專利名稱：用于胃癌檢測(cè)的標(biāo)記物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及癌癥的檢測(cè)。具體而言，本發(fā)明涉及用于癌癥檢測(cè)的遺傳標(biāo)記物和/或蛋白質(zhì)標(biāo)記物的用途，并且更加具體而言涉及到遺傳標(biāo)記物和/或蛋白質(zhì)標(biāo)記物用于胃癌檢測(cè)的用途。
背景技術(shù)：
癌癥的早期檢測(cè)和治療能顯著提高癌癥患者的存活。以胃癌為例，診斷為疾病早期的患者5年存活率為90％，而診斷為疾病晚期的患者5年存活率約為10％。然而，絕大多數(shù)胃癌患者通常處于疾病晚期。因此，開發(fā)胃癌早期診斷方法能夠改善患者的預(yù)后。
在包括體液如血液、尿液、腹膜灌洗液和糞便提取物在內(nèi)的生物標(biāo)本中的特異性癌癥相關(guān)標(biāo)記物的鑒定能提供有價(jià)值的癌癥早期診斷方法，以便早期治療并改善預(yù)后。特異性癌癥標(biāo)記物還能提供用于監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展的方法，從而能跟蹤外科手術(shù)、放射治療和化學(xué)治療的功效。然而，對(duì)于許多主要癌癥，可利用的標(biāo)記物缺乏足夠的敏感性和特異性。例如，用于胃癌的最常用標(biāo)記物ca19-9、ca72-4和癌胚抗原(CEA)僅檢測(cè)到大約15-50％的任何階段的胃腫瘤，對(duì)于疾病早期的檢測(cè)則降至大約2-11％。因此，出現(xiàn)假陰性檢測(cè)的頻率非常高，這導(dǎo)致患者和健康護(hù)理工作者認(rèn)為不存在疾病，而事實(shí)上，患者可能患有嚴(yán)重的需要立即注意的癌癥。而且，使用這些標(biāo)記物可能對(duì)高達(dá)1/3的患有良性胃疾病個(gè)體給出假陽(yáng)性信號(hào)。
發(fā)明簡(jiǎn)述因此，迫切需要更好的檢測(cè)癌癥存在的方法。本發(fā)明方面提供了能夠檢測(cè)早期癌癥和降低假陽(yáng)性和假陰性測(cè)試結(jié)果頻率的方法、成分和裝置。
在某些實(shí)施方案中，可以使用分子分析來(lái)鑒定與非惡性胃組織相比在胃腫瘤組織中過表達(dá)的基因。此分析包括微陣列和定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)方法。癌基因和由那些基因編碼的蛋白質(zhì)在本文中稱作胃腫瘤標(biāo)記物(GTM)。需要理解的是術(shù)語(yǔ)GTM并不要求標(biāo)記物僅僅對(duì)于胃腫瘤是特異的。而是應(yīng)當(dāng)解釋為GTM可以在包括惡性或非惡性腫瘤在內(nèi)的其他類型腫瘤中表達(dá)增加，其中所述腫瘤除此之外包括胃癌、膀胱癌、結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、皮膚癌(例如黑素瘤)、肝癌、食道癌、子宮內(nèi)膜癌和腦癌。無(wú)論如何應(yīng)當(dāng)這樣理解，即術(shù)語(yǔ)GTM不包括在先技術(shù)標(biāo)記物ca19-9、ca72-4和CEA。一些GTM的過表達(dá)足以高度可靠地診斷胃癌，而且在其它情況下，兩種或多種GTM的過表達(dá)能提供胃癌的可靠診斷。
在某些實(shí)施方案中，可以用微陣列方法來(lái)檢測(cè)一種或多種癌相關(guān)基因的過表達(dá)模式。
在其它實(shí)施方案中，可以用定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)來(lái)鑒定腫瘤或其它生物樣品中過表達(dá)標(biāo)記物的存在。
在本文公開的一些GTM檢測(cè)的實(shí)施方案中，GTM在腫瘤細(xì)胞內(nèi)以高度選擇方式過表達(dá)而在非腫瘤細(xì)胞即使表達(dá)也是很少，從而能夠只檢測(cè)一種過表達(dá)的GTM來(lái)對(duì)癌癥進(jìn)行敏感和精確檢測(cè)。在其它實(shí)施方案中，可以在樣品中檢測(cè)兩種、三種或更多GTM的過表達(dá)并從而能提供更大的診斷確定性。
所選擇基因編碼的蛋白質(zhì)能夠被細(xì)胞分泌出來(lái)或從細(xì)胞中穿透出來(lái)。這些蛋白質(zhì)可以單獨(dú)或彼此聯(lián)合用作診斷胃癌的血清或體液標(biāo)記物或者作為監(jiān)測(cè)所確定疾病進(jìn)展的標(biāo)記物。可以使用本領(lǐng)域已知的方法開展蛋白質(zhì)標(biāo)記物的檢測(cè)，并且所述方法包括單克隆抗體、多克隆抗血清等的使用。
附圖簡(jiǎn)述關(guān)于其特定實(shí)施方案和圖在本發(fā)明中進(jìn)行了描述，其中

圖1描述了本發(fā)明的胃癌標(biāo)記物及其寡核苷酸序列列表。
圖2描述了用微陣列方法進(jìn)行研究獲得的結(jié)果列表。
圖3描述了用定量PCR進(jìn)行研究獲得的結(jié)果列表。
圖4a-4d描述了用微陣列方法和qPCR方法獲得的倍數(shù)的log2數(shù)值結(jié)果之間的關(guān)系，其中對(duì)于四種胃癌標(biāo)記物數(shù)據(jù)集中于中間的正常值。灰色方塊對(duì)應(yīng)非惡性腫瘤(“正?！?樣品，而黑色三角對(duì)應(yīng)腫瘤樣品。圖4aASPN。圖4bSPP1。圖4cSPARC。圖4dMMP12。
圖5a-5w描述了顯示從定量PCR研究獲得的多種腫瘤標(biāo)志物的相對(duì)頻率對(duì)變化倍數(shù)的log2數(shù)值的柱狀圖。圖5aASPN；圖5bCST1、2和4；圖5cCSPG2；圖5dIGFBP7；圖5eINHBA；圖5fLOXL2；圖5gLUM；圖5hSFRP4；圖5iSPARC；圖5jSPP1；圖5kTHBS2；圖5lTIMP1；圖5madlican；圖5nPRS11；圖5oASAH1；圖5pSFRP2；圖5qGGH；圖5rMMP12；圖5sKLK10；圖5tLEPRE1；圖5uTG；圖5vEFEMP2和圖5wTGFBI。
圖6是顯示表達(dá)高于中間正常表達(dá)的第95百分位數(shù)的腫瘤標(biāo)記物數(shù)量的柱狀圖。結(jié)果以qPCR數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)并分別顯示了每一份腫瘤樣品的結(jié)果。
圖7a-7c描述了與腫瘤標(biāo)記物CEA基因表達(dá)相比，在單個(gè)腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品中標(biāo)記物的相對(duì)的log2表達(dá)圖。CEA是當(dāng)前最常用的用于監(jiān)測(cè)胃癌進(jìn)展的血清標(biāo)記物。
圖8顯示的是圖3的補(bǔ)充列表。圖8總結(jié)了用qPCR檢測(cè)候選腫瘤標(biāo)記物的表達(dá)水平，但是使用的是配對(duì)數(shù)據(jù)(即腫瘤(“T”)和非惡性腫瘤(“N”)樣品來(lái)自同一個(gè)體)從而提供T:N比。圖8還包括了圖3中未包括的其它標(biāo)記物，即MMP2，CGR11，TGFB1，PCSK5，SERPINB5，SERPINH1。為了比較，也顯示了已經(jīng)建立的血清標(biāo)記物基因CEACAM5(CEA)的表達(dá)水平。在29個(gè)標(biāo)記物中有27個(gè)具有高于或等于CEA的T:N差異中值。此外，與CEA相比，全部29個(gè)標(biāo)記物在配對(duì)樣品中具有較高的百分比，其中在腫瘤樣品中標(biāo)記物的表達(dá)超過在正常樣品中的表達(dá)。CST1，2，44、ASPN和SFRP4三種標(biāo)記物在配對(duì)的腫瘤樣品和正常樣品之間的表達(dá)顯示出100％的差異。本文顯示了這三種標(biāo)記物的基因序列以及用來(lái)檢測(cè)它們的引物和探針位置。
圖9a-9d描述了29種胃癌標(biāo)記物在40位患者的配對(duì)樣品中的單個(gè)的及中值的TN變化倍數(shù)數(shù)據(jù)。
圖10a-10ad描述了CEA和本發(fā)明中其它GTM表達(dá)在腫瘤分期和變化倍數(shù)的log2數(shù)值間的關(guān)系圖。圖10aadlican；圖10bASPN；圖10cCSPG2；圖10dCST1，2，4；圖10eEFEMP2；圖10fGGF；圖10gINHBA；圖10hIGFBP7；圖10iKLK10；圖10jLEPRE1；圖10kLUM；圖10lLOXL2；圖10mMMP12；圖10n；TIMP1；圖10oASAH1；圖10pSPP1；圖10qSFRP2；圖10rSFRP4；圖10sSPARC；圖10tPRSS11；圖10uTHBS2圖10vTG；圖10wTGFBI；圖10xCGR11；圖10ySERPINH1；圖10zMMP2；圖10aaPCSK5；圖10abSERPINB5；圖10acTGFB1和圖10adCEA(CEACAM5)。
圖11a-11ad描述了本發(fā)明的29種GTM和CEA表達(dá)在腫瘤類型(擴(kuò)散型(D)和腸型(I))和變化倍數(shù)的log2數(shù)值間的關(guān)系圖。圖11aadlican；圖11bASPN；圖11cCSPG2；圖11dCST1，2，4；圖11eEFEMP2；圖11fGGH；圖11gINHBA；圖11hIGFBP7；圖11iKLK10；圖11jLEPRE1圖11kLUM；圖11lLOXL2；圖11mMMP12；圖11nTIMP1；圖11oASAH1；圖11pSPP1；圖11qSFRP2；圖11rSFRP4圖11s；SPARC；圖11tPRSS11圖11uTHBS2；圖11vTG；圖11wTGFBI；圖11xCGR11；圖11ySERPINH1；圖11zMMP2；圖11aaPCSK5；圖11abSERPINB5；圖11acTGFB1和圖11adCEA(CEACAM5)。
圖12描述了顯示三種標(biāo)記物SERPINH1、CST1，2，4和INHBA在一系列胃腫瘤樣品和非惡性腫瘤胃樣品中表達(dá)的三維圖。
圖13描述了顯示多重標(biāo)記物對(duì)精確區(qū)分腫瘤組織和非惡性腫瘤組織能力的影響的表。此表來(lái)自qPCR數(shù)據(jù)的正態(tài)分布。
圖14是來(lái)源于腫瘤和非腫瘤組織的4種腫瘤標(biāo)記物的Western印跡。
圖15是胃癌組織和血清中腫瘤標(biāo)志物SPARC的Western印跡。
圖16是胃細(xì)胞系A(chǔ)GS上清中的半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN的免疫印跡。
發(fā)明詳述定義在詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施方案之前，提供本文使用的一些術(shù)語(yǔ)的定義是有用的。
術(shù)語(yǔ)“GTM”或“胃腫瘤標(biāo)記物”或“GTM家族成員”指與胃癌有關(guān)的基因、基因片段、RNA、RNA片段、蛋白質(zhì)或相關(guān)蛋白質(zhì)片段或者其它鑒別分子，其中不包括在先技術(shù)已知的與胃癌相關(guān)的分子ca19-9、ca72-4和CEA。下文包括了GTM實(shí)例。
述語(yǔ)“標(biāo)記物”指在數(shù)量和質(zhì)量上與生物現(xiàn)象的存在相關(guān)的分子。“標(biāo)記物”的實(shí)例為GTM，然而，“標(biāo)記物”還包括與不良狀況形成機(jī)制直接相關(guān)或者間接相關(guān)的代謝產(chǎn)物、副產(chǎn)物。
術(shù)語(yǔ)“qPCR”指定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。
術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”包括mRNA從基因或基因部分的產(chǎn)生，并且包括由RNA或基因或基因部分所編碼的蛋白質(zhì)的產(chǎn)生，還包括與表達(dá)相關(guān)的檢測(cè)物質(zhì)的出現(xiàn)。例如，結(jié)合配體(如抗體)與基因或其它寡核苷酸、蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段的結(jié)合以及結(jié)合配體的顯色都包括在術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”的范圍內(nèi)。因此，在免疫印跡如Western印跡上斑點(diǎn)密度的增加也處于以生物學(xué)分子為基礎(chǔ)的術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”的范圍內(nèi)。
