專利名稱：：急性毒性藻紅外測(cè)試中聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及對(duì)急性毒性藻紅外測(cè)試中聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)方法，屬生態(tài)毒理學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：兩種和兩種以上化學(xué)污染物共同作用所產(chǎn)生的綜合生物學(xué)效應(yīng)稱作聯(lián)合作用。環(huán)境中，多種污染物往往同時(shí)存在，多種與單一化學(xué)污染物對(duì)生物的聯(lián)合作用完全不同，因此，生態(tài)毒理學(xué)研究趨勢(shì)之一是加強(qiáng)對(duì)污染綜合效應(yīng)和多組分復(fù)合污染的環(huán)境效應(yīng)的研究(孔繁翔.2000.《環(huán)境生物學(xué)》[M].北京高等教育出版社:13,92-93)。但是，研究這兩種效應(yīng)需要聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)方法，以及確立毒物聯(lián)合作用類型，尚無標(biāo)準(zhǔn)方法(孔繁翔，2000《環(huán)境生物學(xué)》[M].北京高等教育出版社:13，92-93)。目前，常用的方法有毒性單位法、混合毒性指數(shù)法、相似性參數(shù)法(董玉瑛，雷炳莉,張春寶.2006.SDS與取代芳烴多元混合體系聯(lián)合毒性作用研究[J].環(huán)境學(xué),27(8):1643-1646)，過篩實(shí)驗(yàn)法、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、直接描述綜合分析法(孔繁翔，2000《環(huán)境生物學(xué)》[M].北京高等教育出版社:13，92-93)，相加指數(shù)法(修瑞琴，許永香，傅迎春.1994.水生毒理聯(lián)合效應(yīng)相加指數(shù)法[J].環(huán)境化學(xué)[J]，13(13):269-271,)，等效線圖模型法(朱心強(qiáng)，黃幸纖.1993.兩種農(nóng)藥聯(lián)合毒性評(píng)價(jià)方法的比較.毒理學(xué)雜志[1]，7(1):60-61.)。但是，這些方法均不適合藻紅外測(cè)試法中聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)，而且普遍存在數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析較繁瑣、測(cè)試周期較長等不足。因此，需要建立適合藻紅外測(cè)試法的簡便、快速的聯(lián)合作用評(píng)價(jià)方法。目前，國內(nèi)已有藻紅外測(cè)試環(huán)境重金屬急性毒性(郭蔚華，蘇海燕,張智,王斌，游先童.2008a.藻紅外輻射測(cè)試環(huán)境重金屬急性毒性[J].生態(tài)環(huán)境，17(2):520-523)、藻紅外測(cè)試農(nóng)藥殘留急性毒性(郭蔚華，王翔，張智，游先童,王斌.2008b.藻紅外輻射測(cè)試環(huán)境農(nóng)藥殘留急性毒性研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，27(5):2039-2042)、急性毒性藻紅外測(cè)試中敏感藻的確定方法(郭蔚華，丁燕燕，張智，王翔,蘇海燕.2008c.急性毒性藻紅外測(cè)試中敏感藻的確定方法[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào),3(6):577-583)的研究，但是，用藻紅外測(cè)試法進(jìn)行聯(lián)合作用的研究，國內(nèi)外尚無報(bào)道
