專利名稱：一種乳制品中抗生素水解殘留物的檢測方法
技術領域：
本發(fā)明提供了一種檢測方法，尤其是指乳制品中牛奶分解劑及抗生素水解 殘留物的檢測，具體為一種市售牛奶抗生素分解劑作用于抗生素后水解殘留物 的檢測方法。
背景技術：
由于國標中規(guī)定原料奶收購時必須"無抗"， 一些不法奶站便人為使用抗生 素酶水解乳中殘留的抗生素，這類水解酶制劑及酶水解產物沒有做過相關的安 全性評價，對于消費者存在直接或間接的安全隱患。奶牛在飼養(yǎng)過程中，用于預防和治療作用的藥物主要是抗生素類藥物。但 是這類藥物在停藥后一段時間內，在分泌的牛奶中仍有殘留。使用抗生素殘留 超標的牛奶，不僅會給產品的生產帶來影響，產品質量無法保障，而且對消費 者的健康存在眾多不利影響。國外很多國家都對不同種類抗生素的最大殘留量(MRL)做了具體規(guī)定，明確要求抗生素殘留超標的牛乳嚴禁收售。國內多數(shù) 乳品企業(yè)對于不同程度抗生素殘留超標的牛乳釆取降價收購和拒收的原則。出 于經濟利益的驅動，為謀求經濟利益，市場上出現(xiàn)了人為使用一些生物制劑去 降解牛乳中殘留抗生素的"無抗奶，即生產了"人造"無抗奶。從2005年至今就有 數(shù)家公司公開出售分解牛乳中殘留抗生素的酶制劑。市售的抗生素分解劑是一 種黃色液體，其主要成份是青霉素酶，每瓶約4mL左右，在8-C-l(TC條件下放置一晚或反應12小時，即可以使3-4噸有抗奶轉變?yōu)?人造"無抗奶。
針對高濃度的抗生素藥品，其分解產物的檢測方法一般有高效液相色譜法， 分光光度法；殘留級的抗生素水解殘留物的檢測則至今未有相關報道。而且， 液相色譜法或分光光度法都不利于在生產企業(yè)推廣應用，設備成本大，檢測費 用高，對檢測人員的要求也高，不利于在收奶和產品檢測中推廣應用。
由于殘留在原料乳中的抗生素經牛奶分解劑作用后，僅僅是其內部P _內酰 胺環(huán)的一個N-C鍵的斷開，因而其抑菌特性依然存在。利用這個特性，在這種"人 造"無抗乳中添加一定量的發(fā)酵劑，在43'C下恒溫培養(yǎng)， 一定時間后根據(jù)酸度的 變化大小就可以判斷出原料乳是否是"人造"無抗奶或產品。
由于乳制品中青霉素類抗生素酶解殘留物的檢測方法未見報道，為了確保 原奶及其產品的質量和安全，本領域急需一種可以檢測乳和乳制品中牛奶分解 劑及抗生素水解殘留物的方法。

發(fā)明內容
為了滿足乳品企業(yè)及質量監(jiān)控檢測機構的需求，確保乳原料和乳制品的質 量安全和消費者的健康，本發(fā)明人開發(fā)了一種抗生素水解殘留物的檢測方法， 尤其是指乳制品中抗生素酶解殘留物的檢測方法，該方法能夠有效地檢測乳制
品，尤其是乳中殘留的獸藥抗生素水解產物殘留物。
本發(fā)明的目的在于提供一種原料乳及乳制品中抗生素水解殘留物的檢測方 法，該方法采用殘留物^t發(fā)酵的影響來確認樣品中是否含有的抗生素水解殘留 物，可以有效地檢測乳和乳制品中殘留的抗生素水解殘留物，并可根據(jù)酸度的 相對變化值來定量其濃度范圍。
本發(fā)明提供了一種殘留的抗生素水解產物的檢測方法，其過程包括將待測的乳制品和作為空白對照的無抗奶樣品殺菌處理，優(yōu)選用巴士殺菌法殺菌，冷
卻后加入發(fā)酵劑，測定其起始的發(fā)酵液pH值，然后在43。C下保溫1小時，測定發(fā) 酵液的pH值，計算發(fā)酵前后pH值的變化與無抗奶對照樣變化值的差值，當差值 大于等于0.03時，判定該樣品為陽性樣品，即其中含有抗生素水解殘留物，為不 合格的"人造"無抗奶。