術(shù)語(yǔ)“CPN2”指人羧肽酶N多肽2(83kDa的鏈)和羧肽酶N。
術(shù)語(yǔ)“HAPLN4”指人透明質(zhì)酸糖蛋白連接蛋白4。
術(shù)語(yǔ)“MMP12”指人基質(zhì)金屬蛋白酶12。
術(shù)語(yǔ)“INHBA”指人抑制素βA(還包括激活蛋白A、激活蛋白AB或α多肽)。
術(shù)語(yǔ)“IGFBP7”指人胰島素樣生長(zhǎng)因子7。
術(shù)語(yǔ)“GGH”指人γ谷氨酰水解酶(也稱作結(jié)合酶、葉酰聚γ谷氨酰水解酶)。
術(shù)語(yǔ)“LEPRE1”指人富含亮氨酸脯氨酸的蛋白多糖(也稱作leprecan1)。
術(shù)語(yǔ)“CST4”指人半胱氨酸蛋白酶抑制劑S。
術(shù)語(yǔ)“SFRP4”指人分泌型frizzled相關(guān)蛋白4。
術(shù)語(yǔ)“ASPN”指人asporin(也稱作1類LRR)。
術(shù)語(yǔ)“CGREF1”或“CGR11”指具有EF手型結(jié)構(gòu)域1的人細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子。
除非另外說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“KLK”指人激肽釋放酶10變體1、或者人激肽釋放酶10變體2、或者兩者。
術(shù)語(yǔ)“TIMP1”指人金屬蛋白酶組織抑制劑1(也稱作促紅細(xì)胞活性劑(erythroid potentiating activity)或膠原酶抑制劑)。
術(shù)語(yǔ)“SPARC”指富含半胱氨酸的人分泌型酸性蛋白質(zhì)(也稱作骨粘連蛋白)。
術(shù)語(yǔ)“TGFBI”指68kDa的人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(transforminggrowth factor，beta-induced，68kDa)。
術(shù)語(yǔ)“EFEMP2”指包含EGF的纖蛋白樣細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)2。
術(shù)語(yǔ)“LUM”指人光亮蛋白聚糖。
術(shù)語(yǔ)“SNN”指人stannin。
術(shù)語(yǔ)“SPP1”指人分泌型磷蛋白1(也稱作骨橋蛋白或骨唾液酸蛋白I或早期T-淋巴細(xì)胞活化劑1)。
術(shù)語(yǔ)“CSPG2”指人硫酸軟骨素蛋白聚糖2(也稱作多功能蛋白聚糖)。
術(shù)語(yǔ)“ASAH1”指人N-?；拾贝减０匪饷缸凅w1，或者N-?；拾贝减０匪饷缸凅w2，或者N-?；拾贝减０匪饷缸凅w1和2(也稱作酸性神經(jīng)酰胺酶1變體1和2)。
術(shù)語(yǔ)“PRSS11”指人絲氨酸蛋白酶11(也稱作IGF結(jié)合絲氨酸蛋白酶)。
術(shù)語(yǔ)“SFRP2”指人分泌型frizzled相關(guān)蛋白2。
術(shù)語(yǔ)“PLA2G12B”指人XIIB組磷脂酶A2。
術(shù)語(yǔ)“SPON2”指人細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)spondin 2。
術(shù)語(yǔ)“OLFM1”指人嗅介蛋白1。
術(shù)語(yǔ)“TSRC1”指人包含重復(fù)的血小板反應(yīng)蛋白1(thrombospondinrepeat containing 1)。
術(shù)語(yǔ)“THBS2”指人血小板反應(yīng)蛋白2。
術(shù)語(yǔ)“adlican”指DKFZp564I1922。
術(shù)語(yǔ)“CST2”指人半胱氨酸蛋白酶抑制劑SA。
術(shù)語(yǔ)“CST1”指人半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN。
術(shù)語(yǔ)“LOXL2”指人賴氨酰氧化酶樣酶2。
術(shù)語(yǔ)“TG”指人甲狀腺球蛋白。
術(shù)語(yǔ)“TGFB1”指人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，β1。
術(shù)語(yǔ)“SERPINH1”指人絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進(jìn)化枝H(也稱作熱休克蛋白47成員1或膠原結(jié)合蛋白1)。
術(shù)語(yǔ)“SERPINB5”指人絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進(jìn)化枝B(也稱作卵清蛋白成員5)。
術(shù)語(yǔ)“CEACAMS”或“CEA”指人癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子5。
術(shù)語(yǔ)“MMP2”指人基質(zhì)金屬蛋白酶2(也稱作明膠酶A或72kDa明膠酶或72kDa IV型膠原酶)。
術(shù)語(yǔ)“PCSK5”指人前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin類型5(proprotein convertase subtilisin/kexin type 5)。
應(yīng)當(dāng)理解，上述術(shù)語(yǔ)可以指蛋白質(zhì)、DNA序列和/或RNA序列。還應(yīng)當(dāng)理解，上述術(shù)語(yǔ)還可以指具有與本文所述相同序列的非人類蛋白質(zhì)、DNA和/或RNA。
本發(fā)明實(shí)施方案詳述本發(fā)明提供了在檢測(cè)胃癌方面比在先技術(shù)的標(biāo)記物可靠性更高的用于檢測(cè)和評(píng)價(jià)腫瘤(包括胃癌)的標(biāo)記物。術(shù)語(yǔ)“可靠性”包括不存在假陽(yáng)性和/或假陰性。因此，標(biāo)記物的可靠性越高，與使用此標(biāo)記物所作出的診斷相關(guān)的假陽(yáng)性和/或假陰性就越少。所以，在某些實(shí)施方案中，提供了允許胃癌檢測(cè)可靠性比為50％左右的先技術(shù)標(biāo)記物可靠性更高的標(biāo)記物。在其它實(shí)施方案中，提供了可靠性大于70％左右的標(biāo)記物；在其它實(shí)施方案中，提供了可靠性大于73％左右的標(biāo)記物；還是在其它實(shí)施方案中，提供了可靠性大于80％左右的標(biāo)記物；在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，提供了可靠性大于90％左右的標(biāo)記物；還是在其它實(shí)施方案中，提供了可靠性大于95％左右的標(biāo)記物；在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，提供了可靠性大于98％左右的標(biāo)記物并且在某些實(shí)施方案中，提供了可靠性為大約100％的標(biāo)記物。
因此，我們已經(jīng)意外發(fā)現(xiàn)了許多其存在與胃腫瘤相關(guān)的基因和蛋白質(zhì)。因此，對(duì)基因產(chǎn)物(例如寡核苷酸諸如mRNA)以及從該寡核苷酸翻譯而來(lái)的蛋白質(zhì)和肽的檢測(cè)能用來(lái)診斷腫瘤，如胃腫瘤。對(duì)來(lái)自胃腫瘤患者的腫瘤組織和同一受試者非惡性腫瘤組織的樣品進(jìn)行陣列分析，意外地發(fā)現(xiàn)在很多胃腫瘤中某些基因過表達(dá)的特定模式與疾病相關(guān)。
還可以使用抗癌標(biāo)記物的抗體檢測(cè)癌標(biāo)記物。
通過分析多個(gè)癌標(biāo)記物的存在和表達(dá)量從而能提高診斷敏感性同時(shí)降低假陽(yáng)性和/或假陰性結(jié)果的頻率。
癌癥檢測(cè)的一般方法以下方法是使用GTM家族成員檢測(cè)包括胃癌在內(nèi)的癌癥的非限定性方法。
·使用對(duì)GTM基因產(chǎn)物具有選擇性的寡核苷酸探針的微陣列方法。
·使用標(biāo)記物特異性引物和探針對(duì)腫瘤樣品和正常樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)。
·酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)。
·使用抗標(biāo)記物的抗體對(duì)胃腫瘤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析。
·使用抗標(biāo)記物的抗體對(duì)其它腫瘤進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析，其中所述的其它腫瘤包括但不限于結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肝癌、食道癌、膀胱癌、子宮內(nèi)膜癌和腦癌。
·對(duì)胃癌患者手術(shù)切除腫瘤之前和之后留取血清中的標(biāo)記物家族成員進(jìn)行免疫檢測(cè)。
·對(duì)健康個(gè)體和患有非惡性腫瘤疾病(例如胃炎、潰瘍、胃上皮化生和發(fā)育異常)個(gè)體血清中的標(biāo)記物家族成員進(jìn)行免疫檢測(cè)。
·對(duì)其它癌癥患者中的標(biāo)記物家族成員進(jìn)行免疫檢測(cè)，其中所述的其它癌癥包括但不限于結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肝癌、食道癌、膀胱癌、子宮內(nèi)膜癌和腦癌。
·對(duì)體液中的標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)，其中所述的體液包括血清、淋巴液、腹膜液、腦脊液、滑液等。
·對(duì)胃癌患者胃液、腹膜灌洗液、尿液和糞便中的標(biāo)記物家族成員進(jìn)行免疫檢測(cè)。使用陣列方法和/或qPCR。
·使用計(jì)算機(jī)對(duì)陣列數(shù)據(jù)或qPCR數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。收集原始數(shù)據(jù)并通過比較胃腫瘤基因表達(dá)水平和同一基因在非腫瘤組織中的表達(dá)水平進(jìn)行變化倍數(shù)分析。提供用于斷定表達(dá)增加的閾值(例如，1.5倍增加、2倍增加，并且在備選的實(shí)施方案中為3倍增加、4倍增加或5倍增加)。應(yīng)該意識(shí)到，用于斷定已發(fā)生表達(dá)增加的其它閾值可以在不脫離本發(fā)明的范圍內(nèi)選擇。對(duì)腫瘤基因表達(dá)的進(jìn)一步分析包括將呈現(xiàn)出表達(dá)增加的那些基因與已知胃腫瘤表達(dá)譜相匹配以便診斷腫瘤。
在某些方面，本發(fā)明提供了檢測(cè)癌癥的方法，其包括(a)準(zhǔn)備生物學(xué)樣品；和
(b)檢測(cè)GTM家族成員在所述樣品中的過表達(dá)。
在其它方面，本發(fā)明包括檢測(cè)GTM mRNA過表達(dá)的步驟。
在其他方面，本發(fā)明包括檢測(cè)GTM蛋白質(zhì)過表達(dá)的步驟。
在更進(jìn)一步的方面，本發(fā)明包括檢測(cè)GTM肽過表達(dá)的步驟。
在仍然進(jìn)一步的方面，本發(fā)明包括檢測(cè)GTM的裝置，其包括其上具有GTM捕獲試劑的基質(zhì)；和與所述基質(zhì)關(guān)聯(lián)的檢測(cè)器，所述檢測(cè)器能夠檢測(cè)與所述捕獲試劑相關(guān)的GTM，其中捕獲試劑包括寡核苷酸或抗體。
另外的方面包括用于檢測(cè)癌癥的試劑盒，其包含基質(zhì)；GTM捕獲試劑，其包含一種或更多GTM特異性寡核苷酸和GTM特異性抗體；和使用說(shuō)明書。
本發(fā)明更進(jìn)一步的方面包括使用qPCR檢測(cè)GTM的方法，其包括對(duì)所述GTM特異的正向引物；對(duì)所述GTM特異的反向引物；PCR試劑；反應(yīng)小管；和使用說(shuō)明書。