發(fā)明內(nèi)容針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，本發(fā)明的目的在于提供一種針對(duì)兩種或兩種以上化學(xué)污染物聯(lián)合作用進(jìn)行分析的急性毒性藻紅外測(cè)試中聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)方法。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的急性毒性藻紅外測(cè)試中聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，包括如下步驟-1)培養(yǎng)敏感藻液使其對(duì)數(shù)期的葉綠素a含量達(dá)到4.0mgI/1;2)準(zhǔn)備測(cè)試藥品，將其稀釋并配制成待測(cè)藥液；3)測(cè)試時(shí)，取510mL的對(duì)數(shù)期的葉綠素含量為4.0mg'L"的敏感藻液，加入到測(cè)試容器中，同時(shí)分試驗(yàn)組和對(duì)照組；待藻液溫度穩(wěn)定時(shí)，再滴加上述待測(cè)藥液于試驗(yàn)組中，滴加與待測(cè)藥液同體積的蒸餾水于對(duì)照組中，立即用紅外測(cè)溫儀測(cè)試藻液變化溫度，計(jì)算相應(yīng)溫差；根據(jù)聯(lián)合偏差系數(shù)法分析各種待測(cè)藥品組合對(duì)實(shí)驗(yàn)藻的聯(lián)合毒性作用，并作出評(píng)價(jià)；用聯(lián)合作用系數(shù)e和總均偏差系數(shù)f構(gòu)建聯(lián)合偏差系數(shù)法；用f=0.06調(diào)整相加作用的9=1的理論值；評(píng)價(jià)時(shí)，用聯(lián)合偏差系數(shù)9i大于、等于、小于1+0.06或1-0.06，評(píng)價(jià)聯(lián)合作用類型；獨(dú)立作用直接用測(cè)試溫差和f分析；評(píng)價(jià)方法如下9i〉l+f，即0i〉1.06協(xié)同作用；1-f《0i《l+f，即0.94《0i《1.06相加作用；ei<l-f，即0;<0.94拮抗作用；<Te〈T廣f'T入獨(dú)立作用；其中，毒性效應(yīng)最強(qiáng)藥品產(chǎn)生的溫差，Te—聯(lián)合作用的溫差，T入一相加作用的溫差，f.T入一偏差溫差；所述聯(lián)合作用系數(shù)e的計(jì)算式為6=17(TA+TB+TC+)式中9一混合毒物引起敏感藻響應(yīng)溫差的聯(lián)合作用系數(shù)；T—混合毒物引起敏感藻產(chǎn)生的絕對(duì)平均最大溫差；TA、TB、TC----混合毒物中單一毒物引起敏感藻產(chǎn)生的絕對(duì)平均最大溫差，其中各種毒物在混合毒物中的質(zhì)量比為1/n，n為混合毒物中毒物種類數(shù)。相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1)混合藥品與單一藥品引起的敏感藻紅外輻射變化不同，這種不同的紅外輻射變化均可被便攜式紅外測(cè)溫儀測(cè)試，測(cè)試方法簡便。2)二元藥品對(duì)敏感藻作用表現(xiàn)出協(xié)同、相加、拮抗和獨(dú)立四種聯(lián)合作用類型。聯(lián)合偏差系數(shù)法評(píng)價(jià)二元藥品對(duì)敏感藻的聯(lián)合作用可行。3)藻紅外測(cè)試法完成一次測(cè)試實(shí)驗(yàn)用時(shí)不到60min,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于用光密度、細(xì)胞數(shù)、葉綠素含量、細(xì)胞干重作為測(cè)試指標(biāo)進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)周期24h96h。具體實(shí)施例方式下面通過確定聯(lián)合作用系數(shù)計(jì)算法、總均偏差系數(shù)，構(gòu)建聯(lián)合偏差系數(shù)法，再用實(shí)驗(yàn)藥品和敏感藻進(jìn)行溫差偏差實(shí)驗(yàn)，求出總均偏差系數(shù)值；最后，為便于研究，用二元藥品對(duì)敏感藻的聯(lián)合作用進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證聯(lián)合偏差系數(shù)法的可行性。一、材料與方法1.1試驗(yàn)材料供試藻種敏感藻是指在急性毒性藻紅外測(cè)試中對(duì)毒物響應(yīng)的溫差大、時(shí)間快、種類多、劑量低的特殊藻類。