專利名稱：生殖道支原體檢測試紙條的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生殖道支原體檢測試紙條，特別是生殖道支原體快檢試紙的配 方及其制備方法。其主要成分是蛋白胨、氯酚紅、胰蛋白胨、復合生長因子、酵母浸膏、 馬血清、氯化鈉、混合抗生素、尿素、半胱氨酸鹽酸鹽、精氨酸鹽酸鹽、濾紙條。該快檢試 劑能夠檢測生殖道支原體陽性結果，具有指導臨床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物 也具有重要意義。生殖道尿道炎是由性接觸傳染的一種疾病，解脲支原體是一群大小、結構 復雜程度介于細菌與病毒之間，能在人工培養(yǎng)基上增殖的原核微生物，主要存在人和動物的 腔道黏膜上，解脲支原體與生殖道尿道炎的發(fā)生密切相關，正常人的泌尿道中也可能有支原 體寄生，故認為其致病性類似條件致病菌，其可通過性行為傳播，是生殖道尿道炎的主要病 原菌。臨床常見癥狀為生殖道尿道炎、盆腔炎、前列腺炎、陰道炎、不育不孕癥等，也有少 數(shù)無癥狀攜帶者，是近年來越來越引起臨床重視的病原體之一。該快檢試劑采用優(yōu)質的支原 體基礎培養(yǎng)基，富含髙營養(yǎng)物和其所需的基質(尿素)及特殊的抑菌劑，并添加氯酚紅指示 劑組成，可快速準確地檢測出臨床標本中的支原體。
背景技術：
本發(fā)明的目的在于提供一種生殖道支原體檢測試紙條，引起生殖道尿道炎的支 原體有解脲支原體、人型支原體和生殖支原體。不同的支原體使用不同的培養(yǎng)試劑。包括液 體和固體培養(yǎng)基。檢測解脲支原體和人型支原體最可靠的方法是先接種于液體培養(yǎng)基，待有 生長后(液體顏色發(fā)生改變)，再接種于固體培養(yǎng)基上，72小時后，如無菌落生長可視為陰 性。生殖支原體主要用于液體培養(yǎng)基14天后無生長可視為陰性。檢測方法復雜、時間長、準 確性差。對泌尿生殖道標本支原體進行快速檢測，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基比較.生殖道支原體檢測試 紙條是以布氏肉湯為基礎，并增加小牛血清含量;將傳統(tǒng)培養(yǎng)基中的抑菌劑青霉素改為萬古霉 素、氟康唑與多粘菌素；將解脲培養(yǎng)基中的酚紅指示劑改為氯酚紅.將傳統(tǒng)培養(yǎng)基中的固體
瓊脂粉改為濾紙條；結果生殖道支原體檢測試紙條與其它類試劑相比具備下列特點生殖道 支原體檢測試紙條營養(yǎng)豐富、配制簡單、選擇性強和變色靈敏，與傳統(tǒng)試劑比較，檢出率高， 污染小，臨床應用效果滿意.接種樣本24小時后，即能得到液體篩選增菌，又能達到固體觀 察菌落生長情況，檢測方法簡單、時間短、準確性強
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要點在于選擇合適的組分，并進行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、 冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種生殖道支原體檢測試紙條。
本發(fā)明選擇的培養(yǎng)基配方如下(克/每升蒸餾水)蛋白胨9.0-10;氯酚紅0.05-0.06; 胰蛋白胨2. 5-6. 0;復合生長因子10. 0-20. 0;酵母浸膏2. 0-4. 0;無菌馬血清80-100ml氯 化鈉5.0-6.0;混合抗生素(萬古霉素、氟康唑與多粘菌素)10-15ml; 尿素0.5-0.6;半 胱氨酸鹽酸鹽0. 1-0. 2;精氨酸鹽酸鹽3. 0-4. 0;蒸餾水加至1000， p服.3±0. 3 ，濾紙條吸 附。
