專利名稱：：雜交瘤、抗人膀胱癌的單抗和導(dǎo)向藥物及膀胱癌診斷試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種產(chǎn)生抗人膀胱癌單克隆抗體的雜交瘤DTB、其用途及制備方法，抗人膀胱癌的單克隆抗體DTB和導(dǎo)向藥物及膀胱癌免疫診斷試劑，以及所述導(dǎo)向藥物的制備方法。
背景技術(shù)：
：膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的腫瘤。盡管目前采用多種措施進行綜合治療，但仍有40%-70%的患者要發(fā)生一次或多次復(fù)發(fā)，10%-15%的患者發(fā)展成更高級別的腫瘤或發(fā)生轉(zhuǎn)移，同時這些治療方法還有明顯的毒副作用。膀胱癌在腫瘤切除后的預(yù)防復(fù)發(fā)是臨床的重要課題。目前用于膀胱灌注預(yù)防復(fù)發(fā)的藥物主要分以下幾類(l)抗腫瘤化療藥物，如阿霉素、絲裂霉素C、喜樹堿類等；(2)免疫增強劑，以卡介苗(BCG)為典型代表。(3)細胞因子，如干擾素、白細胞介素-2。以上幾類藥物可以單獨使用或聯(lián)合使用，雖在降低膀胱癌術(shù)后復(fù)發(fā)率上取得一些效果，但因特異性差、腫瘤多耐藥性(MDR)等問題的存在，總體療效并不理想，高達40%-70%的患者要發(fā)生一次或多次復(fù)發(fā)，10%-15%的患者發(fā)展成更高級別的腫瘤或發(fā)生轉(zhuǎn)移。且以上各類藥物分子量小，不但可非特異性地作用于全膀胱及尿道，還可經(jīng)膀胱及尿道粘膜吸收，因而容易產(chǎn)生局部及全身的毒副作用。以療效較為肯定的絲裂霉素C及卡介苗為例使用卡介苗的患者90。/。有BCG膀胱炎，其它的副作用有血尿、皮滲、發(fā)熱、關(guān)節(jié)炎、附睪炎、尿道狹窄等，還有少見而嚴重的肝炎及肺炎、致命性敗血癥等。絲裂霉素C的副作用相對較少，但仍有5%~25%的化學(xué)性膀胱炎、5%~15%的過敏性反應(yīng)，還可見尿道狹窄、骨髓抑制、膀胱壁鈣化等副作用。導(dǎo)向藥物是具有導(dǎo)向能力的分子(如單克隆抗體)和具有活性的效應(yīng)分子(如毒素、藥物、放射性核素等)偶聯(lián)而成的一種具有特異性識別、殺傷或顯像的雜交分子。膀胱癌是一種人體腔內(nèi)腫瘤，相當(dāng)于一個人體的"肉試管"，而導(dǎo)向藥物在體外對靶細胞具有高特異和強殺傷作用。尋找一種療效好、副作用少的新的抗人膀胱癌的導(dǎo)向藥物，在膀胱癌的治療上具有重要意義。在膀胱腫瘤的篩查中，膀胱癌的早期發(fā)現(xiàn)和正確的預(yù)后估計對臨床治療顯得極為重要。近年新用于臨床的分子標記，如核基質(zhì)蛋白、膀胱腫瘤抗原和衛(wèi)星不穩(wěn)定性等，也同樣受限于靈敏度和特異性低的不足。尿脫落細胞學(xué)分析和膀胱鏡檢查仍然是膀胱癌診斷和監(jiān)測的金標準。所以，尋求有效、便利的膀胱癌的診斷方法是非常必要的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題旨在克服上述已有技術(shù)的不足，提供了一種雜交瘤，這種雜交瘤能夠產(chǎn)生高效價的抗人膀胱癌的單抗。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種產(chǎn)生抗人膀胱癌單克隆抗體的雜交瘤DTB,其特征在于所述雜交瘤由以人膀胱癌細胞系E-J細胞免疫的小鼠的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合而得。