軟件做出的。 由于細(xì)胞的組成、形態(tài)和結(jié)構(gòu)上的不同，細(xì)胞的介電性質(zhì)具有固有的非均一性，使 得相同類型的不同細(xì)胞具有不同的速度。通過(guò)對(duì)每個(gè)頻率至少20個(gè)點(diǎn)的觀察記錄生物顆 粒旋轉(zhuǎn)的速度和方向，獲得電旋轉(zhuǎn)譜圖，譜圖上的每一個(gè)點(diǎn)表示對(duì)大小相似的細(xì)胞所做20 次測(cè)定的平均值。請(qǐng)參閱圖3、圖4所示，其為本發(fā)明對(duì)于給藥前后的HeLa細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)得 到的電旋轉(zhuǎn)譜圖，其中，圖中橫坐標(biāo)為電場(chǎng)頻率的對(duì)數(shù)值，縱坐標(biāo)為HeLa細(xì)胞旋轉(zhuǎn)速率。橫 坐標(biāo)以上為共場(chǎng)旋轉(zhuǎn)；橫坐標(biāo)以下為反場(chǎng)旋轉(zhuǎn)。
另在開始步驟1中的實(shí)驗(yàn)前，還可以包括步驟根據(jù)研究對(duì)象選取適宜的實(shí)驗(yàn)參數(shù)。 根據(jù)研究對(duì)象選取適宜的微電極2之間距離。對(duì)于選用來(lái)做這個(gè)研究用的微電極 設(shè)計(jì)，可以用范圍很大的微電極之間距離來(lái)對(duì)生物顆粒誘發(fā)電旋轉(zhuǎn)。各微電極2之間的間 距為100iim至lmm，優(yōu)選的采用各微電極間距為400 y m的電極，這個(gè)距離下可產(chǎn)生一個(gè)適 當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)區(qū)域和旋轉(zhuǎn)速度，且應(yīng)用較小微電極間距可以避免檢測(cè)設(shè)備局部發(fā)熱效應(yīng)對(duì)生物 顆粒膜造成的影響。微電極間距的大小可以加以改變來(lái)觀察不同類型的生物顆粒，而不必 改變電路或分析系統(tǒng)。 對(duì)正弦電壓信號(hào)發(fā)生器所施加的交流電信號(hào)選取適宜幅值，并在多個(gè)微電極上依 次施加均勻的正弦電壓信號(hào)。圖1中的四個(gè)微電極(直徑100i!m)上的激勵(lì)電壓依次為^ =U。cos(cot) ;u2 = U0cos(cot+90° ) ;u3 = U0cos(cot+180° ) ;u4 = U0cos(cot+270° )。 正弦電壓信號(hào)發(fā)生器產(chǎn)生頻率1 y Hz至20腿z，電壓4mV卯至20V卯的可控正弦電壓信號(hào)。 為了減少電熱效應(yīng)，旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)的場(chǎng)強(qiáng)應(yīng)該盡可能低，優(yōu)選的將每個(gè)頻率的峰峰電壓值維持 在12V。 在步驟4中的實(shí)驗(yàn)后，對(duì)步驟4中得到的電旋轉(zhuǎn)譜圖進(jìn)行分析
如圖3所示，其為應(yīng)用電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法得到的順鉑作用不同時(shí)間后的HeLa細(xì)胞的 電旋轉(zhuǎn)譜圖(在電導(dǎo)率為600 ii S/cm的甘氨酸/PBS介質(zhì)中，順鉑濃度為15 y g/mL)，分別為 順鉑作用12小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)后的電旋轉(zhuǎn)譜圖。觀察對(duì)給藥后不同時(shí)間的細(xì)胞記錄 下來(lái)的電旋轉(zhuǎn)譜，可以見到其中有順場(chǎng)旋轉(zhuǎn)和反場(chǎng)旋轉(zhuǎn)的部分。在抗癌藥物作用于腫瘤細(xì) 胞的過(guò)程中，細(xì)胞介電性質(zhì)的變化反映在了電旋轉(zhuǎn)譜的變化中。譜圖中最關(guān)鍵的變化是特 征頻率f。的移動(dòng)以及峰高的差別。由圖可見，隨著藥物作用時(shí)間的增加，f。向高頻方向移 動(dòng)，且同一頻率下的旋轉(zhuǎn)速度存在明顯差異。這就提示我們完全可以通過(guò)特征頻率及峰高 的顯著差別來(lái)區(qū)分生物顆粒的活性。 具體來(lái)看，如果以48h實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組作比較，可以看到對(duì)照組細(xì)胞的特征頻率 大約在400kHz ;而順鉑作用48h后細(xì)胞的特征頻率大約在lMHz，發(fā)生了明顯的向高頻方向 的移動(dòng)。另外從轉(zhuǎn)速來(lái)看，可以發(fā)現(xiàn)在10kHz-400kHz的頻率窗口實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的轉(zhuǎn)速要明顯 低于對(duì)照組轉(zhuǎn)速，可以根據(jù)細(xì)胞在這一電場(chǎng)頻率下的轉(zhuǎn)速差別對(duì)藥物的敏感性作出迅速判 斷。 另夕卜，圖中所示的HeLa細(xì)胞在10腿z附近的電旋轉(zhuǎn)譜當(dāng)中，48h實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的 細(xì)胞以相反的方向旋轉(zhuǎn)，這就提供了一個(gè)方便的單頻率活性檢測(cè)方法。