快檢試劑中含有蛋白胨、酵母抽提物、馬血清、生長因子等營養(yǎng)物，并加有尿素、精氨 酸底物及酚紅指示劑；當有Uu和Mh生長時，尿素和精氨酸被分解，生成的堿性物質引起pH 值上升，培養(yǎng)基由黃變紅?？鞕z試劑內(nèi)加有混合抗生素，可抑制泌尿生殖道中G+、 G-細菌和
3真菌生長?？鞕z試劑中不加葡萄糖，分別加入精氨酸及尿素，觀察PH變化情況。Mg不能水 解精氨酸及尿素，因此不發(fā)生PH變化。脲原體產(chǎn)生的集落稍大而呈深棕色，故甚易檢出。
解脲支原體和人型支原體將先接種于液體培養(yǎng)基，待有生長后(液體顏色發(fā)生改變)，再 接種于固體培養(yǎng)基上，72小時后，觀察無菌落生長。而生殖道支原體檢測試紙條，是一種快 檢試紙條，將快檢試紙條加入試管再接種液體樣本24小時后，即能得到液體篩選增菌，又能 達到固體觀察菌落生長情況，檢測方法簡單、時間短、準確性強。培養(yǎng)到的微生物需作品種 鑒定，而分離過程中常規(guī)測定的某些非特征，可能提拱線索。由生殖泌尿道分離到的標本， 產(chǎn)生堿性顏色改變而使含精氨酸的基質混濁，則以含人型支原體的可能性最大；在含脲基質 中產(chǎn)生類似改變，則幾可肯定為脲原體。提高了試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性。 本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是
1) 、將蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、氯化鈉、半胱氨酸鹽酸鹽、精氨酸鹽酸鹽按比
例進行加溫、溶解；
2) 、將復合生長因子按比例加熱溶解于蒸餾水中，冷至54。C;
3) 、將溶解的l)混合液加入到溶解的2)溶液中，混合、冷卻后調(diào)PH6. 1-6.3，加氯酚
紅；壓力蒸汽滅菌115。C， 20-30min，冷至50。C;
4) 、在無菌條件下加馬血清、混合抗生素、尿素，混合均勻；
5) 、將4號濾紙制成濾紙條，包裝；壓力蒸汽滅菌115。C， 20-30min，烘干；
6) 、在無菌條件下將濾紙條浸泡液體中，待吸附完全后，無菌條件下烘干；冷藏備用。 生殖道支原體檢測試紙條的使用方法是
1) 、用棉試子取臨床標本，然后洗入液體培養(yǎng)液中；
2) 、將快檢試紙條一半浸入液體培養(yǎng)液中，使菌落蔓爬。
3) 、培養(yǎng)24小時后，抽出快檢試紙條，觀察附著在快檢試紙條上的菌落形態(tài)和液體培養(yǎng)
液的顏色和濁度變化，進行判斷液體培養(yǎng)液澄清透明、變紅；附著在快檢試紙條 上的菌落形態(tài)如"油煎蛋"狀，集落稍大而呈深棕色，為生殖道解脲支原體；反之 為人型支原體和生殖支原體。 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)生殖道支原體檢測試紙條營養(yǎng)豐富、配制簡單；(2)臨床應 用效果滿意，解決了床邊接種的困難，污染??；(3)檢測方法簡單、時間短、選擇性強、變 色靈敏、檢出率高；(4)接種樣本24小時后，即能得到液體篩選增菌，又能達到固體觀察 菌落生長情況，穩(wěn)定性好。(5)可以獲得附著在快檢試紙條上的純種菌落。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明-按照下表所列數(shù)據(jù)(克/每升蒸餾水)及其所述步驟進行配置 配方一
蛋白胨9.0-10.0;氯酚紅0.05-0.06;胰蛋白胨2. 5-6. 0;復合生長因子10.0-20.0; 酵母浸膏2.0-4.0;無菌馬血清80-100ml氯化鈉5.0-6.0;混合抗生素(萬古霉素、氟康唑 與多粘菌素)10-15ml; 尿素0. 5-0. 6;半胱氨酸鹽酸鹽0. 1-0. 2;精氨酸鹽酸鹽3. 0-4. 0; 蒸餾水加至1000， p服.3±0. 3 ，濾紙條吸附。
4配方二