進一步地，本發(fā)明涉及的雜交瘤由下述方法制備而得以人膀胱癌細胞系E-J細胞免疫小鼠，將致敏的小鼠B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，用HAT培養(yǎng)基進行選4奪性培養(yǎng)，用ELISA方法篩選陽性克隆后，用有限稀釋法進行克隆，經(jīng)過2-3輪克隆化培養(yǎng)，獲得能夠產(chǎn)生抗人膀胱癌單克隆抗體的雜交瘤細胞。本發(fā)明的雜交瘤與已有技術(shù)相比具有以下積極效果能夠產(chǎn)生高效價的抗人膀胱癌的單抗DTB,并且分泌穩(wěn)定。本發(fā)明還涉及所述雜交瘤DTB用于制備抗人膀胱癌單克隆抗體DTB的用途。本發(fā)明還涉及一種產(chǎn)生抗人膀胱癌單克隆抗體的雜交瘤的制備方法，所述制備方法包括下述步驟以人膀胱癌細胞系E-J細胞免疫小鼠，將致敏的小鼠B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，用HAT培養(yǎng)基進行選擇性培養(yǎng)，用ELISA方法篩選陽性克隆后，用有限稀釋法進行克隆，經(jīng)過2-3輪克隆化培養(yǎng)，獲得能夠產(chǎn)生抗人膀胱癌單克隆抗體的雜交瘤細胞。本發(fā)明的雜交瘤的制備方法與已有技術(shù)相比簡單易操作。本發(fā)明還涉及一種單克隆抗體DTB,所述單克隆抗體是由上述的雜交瘤所產(chǎn)生。本發(fā)明的單克隆抗體與已有技術(shù)相比具有以下積極效果免疫組織化學(xué)和免疫熒光法證明，該抗體DTB與人膀胱癌組織及膀胱癌細胞E-J呈強陽性反應(yīng)，而與人正常膀胱組織和其它非膀胱癌細胞無交叉反應(yīng)，表明抗膀胱癌單克隆抗體DTB特異性強。本發(fā)明還涉及一種抗人膀胱癌的導(dǎo)向藥物，所述導(dǎo)向藥物的抗體部分是上述抗人膀胱癌的單克隆抗體。進一步地，所述導(dǎo)向藥物由上述的抗人膀胱癌的單克隆抗體和蓖麻毒素A鏈連接而成。本發(fā)明的導(dǎo)向藥物與已有技術(shù)相比具有以下積極效果(1)殺傷腫瘤的作用強，不會產(chǎn)生耐藥性，預(yù)防術(shù)后復(fù)發(fā)的效果明顯優(yōu)于目前常規(guī)的治療方法，對一些原發(fā)肺瘤可以有效地控制其生長。(2)特異性好，避免了機體其它正常組織非特異攝取所致的損傷和蓖麻毒素B鏈的非特異性所帶來的毒副作用。(3)不進入血液，可避免血清中的人抗鼠抗體(HAMA)以及抗蓖麻毒素A鏈抗體的產(chǎn)生。(4)局部給藥，避免了血液的稀釋。對那些由于種種原因?qū)拱┧幬锊幻舾械膹?fù)發(fā)患者，通過加大藥物劑量、調(diào)整用藥頻率，可獲得非常明顯的治療效果。體外細胞殺傷實驗表明，DTB-RA具有很強的特異殺傷活性，其對人膀胱癌細胞E-J的半抑制濃度(IC5Q)為1.0x10—"M，而對非膀胱癌細胞(人直腸癌細胞Lovo)的半抑制濃度為1.2xlO—9M。本發(fā)明還涉及一種制備所述導(dǎo)向藥物的方法，所述制備方法包括下述步驟完整的蓖麻毒素經(jīng)還原及親和層析，分離純化得到具有酶活性蓖麻毒素A鏈(RA)。蓖麻毒素A鏈與摩爾比過量的交聯(lián)劑SPDP反應(yīng)，透析。DTB單抗與摩爾比過量的交聯(lián)劑SPDP反應(yīng)，攪拌，透析。分別將透析好的蓖麻毒素A鏈與DTB單抗以等摩爾比例混合，攪拌，過G-100凝膠過濾柱。