本發(fā)明的另外方面包括檢測(cè)GTM蛋白質(zhì)或肽存在的試劑盒，其包含具有針對(duì)所述GTM蛋白質(zhì)或肽的捕獲試劑的基質(zhì)；對(duì)所述GTM蛋白質(zhì)或肽特異的抗體；能夠?qū)︶槍?duì)所述GTM蛋白質(zhì)或肽的結(jié)合抗體進(jìn)行標(biāo)記的試劑；和使用說(shuō)明書。
本發(fā)明的另外方面包括生產(chǎn)單克隆抗體的方法，其包括步驟在更進(jìn)一步的方面，本發(fā)明包括檢測(cè)胃癌的方法，其包括步驟從懷疑患有胃癌的患者準(zhǔn)備樣品；
用ELISA方法測(cè)定GTM蛋白質(zhì)的存在。
如本文所描述，腫瘤檢測(cè)可以通過測(cè)定一種或更多腫瘤特異性標(biāo)記物的表達(dá)來(lái)完成。我們已經(jīng)意外發(fā)現(xiàn)GTM的增強(qiáng)表達(dá)與所診斷胃癌存在之間的相關(guān)性非常高。檢測(cè)到的最小顯著相關(guān)性的p值約1.6×10-6。許多相關(guān)性在p值小于10-20時(shí)具有意義。由于具有如此高的顯著性，就不必檢測(cè)一種以上GTM的增強(qiáng)表達(dá)。然而，本發(fā)明過多的GTM能夠提高胃癌檢測(cè)的可靠性。
本文提供的方法還包括高敏感性的測(cè)定法。qPCR非常靈敏從而能用來(lái)檢測(cè)樣品中拷貝數(shù)非常低(例如，1-100)的基因產(chǎn)物。這樣的敏感性使得對(duì)胃癌相關(guān)事件的極早檢測(cè)成為可能。
方法下面的普通方法用來(lái)評(píng)價(jià)用于胃癌相關(guān)標(biāo)記物分子鑒定的多種方法的適宜性。
腫瘤收集從韓國(guó)的首爾大學(xué)醫(yī)院和新西蘭的Dunedin醫(yī)院手術(shù)切除樣品中收集胃腫瘤樣品和非惡性胃組織。胃癌診斷是基于癥狀、體檢發(fā)現(xiàn)和對(duì)組織的組織學(xué)檢查做出的。
RNA提取在一些實(shí)施方案中，通過測(cè)定腫瘤樣品中RNA的變化分析胃癌相關(guān)基因的表達(dá)。將冰凍的手術(shù)樣品包埋入OCT介質(zhì)中。使用切片機(jī)從組織塊中切出60μM厚的切片，放入TriReagent∶水(3∶1)混合物中勻漿，再用氯仿抽提。然后用RneasyTM方法(Qiagen)從水相中純化總RNA。同樣也從16種癌細(xì)胞系中提取RNA并且合并后作為參考RNA。
微陣列玻片制備環(huán)氧樹脂包被的玻片從MWG Biotech AG(Ebersberg，德國(guó))獲得，并且使用Gene Machines微陣列機(jī)器人并根據(jù)廠商提供的方法在上面印上～30,000條50mer寡核苷酸。圖2顯示了相關(guān)寡核苷酸的參考號(hào)(MWGoligo#)以及NCBI mRNA和蛋白質(zhì)參考序列。下文還顯示了本發(fā)明GTM的全部DNA序列。
RNA標(biāo)記和雜交用Superscript II逆轉(zhuǎn)錄酶(Invitrogen)在包含5-(3-氨烷基)-2’-脫氧尿苷-5’-三磷酸的反應(yīng)中將10μg總RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)Microcon柱去離子之后，與Cy3或Cy5在碳酸氫緩沖液中室溫孵育1小時(shí)。經(jīng)Qiaquick柱(Qiagen)去除未結(jié)合的染料，并在SpeedVac中濃縮樣品至15μL。然后，Cy3和Cy5標(biāo)記的cDNA與Ambion ULTRAhyb緩沖液混合，100℃變性2分鐘，在雜交盒中與微陣列玻片于42℃雜交16小時(shí)。然后洗滌玻片并用Axon 4000A掃描儀在兩種功率設(shè)置下進(jìn)行兩次掃描產(chǎn)生基因表達(dá)的初步熒光數(shù)據(jù)。
歸一化方法為比較腫瘤組織和非癌組織中癌基因的表達(dá)，應(yīng)用Genepix軟件檢測(cè)的平均熒光強(qiáng)度通過減去局部背景熒光強(qiáng)度得以校正。背景校正強(qiáng)度少于零的點(diǎn)被排除。為了易于歸一化，將強(qiáng)度比和總體點(diǎn)強(qiáng)度進(jìn)行對(duì)數(shù)(log)轉(zhuǎn)換。對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后的強(qiáng)度比通過用LOCFITTM軟件包進(jìn)行局部回歸來(lái)校正著色誤差(dye bias)和空間誤差(spatial bias)。對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換的強(qiáng)度比同時(shí)對(duì)總體點(diǎn)強(qiáng)度和位置回歸。局部回歸殘差提供了經(jīng)校正的變化倍數(shù)對(duì)數(shù)值。對(duì)于質(zhì)量控制，每個(gè)歸一化微陣列的比率對(duì)于點(diǎn)強(qiáng)度和位置進(jìn)行了繪圖。隨后肉眼檢測(cè)圖中可能的殘余假象。另外，應(yīng)用方差分析(ANOVA)模型來(lái)檢測(cè)針尖誤差(pin-tip bias)。將所有歸一化結(jié)果和參數(shù)插入Postgres數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析在腫瘤樣品對(duì)正常組織中基因表達(dá)中的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義變化可通過測(cè)定陣列之間的變化倍數(shù)進(jìn)行鑒定。為實(shí)現(xiàn)此鑒定，將log2(比率)按比例調(diào)整至每個(gè)陣列具有相同的總體標(biāo)準(zhǔn)差。此標(biāo)準(zhǔn)化步驟減少了平均的組織種類內(nèi)變異性。對(duì)于每一個(gè)寡核苷酸，將log2(比率)進(jìn)一步轉(zhuǎn)換至中位數(shù)值為零的結(jié)果從而易于肉眼檢察。然后應(yīng)用以變化倍數(shù)為基礎(chǔ)的秩檢驗(yàn)改善噪音魯棒性。此檢驗(yàn)由兩個(gè)步驟組成(i)計(jì)算陣列內(nèi)變化倍數(shù)的等級(jí)(rankof fold change)(Rfc)，和(ii)將腫瘤組織的中值(Rfc)減去正常組織的中值(Rfc)。兩個(gè)中值等級(jí)的差異限定了圖2中給出的變化倍數(shù)等級(jí)的范圍。另外兩個(gè)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)也根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)進(jìn)行1)進(jìn)行和不進(jìn)行Bonferroni調(diào)整的兩組樣品student′s t-檢驗(yàn)；和2)Wilcoxon檢驗(yàn)。
標(biāo)記物組合的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析為了確定使用兩種或三種標(biāo)記物組合區(qū)分腫瘤和非惡性腫瘤樣品的數(shù)值，對(duì)來(lái)自40份配對(duì)樣品(來(lái)自同一患者的腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品)的qPCR數(shù)據(jù)進(jìn)行下面的分析。使用樣品平均值和標(biāo)準(zhǔn)差得到非惡性腫瘤樣品和腫瘤樣品的正態(tài)分布。然后確定來(lái)自腫瘤表達(dá)數(shù)據(jù)的值可能超過非惡性腫瘤分布中所規(guī)定閾值(例如，大于50％、70％、73％、80％、90％、95％、98％、99％或100％)的可能性(即敏感性)。對(duì)于標(biāo)記物組合，確定了至少一種標(biāo)記物表達(dá)超過閾值的可能性。
表1
定量實(shí)時(shí)PCR在其它實(shí)施方案中，實(shí)時(shí)PCR或者定量PCR(qPCR)能用來(lái)對(duì)PCR模板拷貝數(shù)進(jìn)行絕對(duì)或相對(duì)定量。使用Primer Express V2.0TM(AppliedBiosystems)設(shè)計(jì)TaqmanTM探針和引物。如果可能，在所得的擴(kuò)增子中盡可能包括所有潛在的剪接變體，其中擴(kuò)增子優(yōu)選為MWG-Biotech來(lái)源微陣列寡核苷酸所涵蓋的區(qū)域。備選地，如果靶基因是由涵蓋目的擴(kuò)增子的Assay-on-Demand表達(dá)分析(Applied Biosystems)所給出的，則可使用這些基因。表1和圖1顯示了基因名稱、符號(hào)、Applied Biosystems“assayon demand”號(hào)、用于qPCR的正向引物、反向引物以及探針序列。在內(nèi)部設(shè)計(jì)分析中，使用SYBR綠色標(biāo)記方法和由參考RNA得到的cDNA滴定引物濃度。在ABI PrismTM7000序列檢測(cè)系統(tǒng)中于標(biāo)準(zhǔn)循環(huán)條件下進(jìn)行擴(kuò)增。當(dāng)從解離曲線中觀察到單一擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，使用最佳引物濃度和終濃度為250nM 5’FAM-3’TAMRA磷酸TaqmanTM探針(Proligo)可得到超過625倍濃度范圍的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在后續(xù)分析中使用了能夠給出回歸系數(shù)大于0.98的標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析法。應(yīng)該意識(shí)到，在其它實(shí)施方案中，回歸系數(shù)不需要如此高。而是可以使用任何標(biāo)準(zhǔn)曲線，只要回歸系數(shù)高到足以允許測(cè)定表達(dá)差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義即可。在備選的實(shí)施方案中，此回歸系數(shù)可以大于大約0.7、大于大約0.8、大于大約0.9或者大于大約0.95。
在兩塊96孔板上對(duì)代表每一個(gè)RNA樣品的單一cDNA進(jìn)行分析。每一塊板包括兩份的參考cDNA標(biāo)準(zhǔn)曲線，其濃度范圍超過625倍。分析包括ΔCT(靶基因CT-平均參考cDNA CT)的計(jì)算。ΔCT與變化倍數(shù)的log2值的負(fù)值成比例。再計(jì)算相對(duì)于非惡性腫瘤變化倍數(shù)log2值中值的變化倍數(shù)log2值(倍數(shù)變化的log2值-正常的變化倍數(shù)log2值的中值)。然后將這些變化倍數(shù)以頻率分類并作圖。
癌癥標(biāo)記物基因的微陣列分析用Cy5標(biāo)記來(lái)自58份胃腫瘤組織樣品和58份非惡性腫瘤(“正?！?胃組織樣品的RNA，并與Cy3標(biāo)記的參考RNA一式兩份或一式三份進(jìn)行雜交。在歸一化之后，在29,718個(gè)基因中每一個(gè)基因的表達(dá)變化通過三種測(cè)定進(jìn)行估計(jì)(i)變化倍數(shù)基因在腫瘤樣品中的表達(dá)中值(非標(biāo)準(zhǔn)化)除以在非惡性腫瘤樣品中的水平中值的比值，(ii)變化倍數(shù)的等級(jí)，以及(iii)所觀察的倍數(shù)變化具有顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)概率。
用于胃惡性腫瘤的血清標(biāo)記物的選擇在某些實(shí)施方案中，可以在包括血清在內(nèi)的生物體液中發(fā)現(xiàn)癌癥標(biāo)記物。血清標(biāo)記物選自陣列數(shù)據(jù)，其基于(i)以分泌蛋白質(zhì)或膜外裂解為特征的信號(hào)序列的存在，(ii)與非惡性腫瘤對(duì)照樣品相比，標(biāo)記物在腫瘤樣品中過表達(dá)(變化倍數(shù))的水平中值，(iii)標(biāo)記物在腫瘤樣品和非惡性腫瘤對(duì)照樣品之間表達(dá)等級(jí)的中值變化，以及(iv)在腫瘤樣品和非惡性腫瘤對(duì)照樣品中表達(dá)范圍之間的重疊程度。
