專利名稱：：一種高通量基因檢測(cè)與分型的微孔板裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本實(shí)用新型涉及一種裝置，特別是一種高通量基因檢測(cè)與分型的微孔板裝置，屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：基因芯片是應(yīng)用已知核酸序列作為探針與互補(bǔ)的靶核苷酸序列雜交，通過(guò)隨后的信號(hào)檢測(cè)進(jìn)行定性與定量分析?；蛐酒谝晃⑿〉幕砻婕闪舜罅康姆肿幼R(shí)別探針，能夠在同一時(shí)間內(nèi)平行分析大量的基因，進(jìn)行大信息量的篩選與檢測(cè)分析。目前的臨床檢測(cè)與基因診斷很多都應(yīng)用到基因芯片技術(shù)，可快速地檢測(cè)出樣品中成千上萬(wàn)個(gè)基因的表達(dá)情況。盡管基因芯片可同一時(shí)間平行分析大量基因，但是到目前為止，市面上商品化的基因檢測(cè)芯片基本上是針對(duì)一人份的設(shè)計(jì)，檢測(cè)人員也只限于每次用一張基因芯片檢測(cè)一份樣品的基因表達(dá)情況，每檢測(cè)一份樣品，就得把檢測(cè)所需的步驟重新再執(zhí)行一遍，耗時(shí)費(fèi)力，并由于多個(gè)樣品檢測(cè)的繁復(fù)的步驟重復(fù)導(dǎo)致體力和精神消耗，失敗和錯(cuò)誤的檢測(cè)時(shí)有發(fā)生。至今市面上還沒(méi)有非常好的產(chǎn)品能用大量基因芯片同時(shí)對(duì)多份樣品進(jìn)行檢測(cè)。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的在于構(gòu)建一個(gè)裝置，能高通量地對(duì)多份樣品進(jìn)行基因檢測(cè)與分型，達(dá)到省時(shí)省力省試劑，檢測(cè)精確的目的。本實(shí)用新型的要點(diǎn)在于，該裝置由多孔微孔板與嵌在微孔內(nèi)的基因芯片組成，嵌在微孔內(nèi)的基因芯片，含有針對(duì)基因檢測(cè)和分型的特異性探針陣列；該基因芯片可以以尼龍膜，硅片，玻璃片，塑膠片為基質(zhì)。優(yōu)選基質(zhì)為尼龍膜，易于切割，成本低，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果背景低。多孔微孔板可以是各種孔型，不同孔數(shù)的微孔板，包括圓形，方形或其他孔型的12孔，24孔，48孔，％孔，384孔等；微孔板的選擇可根據(jù)所需檢測(cè)基因型的多少而定；根據(jù)所采用的不同孔型或不同孔數(shù)的微孔板的微孔大小，可將膜質(zhì)芯片裁剪成相應(yīng)大小并嵌入微孔內(nèi)，構(gòu)建成三維的基因芯片裝置。在這種裝置中，微孔板既作為多張芯片的載體，也作為基因檢測(cè)的反應(yīng)容器。本實(shí)用新型革新了傳統(tǒng)基因檢測(cè)的單一手段，將現(xiàn)有的二維結(jié)構(gòu)的基因芯片與微孔板結(jié)合構(gòu)建成三維的裝置，充分結(jié)合了基因芯片一次能同時(shí)檢測(cè)一份樣品中多個(gè)基因的優(yōu)點(diǎn)和利用多孔微孔板一次能對(duì)多份樣品進(jìn)行檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，將基因芯片嵌在多孔微孔板內(nèi)構(gòu)造成高通量檢測(cè)裝置，具有操作簡(jiǎn)單，省時(shí)省力省試劑，減少交叉污染，檢測(cè)精確，結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn)。圖1本實(shí)用新型裝置示意圖。圖2左圖基因芯片上基因矩陣的排列，右圖單個(gè)基因矩陣中HPV探針與質(zhì)控點(diǎn)的分布(包括不同基因型探針，+ve:定位質(zhì)控點(diǎn)，-ve:陰性質(zhì)控點(diǎn)，HB:樣本DNA提取和PCR過(guò)程的陽(yáng)性質(zhì)控點(diǎn))。圖3HPV微孔板雜交檢測(cè)示意圖。具體實(shí)施方式結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本實(shí)用新型的裝置作進(jìn)一步說(shuō)明，但不以任何形式限制本實(shí)用新型實(shí)施例一高通量基因檢測(cè)與分型的微孔板裝置的構(gòu)建此例使用96方孔微孔板結(jié)合邊長(zhǎng)為6.5毫米方形尼龍膜為基質(zhì)的基因芯片。尼龍膜剪裁成合適的大小，固定于點(diǎn)樣儀上，根據(jù)所需矩陣的大小，點(diǎn)樣儀可一次完成基因型片384-500片。設(shè)計(jì)所需的探針數(shù)目并將其排列成矩陣，在點(diǎn)樣儀中設(shè)置全自動(dòng)程序進(jìn)行點(diǎn)樣。為了便于探針的固定，探針在5'端進(jìn)行了多聚T和氨基修飾，并在催化劑的作用下，通過(guò)共價(jià)鍵固定于尼龍膜上，其他位點(diǎn)將以化學(xué)作用滅活，在基因芯片3上形成基因矩陣4。經(jīng)過(guò)化學(xué)處理和點(diǎn)樣完畢的基因芯片3就已經(jīng)可以使用，將其裁成6.5毫米方形并放入96方孔微孔板1的微孔2中。