上樣后收集的第一洗脫峰即為導(dǎo)向藥物DTB-RA,將DTB-RA過濾除菌，凍存。本發(fā)明的導(dǎo)向藥物的制備方法與已有技術(shù)相比筒單易操作。本發(fā)明還涉及一種膀胱癌免疫診斷試劑，所述診斷試劑由包被在酶標板上的人膀胱癌細胞系E-J細胞裂解液和抗人膀胱癌單克隆抗體DTB組成，采用竟爭ELISA法檢測尿脫落細胞中的膀胱癌抗原。本發(fā)明的膀胱癌免疫"^斷試劑與已有技術(shù)相比具有以下積極效果(1)非損傷性，直接檢測尿脫落細胞，避免了膀胱鏡檢查給病人帶來的不便與痛苦。(2)靈敏度達到了86%，特異性達到了92%，遠高于目前的膀胱腫瘤標記物(如核基質(zhì)蛋白、細胞角蛋白、透明質(zhì)酸等)的檢測和尿脫落細胞的病理學(xué)檢查。(3)特異性強、靈敏度高，采用竟爭ELISA法檢測細胞中的膀敏度較低的缺點。(4)方便快捷，適合于早期膀胱癌患者的篩查和腫瘤復(fù)發(fā)的沖企測。本發(fā)明提供的抗人膀胱癌導(dǎo)向藥物及其膀胱癌免疫診斷試劑，為癌癥病人的診斷、治療、預(yù)后和監(jiān)測提供了有效的途徑。圖1表示本發(fā)明涉及的DTB單抗，按常規(guī)方法對膀胱癌細胞E-J進行免疫熒光的400倍照片；圖2表示本發(fā)明涉及的DTB單抗，按常規(guī)方法對其它細胞進行免疫熒光的400倍照片；圖3表示本發(fā)明涉及的導(dǎo)向藥物DTB-RA鑒定的吸光光度值。保藏說明保藏日期2008年3月5曰保藏單位全稱中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏單位簡稱CGMCC保藏單位地址北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院農(nóng)i生物研究所，100101分類命名抗人膀胱癌單克隆抗體雜交瘤細胞株保藏編號CGMCCNo.2393具體實施例方式參照附圖，將詳細敘述本發(fā)明的具體實施方式。本發(fā)明涉及一種產(chǎn)生抗人膀胱癌單克隆抗體的雜交瘤細胞抹DTB，它能夠產(chǎn)生高效價的抗人膀胱癌的單抗DTB，并且分泌穩(wěn)定。實施例l:制備雜交瘤細胞抹材料人膀胱癌細胞系E-J細胞(北京北方偉業(yè)發(fā)展有卩艮公司)Balb/C小鼠(北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司)小鼠骨髓瘤細胞Sp2/0(ATCCCRL-1772)方法1)免疫以人膀胱癌細胞系E-J細胞免疫Balb/C小鼠，以1x107個細胞/0.5mlPBS的劑量進行腹腔注射。2周后對小鼠進行再次免疫，注射體積和方法不變。待小鼠血清效〗介達到要求后準備進行細胞融合，融合前三天對小鼠進行加強免疫。在免疫小鼠的同時準備小鼠骨髓瘤細胞Sp2/0(ATCCCRL-1772)。2)細胞融合將致敏的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞按照下述方法進行細胞融合(1)取對數(shù)生長的骨髓瘤細胞Sp2/0，1000rpm離心5分鐘，棄上清，用不完全培養(yǎng)液混懸細胞后計數(shù)，取所需的細胞數(shù)，用不完全培養(yǎng)液洗滌2次。同時制備免疫脾細胞懸液，用不完全培養(yǎng)液洗滌2次。(2)將骨髓瘤細胞與脾細胞按1:10的比例混合在一起，用不完全培養(yǎng)液洗1次，1200rpm，8分4中。