已知全部29種GTM在其編碼序列的5’末端具有信號(hào)肽序列。信號(hào)序列引導(dǎo)GTM蛋白質(zhì)通過質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞外區(qū)室(Gunner von Heijne，Journal of Molecular Biology 173243-251(1984))。此外，沒有一個(gè)GTM具有可導(dǎo)致全長(zhǎng)蛋白質(zhì)滯留在質(zhì)膜內(nèi)的跨膜序列基序。因此，本發(fā)明的所有GTM標(biāo)記物很可能分泌至細(xì)胞外區(qū)室，并因此與脈管系統(tǒng)接觸(通過毛細(xì)管吸收，或者先轉(zhuǎn)運(yùn)至淋巴系統(tǒng)然后再轉(zhuǎn)運(yùn)至脈管系統(tǒng))。結(jié)果，這些腫瘤來(lái)源的每一個(gè)標(biāo)記物會(huì)出現(xiàn)在血液中。
再者，如果＞50％的腫瘤樣品顯示基因表達(dá)水平位于非惡性腫瘤樣品范圍的第95百分位數(shù)之內(nèi)，則基因被排除。腫瘤樣品中過表達(dá)程度的變化不僅反映了腫瘤異質(zhì)性，而且反映了腫瘤樣品被“正?！苯M織(包括肌肉、基質(zhì)細(xì)胞和非惡性上皮腺)污染程度的變化?！罢！蔽廴痉秶鸀?-70％，其中值大約為25％。其它基因由于在造血細(xì)胞中相對(duì)高表達(dá)或在化生胃組織中表達(dá)增加而被排除。應(yīng)該意識(shí)到，取決于正常細(xì)胞或正常表達(dá)標(biāo)記物的細(xì)胞的污染程度，可以選擇能夠使癌癥源和正常源充分分離的不同閾值范圍。
我們發(fā)現(xiàn)有有用GTM包括下面標(biāo)記物的基因(DNA)、互補(bǔ)DNA(cDNA)、RNA、蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)片段，其中所述標(biāo)記物有羧肽酶N多肽2，83kDa的鏈(也稱作羧肽酶N(CPN2))、基質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP12)、抑制素(“TNHBA”)、胰島素樣生長(zhǎng)因子7(“IGFBP7”)、γ谷氨酰水解酶(“GGH”)、富含亮氨酸脯氨酸的蛋白多糖(“LEPRE1”)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑S(“CST4”)、分泌型frizzled相關(guān)蛋白4(“SFRP4”)、asporin(“ASPN”)、具有EF手型結(jié)構(gòu)域1的細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子(“CGREF1”)、激肽釋放酶(“KLK10”)、金屬蛋白酶組織抑制劑1(“TIMP1”)、富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白質(zhì)(“SPARC”)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(“TGFBI”)、包含EGF的纖蛋白樣細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)2(“EFEMP2”)、光亮蛋白聚糖(“LUM”)、stannin(“SNN”)、分泌型磷蛋白1(“SPP1”)、硫酸軟骨素蛋白聚糖2(“CSPG2”)、N-?；拾贝减０匪饷?“ASAH1”)、絲氨酸蛋白酶11(“PRSS11”)、分泌型frizzled相關(guān)蛋白2(“SFRP2”)、XIIB組磷脂酶A2(“PLA2G12B”)、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)spondin 2(“SPON2”)、嗅介蛋白1(“OLFM1”)、包含重復(fù)的血小板反應(yīng)蛋白1(“TSRC1”)、血小板反應(yīng)蛋白2(“THBS2”)、adlican、半胱氨酸蛋白酶抑制劑SA(“CST2”)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN(“CST1”)、賴氨酰氧化酶樣酶2(“LOXL2”)、甲狀腺球蛋白(“TG”)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(“TGFB1”)、絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進(jìn)化枝H(“SERPINH1”)、絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進(jìn)化枝B(“SERPINB5”)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(“MMP2”)、前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin類型5(“PCSK5”)以及透明質(zhì)酸糖蛋白連接蛋白4(“HAPLN4”)。
本發(fā)明GTM的DNA序列以及鑒定信息一起示于下面。
基質(zhì)金屬蛋白酶12＞gi|4505206|ref|NM_002426.1|人類基質(zhì)金屬蛋白酶12(巨噬細(xì)胞彈性蛋白酶)(MMP12)，mRNA|qPCR正向引物匹配[758..780]|qPCR反向引物匹配[888..864]|qPCR探針匹配[786..815]
TAGAAGTTTACAATGAAGTTTCTTCTAATACTGCTCCTGCAGGCCACTGCTTCTGGAGCTCTTCCCCTGAACAGCTCTACAAGCCTGGAAAAAAATAATGTGCTATTTGGTGAGAGATACTTAGAAAAATTTTATGGCCTTGAGATAAACAAACTTCCAGTGACAAAAATGAAATATAGTGGAAACTTAATGAAGGAAAAAATCCAAGAAATGCAGCACTTCTTGGGTCTGAAAGTGACCGGGCAACTGGACACATCTACCCTGGAGATGATGCACGCACCTCGATGTGGAGTCCCCGATCTCCATCATTTCAGGGAAATGCCAGGGGGGCCCGTATGGAGGAAACATTATATCACCTACAGAATCAATAATTACACACCTGACATGAACCGTGAGGATGTTGACTACGCAATCCGGAAAGCTTTCCAAGTATGGAGTAATGTTACCCCCTTGAAATTCAGCAAGATTAACACAGGCATGGCTGACATTTTGGTGGTTTTTGCCCGTGGAGCTCATGGAGACTTCCATGCTTTTGATGGCAAAGGTGGAATCCTAGCCCATGCTTTTGGACCTGGATCTGGCATTGGAGGGGATGCACATTTCGATGAGGACGAATTCTGGACTACACATTCAGGAGGCACAAACTTGTTCCTCACTGCTGTTCACGAGATTGGCCATTCCTTAGGTCTTGGCCATTCTAGTGATCCAAAGGCTGTAATGTTCCCCACCTACAAATATGTCGACATCAACACATTTCGCCTCTCTGCTGATGACATACGTGGCATTCAGTCCCTGTATGGAGACCCAAAAGAGAACCAACGCTTGCCAAATCCTGACAATTCAGAACCAGCTCTCTGTGACCCCAATTTGAGTTTTGATGCTGTCACTACCGTGGGAAATAAGATCTTTTTCTTCAAAGACAGGTTCTTCTGGCTGAAGGTTTCTGAGAGACCAAAGACCAGTGTTAATTTAATTTCTTCCTTATGGCCAACCTTGCCATCTGGCATTGAAGCTGCTTATGAAATTGAAGCCAGAAATCAAGTTTTTCTTTTTAAAGATGACAAATACTGGTTAATTAGCAATTTAAGACCAGAGCCAAATTATCCCAAGAGCATACATTCTTTTGGTTTTCCTAACTTTGTGAAAAAAATTGATGCAGCTGTTTTTAACCCACGTTTTTATAGGACCTACTTCTTTGTAGATAACCAGTATTGGAGGTATGATGAAAGGAGACAGATGATGGACCCTGGTTATCCCAAACTGATTACCAAGAACTTCCAAGGAATCGGGCCTAAAATTGATGCAGTCTTCTATTCTAAAAACAAATACTACTATTTCTTCCAAGGATCTAACCAATTTGAATATGACTTCCTACTCCAACGTATCACCAAAACACTGAAAAGCAATAGCTGGTTTGGTTGTTAGAAATGGTGTAATTAATGGTTTTTGTTAGTTCACTTCAGCTTAATAAGTATTTATTGCATATTTGCTATGTCCTCAGTGTACCACTACTTAGAGATATGTATCATAAAAATAAAATCTGTAAACCATAGGTAATGATTATATAAAATACATAATATTTTTCAATTTTGAAAACTCTAATTGTCCATTCTTGCTTGACTCTACTATTAAGTTTGAAAATAGTTACCTTCAAAGCAAGATAATTCTATTTGAAGCATGCTCTGTAAGTTGCTTCCTAACATCCTTGGACTGAGAAATTATACTTACTTCTGGCATAACTAAAATTAAGTATATATATTTTGGCTCAAATAAAATTGSEQ ID NO67抑制素βA＞gi|4504698|ref|NM_002192.1|人類抑制素，βA(激活蛋白A、激活蛋白ABα多肽)(INHBA)，mRNA|qPCR據(jù)assay_on_demand情況匹配[457..481]TCCACACACACAAAAAACCTGCGCGTGAGGGGGGAGGAAAAGCAGGGCCTTTAAAAAGGCAATCACAACAACTTTTGCTGCCAGGATGCCCTTGCTTTGGCTGAGAGGATTTCTGTTGGCAAGTTGCTGGATTATAGTGAGGAGTTCCCCCACCCCAGGATCCGAGGGGCACAGCGCGGCCCCCGACTGTCCGTCCTGTGCGCTGGCCGCCCTCCCAAAGGATGTACCCAACTCTCAGCCAGAGATGGTGGAGGCCGTCAAGAAGCACATTTTAAACATGCTGCACTTGAAGAAGAGACCCGATGTCACCCAGCCGGTACCCAAGGCGGCGCTTCTGAACGCGATCAGAAAGCTTCATGTGGGCAAAGTCGGGGAGAACGGGTATGTGGAGATAGAGGATGACATTGGAAGGAGGGCAGAAATGAATGAACTTATGGAGCAGACCTCGGAGATCATCACGTTTGCCGAGTCAGGAACAGCCAGGAAGACGCTGCACTTCGAGATTTCCAAGGAAGGCAGTGACCTGTCAGTGGTGGAGCGTGCAGAAGTCTGGCTCTTCCTAAAAGTCCCCAAGGCCAACAGGACCAGGACCAAAGTCACCATCCGCCTCTTCCAGCAGCAGAAGCACCCGCAGGGCAGCTTGGACACAGGGGAAGAGGCCGAGGAAGTGGGCTTAAAGGGGGAGAGGAGTGAACTGTTGCTCTCTGAAAAAGTAGTAGACGCTCGGAAGAGCACCTGGCATGTCTTCCCTGTCTCCAGCAGCATCCAGCGGTTGCTGGACCAGGGCAAGAGCTCCCTGGACGTTCGGATTGCCTGTGAGCAGTGCCAGGAGAGTGGCGCCAGCTTGGTTCTCCTGGGCAAGAAGAAGAAGAAAGAAGAGGAGGGGGAAGGGAAAAAGAAGGGCGGAGGTGAAGGTGGGGCAGGAGCAGATGAGGAAAAGGAGCAGTCGCACAGACCTTTCCTCATGCTGCAGGCCCGGCAGTCTGAAGACCACCCTCATCGCCGGCGTCGGCGGGGCTTGGAGTGTGATGGCAAGGTCAACATCTGCTGTAAGAAACAGTTCTTTGTCAGTTTCAAGGACATCGGCTGGAATGACTGGATCATTGCTCCCTCTGGCTATCATGCCAACTACTGCGAGGGTGAGTGCCCGAGCCATATAGCAGGCACGTCCGGGTCCTCACTGTCCTTCCACTCAACAGTCATCAACCACTACCGCATGCGGGGCCATAGCCCCTTTGCCAACCTCAAATCGTGCTGTGTGCCCACCAAGCTGAGACCCATGTCCATGTTGTACTATGATGATGGTCAAAACATCATCAAAAAGGACATTCAGAACATGATCGTGGAGGAGTGTGGGTGCTCATAGAGTTGCCCAGCCCAGGGGGAAAGGGAGCAAGAGTTGTCCAGAGAAGACAGTGGCAAAATGAAGAAATTTTTAAGGTTTCTGAGTTAACCAGAAAAATAGAAATTAAAAACAAAACAAAACAAAAAAAAAAACAAAAAAAAACAAAAGTAAATTAAAAACAAACCTGATGAAACAGATGAAACAGATGAAGGAAGATGTGGAAATCTTAGCCTGCCTTAGCCAGGGCTCAGAGATGAAGCAGTGAAGAGACAGATTGGGAGGGAAAGGGAGAATGGTGTACCCTTTATTTCTTCTGAAATCACACTGATGACATCAGTTGTTTAAACGGGGTATTGTCCTTTCCCCCCTTGAGGTTCCCTTGTGAGCTTGAATCAACCAATCTGATCTGCAGTAGTGTGGACTAGAACAACCCAAATAGCATCTAGAAAGCCATGAGTTTGAAAGGGCCCATCACAGGCACTTTCCTAGCCTAAT