上述乳制品包括液態(tài)乳制品和固態(tài)乳制品，液態(tài)乳制品包括液態(tài)的原奶和還 原奶，固態(tài)乳制品包括奶粉等，若是固態(tài)乳制品則需要先用水還原成液態(tài)還原 奶。
上述檢測方法中采用的發(fā)酵劑為含有乳酸菌的發(fā)酵劑。 乳酸菌指發(fā)酵糖類，產生乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。 在其發(fā)酵產物中只有乳酸的稱為同型乳酸發(fā)酵，而產物中除乳酸外還有較多乙 酸、乙醇、C02等物質的稱為異型乳酸發(fā)酵。乳酸菌從形態(tài)上分類主要有球狀和 桿狀兩大類，主要包括乳酸鏈球菌(Streptococceae)和乳酸桿菌(Lactobacilleae)。 多數(shù)種可發(fā)酵乳糖，發(fā)酵后可將pH下降至6.0以下。乳酸桿菌中以乳酸桿菌屬 (Lactobacillus)最為重要。
本發(fā)明所用的發(fā)酵劑中含有的乳酸菌優(yōu)選含有乳稈菌屬、鏈球菌屬任一或 其組合的菌屬的乳酸菌，鏈球菌屬的乳酸菌優(yōu)選嗜熱鏈球菌Oftre內oco"^ AemcpMw",乳稈菌屬的乳酸菌優(yōu)選保加利亞乳桿菌(Zfl"o6a"7/ws &w/gaWcwW。 在本發(fā)明的優(yōu)選實施例中，上述的發(fā)酵劑為含有嗜熱鏈球菌OSfreptococaw Aenwop/w7w)、保加利亞乳桿菌fla"o6a"7/w 6w/gar/cu^任一或其混合的乳酸菌 的發(fā)酵劑；更優(yōu)選為含有嗜熱鏈球菌fS^/ tococc船f/iemiop/n7一和保加利亞乳桿 菌(Xacto6ac!說"6M/gahcwW的乳酸菌的工業(yè)發(fā)酵劑。本發(fā)明所述的檢測方法中所加入的發(fā)酵劑的量為0.2-0.8U/L，以待測的乳制 品或作為空白對照樣品為基數(shù)，即每升待測的樣品溶液中加入0.2-0.8U/L，優(yōu)選 0.4-0.7U/L，更優(yōu)選加入0.6U/L;其中，所述的U為發(fā)酵劑中菌的活力單位。 本發(fā)明所述的檢測方法具體的步驟包括
(1) .樣品的處理
取待測的液態(tài)乳制品樣品100ml， 75。C以上(優(yōu)選75-98。C)加熱10min; 將殺菌后的樣品冷卻備用；
若樣品為奶粉類固體或粉狀樣品時，稱取10-15g固體或者粉末狀樣品，用去 離子水溶解定容至100ml;
同時設置無抗奶為空白對照樣品，按同樣的上述方法處理待用；
(2) .發(fā)酵
在上述制備好的待測液態(tài)乳制品樣品和空白對照樣品中添加發(fā)酵劑，該發(fā) 酵劑為含有嗜熱鏈球菌fS"加ptocoa^ Aemo/^7z^ 、保加利亞乳桿菌 (IflctoZ)a"7/w 6M/gfln'cM)至少一種的乳酸菌的發(fā)酵劑，添加量約為0.4-0.7U/L， 搖勻，測定發(fā)酵前的初始pH值；
然后將樣品置入40-45。C恒溫培養(yǎng)箱，發(fā)酵，取出冷卻；
(3) .測定pH值
待測樣品發(fā)酵結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差，與空白對照樣品的發(fā)酵 結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差，以二者之差是否大于0.03來判定該樣品是 否為曾經使用過抗生素的乳制品。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施例中，通過以下技術方案來實現(xiàn)本發(fā)明的目的