如圖4所示，其為應(yīng)用電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法得到的不同濃度順鉑作用后的HeLa細(xì)胞的 電旋轉(zhuǎn)譜圖(在電導(dǎo)率為600iiS/cm的甘氨酸/PBS介質(zhì)中，順鉑作用時(shí)間為為48h)。此 處我們選取了四個(gè)濃度來(lái)說(shuō)明變化的趨勢(shì)，具體為對(duì)照組、順鉑濃度5ii g/ml、15ii g/ml和 25ii g/ml下的電旋轉(zhuǎn)譜圖。可以看到隨著藥物濃度的增加，fc向高頻方向移動(dòng)，且同一頻 率下的旋轉(zhuǎn)速度存在明顯差異。比較順鉑濃度為5 ii g/mL和25 ii g/mL的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的電 旋轉(zhuǎn)譜圖，可見前者的特征頻率大約在800kHz，而后者的特征頻率則大約在2MHz，且特征 頻率下的轉(zhuǎn)速前者大約為后者的1. 5倍。這就提示我們可以在接近反場(chǎng)旋轉(zhuǎn)的最高峰處測(cè) 定旋轉(zhuǎn)的速度，用以區(qū)分不同活性的細(xì)胞。若比較頻率為400kHz時(shí)的旋轉(zhuǎn)速度，可發(fā)現(xiàn)對(duì) 照組細(xì)胞的轉(zhuǎn)速是25 i！ g/ml實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞轉(zhuǎn)速的3. 5倍。
MTT法是抗腫瘤藥物體外篩選中的常用方法，作為與電旋轉(zhuǎn)方法的比較，本實(shí)施例 中同時(shí)做了 MTT實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用MTT法檢測(cè)順鉑對(duì)HeLa細(xì)胞系增殖的毒性作用，觀察不同濃度 順鉬(2. 5， 5， 10， 15， 20和25 ii g/mL)作用于HeLa細(xì)胞系12， 24， 48小時(shí)后對(duì)細(xì)胞增殖的抑 制作用，對(duì)給藥前后HeLa細(xì)胞的活性加以確認(rèn)，用以表明電旋轉(zhuǎn)技術(shù)的有效性和通用性。 即令藥物分別作用12， 24， 48小時(shí)后向96孔板的每個(gè)孔中加入5mg/mL的MTT溶液25 y L， 繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后，棄去孔內(nèi)液體，加入匿S0(100 y L/孔)，置搖床上低速振蕩10min，使藍(lán) 紫色甲臜結(jié)晶物充分溶解，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀570nm(630nm校準(zhǔn))處測(cè)量各孔的光密度值， 計(jì)算藥物各濃度下的抑制率(圖5)。 如圖5所示，其為用MTT法測(cè)得的不同濃度順鉑在不同時(shí)間對(duì)HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)抑 制曲線。結(jié)果表明順鉑對(duì)HeLa細(xì)胞系增殖確有抑制作用，并呈時(shí)間和劑量依賴性。在本實(shí) 驗(yàn)條件同一藥物濃度下，藥物作用48小時(shí)對(duì)HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用最強(qiáng)。
由此可知，電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法的結(jié)論用活性染料方法MTT法檢驗(yàn)得到了支持。應(yīng)用 電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法時(shí)，我們有兩種簡(jiǎn)單的途徑來(lái)迅速地確定細(xì)胞的活性， 一個(gè)是僅通過(guò)特定 頻率下顆粒的旋轉(zhuǎn)方向；另一個(gè)是通過(guò)一定頻率窗口中旋轉(zhuǎn)速度的差異。有些藥物作用于 生物顆粒后不造成其形態(tài)上的變化，但會(huì)使其與已知的無(wú)活性或活性下降的細(xì)胞產(chǎn)生相似 的電旋轉(zhuǎn)譜圖，我們便可通過(guò)電旋轉(zhuǎn)技術(shù)檢測(cè)到這種變化。 當(dāng)一個(gè)細(xì)胞從活性到非活性變化的過(guò)程中介電性質(zhì)的變化可以很清楚地用電旋 轉(zhuǎn)方法檢測(cè)出來(lái)?？