SEQ ID NO68胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7＞gi|4504618|ref|NM_001553.1|人類胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7(IGFBP7)，mRNA|qPCR正向引物匹配[470..487]|qPCR反向引物匹配[567..546]|qPCR探針匹配[492..517]GCCGCTGCCACCGCACCCCGCCATGGAGCGGCCGTCGCTGCGCGCCCTGCTCCTCGGCGCCGCTGGGCTGCTGCTCCTGCTCCTGCCCCTCTCCTCTTCCTCCTCTTCGGACACCTGCGGCCCCTGCGAGCCGGCCTCCTGCCCGCCCCTGCCCCCGCTGGGCTGCCTGCTGGGCGAGACCCGCGACGCGTGCGGCTGCTGCCCTATGTGCGCCCGCGGCGAGGGCGAGCCGTGCGGGGGTGGCGGCGCCGGCAGGGGGTACTGCGCGCCGGGCATGGAGTGCGTGAAGAGCCGCAAGAGGCGGAAGGGTAAAGCCGGGGCAGCAGCCGGCGGTCCGGGTGTAAGCGGCGTGTGCGTGTGCAAGAGCCGCTACCCGGTGTGCGGCAGCGACGGCACCACCTACCCGAGCGGCTGCCAGCTGCGCGCCGCCAGCCAGAGGGCCGAGAGCCGCGGGGAGAAGGCCATCACCCAGGTCAGCAAGGGCACCTGCGAGCAAGGTCCTTCCATAGTGACGCCCCCCAAGGACATCTGGAATGTCACTGGTGCCCAGGTGTACTTGAGCTGTGAGGTCATCGGAATCCCGACACCTGTCCTCATCTGGAACAAGGTAAAAAGGGGTCACTATGGAGTTCAAAGGACAGAACTCCTGCCTGGTGACCGGGACAACCTGGCCATTCAGACCCGGGGTGGCCCAGAAAAGCATGAAGTAACTGGCTGGGTGCTGGTATCTCCTCTAAGTAAGGAAGATGCTGGAGAATATGAGTGCCATGCATCCAATTCCCAAGGACAGGCTTCAGCATCAGCAAAAATTACAGTGGTTGATGCCTTACATGAAATACCAGTGAAAAAAGGTGAAGGTGCCGAGCTATAAACCTCCAGAATATTATTAGTCTGCATGGTTAAAAGTAGTCATGGATAACTACATTACCTGTTCTTGCCTAATAAGTTTCTTTTAATCCAATCCACTAACACTTTAGTTATATTCACTGGTTTTACACAGAGAAATACAAAATAAAGATCACACATCAAGACTATCTACAAAAATTTATTATATATTTACAGAAGAAAAGCATGCATATCATTAAACAAATAAAATACTTTTTATCACAAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO69γ谷氨酰水解酶＞gi|4503986|ref|NM_003878.1|人類γ谷氨酰水解酶(結(jié)合酶、葉酰聚γ谷氨酰水解酶)(GGH)，mRNA|qPCR正向引物匹配[531..547]|qPCR反向引物匹配[611..587]|qPCR探針匹配[549..577]TGCCGCAGCCCCCGCCCGCCCGCAGAGCTTTTGAAAGGCGGCGGGAGGCGGCGAGCGCCATGGCCAGTCCGGGCTGCCTGCTGTGCGTGCTGGGCCTGCTACTCTGCGGGGCGGCGAGCCTCGAGCTGTCTAGACCCCACGGCGACACCGCCAAGAAGCCCATCATCGGAATATTAATGCAAAAATGCCGTAATAAAGTCATGAAAAACTATGGAAGATACTATATTGCTGCGTCCTATGTAAAGTACTTGGAGTCTGCAGGTGCGAGAGTTGTACCAGTAAGGCTGGATCTTACAGAGAAAGACTATGAAATACTTTTCAAATCTATTAATGGAATCCTTTTCCCTGGAGGAAGTGTTGACCTCAGACGCTCAGATTATGCTAAAGTGGCCAAAATATTTTATAACTTGTCCATACAGAGTTTTGATGATGGAGACTATTTTCCTGTGTGGGGCACATGCCTTGGATTTGAAGAGCTTTCACTGCTGATTAGTGGAGAGTGCTTATTAACTGCCACAGATACTGTTGACGTGGCAATGCCGCTGAACTTCACTGGAGGTCAATTGCACAGCAGAATGTTCCAGAATTTTCCTACTGAGTTGTTGCTGTCATTAGCAGTAGAACCTCTGACTGCCAATTTCCATAAGTGGAGCCTCTCCGTGAAGAATTTTACAATGAATGAAAAGTTAAAGAAGTTTTTCAATGTCTTAACTACAAATACAGATGGCAAGATTGAGTTTATTTCAACAATGGAAGGATATAAGTATCCAGTATATGGTGTCCAGTGGCATCCAGAGAAAGCACCTTATGAGTGGAAGAATTTGGATGGCATTTCCCATGCACCTAATGCTGTGAAAACCGCATTTTATTTAGCAGAGTTTTTTGTTAATGAAGCTCGGAAAAACAACCATCATTTTAAATCTGAATCTGAAGAGGAGAAAGCATTGATTTATCAGTTCAGTCCAATTTATACTGGAAATATTTCTTCATTTCAGCAATGTTACATATTTGATTGAAAGTCTTCAATTTGTTAACAGAGCAAATTTGAATAATTCCATGATTAAACTGTTAGAATAACTTGCTACTCATGGCAAGATTAGGAAGTCACAGATTCTTTTCTATAATGTGCCTGGCTCTGATTCTTCATTATGTATGTGACTATTTATATAACATTAGATAATTAAATAGTGAGACATAAATAGAGTGCTTTTTCATGGAAAAGCCTTCTTATATCTGAAGATTGAAAAATAAATTTACTGAAATACAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO70富含亮氨酸脯氨酸的蛋白多糖1＞gi|21361917|ref|NM_022356.2|人類富含亮氨酸脯氨酸的蛋白多糖(leprecan)1(LEPRE1)，mRNA|qPCR正向引物匹配[813..836]|qPCR反向引物匹配[894..872]|qPCR探針匹配[841..870]GGTGGCGGGTGGCTGGCGGTTCCGTTAGGTCTGAGGGAGCGATGGCGGTACGCGCGTTGAAGCTGCTGACCACACTGCTGGCTGTCGTGGCCGCTGCCTCCCAAGCCGAGGTCGAGTCCGAGGCAGGATGGGGCATGGTGACGCCTGATCTGCTCTTCGCCGAGGGGACCGCAGCCTACGCGCGCGGGGACTGGCCCGGGGTGGTCCTGAGCATGGAACGGGCGCTGCGCTCCCGGGCAGCCCTCCGCGCCCTTCGCCTGCGCTGCCGCACCCAGTGTGCCGCCGACTTCCCGTGGGAGCTGGACCCCGACTGGTCCCCCAGCCCGGCCCAGGCCTCGGGCGCCGCCGCCCTGCGCGACCTGAGCTTCTTCGGGGGCCTTCTGCGTCGCGCTGCCTGCCTGCGCCGCTGCCTCGGGCCGCCGGCCGCCCACTCGCTCAGCGAAGAGATGGAGCTGGAGTTCCGCAAGCGGAGCCCCTACAACTACCTGCAGGTCGCCTACTTCAAGATCAACAAGTTGGAGAAAGCTGTTGCTGCAGCACACACCTTCTTCGTGGGCAATCCTGAGCACATGGAAATGCAGCAGAACCTAGACTATTACCAAACCATGTCTGGAGTGAAGGAGGCCGACTTCAAGGATCTTGAGACTCAACCCCATATGCAAGAATTTCGACTGGGAGTGCGACTCTACTCAGAGGAACAGCCACAGGAAGCTGTGCCCCACCTAGAGGCGGCGCTGCAAGAATACTTTGTGGCCTATGAGGAGTGCCGTGCCCTCTGCGAAGGGCCCTATGACTACGATGGCTACAACTACCTTGAGTACAACGCTGACCTCTTCCAGGCCATCACAGATCATTACATCCAGGTCCTCAACTGTAAGCAGAACTGTGTCACGGAGCTTGCTTCCCACCCAAGTCGAGAGAAGCCCTTTGAAGACTTCCTCCCATCGCATTATAATTATCTGCAGTTTGCCTACTATAACATTGGGAATTATACACAGGCTGTTGAATGTGCCAAGACCTATCTTCTCTTCTTCCCCAATGACGAGGTGATGAACCAAAATTTGGCCTATTATGCAGCTATGCTTGGAGAAGAACACACCAGATCCATCGGCCCCCGTGAGAGTGCCAAGGAGTACCGACAGCGAAGCCTACTGGAAAAAGAACTGCTTTTCTTCGCTTATGATGTTTTTGGAATTCCCTTTGTGGATCCGGATTCATGGACTCCAGGAGAAGTGATTCCCAAGAGATTGCAAGAGAAACAGAAGTCAGAACGGGAAACAGCCGTACGCATCTCCCAGGAGATTGGGAACCTTATGAAGGAAATCGAGACCCTTGTGGAAGAGAAGACCAAGGAGTCACTGGATGTGAGCAGACTGACCCGGGAAGGTGGCCCCCTGCTGTATGAAGGCATCAGTCTCACCATGAACTCCAAACTCCTGAATGGTTCCCAGCGGGTGGTGATGGACGGCGTAATCTCTGACCACGAGTGTCAGGAGCTGCAGAGACTGACCAATGTGGCAGCAACCTCAGGAGATGGCTACCGGGGTCAGACCTCCCCACATACTCCCAATGAAAAGTTCTATGGTGTCACTGTCTTCAAAGCCCTCAAGCTGGGGCAAGAAGGCAAAGTTCCTCTGCAGAGTGCCCACCTGTACTACAACGTGACGGAGAAGGTGCGGCGCATCATGGAGTCCTACTTCCGCCTGGATACGCCCCTCTACTTTTCCTACTCTCATCTGGTGTGCCGCACTGCCATCGAAGAGGTCCAGGCAGAGAGGAAGGATGATAGTCATCCAGTCCACGTGGACAACTGCATCCTGAATGCCGAGACCCTCGTGTGTGTCAAAGAGCCCCCAGCCTACACCTTCCGCGACTACAGCGCCATCCTTTACCTAAATGGGGACTTCGATGGCGGAAACTTTTATTTCACTGAACTGGATGCCAAGACCGTGACGGCAGAGGTGCAGCCTCAGTGTGGAAGAGCCGTGGGATTCTCTTCAGGCACTGAAAACCCACATGGAGTGAAGGCTGTCACCAGGGGGCAGCGCTGTGCCATCGCCCTGTGGTTCACCCTGGACCCTCGACACAGCGAGCGGGTGAGAGCAGCTCGAGCGGGTGAGAGCAGCTGGTGCTGTGGTGACCCGTTCCCAGAGCGCCCTTGGTTTGCCTTTCTCTTCCCCAAATCCCATTGCCAGTGGCTGAGACACGAAAGGAGCACTTGGGACACCAGCTCCAACGCCCTGTCATTATGGTCACATTGCCTTGTCCTCCCTGGGCCTGCTGTGAACGGGATCCAGGTGGGGAAAGAGGTCAAGACAGGGAGCGATGCTGAGTTCTTGGTTCCCTCCTTGGGCCCCACTTCAGCTGTCCTTTTCCAGAGAGTAGGACCTGCTGGGAAGGAGATGAGCCTGGGGCCATTAAGGAACCTTCCTTGTCCCCTGGGAAGTAGCAGCTGAGAGATAGCGAGTGTCTGGAGCGGAGGCCTCTCTGAATGGGCAGGGGTTTGTCCTTGCAGGACAGGGTGCAGGCAGATGACCTGGTGAAGATGCTCTTCAGCCCAGAAGAGATGGTCCTCTCCCAGGAGCAGCCCCTGGATGCCCAGCAGGGCCCCCCCGAACCTGCACAAGAGTCTCTCTCAGGCAGTGAATCGAAGCCCAAGGATGAGCTATGACAGCGTCCAGGTCAGACGGATGGGTGACTAGACCCATGGAGAGGAACTCTTCTGCACTCTGAGCTGGCCAGCCCCTCGGGGCTGCAGAGCAGTGAGCCTACATCTGCCACTCAGCCGAGGGGACCCTGCTCACAGCCTTCTACATGGTGCTACTGCTCTTGGAGTGGACATGACCAGACACCGCACCCCCTGGATCTGGCTGAGGGCTCAGGACACAGGCCCAGCCACCCCCAGGGGCCTCCACAGGCCGCTGCATAACAGCGATACAGTACTTAAGTGTCTGTGTAGACAACCAAAGAATAAATGATTCATGGTTTTTTTTSEQ ID NO71半胱氨酸蛋白酶抑制劑S＞gi|19882254|ref|NM_001899.2|人類半胱氨酸蛋白酶抑制劑S(CST4)，mRNA|qPCR正向引物匹配[343..361]|qPCR反向引物匹配[434..411]|qPCR探針匹配[382..410]GGCTCTCACCCTCCTCTCCTGCAGCTCCAGCTTTGTGCTCTGCCTCTGAGGAGACCATGGCCCGGCCTCTGTGTACCCTGCTACTCCTGATGGCTACCCTGGCTGGGGCTCTGGCCTCGAGCTCCAAGGAGGAGAATAGGATAATCCCAGGTGGCATCTATGATGCAGACCTCAATGATGAGTGGGTACAGCGTGCCCTTCACTTCGCCATCAGCGAGTACAACAAGGCCACCGAAGATGAGTACTACAGACGCCCGCTGCAGGTGCTGCGAGCCAGGGAGCAGACCTTTGGGGGGGTGAATTACTTCTTCGACGTAGAGGTGGGCCGCACCATATGTACCAAGTCCCAGCCCAACTTGGACACCTGTGCCTTCCATGAACAGCCAGAACTGCAGAAGAAACAGTTGTGCTCTTTCGAGATCTACGAAGTTCCCTGGGAGGACAGAATGTCCCTGGTGAATTCCAGGTGTCAAGAAGCCTAGGGGTCTGTGCCAGGCCAGTCACACCGACCACCACCCACTCCCACCCACTGTAGTGCTCCCACCCCTGGACTGGTGGCCCCCACCCTGCGGGAGGCCTCCCCATGTGCCTGTGCCAAGAGACAGACAGAGAAGGCTGCAGGAGTCCTTTGTTGCTCAGCAGGGCGCTCTGCCCTCCCTCCTTCCTTCTTGCTTCTAATAGACCTGGTACATGGTACACACACCCCCACCTCCTGCAATTAAACAGTAGCATCGCCSEQ ID NO72
分泌型frizzled相關(guān)蛋白4＞gi|8400733|ref|NM_003014.2|人類分泌型frizzled相關(guān)蛋白4(SFRP4)，mRNA|qPCR據(jù)assay_on_demand情況匹配[1079..1103]GGCGGGTTCGCGCCCCGAAGGCTGAGAGCTGGCGCTGCTCGTGCCCTGTGTGCCAGACGGCGGAGCTCCGCGGCCGGACCCCGCGGCCCCGCTTTGCTGCCGACTGGAGTTTGGGGGAAGAAACTCTCCTGCGCCCCAGAAGATTTCTTCCTCGGCGAAGGGACAGCGAAAGATGAGGGTGGCAGGAAGAGAAGGCGCTTTCTGTCTGCCGGGGTCGCAGCGCGAGAGGGCAGTGCCATGTTCCTCTCCATCCTAGTGGCGCTGTGCCTGTGGCTGCACCTGGCGCTGGGCGTGCGCGGCGCGCCCTGCGAGGCGGTGCGCATCCCTATGTGCCGGCACATGCCCTGGAACATCACGCGGATGCCCAACCACCTGCACCACAGCACGCAGGAGAACGCCATCCTGGCCATCGAGCAGTACGAGGAGCTGGTGGACGTGAACTGCAGCGCCGTGCTGCGCTTCTTCTTCTGTGCCATGTACGCGCCCATTTGCACCCTGGAGTTCCTGCACGACCCTATCAAGCCGTGCAAGTCGGTGTGCCAACGCGCGCGCGACGACTGCGAGCCCCTCATGAAGATGTACAACCACAGCTGGCCCGAAAGCCTGGCCTGCGACGAGCTGCCTGTCTATGACCGTGGCGTGTGCATTTCGCCTGAAGCCATCGTCACGGACCTCCCGGAGGATGTTAAGTGGATAGACATCACACCAGACATGATGGTACAGGAAAGGCCTCTTGATGTTGACTGTAAACGCCTAAGCCCCGATCGGTGCAAGTGTAAAAAGGTGAAGCCAACTTTGGCAACGTATCTCAGCAAAAACTACAGCTATGTTATTCATGCCAAAATAAAAGCTGTGCAGAGGAGTGGCTGCAATGAGGTCACAACGGTGGTGGATGTAAAAGAGATCTTCAAGTCCTCATCACCCATCCCTCGAACTCAAGTCCCGCTCATTACAAATTCTTCTTGCCAGTGTCCACACATCCTGCCCCATCAAGATGTTCTCATCATGTGTTACGAGTGGCGTTCAAGGATGATGCTTCTTGAAAATTGCTTAGTTGAAAAATGGAGAGATCAGCTTAGTAAAAGATCCATACAGTGGGAAGAGAGGCTGCAGGAACAGCGGAGAACAGTTCAGGACAAGAAGAAAACAGCCGGGCGCACCAGTCGTAGTAATCCCCCCAAACCAAAGGGAAAGCCTCCTGCTCCCAAACCAGCCAGTCCCAAGAAGAACATTAAAACTAGGAGTGCCCAGAAGAGAACAAACCCGAAAAGAGTGTGAGCTAACTAGTTTCCAAAGCGGAGACTTCCGACTTCCTTACAGGATGAGGCTGGGCATTGCCTGGGACAGCCTATGTAAGGCCATGTGCCCCTTGCCCTAACAACTCACTGCAGTGCTCTTCATAGACACATCTTGCAGCATTTTTCTTAAGGCTATGCTTCAGTTTTTCTTTGTAAGCCATCACAAGCCATAGTGGTAGGTTTGCCCTTTGGTACAGAAGGTGAGTTAAAGCTGGTGGAAAAGGCTTATTGCATTGCATTCAGAGTAACCTGTGTGCATACTCTAGAAGAGTAGGGAAAATAATGCTTGTTACAATTCGACCTAATATGTGCATTGTAAAATAAATGCCATATTTCAAACAAAACACGTAATTTTTTTACAGTATGTTTTATTACCTTTTGATATCTGTTGTTGCAATGTTAGTGATGTTTTAAAATGTGATGAAAATATAATGTTTTTAAGAAGGAACAGTAGTGGAATGAATGTTAAAAGATCTTTATGTGTTTATGGTCTGCAGAAGGATTTTTGTGATGAAAGGGGATTTTTTGAAAAATTAGAGAAGTAGCATATGGAAAATTATAATGTGTTTTTTTACCAATGACTTCAGTTTCTGTTTTTAGCTAGAAACTTAAAAACAAAAATAATAATAAAGAAAAATAAATAAAAAGGAGAGGCAGACAATGTCTGGATTCCTGTTTTTTGGTTACCTGATTTCCATGATCATGATGCTTCTTGTCAACACCCTCTTAAGCAGCACCAGAAACAGTGAGTTTGTCTGTACCATTAGGAGTTAGGTACTAATTAGTTGGCTAATGCTCAAGTATTTTATACCCACAAGAGAGGTATGTCACTCATCTTACTTCCCAGGACATCCACCCTGAGAATAATTTGACAAGCTTAAAAATGGCCTTCATGTGAGTGCCAAATTTTGTTTTTCTTCATTTAAATATTTTCTTTGCCTAAATACATGTGAGAGGAGTTAAATATAAATGTACAGAGAGGAAAGTTGAGTTCCACCTCTGAAATGAGAATTACTTGACAGTTGGGATACTTTAATCAGAAAAAAAGAACTTATTTGCAGCATTTTATCAACAAATTTCATAATTGTGGACAATTGGAGGCATTTATTTTAAAAAACAATTTTATTGGCCTTTTGCTAACACAGTAAGCATGTATTTTATAAGGCATTCAATAAATGCACAACGCCCAAAGGAAATAAAATCCTATCTAATCCTACTCTCCACTACACAGAGGTAATCACTATTAGTATTTTGGCATATTATTCTCCAGGTGTTTGCTTATGCACTTATAAAATGATTTGAACAAATAAAACTAGGAACCTGTATACATGTGTTTCATAACCTGCCTCCTTTGCTTGGCCCTTTATTGAGATAAGTTTTCCTGTCAAGAAAGCAGAAACCATCTCATTTCTAACAGCTGTGTTATATTCCATAGTATGCATTACTCAACAAACTGTTGTGCTATTGGATACTTAGGTGGTTTCTTCACTGACAATACTGAATAAACATCTCACCGGAATTCSEQ ID