l.樣品的處理取待測的液態(tài)乳制品樣品lOOmI， 95'C加熱10min; 將殺菌后的樣品冷卻到40'C-45"C之間備用；
若樣品為奶粉類固體或粉狀樣品時，稱取13g固體或者粉末狀樣品，用去離 子水溶解定容至100ml;
同時設置無抗奶為空白對照樣品，按同樣的上述方法處理待用；
2. 發(fā)酵
在上述制備好的待測的液態(tài)乳制品樣品和空白對照樣品中添加發(fā)酵劑，例如 是經過篩選的嗜熱鏈球菌OS^^tococc^ Awmo; /n7^)和保加利亞乳桿菌 (^"0^"7/^^/^^"力混合乳酸菌發(fā)酵劑^-1，添加量約為0.6U/L，搖勻，測 定發(fā)酵前的初始pH值；
然后將樣品置入43。C恒溫培養(yǎng)箱，發(fā)酵，優(yōu)選0.5 — 2小時，更優(yōu)選發(fā)酵l小 時，取出冷卻，終止發(fā)酵；
3. 測定pH值
待測樣品發(fā)酵結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差(pH2)，與空白對照樣品 的發(fā)酵結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差(pH。， pHi和pH2二者之差^).03時， 即可判定該樣品為陽性，即為"人造"無抗乳制品，即認為待測樣品為人為添 加牛奶抗生素分解劑分解抗生素的乳制品，也就是說，其為含有抗生素的原料 乳或用含有抗生素的原料乳生產的乳制品。 用計算式表示為 pHt 二pH, —pH01 (空白對照樣品發(fā)酵前后pH值之差) pH2=pH2—pHo2 (檢測樣品發(fā)酵前后pH值之差)
當ApH, — ApH2》0.03時，判定為陽性樣品，即待測乳制品為含有抗生素的乳制品。
上述步驟(2)中采用的發(fā)酵劑為含有的乳酸菌的發(fā)酵劑，該乳酸菌為含有 乳稈菌屬、鏈球菌屬任一或其組合的菌屬的乳酸菌。
在本發(fā)明的檢測方法中，用于檢測乳中抗生素的酶解產物，所述的抗生素包 括e-內酰胺類(青霉素類和頭孢類)，四環(huán)素類(四環(huán)素、金霉素、土霉素等)， 氨基糖苷類(慶大霉素和鏈霉素等)，氯霉素類，大環(huán)內酯類(紅霉素和螺旋 霉素等)。
本發(fā)明的方法可以檢測的酶解產物的濃度下限為10ppb。
發(fā)明方法的原理是基于抗生素及水解殘留物對微生物具有抑制作用，并利用 乳酸菌對乳的發(fā)酵特性，選取特殊的乳酸菌對樣品進行發(fā)酵處理，跟蹤發(fā)酵過 程，根據(jù)其發(fā)酵特性來判斷樣品中有無抗生素的水解殘留物。該檢測判定方法 經濟、簡便、快捷、準確，適合乳品企業(yè)的原料奶質量安全控制和工業(yè)原料品 質控制及產品安全控制。實用性非常強。
本發(fā)明的大量的篩選實驗其中較有代表性和說服力的實驗數(shù)據(jù)如下，均以業(yè) 內普遍使用的青霉素類抗生素類為例
l.發(fā)酵劑產酸能力的比較，選擇最佳發(fā)酵劑
選擇目前國內、外市場上發(fā)酵快、產酸能力強的乳酸菌作為發(fā)酵劑，共選擇 六種不同的市售商品，其區(qū)別在于含有不同種類和不同組合的菌屬，作為實驗 用乳酸菌發(fā)酵劑，通過對比一定時間內產酸量的多少，選出一定時間內產酸能 力強的發(fā)酵劑。
方法
①滅菌乳的制備取無抗奶于三角瓶中，114。C滅菌15min。冷卻到45。C備用。
②樣品的制備
菌粉的添加方法
稱取0.04g菌粉，溶解于10ml滅菌乳中，充分混勻，取2.5mL接入250mL滅菌奶中。