高通量基因檢測(cè)與分型的微孔板裝置就完成構(gòu)建，其示意圖可參見(jiàn)圖1。每個(gè)微孔2的反應(yīng)試劑用量只需100-200微升，此微孔板裝置可同時(shí)檢測(cè)96人份。實(shí)施例二構(gòu)建好的裝置在人類乳頭瘤病毒(HPV)的基因檢測(cè)與分型中的應(yīng)用在此例中，沿用實(shí)施例一的裝置形式，將此裝置運(yùn)用于人類乳頭瘤病毒(HPV)的基因檢測(cè)與分型中。HPV有100多種基因型，而其中40多種與子宮頸癌和尖銳濕疣有密切的關(guān)系，此例中選取29種常見(jiàn)的基因型，包括HPV6，11，16，18，26，31，33，35，39，40，42，43，44，45，51，52，53，54，55,56，57，58，59，66，67，68,69，73，82。探針的設(shè)計(jì)選擇是位于HPVLl區(qū)域的多變區(qū)，設(shè)計(jì)針對(duì)29種基因型的特異性探針。此基因芯片，特異性探針與質(zhì)控點(diǎn)在尼龍膜上排列為6x6矩陣，如圖2左圖所示，矩陣點(diǎn)與點(diǎn)之間間隔為600微米，其具體特異性探針和質(zhì)控點(diǎn)的分布如圖2右圖所示。HPV微孔板雜交檢測(cè)流程如圖3所示。此例結(jié)合聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，將目標(biāo)DNA以倍數(shù)擴(kuò)增。在HPV基因組的L1區(qū)域設(shè)計(jì)通用引物，引物以生物素標(biāo)記，擴(kuò)增后，帶有生物素標(biāo)記的PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)堿變性，中和后可被相對(duì)應(yīng)的固定于基因芯片上的特異性探針?biāo)东@。雜交完成后，通過(guò)過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素及其特異性底物TMB(3，3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺)的顯色反應(yīng)得出結(jié)果。對(duì)基因芯片結(jié)果進(jìn)行圖像采集與分析，在短時(shí)間內(nèi)給出基因型別資料。利用此例中的裝置可以同時(shí)檢測(cè)96份不同的樣品，與利用傳統(tǒng)的分型雜交方法(羅氏HPV分型試劑盒)同樣檢測(cè)96份樣品，在操作需時(shí)，試劑用量，精確度等方面作的比較如下表所示<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>權(quán)利要求1.一種高通量基因檢測(cè)與分型的微孔板裝置，其特征在于該裝置由多孔微孔板與嵌在微孔內(nèi)的基因芯片組成。2.如權(quán)利要求1所述的高通量基因檢測(cè)與分型的微孔板裝置，其特征在于所述的多孔微孔板可以是方孔板或圓孔板或其他孔型的板。3.如權(quán)利要求1或2所述的高通量基因檢測(cè)與分型的微孔板裝置，其特征在于所述的多孔微孔板可以是12孔或24孔或48孔或96孔或384孔微孔板。4.如權(quán)利要求1所述的高通量基因檢測(cè)與分型的微孔板裝置，其特征在于所述的基因芯片可以是以尼龍膜為基質(zhì)，或以硅片為基質(zhì)，或以玻璃片為基質(zhì)，或以塑膠片為基質(zhì)。5.如權(quán)利要求1所述的高通量基因檢測(cè)與分型的微孔板裝置，其特征在于所述的基因芯片以尼龍膜為基質(zhì)。6.如權(quán)利要求1所述的高通量基因檢測(cè)與分型的微孔板裝置，其特征在于所述的基因芯片含有針對(duì)基因分析和分型的特異性探針陣列。專利摘要本實(shí)用新型涉及一種裝置，尤其是一種高通量基因檢測(cè)與分型的多孔微孔板裝置；該實(shí)用新型的裝置由多孔微孔板與嵌在微孔內(nèi)的基因芯片組成，多孔微孔板可以是各種孔型，不同孔數(shù)的微孔板，包括圓形，方形或其他孔型的12孔，24孔，48孔，96孔，384孔等，嵌在微孔內(nèi)的基因芯片可以是以尼龍膜，硅片，玻璃片或塑膠片為基質(zhì)，含有針對(duì)基因分型的特異性探針陣列；本實(shí)用新型革新了傳統(tǒng)基因檢測(cè)的單一手段，充分結(jié)合了基因芯片一次能同時(shí)檢測(cè)一份樣品中多個(gè)基因的優(yōu)點(diǎn)和利用多孔微孔板一次能對(duì)多份樣品進(jìn)行檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，將基因芯片嵌在多孔微孔板內(nèi)構(gòu)造成高通量檢測(cè)裝置，具有操作簡(jiǎn)單，省時(shí)省力省試劑，減少交叉污染，檢測(cè)精確，結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)C12M1/00GK201280550SQ2008200947公開(kāi)日2009年7月29日申請(qǐng)日期2008年5月15日優(yōu)先權(quán)日2008年5月15日發(fā)明者季晟琳,戚穗堅(jiān),曾志雄,楊夢(mèng)甦申請(qǐng)人:港龍生物技術(shù)(深圳)有限公司