用急性毒性藻紅外測(cè)試中敏感藻的確定方法(郭蔚華等，2008c急性毒性藻紅外測(cè)試中敏感藻的確定方法[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào),3(6):577-583)得到的四種敏感藻作為實(shí)驗(yàn)藻種殺菌劑的敏感藻—水華魚腥藻U""6"e朋,os-^w^),除草劑和殺蟲劑的敏感藻一纖細(xì)裸藻(五"gfew"graa'fo)，有機(jī)藥品的敏感藻羊角月牙藻(5We膨&"w啤r/cwro""附),重金屬的敏感藻一短線脆桿藻(Frag//",/"v&她Aar)。供試藥品重金屬硫酸汞(HgS04)、硝酸鉛[Pb(N03)2]、氯化鋇(BaCl2.2H20)、氯化鉻(CrCl36H20)。有機(jī)藥品甲醛(CH20)、苯酚(C6H5OH)、磺胺(NH2C6H4S02NH2)、聚丙烯酰胺([CH2CHCONH2]n)。農(nóng)藥除草劑一百草枯(C12H14N2C12)、蓋草能(CisHuClFsNOA)、草甘膦(C3H8N05P)，殺菌劑一三唑酮(C14H16C1N302)、井岡霉素(C20H35O13N)、克菌康(C19H3408N8)，殺蟲劑一殺蟲單(C5H12N06S2Na'H20)、滅掃利(C22H23N03)。本藥品由西南大學(xué)農(nóng)藥研究室提供。實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備便攜式紅外測(cè)溫儀(型號(hào)ST60，分辨率0.rC，重量320g)，LRH-250A生化培養(yǎng)箱，DR/4000U分光光度計(jì)，EBA21離心機(jī)，數(shù)碼顯微鏡。1.2實(shí)驗(yàn)方法測(cè)試原理敏感藻的光合磷酸化和氧化磷酸化的能量代謝系統(tǒng)中ATP合成和水解受到毒物干擾時(shí)，引起的藻紅外輻射變化可被紅外測(cè)溫儀測(cè)試(郭蔚華等，2008c急性毒性藻紅外測(cè)試中敏感藻的確定方法[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，3(6):577-583)。測(cè)試環(huán)境室內(nèi)，自然光照，20~28°C。藻種來源中科院武漢水生所提供，按其提供的配方、方法培養(yǎng)藻類。測(cè)試用藻量藻液葉綠素a含量4.0mg'1/1。藥品稀釋①溫差偏差實(shí)驗(yàn)，藥品配成500mg'L"和1000mg'L"兩種測(cè)試藥液；②聯(lián)合作用實(shí)驗(yàn)，用兩種1000mg，L"的單藥測(cè)試液，按l:l體積比配制兩種藥品含量各為500mgL"的混合測(cè)試藥液。測(cè)試藥液用量測(cè)試時(shí)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)藻液中滴加配制藥液0.05mL。測(cè)試藻生長期用對(duì)毒物最敏感的對(duì)數(shù)生長期的藻液作為測(cè)試藻液。測(cè)試組設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)試驗(yàn)組、對(duì)照組，每組3個(gè)重復(fù)。測(cè)試容器直徑4cm、高3cm、厚0.2cm的透明絕熱塑料容器。測(cè)試方法先預(yù)培養(yǎng)藻類，然后進(jìn)行藥品稀釋，準(zhǔn)備測(cè)試儀器等物品。待藻培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長后期時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)。測(cè)試時(shí)，在試驗(yàn)組和對(duì)照組的每一容器中，同時(shí)分別滴加含有測(cè)試用藻量的測(cè)試藻液5mL,待藻液溫度穩(wěn)定時(shí)用紅外測(cè)溫儀對(duì)準(zhǔn)液面中部測(cè)溫記錄，然后試驗(yàn)組、對(duì)照組分別滴加稀釋藥液、蒸餾水各0.05mL,立即測(cè)溫記錄，以后每1.5min測(cè)1次，直到溫度變化停止時(shí)。平均響應(yīng)溫差計(jì)算方法平均響應(yīng)溫差=(試驗(yàn)組最大響應(yīng)溫度之和一對(duì)照組平均溫度之和)+31.3聯(lián)合作用系數(shù)計(jì)算式的確定方法兩種和兩種以上化學(xué)污染物共同作用所產(chǎn)生的綜合生物學(xué)效應(yīng)稱作聯(lián)合作用，根據(jù)生物學(xué)效應(yīng)的差異，聯(lián)合作用通常分為4種類型(孔繁翔，2000，《環(huán)境生物學(xué)》[M].