按上述菌粉的添加方法向六個裝有滅菌奶的三角瓶中依次接入所選發(fā)酵劑。 之后于43。C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別于Omin、 50min、 110min、 170min測試樣品 的pH值，從而確定不同發(fā)酵劑的產酸能力。
對比后可以看出代號為YF-1和G-061的發(fā)酵劑在1小時后表現(xiàn)出最強的和 較強的產酸能力；YF-1和G-061均含有嗜熱鏈球菌(5^e; tococms決"mo尸W/w^、 保加利亞乳桿菌(Xa"o6a"7/w ^/gafr/cmj至少一種。
2.產酸能力強的發(fā)酵劑對抗生素水解產物的感受性試驗
根據(jù)試驗目的，應選擇產酸能力強、且對抗生素水解產物敏感的發(fā)酵劑。即 使用上一實驗選出的兩種產酸最強YF-1與G-061,進行感受性實驗。因為本方 法發(fā)明的意圖就是要開發(fā)快速的檢測方法，所以要選擇在最短的時間內表現(xiàn)出 最強的產酸性能的發(fā)酵劑。
方法
① 滅菌乳的制備
取無抗奶于三角瓶中，114。C滅菌15min。冷卻到45。C備用。
② 青霉噻唑酸鉀稀釋液的配制
精密稱取2.5g青霉素鉀于100mL容量瓶中，加入0.5mL (過量)抗生素分 解劑后用去離子水定容后搖勻，室溫放置4個小時，標記為稀釋液①。取10ml稀釋液①于100mL容量瓶中，定容后搖勻，標記為稀釋液②。取lmL稀釋液② 于100mL容量瓶中，用去離子水定容后搖勻，標記為稀釋液③，其濃度為 25mg/L。
③樣品的制備 菌粉的添加方法-
稱取0.04g菌粉，溶解于10mL滅菌乳中，充分混勻，取2.5mL接入250mL
滅菌奶中。
陰性樣品的制備
將YF-1與G-061及對照(以L-812為代號)三種發(fā)酵劑按上述菌粉的添加 方法分別接入到滅菌乳中，作為陰性對照。 陽性樣品的制備
將YF-1與G-061及對照(以L-812為代號)三種發(fā)酵劑按上述方法分別接 入到滅菌乳中，再分別向其中添加lml稀釋液③。三個樣品中的青霉噻唑酸鉀 濃度均為10(^g/L。分別標記。由得出的數(shù)據(jù)曲線可以看出，YF-1對抗生素水 解產物的感受性強于G-061和L812。該YF-1為同時含有嗜熱鏈球菌 f5Vre/ fococcM51決em70/ /zr7i^)禾口保力口禾!j亞孚L桿菌(Iacfo6acz7/ws 6w/garz'cw"的發(fā)酵 劑。
3.最佳接種量試驗
分別向滅菌奶中添加接種量為標準推薦量(0.2U/L)的1倍、2倍、3倍的YF-1， 用對照樣與標準推薦量試驗組，進行發(fā)酵試驗(43'C下發(fā)酵1小時)，以確定最 快速發(fā)酵的發(fā)酵劑使用劑量。
方法(1) 滅菌乳的制備
取無抗奶于三角瓶中，114。C滅菌15min。冷卻到45。C備用。
(2) 青霉噻唑酸鉀稀釋液的配制 精密稱取1.00g青霉素鉀于100mL容量瓶中，加入0.5mL抗生素分解劑后用
去離子水定容后搖勻，室溫放置4小時后標記為稀釋液①。取10mL稀釋液①于 100mL容量瓶中，定容后搖勻，標記為稀釋液②。取lmL稀釋液②于100ml容量 瓶中，用去離子水定容后搖勻，標記為稀釋液③。取lmL稀釋液③于10mL容量 瓶中，用去離子水定容后搖勻，標記為稀釋液④。
精密稱取2.50g青霉素鉀于100mL容量瓶中，加入0.5mL抗生素分解劑后用 去離子水定容后搖勻，室溫放置4小時后標記為稀釋液⑤。取10mL稀釋液⑤于 100mL容量瓶中，定容后搖勻，標記為稀釋液⑥。取lmL稀釋液⑥于100ml容量 瓶中，用去離子水定容后搖勻，標記為稀釋液⑦，其濃度為25mg/L。
(3) 樣品的制備 陰性對照樣的制備