梢钥闯鲭S給藥時(shí)間和劑量的不同，電旋轉(zhuǎn)的響應(yīng)差別很大，譜圖之間的 不同被歸因于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)特性的物理變化，很清楚地表明了用這種技術(shù)來(lái)在單個(gè)細(xì)胞 中識(shí)別出了細(xì)致的生化學(xué)變化。 本發(fā)明中雖然以順鉑作用于HeLa細(xì)胞的藥效學(xué)研究為例加以說(shuō)明，但不以此為 限，本發(fā)明的檢測(cè)方法應(yīng)用于藥效學(xué)檢測(cè)其他藥物試劑作用于其他生物樣品顆粒對(duì)象如 病毒、原核細(xì)胞和真核細(xì)胞等時(shí)的方法，與檢測(cè)順鉑作用于HeLa細(xì)胞的藥效學(xué)檢測(cè)方法相 同，僅需要根據(jù)不同的檢測(cè)對(duì)象，將甘氨酸/PBS液體介質(zhì)替換為與檢測(cè)對(duì)象相匹配的液體 介質(zhì)即可，而選用何種液體介質(zhì)以匹配檢測(cè)對(duì)象為本領(lǐng)域技術(shù)人員所應(yīng)當(dāng)知道的，故此不 再贅述。 綜上所述，本發(fā)明表明了電旋轉(zhuǎn)技術(shù)可以用來(lái)測(cè)定生物顆粒在給藥過(guò)程中的活性 變化，檢測(cè)到了生物顆粒由于應(yīng)用抗腫瘤藥所造成的電旋轉(zhuǎn)響應(yīng)的變化，這一結(jié)論得到了 活性染料方法MTT法結(jié)果的證實(shí)。即通過(guò)觀察和記錄細(xì)胞在給藥前后的不同電旋轉(zhuǎn)行為， 我們檢測(cè)到了細(xì)胞在用藥前后的電旋轉(zhuǎn)譜中可明顯觀察到的，能夠歸因于藥物對(duì)細(xì)胞作用 的變化，用來(lái)表征生物微粒的介電性質(zhì)，從而對(duì)藥物的敏感性做出預(yù)測(cè)，達(dá)到了檢測(cè)抗腫瘤 藥物藥效作用的目的，具有在藥物篩選和分析中的潛在用途，可以用來(lái)發(fā)展成為新的藥效 學(xué)分析方法。 本發(fā)明利用電旋轉(zhuǎn)分析方法來(lái)進(jìn)行藥效學(xué)研究，其操作簡(jiǎn)便，不需要染色等步驟， 也沒(méi)有應(yīng)用到毒性有機(jī)試劑。可用于動(dòng)態(tài)跟蹤監(jiān)測(cè)細(xì)胞不同生理狀態(tài)，用于藥物篩選、細(xì)胞 周期與細(xì)胞凋亡和細(xì)胞生理狀態(tài)監(jiān)測(cè)等眾多研究領(lǐng)域。 本發(fā)明提供的一種用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，可以給出關(guān)于生物顆粒群 體中單個(gè)個(gè)體的信息，且這種微型化裝置所需的樣品體積比常規(guī)監(jiān)測(cè)方法中所需的少得
多，即不需大量生物顆粒作為研究對(duì)象，僅使用非常少量的樣品和試劑及很少的檢測(cè)時(shí)間
10便可完成整個(gè)檢測(cè)過(guò)程，使得它成為研究少量生物體的理想工具，可用來(lái)進(jìn)行快速和低耗
的生物診斷。其本身可以用來(lái)作為一種芯片上實(shí)驗(yàn)室的傳感和分析組件，也可以與如同介
電泳和行波介電泳那樣的其他電動(dòng)力學(xué)技術(shù)結(jié)合，用來(lái)對(duì)生物顆粒進(jìn)行快速分析。 電旋轉(zhuǎn)技術(shù)另一優(yōu)于其他常規(guī)技術(shù)的特點(diǎn)是它不僅能夠在分析過(guò)程中保持生物
顆粒完整的、與實(shí)驗(yàn)前狀態(tài)一樣的狀況和活性，使得該生物顆粒樣品可用來(lái)進(jìn)行進(jìn)一步的
整體或破壞性分析；并且采用這種方法能夠用同一批生物顆粒完成整個(gè)藥效學(xué)研究的過(guò)
程，增加藥效統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)的靈敏度，從而更有利于獲取藥效研究的信息。此外，它還是一種通
用的分析技術(shù)，可以用來(lái)觀察許多不同類型的有機(jī)體。并且由于使用了灌流裝置，還可實(shí)
時(shí)地檢測(cè)和研究細(xì)胞等生物顆粒在藥物作用下的變化情況，即在藥效學(xué)檢驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)給
藥，用作一種新的藥物篩選方法具有很大的優(yōu)勢(shì)和潛在用途。 以上對(duì)本發(fā)明的描述是說(shuō)明性的，而非限制性的，本專業(yè)技術(shù)人員理解，在權(quán)利要 求限定的精神與范圍之內(nèi)可對(duì)其進(jìn)行許多修改、變化或等效，但是它們都將落入本發(fā)明的 保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