北京高等教育出版社:13,92-93):協(xié)同作用指兩種或兩種以上化學(xué)污染物同時(shí)或數(shù)分鐘內(nèi)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的生物學(xué)作用強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過它們分別單獨(dú)引起的生物學(xué)作用的總和。相加作用指兩種或兩種以上化學(xué)污染物混合所產(chǎn)生的生物學(xué)作用強(qiáng)度等于各種化學(xué)污染物分別產(chǎn)生的作用強(qiáng)度的總和。拮抗作用指兩種或兩種以上化學(xué)污染物同時(shí)或數(shù)分鐘內(nèi)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的生物學(xué)作用強(qiáng)度低于它們分別單獨(dú)引起的生物學(xué)作用的總和。獨(dú)立作用指兩種或兩種以上化學(xué)污染物對(duì)生物體所產(chǎn)生的生物學(xué)作用強(qiáng)度低于它們分別單獨(dú)引起的生物學(xué)作用的總和，高于其中活性最強(qiáng)者。根據(jù)聯(lián)合作用類型的定義，根據(jù)實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)出的敏感藻響應(yīng)定量毒物的半劑量與倍劑量的半、倍溫差效應(yīng)(表i)，確定并用聯(lián)合作用系數(shù)e來評(píng)價(jià)聯(lián)合作用聯(lián)合作用系數(shù)e計(jì)算式為-6=T/(TA+TB+TC+)式中9—混合毒物引起敏感藻響應(yīng)溫差的聯(lián)合作用系數(shù)；T一混合毒物引起敏感藻產(chǎn)生的絕對(duì)平均最大溫差；TA、TB、TC----混合毒物中單一毒物引起敏感藻產(chǎn)生的絕對(duì)平均最大溫差，其中各種毒物在混合毒物中的質(zhì)量比為1/n，ri為混合毒物中毒物種類數(shù)。9>1為協(xié)同作用；0=1為相加作用；9<1為拮抗作用；獨(dú)立作用可直接分析。表1敏感藻對(duì)藥品半劑量、倍劑量響應(yīng)溫差的實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.4總均偏差系數(shù)的確定與測(cè)試方法實(shí)評(píng)中，實(shí)測(cè)溫差有一定偏差，直接用聯(lián)合作用系數(shù)e分析聯(lián)合作用不理想，需用溫差偏差系數(shù)值調(diào)整相加作用的e理論值(0=1)，為了找出其調(diào)整范圍，需進(jìn)行對(duì)相加作用分析的溫差偏差實(shí)驗(yàn)，確定特定溫差偏差系數(shù)和系數(shù)值。實(shí)驗(yàn)中，重金屬、有機(jī)藥品、農(nóng)藥各三種，根據(jù)敏感藻響應(yīng)定量毒物的半劑量與倍劑量的半、倍溫差效應(yīng)，每種藥品按i:i比例，一分為二，分單一和相加兩種方式加藥，測(cè)試計(jì)算敏感藻對(duì)半劑量和倍劑量藥品的響應(yīng)溫差，通過平均溫差偏差系數(shù)算式求出九種平均溫差偏差系數(shù)，再對(duì)其平均得到總平均溫差偏差系數(shù)(簡稱總均偏差系數(shù))，f表示，用f值調(diào)整相加作用的9理論值(eo。平均溫差偏差系數(shù)計(jì)算如下平均溫差偏差系數(shù)絕對(duì)值=(相加作用理論溫差_平均實(shí)測(cè)溫差)+相加作用理論溫差。1.5聯(lián)合偏差系數(shù)法驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)方法為便于研究，用二元藥品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證聯(lián)合偏差系數(shù)法的可行性。實(shí)驗(yàn)中，從16種實(shí)驗(yàn)藥品中取出2種，分別測(cè)試敏感藻響應(yīng)單一藥品和混合藥品的溫度，并用平均響應(yīng)溫差算法換算其響應(yīng)溫差。