(3)棄上清，用滴管吸凈殘留液體，輕輕彈擊離心管底，使細胞沉淀略加松動，在室溫下融合①30秒內(nèi)加入預(yù)熱的lml45%PEG(Merek公司)含5%DMSO(Sigma公司)，邊加邊攪拌，作用90秒鐘。②加預(yù)熱的不完全培養(yǎng)液，終止PEG作用，每隔2分鐘分別加入lml,2ml,3ml，4ml，5ml和10ml。(4)離心，800rpm，6分鐘，棄上清，用含10%胎牛血清的RPMI-1640(GIBCO公司)輕輕混懸。(5)將融合后細胞懸液加入含有飼養(yǎng)細胞的96孔板，100jal/孔，37℃、5%C02孵箱培養(yǎng)。)，用HAT培養(yǎng)基進行選擇性培養(yǎng)(以小鼠腹腔巨喧細月包為飼養(yǎng)細"包)。3)4企測用ELISA方法檢測雜交瘤細胞培養(yǎng)上清以E-J細胞(105個/ml)包被96孔板，每孔100pl，37。C培養(yǎng)過夜。細胞貼壁后，加4%多聚曱醛室溫固定IO分鐘，洗滌3次，加待檢上清lOOul,37℃孵育1小時。洗滌3次，加酶標二抗(抗小鼠IgG-HRP),37℃孵育1小時。洗滌3次，加底物顯色劑50pl，室溫靜置5分鐘，加終止液50μl。結(jié)果用酶標儀測定波長450nm的OD值，OD值高于陰性對照2倍以上者可-見為陽性。4)細胞克隆化培養(yǎng)將選出的陽性雜交瘤細胞克隆化培養(yǎng)(有限稀釋法，以小鼠腹腔巨噬細胞為飼養(yǎng)細胞)。經(jīng)過2-3輪克隆化培養(yǎng)，獲得穩(wěn)定的能夠產(chǎn)生高效價單抗的雜交瘤細胞克隆。將雜交瘤細胞克隆擴大培養(yǎng)，并凍存保種。本發(fā)明中的一種陽性雜交瘤細胞為抗人膀胱癌單克隆抗體雜交瘤細胞抹，該雜交瘤細胞系于2008年3月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC,中國，北京)，保藏號為CGMCCNo.2393。實施例2:DTB單克隆抗體的制備和純化將上述雜交瘤細胞DTB接種至小鼠腹腔，制備腹水，再從腹水中提取單抗。單抗DTB的純化采用ProteinG親和層析法。首先制備ProteinG親和層析柱，用PBS平衡柱子后，取含DTB單抗的腹水過柱，然后用PBS洗柱子，至OD值接近于零，以0.2M的甘氨酸-HC1溶液(pH2.8)洗脫，收集洗脫液，測定各收集管的OD值，保留峰值區(qū)的洗脫液，洗脫液經(jīng)透析濃縮后用于制備免疫偶聯(lián)物。實施例3:DTB單克隆抗體的性質(zhì)鑒定按常規(guī)方法對人膀胱癌組織切片進行免疫組化染色，結(jié)果如圖1、2所示。結(jié)果表明，人膀胱癌組織經(jīng)DTB單抗、二抗及底物染色后呈陽性反應(yīng)，而人正常膀胱組織經(jīng)DTB單抗、二抗及底物染色后呈陰性反應(yīng)。用DTB單抗，按常規(guī)方法對膀胱癌細胞E-J和其它細胞進行免疫熒光。結(jié)果如圖1、2所示。結(jié)果表明，DTB單抗與E-J細胞呈強陽性反應(yīng)，與其它非膀胱癌細胞無交叉反應(yīng)。