一種用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟(1)向電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池內(nèi)充滿已知電導(dǎo)率的液體介質(zhì)，并保持灌流；(2)將藥物作用前后的待測(cè)生物樣品顆粒加入到電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池中；(3)通過(guò)施加均勻的旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)使樣品顆粒發(fā)生電旋轉(zhuǎn)行為，觀察位于電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池中心區(qū)域的單個(gè)樣品顆粒；(4)獲得有關(guān)樣品顆粒電旋轉(zhuǎn)的信息，并制作電旋轉(zhuǎn)譜圖。
2. 如權(quán)利要求l所述的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)中的 灌流速度設(shè)定為0. 002mL/min至4mL/min。
3. 如權(quán)利要求2所述的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，所述灌流速 度為0. 16mL/min。
4. 如權(quán)利要求1所述的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(3)中施 加均勻的旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)為在電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池的四周均勻分布的多個(gè)微電極上施加均勻的正弦電壓信號(hào)。
5. 如權(quán)利要求4所述的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，該微電 極為四個(gè)，該正弦電壓信號(hào)依次為^ = U。C0S("t)， u2 = U。cos("t+90。 )， u3 = U。co s("t+180° )和114 = U。cos("t+270° )的正弦電壓信號(hào)。
6. 如權(quán)利要求5所述的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，所述微電極 為鉑絲電極。
7. 如權(quán)利要求4所述的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，該中心區(qū)域 為電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池中心直徑為0. 3x的圓形區(qū)域，其中x為各微電極尖端之間的距離。
8. 如權(quán)利要求1所述的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(3)中僅 對(duì)相互間分開至少三個(gè)直徑距離的樣品顆粒作電旋轉(zhuǎn)觀察。
9. 如權(quán)利要求1所述的用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，該生物樣品 顆粒為病毒、原核細(xì)胞或真核細(xì)胞。
全文摘要
一種用于藥效學(xué)研究的電旋轉(zhuǎn)檢測(cè)方法，包括如下步驟(1)向電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池內(nèi)充滿已知電導(dǎo)率的液體介質(zhì)，并保持灌流；(2)將待測(cè)樣品加入到電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池中；(3)通過(guò)施加均勻的旋轉(zhuǎn)電場(chǎng)使待測(cè)樣品發(fā)生電旋轉(zhuǎn)行為，觀察位于電旋轉(zhuǎn)測(cè)量池中心區(qū)域的單個(gè)樣品顆粒；(4)獲得有關(guān)樣品顆粒電旋轉(zhuǎn)的信息，并制作電旋轉(zhuǎn)譜圖。本發(fā)明出于其非介入性的本質(zhì)，不僅能夠在分析過(guò)程中保持生物顆粒的完整性和活性，使它們可用來(lái)進(jìn)行進(jìn)一步的整體或破壞性分析；并且采用這種方法能夠用同一批生物顆粒完成整個(gè)藥效學(xué)研究的過(guò)程，增加藥效統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)的靈敏度，從而更有利于獲取藥效研究的信息。
文檔編號(hào)C12Q1/70GK101762440SQ200910244459
公開日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2009年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月31日
發(fā)明者唐靜成, 張會(huì)亮, 張芳, 徐秉玖, 汪旭, 耿勝燕 申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)