二、結(jié)果與討論將溫差偏差實(shí)驗(yàn)的測(cè)試分析結(jié)果整理成表2;將驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中重金屬對(duì)短線脆桿藻聯(lián)合作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果整理成表3，有機(jī)藥品對(duì)羊角月牙藻聯(lián)合作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果整理成表4，農(nóng)藥對(duì)水華魚腥藻、纖細(xì)裸藻聯(lián)合作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果整理成表5。表2溫差偏差實(shí)驗(yàn)測(cè)試分析結(jié)果有機(jī)藥品敏感藻平均溫差偏差系數(shù)農(nóng)藥敏感藻平均溫差偏差系數(shù)重金屬敏感藻平均溫差偏差系數(shù)磺胺羊角月牙藻"0.11滅掃利纖細(xì)裸藻4,=0.12硫酸汞短線脆桿藻fw掘2苯酚&-2=0.03草甘膦f2-2=0.16氯化鉻f3.2』.01甲苯f!.3-0.02蓋草能f2>0.01硝酸鉛f3—3=0.04偏差系數(shù)平均值0.06總均偏差系數(shù)f值0.062.1聯(lián)合偏差系數(shù)法用聯(lián)合作用系數(shù)0和總均偏差系數(shù)f構(gòu)建聯(lián)合偏差系數(shù)法，用f=0.06(表1)調(diào)整相加作用的0理論值(9-1)。評(píng)價(jià)時(shí)，用聯(lián)合偏差系數(shù)8i大于、等于、小于1+0.06或1-0.06，評(píng)價(jià)聯(lián)合作用類型。獨(dú)立作用直接用測(cè)試溫差和f分析。評(píng)價(jià)方法如下6i〉l+f，即6;>1.06協(xié)同作用l-f《6i《l+f，即0.94《6;《1.06相加作用ei<l-f，即0;<0.94拮抗作用<Te<TA-f.T,獨(dú)立作用(T^毒性效應(yīng)最強(qiáng)藥品產(chǎn)生的溫差，Tp—聯(lián)合作用的溫差，Ta—相加作用的溫差，f.T入一偏差溫差。)2.2聯(lián)合偏差系數(shù)法的驗(yàn)證重金屬的聯(lián)合作用從表2可知，用聯(lián)合偏差系數(shù)法分析4種重金屬6種混合對(duì)短線脆桿藻的聯(lián)合作用為，3次拮抗作用(氯化鋇+硝酸鉛，硝酸鉛+硫酸汞，硝酸鉛+硫酸汞)，2次獨(dú)立作用(氯化鋇+硫酸汞，硝酸鉛+氯化鉻)，l次相加作用(氯化鋇+氯化鉻)。有機(jī)毒物的聯(lián)合作用從表3可知，用聯(lián)合偏差系數(shù)法分析4種有機(jī)藥品，6種混合對(duì)羊角月牙藻的聯(lián)合作用為，2次協(xié)同作用(苯酚+磺胺，甲醛+聚丙烯酰胺)，3次獨(dú)立作用(苯酚+聚丙烯酰胺，甲醛+磺胺，磺胺+聚丙烯酰胺)，l次拮抗作用(苯酚+甲醛)。表3重金屬對(duì)短線脆桿藻聯(lián)合作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>農(nóng)藥的聯(lián)合作用從表4可知，用聯(lián)合偏差系數(shù)法分析8種農(nóng)藥12種混合對(duì)水華魚腥藻、纖細(xì)裸藻的聯(lián)合作用為，9次拮抗作用，3次獨(dú)立作用。其中，對(duì)水華魚腥藻引起聯(lián)合作用的二元毒物是，蓋草能+井崗霉素引起獨(dú)立作用，其余5種二元毒物引起拮抗作用；對(duì)纖細(xì)裸藻引起聯(lián)合作用的二元毒物是，草甘膦+殺蟲單，百草枯+三唑酮引起獨(dú)立作用，其余4種二元毒物引起拮抗作用。表4有機(jī)藥品對(duì)羊角月牙藻聯(lián)合作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.3測(cè)試周期一組驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)從藻液加藥，測(cè)試，計(jì)算，到聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)，60min內(nèi)即可完成。而用光密度、細(xì)胞數(shù)、葉綠素含量、細(xì)胞干重作為測(cè)試指標(biāo)進(jìn)行藻類急性毒性實(shí)驗(yàn)，需要24h96h(孔繁翔，2000)。通過以上分析可知1)兩種藥品與一種藥品引起的敏感藻紅外輻射變化不同，兩種紅外輻射變化均可被便攜式紅外測(cè)溫儀測(cè)試，測(cè)試方法簡便。