表1DTB單抗與人細胞系的反應(yīng)性<table><row><column>細胞系</column><column>DTB單抗</column></row><table><table><row><column>E-J</column><column>+++</column></row><row><column></column><column>293T</column><column>—</column></row><row><column></column><column>HepG2</column><column>—</column></row><row><column></column><column>Jurkat</column><column>—</column></row><row><column></column><column>K562</column><column>—</column></row><row><column></column><column>Lovo</column><column>—</column></row><row><column></column><column>MCF-7</column><column>—</column></row><table>實施例4:抗人膀胱癌的導(dǎo)向藥物DTB-RA的制備免疫組織化學(xué)和免疫熒光法證明，DTB抗體與人膀胱癌組織及膀胱癌細胞E-J呈強陽性反應(yīng)，而與人正常膀胱組織和其它非膀胱癌細胞無交叉反應(yīng)。表明抗膀胱癌單克隆抗體DTB特異性強，是理想的導(dǎo)向載體。蓖麻毒素A鏈(RA)是由完整的蓖麻毒素經(jīng)還原及親和層析分離純化得到具有酶活性A鏈。蓖麻毒素A鏈能直接滅活真核生物細胞核糖體大亞基中的28SrRNA,從而阻斷蛋白質(zhì)合成，導(dǎo)致細胞死亡?？谷税螂装?dǎo)向藥物DTB-RA是由抗人膀胱癌單克隆抗體DTB與蓖麻毒素A鏈(RA),通過異型雙功能交聯(lián)劑SPDP化學(xué)偶聯(lián)制備而成。方法1)蓖麻毒素的制備(1)蓖麻籽去殼，搗碎，研磨；用乙醚脫脂后，加入的醋酸水溶液溶解沉淀，用Tris-HCl(0.1M/pH8.4)透析，即為粗毒；(2)制備Sepharose-6B親和層析柱，用Tris-HCl平衡柱子后，取粗毒過柱，然后用用Tris-HCl洗脫雜蛋白，至OD值接近于零，用含0.2M半乳糖的Tris-HCl緩沖液洗脫毒素蛋白，收集洗脫液，測定各收集管的OD值，保留峰值區(qū)的洗脫液。)2)制備蓖麻毒素A鏈完整的蓖麻毒素經(jīng)還原及親和層析完整的蓖麻毒素與Sepharose-6B柱孵育后，用200mM的DTT洗脫，收集洗脫液，測定各收集管的OD值，保留峰值區(qū)的洗脫液，洗脫液經(jīng)透析濃縮后用于制備免疫偶聯(lián)物，分離純化得到具有酶活性蓖麻毒素A鏈(RA)。3)交聯(lián)蓖麻毒素A鏈與摩爾比10倍過量的交聯(lián)劑SPDP反應(yīng)，用醋酸緩沖液(0.02M,pH4.5)透析過夜，加入終濃度為50mM的二碌,蘇糖醇(DTT)，室溫攪拌30分鐘，用PBS透析過夜。DTB單抗與摩爾比10倍過量的交聯(lián)劑SPDP反應(yīng)，室溫攪拌30分鐘，用PBS透析過夜。分別將透析好的蓖麻毒素A鏈與DTB單抗以等摩爾比例混合，室溫攪拌過夜，加樣于G-100凝膠過濾柱上。上樣后收集各洗脫峰，第一峰即為導(dǎo)向藥物DTB-RA,第二峰為DTB抗體，第三峰為蓖麻毒素A鏈(RA)，將DTB-RA過濾除菌，-20°C凍存。實施例5:抗人膀胱癌的導(dǎo)向藥物DTB-RA的鑒定采用細胞殺傷結(jié)晶紫染色法分別將人膀胱癌細胞E-J和人直腸癌Lovo細胞(中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細胞中心)接種于96孔板，細胞密度為1()S個/ml，37。C培養(yǎng)過夜。在起始孔內(nèi)加入終濃度為1(T6M的導(dǎo)向藥物DTB-RA,混勻，依次進行10倍梯度稀釋。