NO73Asporin＞gi|41350213|ref|NM_017680.3|人類asporin(1類LRR)(ASPN)，mRNA|qPCR正向引物匹配[798..823]|qPCR反向引物匹配[934..912]|qPCR探針匹配[842..875]AGTACTAACATGGACTAATCTGTGGGAGCAGTTTATTCCAGTATCACCCAGGGTGCAGCCACACCAGGACTGTGTTGAAGGGTGTTTTTTTTCTTTTAAATGTAATACCTCCTCATCTTTTCTTCTTACACAGTGTCTGAGAACATTTACATTATAGATAAGTAGTACATGGTGGATAACTTCTACTTTTAGGAGGACTACTCTCTTCTGACAGTCCTAGACTGGTCTTCTACACTAAGACACCATGAAGGAGTATGTGCTCCTATTATTCCTGGCTTTGTGCTCTGCCAAACCCTTCTTTAGCCCTTCACACATCGCACTGAAGAATATGATGCTGAAGGATATGGAAGACACAGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGAGGACAACTCTCTTTTTCCAACAAGAGAGCCAAGAAGCCATTTTTTTCCATTTGATCTGTTTCCAATGTGTCCATTTGGATGTCAGTGCTATTCACGAGTTGTACATTGCTCAGATTTAGGTTTGACCTCAGTCCCAACCAACATTCCATTTGATACTCGAATGCTTGATCTTCAAAACAATAAAATTAAGGAAATCAAAGAAAATGATTTTAAAGGACTCACTTCACTTTATGGTCTGATCCTGAACAACAACAAGCTAACGAAGATTCACCCAAAAGCCTTTCTAACCACAAAGAAGTTGCGAAGGCTGTATCTGTCCCACAATCAACTAAGTGAAATACCACTTAATCTTCCCAAATCATTAGCAGAACTCAGAATTCATGAAAATAAAGTTAAGAAAATACAAAAGGACACATTCAAAGGAATGAATGCTTTACACGTTTTGGAAATGAGTGCAAACCCTCTTGATAATAATGGGATAGAGCCAGGGGCATTTGAAGGGGTGACGGTGTTCCATATCAGAATTGCAGAAGCAAAACTGACCTCAGTTCCTAAAGGCTTACCACCAACTTTATTGGAGCTTCACTTAGATTATAATAAAATTTCAACAGTGGAACTTGAGGATTTTAAACGATACAAAGAACTACAAAGGCTGGGCCTAGGAAACAACAAAATCACAGATATCGAAAATGGGAGTCTTGCTAACATACCACGTGTGAGAGAAATACATTTGGAAAACAATAAACTAAAAAAAATCCCTTCAGGATTACCAGAGTTGAAATACCTCCAGATAATCTTCCTTCATTCTAATTCAATTGCAAGAGTGGGAGTAAATGACTTCTGTCCAACAGTGCCAAAGATGAAGAAATCTTTATACAGTGCAATAAGTTTATTCAACAACCCGGTGAAATACTGGGAAATGCAACCTGCAACATTTCGTTGTGTTTTGAGCAGAATGAGTGTTCAGCTTGGGAACTTTGGAATGTAATAATTAGTAATTGGTAATGTCCATTTAATATAAGATTCAAAAATCCCTACATTTGGAATACTTGAACTCTATTAATAATGGTAGTATTATATATACAAGCAAATATCTATTCTCAAGTGGTAAGTCCACTGACTTATTTTATGACAAGAAATTTCAACGGAATTTTGCCAAACTATTGATACATAAGGGTTGAGAGAAACAAGCATCTATTGCAGTTTCTTTTTGCGTACAAATGATCTTACATAAATCTCATGCTTGACCATTCCTTTCTTCATAACAAAAAAGTAAGATATTCGGTATTTAACACTTTGTTATCAAGCATATTTTAAAAAGAACTGTACTGTAAATGGAATGCTTGACTTAGCAAAATTTGTGCTCTTTCATTTGCTGTTAGAAAAACAGAATTAACAAAGACAGTAATGTGAAGAGTGCATTACACTATTCTTATTCTTTAGTAACTTGGGTAGTACTGTAATATTTTTAATCATCTTAAAGTATGATTTGATATAATCTTATTGAAATTACCTTATCATGTCTTAGAGCCCGTCTTTATGTTTAAAACTAATTTCTTAAAATAAAGCCTTCAGTAAATGTTCATTACCAACTTGATAAATGCTACTCATAAGAGCTGGTTTGGGGCTATAGCATATGCTTTTTTTTTTTTAATTATTACCTGATTTAAAAATCTCTGTAAAAACGTGTAGTGTTTCATAAAATCTGTAACTCGCATTTTAATGATCCGCTATTATAAGCTTTTAATAGCATGAAAATTGTTAGGCTATATAACATTGCCACTTCAACTCTAAGGAATATTTTTGAGATATCCCTTTGGAAGACCTTGCTTGGAAGAGCCTGGACACTAACAATTCTACACCAAATTGTCTCTTCAAATACGTATGGACTGGATAACTCTGAGAAACACATCTAGTATAACTGAATAAGCAGAGCATCAAATTAAACAGACAGAAACCGAAAGCTCTATATAAATGCTCAGAGTTCTTTATGTATTTCTTATTGGCATTCAACATATGTAAAATCAGAAAACAGGGAAATTTTCATTAAAAATATTGGTTTGAAATAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO74具有EF手型結(jié)構(gòu)域1的細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子＞gi|33589823|ref|NM_006569.2|人類具有EF手型結(jié)構(gòu)域1的細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子(CGREF1)，mRNA|qPCR正向引物匹配[378..394]|qPCR反向引物匹配[455..431]|qPCR探針匹配[396..415]CGCGCAGCCCCTCCGGCCGCGGGCGCAGCGGGGGCGCTGGTGGAGCTGCGAAGGGCCAGGTCCGGCGGGCGGGGCGGCGGCTGGCACTGGCTCCGGACTCTGCCCGGCCAGGGCGGCGGCTCCAGCCGGGAGGGCGACGTGGAGCGGCCACGTGGAGCGGCCCGGGGGAGGCTGGCGGCGGGAGGCGAGGCGCGGGCGGCGCAGCAGCCAGGAGCGCCCACGGAGCTGGACCCCCAGAGCCGCGCGGCGCCGCAGCAGTTCCAGGAAGGATGTTACCTTTGACGATGACAGTGTTAATCCTGCTGCTGCTCCCCACGGGTCAGGCTGCCCCAAAGGATGGAGTCACAAGGCCAGACTCTGAAGTGCAGCATCAGCTCCTGCCCAACCCCTTCCAGCCAGGCCAGGAGCAGCTCGGACTTCTGCAGAGCTACCTAAAGGGACTAGGAAGGACAGAAGTGCAACTGGAGCATCTGAGCCGGGAGCAGGTTCTCCTCTACCTCTTTGCCCTCCATGACTATGACCAGAGTGGACAGCTGGATGGCCTGGAGCTGCTGTCCATGTTGACAGCTGCTCTGGCCCCTGGAGCTGCCAACTCTCCTACCACCAACCCGGTGATATTGATAGTGGACAAAGTGCTCGAGACGCAGGACCTGAATGGGGATGGGCTCATGACCCCTGCTGAGCTCATCAACTTCCCGGGAGTAGCCCTCAGGCACGTGGAGCCCGGAGAGCCCCTTGCTCCATCTCCTCAGGAGCCACAAGCTGTTGGAAGGCAGTCCCTATTAGCTAAAAGCCCATTAAGACAAGAAACACAGGAAGCCCCTGGTCCCAGAGAAGAAGCAAAGGGCCAGGTAGAGGCCAGAAGGGAGTCTTTGGATCCTGTCCAGGAGCCTGGGGGCCAGGCAGAGGCTGATGGAGATGTTCCAGGGCCCAGAGGGGAAGCTGAGGGCCAGGCAGAGGCTAAAGGAGATGCCCCTGGGCCCAGAGGGGAAGCTGGGGGCCAGGCAGAGGCTGAAGGAGATGCCCCCGGGCCCAGAGGGGAAGCTGGGGGCCAGGCAGAGGCCAGGGAGAATGGAGAGGAGGCCAAGGAACTTCCAGGGGAAACACTGGAGTCTAAGAACACCCAAAATGACTTTGAGGTGCACATTGTTCAAGTGGAGAATGATGAGATCTAGATCTTGAAGATACAGGTACCCCACGAAGTCTCAGTGCCAGAACATAAGCCCTGAAGTGGGCAGGGGAAATGTACGCTGGGACAAGGACCATCTCTGTGCCCCCTGTCTGGTCCCAGTAGGTATCAGGTCTTTCTGTGCAGCTCAGGGAGACCCTAAGTTAAGGGGCAGATTACCAATAAAGAACTGAATGAATTCATCCCCCCGGGCCACCTCTCTACCCGTCCAGCCTGCCCAGACCCTCTCAGAGGAACGGGGTTGGGGACCGAAAGGACAGGGATGCCGCCTGCCCAGTGTTTCTGGGCCTCACGGTGCTCCGGCAGCAGAGCGCATGGTGCTAGCCATGGCCGGCTGCAGAGGACCCAGTGAGGAAAGCTCAGTCTATCCCTGGGCCCCAAACCCTCACCGGTTCCCCCTCACCTGGTGTTCAGACACCCCATGCTCTCCTGCAGCTCAGGGCAGGTGACCCCATCCCCAGTAATATTAATCATCACTAGAACTTTTTGAGAGCCTTGTACACATCAGGCATCATGCTGGGCATTTTATATATGATTTTATCCTCACAATAATTCTGTAGCCAAGCAGAATTGGTTCCATTTGACAGATGAAGAAATTGAGGCAGATTGCGTTAAGTGCTGTACCCTAAGGTGATATGCAGCTAATTAAATGGCAGATTTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO75激肽釋放酶10，轉(zhuǎn)錄物變體1＞gi|22208981|ref|NM_002776.3|人類激肽釋放酶10(KLK10)，轉(zhuǎn)錄物變體1，mRNA|qPCR正向引物匹配[851..874]|qPCR反向引物匹配[950..931]|qPCR探針匹配[890..914]CATCCTGCCACCCCTAGCCTTGCTGGGGACGTGAACCCTCTCCCCGCGCCTGGGAAGCCTTCTTGGCACCGGGACCCGGAGAATCCCCACGGAAGCCAGTTCCAAAAGGGATGAAAAGGGGGCGTTTCGGGCACTGGGAGAAGCCTGTATTCCAGGGCCCCTCCCAGAGCAGGAATCTGGGACCCAGGAGTGCCAGCCTCACCCACGCAGATCCTGGCCATGAGAGCTCCGCACCTCCACCTCTCCGCCGCCTCTGGCGCCCGGGCTCTGGCGAAGCTGCTGCCGCTGCTGATGGCGCAACTCTGGGCCGCAGAGGCGGCGCTGCTCCCCCAAAACGACACGCGCTTGGACCCCGAAGCCTATGGCTCCCCGTGCGCGCGCGGCTCGCAGCCCTGGCAGGTCTCGCTCTTCAACGGCCTCTCGTTCCACTGCGCGGGTGTCCTGGTGGACCAGAGTTGGGTGCTGACGGCCGCGCACTGCGGAAACAAGCCACTGTGGGCTCGAGTAGGGGATGACCACCTGCTGCTTCTTCAGGGAGAGCAGCTCCGCCGGACCACTCGCTCTGTTGTCCATCCCAAGTACCACCAGGGCTCAGGCCCCATCCTGCCAAGGCGAACGGATGAGCACGATCTCATGTTGCTGAAGCTGGCCAGGCCCGTAGTGCTGGGGCCCCGCGTCCGGGCCCTGCAGCTTCCCTACCGCTGTGCTCAGCCCGGAGACCAGTGCCAGGTTGCTGGCTGGGGCACCACGGCCGCCCGGAGAGTGAAGTACAACAAGGGCCTGACCTGCTCCAGCATCACTATCCTGAGCCCTAAAGAGTGTGAGGTCTTCTACCCTGGCGTGGTCACCAACAACATGATATGTGCTGGACTGGACCGGGGCCAGGACCCTTGCCAGAGTGACTCTGGAGGCCCCCTGGTCTGTGACGAGACCCTCCAAGGCATCCTCTCGTGGGGTGTTTACCCCTGTGGCTCTGCCCAGCATCCAGCTGTCTACACCCAGATCTGCAAATACATGTCCTGGATCAATAAAGTCATACGCTCCAACTGATCCAGATGCTACGCTCCAGCTGATCCAGATGTTATGCTCCTGCTGATCCAGATGCCCAGAGGCTCCATCGTCCATCCTCTTCCTCCCCAGTCGGCTGAACTCTCCCCTTGTCTGCACTGTTCAAACCTCTGCCGCCCTCCACACCTCTAAACATCTCCCCTCTCACCTCATTCCCCCACCTATCCCCATTCTCTGCCTGTACTGAAGCTGAAATGCAGGAAGTGGTGGCAAAGGTTTATTCCAGAGAAGCCAGGAAGCCGGTCATCACCCAGCCTCTGAGAGCAGTTACTGGGGTCACCCAACCTGACTTCCTCTGCCACTCCCTGCTGTGTGACTTTGGGCAAGCCAAGTGCCCTCTCTGAACCTCAGTTTCCTCATCTGCAAAATGGGAACAATGACGTGCCTACCTCTTAGACATGTTGTGAGGAGACTATGATATAACATGTGTATGTAAATCTTCATGGTGATTGTCATGTAAGGCTTAACACAGTGGGTGGTGAGTTCTGACTAAAGGTTACCTGTTGTCGTGASEQ ID NO76激肽釋放酶10，轉(zhuǎn)錄物變體2