2)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果二元藥品對(duì)敏感藻作用表現(xiàn)出協(xié)同、相加、拮抗和獨(dú)立4種聯(lián)合作用類型。研究表明，聯(lián)合偏差系數(shù)法評(píng)價(jià)二元藥品對(duì)敏感藻的聯(lián)合作用可行。3)在藻類急性毒性實(shí)驗(yàn)中，藻紅外測(cè)試法完成一次測(cè)試實(shí)驗(yàn)用時(shí)不到60min，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于用光密度、細(xì)胞數(shù)、葉綠素含量、細(xì)胞干重測(cè)試指標(biāo)進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)周期24h96h。4)盡管聯(lián)合偏差系數(shù)法所采用的聯(lián)合偏差系數(shù)可能還不理想，尚需要開展更大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行調(diào)整，但不影響急性毒性藻紅外測(cè)試中聯(lián)合作用評(píng)價(jià)方法的可行性。表5農(nóng)藥對(duì)水華魚腥藻、纖細(xì)裸藻聯(lián)合作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>本發(fā)明中，用敏感藻和重金屬、有機(jī)藥品和/或農(nóng)藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；首先確定聯(lián)合作用系數(shù)0的計(jì)算式和總均偏差系數(shù)f，用其構(gòu)建聯(lián)合偏差系數(shù)法，再用實(shí)驗(yàn)得到的^0.06調(diào)整相加作用的e理論值(9=1)，用聯(lián)合偏差系數(shù)0i大于、等于、小于1+0.06或1-0.06,評(píng)價(jià)聯(lián)合作用類型；最后，進(jìn)行二元藥品對(duì)敏感藻聯(lián)合作用的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證聯(lián)合偏差系數(shù)法的可行性。驗(yàn)證結(jié)果4種重金屬6種混合對(duì)短線脆桿藻的聯(lián)合作用為，3次拮抗作用，2次獨(dú)立作用，l次相加作用；4種有機(jī)藥品6種混合對(duì)羊角月牙藻的聯(lián)合作用為，2次協(xié)同作用，3次獨(dú)立作用，l次拮抗作用；8種農(nóng)藥12種混合對(duì)水華魚腥藻、纖細(xì)裸藻的聯(lián)合作用為，9次拮抗作用，3次獨(dú)立作用；一組驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)從藻液加藥，測(cè)試，計(jì)算，到評(píng)價(jià),60min內(nèi)完成，而用光密度、細(xì)胞數(shù)、葉綠素含量、細(xì)胞干重作為測(cè)試指標(biāo)進(jìn)行藻類急性毒性實(shí)驗(yàn)，需要24h96h。對(duì)驗(yàn)證結(jié)果分析可知，用所構(gòu)建的聯(lián)合偏差系數(shù)法評(píng)價(jià)二元藥品對(duì)敏感藻的聯(lián)合作用，可行、快速、簡便。權(quán)利要求1、急性毒性藻紅外測(cè)試中聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，包括如下步驟1)培養(yǎng)敏感藻液使其對(duì)數(shù)期的葉綠素a含量達(dá)到4.0mg·L-1；2)準(zhǔn)備測(cè)試藥品，將其稀釋并配制成待測(cè)藥液；3)測(cè)試時(shí)，取5～10mL的對(duì)數(shù)期的葉綠素含量為4.0mg·L-1的敏感藻液，加入到測(cè)試容器中，同時(shí)分試驗(yàn)組和對(duì)照組；待藻液溫度穩(wěn)定時(shí)，再滴加上述待測(cè)藥液于試驗(yàn)組中，滴加與待測(cè)藥液同體積的蒸餾水于對(duì)照組中，立即用紅外測(cè)溫儀測(cè)試藻液變化溫度，計(jì)算相應(yīng)溫差；根據(jù)聯(lián)合偏差系數(shù)法分析各種待測(cè)藥品組合對(duì)實(shí)驗(yàn)藻的聯(lián)合毒性作用，并作出評(píng)價(jià)；用聯(lián)合作用系數(shù)θ和總均偏差系數(shù)f