分別稱取其他發(fā)酵劑0.04g(0.2U)、 0.08g (0.4U)、 0.12g (0.6U)溶解于10mL 滅菌乳中，充分混勻，取2.5mL接入250mL滅菌奶中。由得出的數(shù)據(jù)曲線可以看 出，YF-1發(fā)酵劑在0.6U/L的添加量時發(fā)酵速度最快。 4.方法有效性的驗證
樣品如下表所示0-6為自配濃度從10ppm至100ppb的添加抗生素水解殘 留物樣品，B為對照空白組。
樣品用95'C， 10min殺菌后，接種YF-1發(fā)酵劑，測定并記錄初始的pH值。置 入43X:恒溫培養(yǎng)箱發(fā)酵60min。起始pH值為6.67。0123456B
1000ppm50ppm10ppmOppmlppm100ppb10ppb0
6.556.536.516.506.496.486.476.44
實驗結果接菌種量為0.6U/L最佳，本領域技術人員均可以推測并且實 驗證明(本發(fā)明已經有實驗數(shù)據(jù)來證實)0.55-0.65U/L，以及0.4-0.7U/L、甚 至0.2-0.8U/L也可以實現(xiàn)本發(fā)明。 1)發(fā)酵前后pH、值的變化
6.67-6.55=0.12 6.67-6.53=0.14 6,67-6.51=0.16 6.67-6.50=0.17 6.67-6.49=0.18 6,67-6.48=0.19 6.67-6.47=0.20 B. 6.67-6.44=0.23
2)對照樣pH變化量與待檢樣pH變化量的差值:
0) B-0=0.23-0.12=0.11
1) B-l= 0.23-0.14=0.09
2) B-2=0.23-0.16=0.07
3) B-3=0.23-0.17=0.06
4) B-4=0.23-0.18=0.04
5) B-5=0.23-0.19=0.04
6) B—6=0.23—0.20=0.033)判定結果0-6號樣中均含有抗生素水解殘留物且最小檢測濃度為10ppb。
上述本發(fā)明的檢測方法可以定性乳或乳制品中是否含有殘留的抗生素酶解 殘留物，對原料乳和乳制品的品質安全檢測提供可靠的依據(jù)，對于乳品企業(yè)控 制原奶質量提供強有力的檢測手段和方法，使當前不法奶站對原奶做手腳等現(xiàn) 象得到完全控制，對于出口奶粉的安全性檢測提供有力的方法支持。該方法具 有樣品前處理簡單、快速、定性準確、重復性好的特點，方法簡便，對操作無 特殊要求，易于推廣。
具體實施例方式
以下結合實施例詳細說明本發(fā)明，但不限定本發(fā)明的實施范圍。 本發(fā)明用于檢測乳中抗生素的酶解產物，所述的抗生素包括p-內酰胺類(青 霉素類和頭孢類)，四環(huán)素類(四環(huán)素、金霉素、土霉素等)，氨基糖苷類(慶 大霉素和鏈霉素等)，氯霉素類，大環(huán)內酯類(紅霉素和螺旋霉素等)，在本 發(fā)明的下述實施例中，均以業(yè)內普遍使用的青霉素類抗生素類為例。
實施例l:
以牛奶為待測產品。
1. 樣品的處理
取待測的牛奶樣品100ml， 95'C加熱10min; 將殺菌后的樣品冷卻到4CTC-45'C之間備用；
同時設置無抗奶為空白對照樣品，按同樣的上述方法處理待用；
2. 發(fā)酵
在上述制備好的待測的液態(tài)乳制品樣品和空白對照樣品中添加0.6U/L的 YF-1發(fā)酵劑，搖勻，測定發(fā)酵前的初始pH值；所述的YF-1發(fā)酵劑為含有嗜熱鏈球菌f5^re/7tococci^ ^er附o/ /2z7wj」禾口保力口禾IJ亞乳桿菌(Zacto6"c/〃Ms few/gan'ct^」的發(fā) 酵劑，由科漢森(CHRHansen)公司提供。