將96孔板放入培養(yǎng)箱，37°C、5%C02,培養(yǎng)24-48小時；棄去上清，每孔加入50)il染色液(50mg結(jié)晶紫加入20ml乙醇溶解，用蒸餾水定溶至100ml結(jié)晶紫)，室溫放置30分鐘；流水沖去染色液，吸干殘留水分，每孔加入lOOpl脫色液，室溫放置3-5分鐘；測定波長570nm，結(jié)果如圖3所示，對E-J細胞的半抑制濃度(IC5Q)為1.0x10—UM,而對Lovo細胞的半抑制濃度為1.2xl(T9M。實施例6:膀胱癌免疫診斷試劑的制備(1)膀胱癌細胞系E-J細胞裂解液酶標板的制備將107個新鮮培養(yǎng)的膀胱癌細胞E-J用1ml三去污裂解液(50mMTris-HCl,pH8.0;150mMNaCl;0.02%疊氮鈉；0.1%SDS;100[ig/mlPMSF;l(ig/mlAprotinin;l%NP-40;0.5%脫氧膽酸鈉)裂解，提取總蛋白，用pH7.4的0.1M磷酸鹽緩沖液稀釋至10ml,按100μl/孔加入聚苯乙烯微孔板中，4℃包被過夜，甩干，按200μl/孔加入含有1%明膠的0.1MpH7.4的磷酸鹽緩沖液，37℃封閉2小時，洗滌甩干，再加入20%蔗糖磷酸鹽緩沖液室溫保護3小時，置干燥室干燥后，裝入含干燥劑的包裝袋中保存。(2)膀胱癌抗原標準溶液的制備將1(f個新鮮培養(yǎng)的膀胱癌細胞E-J用lml三去污裂解液裂解，提取總蛋白；用稀釋液(0.1MpH7.4的磷酸鹽緩沖液)按1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128倍數(shù)進行梯度稀釋，加入1%BSA和50%甘油，-20℃保存?zhèn)溆?。實施?:膀胱癌免疫i貪斷試劑的應(yīng)用(1)樣品4全測分別收集膀胱癌病人(I期、II期、III期)和健康人各50份新鮮尿液，每份50ml，離心后耳又細胞沉淀，加入100μl三去污裂解液裂解細胞，提取總蛋白，并與lmg/mlDTB單抗等體積混合，室溫反應(yīng)10分鐘；以100μl/孔的體積加樣，同時用膀胱癌抗原標準溶液作對照，37℃孵育1小時；甩去液體，用洗滌液(0.1MpH7.4的磷酸鹽緩沖液，0.05%Tween-20)洗滌5次；甩干，加入辣才艮過氧化物酶標記的羊抗小鼠IgG抗體(Sigma公司)，100μl/孔，37℃孵育1小時；甩去液體，用洗滌液洗滌5次；加入底物(四曱基聯(lián)苯胺，H202)100μl/孔，室溫避光孵育10-20分鐘；加入2MH2S0450μl中止反應(yīng)；在酶標儀上測定OD值(450nm)。(2)結(jié)果分析標準溶液的OD最小值/OD臨界值-0.5,得到OD臨界值-OD最小值x2，根據(jù)OD臨界值，判斷其靈敏度為86%,特異性為92%,符合率為89%。結(jié)果如表2所示。表2膀胱癌免疫診斷試劑與膀胱癌病人和健康人的檢測結(jié)果<table>complextableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>權(quán)利要求1、一種產(chǎn)生抗人膀胱癌單克隆抗體的雜交瘤DTB，其特征在于所述雜交瘤的親本細胞是以人膀胱癌細胞系E-J細胞免疫的小鼠的B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的雜交瘤DTB,其特征在于所述雜交瘤由下述方法制備而得以人膀胱癌細胞系E-J細胞免疫小鼠，將致敏的小鼠B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，用HAT培養(yǎng)基進行選擇性培養(yǎng)，用ELISA方法篩選陽性克隆后，用有限稀釋法進行克隆，經(jīng)過2-3輪克隆化培養(yǎng)，獲得所述能夠產(chǎn)生抗人膀胱癌單克隆抗體的雜交瘤細胞。