構(gòu)建聯(lián)合偏差系數(shù)法；用f＝0.06調(diào)整相加作用的θ＝1的理論值；評(píng)價(jià)時(shí)，用聯(lián)合偏差系數(shù)θi大于、等于、小于1+0.06或1-0.06，評(píng)價(jià)聯(lián)合作用類型；獨(dú)立作用直接用測(cè)試溫差和f分析；評(píng)價(jià)方法如下θi＞1+f，即θi＞1.06協(xié)同作用；1-f≤θi≤1+f，即0.94≤θi≤1.06相加作用；θi＜1-f，即θi＜0.94拮抗作用；Tφ＜Tβ＜Tλ-f·Tλ獨(dú)立作用；其中，Tφ毒性效應(yīng)最強(qiáng)藥品產(chǎn)生的溫差，Tβ-聯(lián)合作用的溫差，Tλ-相加作用的溫差，f·Tλ-偏差溫差；所述聯(lián)合作用系數(shù)θ的計(jì)算式為θ＝T/(TA+TB+TC+…)式中θ-混合毒物引起敏感藻響應(yīng)溫差的聯(lián)合作用系數(shù)；T-混合毒物引起敏感藻產(chǎn)生的絕對(duì)平均最大溫差；TA、TB、TC…-混合毒物中單一毒物引起敏感藻產(chǎn)生的絕對(duì)平均最大溫差，其中各種毒物在混合毒物中的質(zhì)量比為1/n，n為混合毒物中毒物種類數(shù)。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的急性毒性藻紅外測(cè)試中聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，所述步驟3)測(cè)試時(shí)，在試驗(yàn)組和對(duì)照組的每一容器中，同時(shí)分別滴加含有測(cè)試用藻量的敏感藻液5mL，待藻液溫度穩(wěn)定時(shí)用紅外測(cè)溫儀對(duì)準(zhǔn)液面中部測(cè)溫記錄，然后試驗(yàn)組、對(duì)照組分別滴加稀釋藥液、蒸餾水各0.05mL,立即測(cè)溫記錄，以后每1.5min測(cè)l次，直到溫度變化停時(shí)止；平均響應(yīng)溫差計(jì)算方法平均響應(yīng)溫差=(試驗(yàn)組最大響應(yīng)溫度之和一對(duì)照組平均溫度之和)+3。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的急性毒性藻紅外測(cè)試中聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，所述測(cè)試藥品為重金屬、有機(jī)藥品或農(nóng)藥。全文摘要急性毒性藻紅外測(cè)試中聯(lián)合作用的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，用聯(lián)合作用系數(shù)θ和總均偏差系數(shù)f構(gòu)建聯(lián)合偏差系數(shù)法(聯(lián)合偏差系數(shù)用θi表示)，用f＝0.06調(diào)整相加作用的θ理論值(θ＝1)。根據(jù)聯(lián)合偏差系數(shù)θi的變化進(jìn)行評(píng)價(jià)，其評(píng)價(jià)方法如下θi＞1+f，即θi＞1.06為協(xié)同作用；1-f≤θi≤1+f，即0.94≤θi≤1.06為相加作用；θi＜1-f，即θi＜0.94為拮抗作用；Tφ＜Tβ＜Tλ-f·Tλ為獨(dú)立作用(Tφ毒性效應(yīng)最強(qiáng)藥品產(chǎn)生的溫差，Tβ-聯(lián)合作用的溫差，Tλ-相加作用的溫差，f·Tλ-偏差溫差)。本發(fā)明測(cè)試方法簡便；二元藥品對(duì)敏感藻作用表現(xiàn)出協(xié)同、相加、拮抗和獨(dú)立4種聯(lián)合作用類型；藻紅外測(cè)試法完成一次測(cè)試實(shí)驗(yàn)用時(shí)不到60min，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于用光密度、細(xì)胞數(shù)、葉綠素含量、細(xì)胞干重作為測(cè)試指標(biāo)進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)周期24h～96h。文檔編號(hào)C12Q1/02GK101613737SQ20091010446公開日2009年12月30日申請(qǐng)日期2009年7月28日優(yōu)先權(quán)日2009年7月28日發(fā)明者偉周,健周,智張,艷林,蔣紹階,郭蔚華,春陽申請(qǐng)人:重慶大學(xué)