然后將樣品置入43。C恒溫培養(yǎng)箱，發(fā)酵l小時，取出冷卻，終止發(fā)酵；
3，測定pH值
待測樣品發(fā)酵結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差(pH2)，與空白對照樣品 的發(fā)酵結朿后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差(pH,)， pH2和pH!二者之差^).03時， 即可判定該樣品為"人造無抗乳制品"，即認為待測樣品為人為添加牛奶抗生素 分解劑分解抗生素的乳制品，也就是說，其為曾經使用過抗生素乳制品。
實施例2:
以奶粉為待測產品。
1. 樣品的處理
稱取13g固體或者粉末狀樣品,用去離子水溶解定容至100ml (還原乳)；. 取待測的還原乳樣品100ml， 95。C加熱10min; 將殺菌后的樣品冷卻到4(TC-45。C之間備用； 同時設置無抗奶為空白對照樣品，按同樣的上述方法處理待用；
2. 發(fā)酵
在上述制備好的待測的樣品和空白對照樣品中添加0.6U/L的含有嗜熱鏈球 菌(S^pfococ"/5f/ emo; Mw)的發(fā)酵劑，搖勻，測定發(fā)酵前的初始pH值； 然后將樣品置入43。C恒溫培養(yǎng)箱，發(fā)酵l小時，取出冷卻，終止發(fā)酵；
3. 測定pH值
待測樣品發(fā)酵結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差(pH2)，與空白對照樣品 的發(fā)酵結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差(pH。 ， pH2和p!^二者之差^).03時，即可判定該樣品為人為添加牛奶抗生素分解劑分解抗生素的乳制品，也就是說， 其為曾經使用過抗生素乳制品。 實施例3:
以牛奶為待測產品。
1. 樣品的處理
取待測的牛奶樣品100ml， 95'C加熱10min; 將殺菌后的樣品冷卻到40'C-45'C之間備用； 同時設置無抗奶為空白對照樣品，按同樣的上述方法處理待用；
2. 發(fā)酵
在上述制備好的待測的樣品和空白對照樣品中添加0.6U/L的含有保加利亞 乳桿菌(LactoZ^"7/^6"/g^7'c—的發(fā)酵劑，搖勻，測定發(fā)酵前的初始pH值； 然后將樣品置入43。C恒溫培養(yǎng)箱，發(fā)酵l小時，取出冷卻，終止發(fā)酵；
3. 測定pH值
待測樣品發(fā)酵結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差(pH2)，與空白對照樣 品的發(fā)酵結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差(pH。 ， pH2和pH,二者之差^).03 時，即可判定該樣品為人為添加牛奶抗生素分解劑分解抗生素的乳制品，也就 是說，其為曾經使用過抗生素乳制品。
實施例1的同時含有嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)和保加利亞乳桿 菌(Lactobacillus bulgaricus)的發(fā)酵劑對抗生素水解產物的感受性強于實施例2和 3所采用的發(fā)酵劑。
實驗證明，無論是液態(tài)奶還是固態(tài)奶(例如奶粉、奶酪或者奶片)，只要 曾經加入過抗生素并且試圖用酶解的方式掩蓋抗生素的存在，即使酶解產物的量很小(痕量)，采用本發(fā)明的方法也完全可以檢測出乳和乳制品中是否添加 過抗生素，從源頭上確保了乳和乳制品及其進一步的加工產品的質量安全。