蛋白胨 9.5-10.0; 氯酚紅0.05-0.06; 胰蛋白胨4.5-6.0; 復合生長因子 15.0-20.0;酵母浸膏3.0-4.0;無菌馬血清85-100ml氯化鈉5.5-6.0;混合抗生素(萬古 霉素、氟康唑與多粘菌素)12-15ml; 尿素0.5-0.6;半胱氨酸鹽酸鹽0.1-0.2;精氨酸 鹽酸鹽3.5-4.0;蒸餾水加至1000， p朋.3±0. 3 ，濾紙條吸附。
配方三
蛋白胨9. 0-9. 5;氯酚紅0.05-0.06;胰蛋白胨4. 5-5. 5;復合生長因子10. 0-18. 0; 酵母浸膏2.0-3.0;無菌馬血清80-90ml氯化鈉5.0-5.5;混合抗生素(萬古霉素、氟康唑 與多粘菌素)10-13ml; 尿素0. 5-0. 6;半胱氨酸鹽酸鹽0. 1-0. 2;精氨酸鹽酸鹽3. 0-3. 5; 蒸餾水加至1000, p朋.3±0. 3 ，濾紙條吸附。
權利要求
1、本發(fā)明涉及一種生殖道支原體檢測試紙條，特別是生殖道支原體快檢試紙的配方及其制備方法，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸餾水)蛋白胨9.0-10；氯酚紅0.05-0.06；胰蛋白胨2.5-6.0；復合生長因子10.0-20.0；酵母浸膏2.0-4.0；無菌馬血清80-100ml氯化鈉5.0-6.0；混合抗生素(萬古霉素、氟康唑與多粘菌素)10-15ml；尿素0.5-0.6；半胱氨酸鹽酸鹽0.1-0.2；精氨酸鹽酸鹽3.0-4.0；蒸餾水加至1000，pH6.3±0.3，濾紙條吸附。
2、 一種權利要求1所述生殖道支原體檢測試紙條的制備方法，其特征在于具有如下的步驟1) 、將蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、氯化鈉、半胱氨酸鹽酸鹽、精氨酸鹽酸鹽按比例進行加溫、溶解；2) 、將復合生長因子按比例加熱溶解于蒸餾水中，冷至54'C;3) 、將溶解的l)混合液加入到溶解的2)溶液中，混合、冷卻后調(diào)1-6. 3，加氯酚紅；壓力蒸汽滅菌115。C， 20-30min，冷至5(TC;4) 、在無菌條件下加馬血清、混合抗生素、尿素，混合均勻；5) 、將4號濾紙制成濾紙條，包裝；壓力蒸汽滅菌115。C， 20-30min，烘干；6) 、在無菌條件下將濾紙條浸泡液體中，待吸附完全后，無菌條件下烘干；冷藏備用。
3、 —種權利要求1所述生殖道支原體檢測試紙條的使用方法，其特征在于具有如下的步驟1) 、用棉試子取臨床標本，然后洗入液體培養(yǎng)液中；2) 、將快檢試紙條一半浸入液體培養(yǎng)液中，使菌落蔓爬；3) 、培養(yǎng)24小時后，抽出快檢試紙條，觀察附著在快檢試紙條上的菌落形態(tài)和液體培養(yǎng)液的顏色和濁度變化，進行判斷液體培養(yǎng)液澄清透明、變紅；附著在快檢試紙條上 的菌落形態(tài)如"油煎蛋"狀，集落稍大而呈深棕色，為生殖道解脲支原體；反之為人 型支原體和生殖支原體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生殖道支原體檢測試紙條，特別是生殖道支原體快檢試紙的配方及其制備方法。該快檢試劑能夠檢測生殖道支原體陽性結果，具有指導臨床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)生殖道支原體檢測試紙條營養(yǎng)豐富、配制簡單；(2)臨床應用效果滿意，解決了床邊接種的困難，污染??；(3)檢測方法簡單、時間短、選擇性強、變色靈敏、檢出率高；(4)接種樣本24小時后，既能得到液體篩選增菌，又能達到固體觀察菌落生長情況，穩(wěn)定性好。(5)可以獲得附著在快檢試紙條上的純種菌落。
文檔編號C12Q1/04GK101565730SQ20081009341
公開日2009年10月28日 申請日期2008年4月21日 優(yōu)先權日2008年4月21日
發(fā)明者奕 曲 申請人:奕 曲