3、權(quán)利要求1或2所述雜交瘤DTB用于制備抗人膀胱癌單克隆抗體DTB的用途。4、一種制備權(quán)利要求1或2所述雜交瘤的方法，其特征在于所述制備方法包括下述步驟以人膀胱癌細胞系E-J細胞免疫小鼠，將致敏的小鼠B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，用HAT培養(yǎng)基進行選4奪性培養(yǎng)，用ELISA方法篩選陽性克隆后，用有限稀釋法進行克隆，經(jīng)過2-3輪克隆化培養(yǎng)，獲得能夠產(chǎn)生抗人膀胱癌單克隆抗體的雜交瘤細胞。5、一種抗人膀胱癌的單克隆抗體DTB,其特征在于所述單克隆抗體由權(quán)利要求1或2中任一權(quán)利要求所述的雜交瘤所產(chǎn)生。6、一種抗人膀胱癌的導(dǎo)向藥物，其特征在于所述導(dǎo)向藥物的抗體部分是權(quán)利要求5所述的抗人膀胱癌的單克隆抗體DTB。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗人膀胱癌的導(dǎo)向藥物，其特征在于所述導(dǎo)向藥物所述的抗人膀胱癌的單克隆抗體DTB和蓖麻毒素A鏈連接而成。8、一種制備權(quán)利要求7所述的導(dǎo)向藥物的方法，其特征在于所述制備方法包括下述步驟完整的蓖麻毒素經(jīng)還原及親和層析，分離純化得到具有酶活性蓖麻毒素A鏈(RA)。蓖麻毒素A鏈與摩爾比過量的交聯(lián)劑SPDP反應(yīng)，透析。DTB單抗與摩爾比過量的交聯(lián)劑SPDP反應(yīng)，攪拌，透析。分別將透析好的蓖麻毒素A鏈與DTB單抗以等摩爾比例混合，攪拌，過G-100凝膠過濾柱。上樣后收集的第一洗脫峰即為導(dǎo)向藥物DTB-RA,將DTB-RA過濾除菌，凍存。9、一種膀胱癌免疫診斷試劑，其特征在于所述診斷試劑由包被在酶標板上的人膀胱癌細胞系E-J細胞裂解液和抗人膀胱癌單克隆抗體DTB組成，采用竟爭ELISA法檢測尿脫落細胞中的膀胱癌抗原。全文摘要本發(fā)明涉及產(chǎn)生抗人膀胱癌單克隆抗體的雜交瘤，所述雜交瘤的親本細胞是以人膀胱癌細胞系E-J細胞免疫的小鼠的B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞。本發(fā)明還涉及所述雜交瘤的用途及制備方法，由所述雜交瘤所產(chǎn)生的單克隆抗體，抗膀胱癌的導(dǎo)向藥物及膀胱癌免疫診斷試劑，以及所述導(dǎo)向藥物的制備方法。其中，所述導(dǎo)向藥物的抗體部分是所述抗人膀胱癌的單克隆抗體。所述診斷試劑由包被在酶標板上的人膀胱癌細胞系E-J細胞裂解液和抗人膀胱癌單克隆抗體DTB組成，采用競爭ELISA法檢測尿脫落細胞中的膀胱癌抗原。本發(fā)明的抗體特異性強；本發(fā)明的導(dǎo)向藥物殺傷腫瘤的作用強，不會有耐藥性，特異性好；本發(fā)明的診斷試劑具有非損傷性，高靈敏度，高特異性，方便快捷的特點。文檔編號C12N5/20GK101343623SQ20081010013公開日2009年1月14日申請日期2008年5月26日優(yōu)先權(quán)日2008年5月26日發(fā)明者強侯,翀李,剛栗,王德朋申請人:翀李