權利要求
1.一種殘留的抗生素水解產物的檢測方法，其特征在于，該方法包括將待測的乳制品和作為空白對照的無抗奶樣品殺菌、冷卻后加發(fā)酵劑，加入的量為0.2-0.8U/L，測定其起始的發(fā)酵液pH值，然后在40-45℃下恒溫培養(yǎng)1小時，測定發(fā)酵液的pH值，計算樣品發(fā)酵前后pH值的變化與無抗奶對照樣發(fā)酵前后的變化的差值。
2. 如權利要求1所述的檢測方法，其中，所述的方法中采用的乳制品包括液 態(tài)乳制品和固態(tài)乳制品。
3. 如權利要求2所述的檢測方法，其中，所述的方法中采用的液態(tài)乳制品包括液態(tài)的原奶和還原奶，固態(tài)乳制品包括奶粉。
4. 如權利要求l所述的檢測方法，其中，所述的方法中采用的發(fā)酵劑為含有 乳酸菌的發(fā)酵劑。
5. 如權利要求4所述的檢測方法，其中，所述的方法中采用的發(fā)酵劑中含有 的乳酸菌為乳稈菌屬、鏈球菌屬任一或其組合的菌屬的乳酸菌。
6. 如權利要求4所述的檢測方法，其中，所述的鏈球菌屬的乳酸菌為嗜熱鏈 球菌，乳稈菌屬的乳酸菌為保加利亞乳桿菌。
7. 如權利要求l所述的檢測方法，其中，所述的方法中所加入的發(fā)酵劑的量 為0.4-0.7U/L;該U為菌的活力單位，該L為待測的乳制品或空白對照樣品的容積 單位。
8. 如權利要求1所述的檢測方法，其中，該方法包括 (1).樣品的處理取待測的液態(tài)乳制品樣品100ml， 95。C以上加熱10min; 將殺菌后的樣品冷卻到40'C-45。C之間備用；若樣品為奶粉類固體或粉狀樣品時，稱取10-15g固體或者粉末狀樣品，用 去離子水溶解定容至100ml;同時設置無抗奶為空白對照樣品，按同樣的上述方法處理待用；(2) .發(fā)酵在上述制備好的待測的液態(tài)乳制品樣品和空白對照樣品中添加發(fā)酵劑，搖勻，測定發(fā)酵前的初始pH值；然后將樣品置入43。C恒溫培養(yǎng)箱，發(fā)酵，取出冷卻；(3) .測定pH值待測樣品發(fā)酵結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差，與空白對照樣品的發(fā)酵 結束后的pH值與發(fā)酵初始的pH之差，以二者之差是否大于0.03來判定該樣品是否為曾經使用過抗生素的乳制品。
9. 如權利要求8所述的檢測方法，其中，所述的方法步驟(2)中采用的發(fā)酵劑為含有的乳酸菌的發(fā)酵劑，該乳酸菌為含有乳稈菌屬、乳酸鏈球菌屬任一 或其組合的菌屬的乳酸菌。
10. 如權利要求1所述的檢測方法，其中，該殘留的抗生素水解產物包括|3-內酰胺類、四環(huán)素類、氨基糖苷類、氯霉素類和/或大環(huán)內酯類。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種殘留的抗生素水解產物的檢測方法，其特征在于，該方法包括將待測的乳制品和空白對照無抗奶樣品經殺菌、冷卻后加入發(fā)酵劑，測定其起始的發(fā)酵液pH值，然后在40-45℃下保溫1小時，測定發(fā)酵液的pH值，計算發(fā)酵前后pH值的變化與無抗奶對照樣變化值的差值，差值大于等于0.3時判定為陽性樣品；該發(fā)明可以檢測出的酶解產物的最低濃度是10ppb，可以靈敏準確地檢測乳制品中抗生素酶解殘留物。
文檔編號C12Q1/02GK101307349SQ20081013181
公開日2008年11月19日 申請日期2008年6月24日 優(yōu)先權日2008年6月24日
發(fā)明者穎 安, 張志一 申請人:內蒙古伊利實業(yè)集團股份有限公司