＞gi|22208983|ref|NM_145888.1|人類激肽釋放酶10(KLK10)，轉(zhuǎn)錄物變體2，mRNA|qPCR正向引物匹配[714..737]|qPCR反向引物匹配[813..794]|qPCR探針匹配[753..777]ACCAGCGGCAGACCACAGGCAGGGCAGAGGCACGTCTGGGTCCCCTCCCTCCTTCCTATCGGCGACTCCCAGGATCCTGGCCATGAGAGCTCCGCACCTCCACCTCTCCGCCGCCTCTGGCGCCCGGGCTCTGGCGAAGCTGCTGCCGCTGCTGATGGCGCAACTCTGGGCCGCAGAGGCGGCGCTGCTCCCCCAAAACGACACGCGCTTGGACCCCGAAGCCTATGGCTCCCCGTGCGCGCGCGGCTCGCAGCCCTGGCAGGTCTCGCTCTTCAACGGCCTCTCGTTCCACTGCGCGGGTGTCCTGGTGGACCAGAGTTGGGTGCTGACGGCCGCGCACTGCGGAAACAAGCCACTGTGGGCTCGAGTAGGGGATGACCACCTGCTGCTTCTTCAGGGAGAGCAGCTCCGCCGGACCACTCGCTCTGTTGTCCATCCCAAGTACCACCAGGGCTCAGGCCCCATCCTGCCAAGGCGAACGGATGAGCACGATCTCATGTTGCTGAAGCTGGCCAGGCCCGTAGTGCTGGGGCCCCGCGTCCGGGCCCTGCAGCTTCCCTACCGCTGTGCTCAGCCCGGAGACCAGTGCCAGGTTGCTGGCTGGGGCACCACGGCCGCCCGGAGAGTGAAGTACAACAAGGGCCTGACCTGCTCCAGCATCACTATCCTGAGCCCTAAAGAGTGTGAGGTCTTCTACCCTGGCGTGGTCACCAACAACATGATATGTGCTGGACTGGACCGGGGCCAGGACCCTTGCCAGAGTGACTCTGGAGGCCCCCTGGTCTGTGACGAGACCCTCCAAGGCATCCTCTCGTGGGGTGTTTACCCCTGTGGCTCTGCCCAGCATCCAGCTGTCTACACCCAGATCTGCAAATACATGTCCTGGATCAATAAAGTCATACGCTCCAACTGATCCAGATGCTACGCTCCAGCTGATCCAGATGTTATGCTCCTGCTGATCCAGATGCCCAGAGGCTCCATCGTCCATCCTCTTCCTCCCCAGTCGGCTGAACTCTCCCCTTGTCTGCACTGTTCAAACCTCTGCCGCCCTCCACACCTCTAAACATCTCCCCTCTCACCTCATTCCCCCACCTATCCCCATTCTCTGCCTGTACTGAAGCTGAAATGCAGGAAGTGGTGGCAAAGGTTTATTCCAGAGAAGCCAGGAAGCCGGTCATCACCCAGCCTCTGAGAGCAGTTACTGGGGTCACCCAACCTGACTTCCTCTGCCACTCCCTGCTGTGTGACTTTGGGCAAGCCAAGTGCCCTCTCTGAACCTCAGTTTCCTCATCTGCAAAATGGGAACAATGACGTGCCTACCTCTTAGACATGTTGTGAGGAGACTATGATATAACATGTGTATGTAAATCTTCATGGTGATTGTCATGTAAGGCTTAACACAGTGGGTGGTGAGTTCTGACTAAAGGTTACCTGTTGTCGTGA SEQ ID NO77金屬蛋白酶組織抑制劑1＞gi|4507508|ref|NM_003254.1|人類金屬蛋白酶組織抑制劑1(促紅細(xì)胞活性劑、膠原酶抑制劑(TIMP1)，mRNA|qPCR正向引物匹配[221..241]|qPCR反向引物匹配[359..340]|qPCR探針匹配[251..283]AGGGGCCTTAGCGTGCCGCATCGCCGAGATCCAGCGCCCAGAGAGACACCAGAGAACCCACCATGGCCCCCTTTGAGCCCCTGGCTTCTGGCATCCTGTTGTTGCTGTGGCTGATAGCCCCCAGCAGGGCCTGCACCTGTGTCCCACCCCACCCACAGACGGCCTTCTGCAATTCCGACCTCGTCATCAGGGCCAAGTTCGTGGGGACACCAGAAGTCAACCAGACCACCTTATACCAGCGTTATGAGATCAAGATGACCAAGATGTATAAAGGGTTCCAAGCCTTAGGGGATGCCGCTGACATCCGGTTCGTCTACACCCCCGCCATGGAGAGTGTCTGCGGATACTTCCACAGGTCCCACAACCGCAGCGAGGAGTTTCTCATTGCTGGAAAACTGCAGGATGGACTCTTGCACATCACTACCTGCAGTTTCGTGGCTCCCTGGAACAGCCTGAGCTTAGCTCAGCGCCGGGGCTTCACCAAGACCTACACTGTTGGCTGTGAGGAATGCACAGTGTTTCCCTGTTTATCCATCCCCTGCAAACTGCAGAGTGGCACTCATTGCTTGTGGACGGACCAGCTCCTCCAAGGCTCTGAAAAGGGCTTCCAGTCCCGTCACCTTGCCTGCCTGCCTCGGGAGCCAGGGCTGTGCACCTGGCAGTCCCTGCGGTCCCAGATAGCCTGAATCCTGCCCGGAGTGGAACTGAAGCCTGCACAGTGTCCACCCTGTTCCCACTCCCATCTTTCTTCCGGACAATGAAATAAAGAGTTACCACCCAGCSEQ ID NO78富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白質(zhì)＞gi|48675809|ref|NM_003118.2|人類富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白質(zhì)(骨粘連蛋白)(SPARC)，mRNA |qPCR正向引物匹配[788..810]|qPCR反向引物匹配[915..898]|qPCR探針匹配[818..839]GTTGCCTGTCTCTAAACCCCTCCACATTCCCGCGGTCCTTCAGACTGCCCGGAGAGCGCGCTCTGCCTGCCGCCTGCCTGCCTGCCACTGAGGGTTCCCAGCACCATGAGGGCCTGGATCTTCTTTCTCCTTTGCCTGGCCGGGAGGGCCTTGGCAGCCCCTCAGCAAGAAGCCCTGCCTGATGAGACAGAGGTGGTGGAAGAAACTGTGGCAGAGGTGACTGAGGTATCTGTGGGAGCTAATCCTGTCCAGGTGGAAGTAGGAGAATTTGATGATGGTGCAGAGGAAACCGAAGAGGAGGTGGTGGCGGAAAATCCCTGCCAGAACCACCACTGCAAACACGGCAAGGTGTGCGAGCTGGATGAGAACAACACCCCCATGTGCGTGTGCCAGGACCCCACCAGCTGCCCAGCCCCCATTGGCGAGTTTGAGAAGGTGTGCAGCAATGACAACAAGACCTTCGACTCTTCCTGCCACTTCTTTGCCACAAAGTGCACCCTGGAGGGCACCAAGAAGGGCCACAAGCTCCACCTGGACTACATCGGGCCTTGCAAATACATCCCCCCTTGCCTGGACTCTGAGCTGACCGAATTCCCCCTGCGCATGCGGGACTGGCTCAAGAACGTCCTGGTCACCCTGTATGAGAGGGATGAGGACAACAACCTTCTGACTGAGAAGCAGAAGCTGCGGGTGAAGAAGATCCATGAGAATGAGAAGCGCCTGGAGGCAGGAGACCACCCCGTGGAGCTGCTGGCCCGGGACTTCGAGAAGAACTATAACATGTACATCTTCCCTGTACACTGGCAGTTCGGCCAGCTGGACCAGCACCCCATTGACGGGTACCTCTCCCACACCGAGCTGGCTCCACTGCGTGCTCCCCTCATCCCCATGGAGCATTGCACCACCCGCTTTTTCGAGACCTGTGACCTGGACAATGACAAGTACATCGCCCTGGATGAGTGGGCCGGCTGCTTCGGCATCAAGCAGAAGGATATCGACAAGGATCTTGTGATCTAAATCCACTCCTTCCACAGTACCGGATTCTCTCTTTAACCCTCCCCTTCGTGTTTCCCCCAATGTTTAAAATGTTTGGATGGTTTGTTGTTCTGCCTGGAGACAAGGTGCTAACATAGATTTAAGTGAATACATTAACGGTGCTAAAAATGAAAATTCTAACCCAAGACATGACATTCTTAGCTGTAACTTAACTATTAAGGCCTTTTCCACACGCATTAATAGTCCCATTTTTCTCTTGCCATTTGTAGCTTTGCCCATTGTCTTATTGGCACATGGGTGGACACGGATCTGCTGGGCTCTGCCTTAAACACACATTGCAGCTTCAACTTTTCTCTTTAGTGTTCTGTTTGAAACTAATACTTACCGAGTCAGACTTTGTGTTCATTTCATTTCAGGGTCTTGGCTGCCTGTGGGCTTCCCCAGGTGGCCTGGAGGTGGGCAAAGGGAAGTAACAGACACACGATGTTGTCAAGGATGGTTTTGGGACTAGAGGCTCAGTGGTGGGAGAGATCCCTGCAGAACCCACCAACCAGAACGTGGTTTGCCTGAGGCTGTAACTGAGAGAAAGATTCTGGGGCTGTGTTATGAAAATATAGACATTCTCACATAAGCCCAGTTCATCACCATTTCCTCCTTTACCTTTCAGTGCAGTTTCTTTTCACATTAGGCTGTTGGTTCAAACTTTTGGGAGCACGGACTGTCAGTTCTCTGGGAAGTGGTCAGCGCATCCTGCAGGGCTTCTCCTCCTCTGTCTTTTGGAGAACCAGGGCTCTTCTCAGGGGCTCTAGGGACTGCCAGGCTGTTTCAGCCAGGAAGGCCAAAATCAAGAGTGAGATGTAGAAAGTTGTAAAATAGAAAAAGTGGAGTTGGTGAATCGGTTGTTCTTTCCTCACATTTGGATGATTGTCATAAGGTTTTTAGCATGTTCCTCCTTTTCTTCACCCTCCCCTTTTTTCTTCTATTAATCAAGAGAAACTTCAAAGTTAATGGGATGGTCGGATCTCACAGGCTGAGAACTCGTTCACCTCCAAGCATTTCATGAAAAAGCTGCTTCTTATTAATCATACAAACTCTCACCATGATGTGAAGAGTTTCACAAATCCTTCAAAATAAAAAGTAATGACTTAGAAACTGCCTTCCTGGGTGATTTGCATGTGTCTTAGTCTTAGTCACCTTATTATCCTGACACAAAAACACATGAGCATACATGTCTACACATGACTACACAAATGCAAACCTTTGCAAACACATTATGCTTTTGCACACACACACCTGTACACACACACCGGCATGTTTATACACAGGGAGTGTATGGTTCCTGTAAGCACTAAGTTAGCTGTTTTCATTTAATGACCTGTGGTTTAACCCTTTTGATCACTACCACCATTATCAGCACCAGACTGAGCAGCTATATCCTTTTATTAATCATGGTCATTCATTCATTCATTCATTCACAAAATATTTATGATGTATTTACTCTGCACCAGGTCCCATGCCAAGCACTGGGGACACAGTTATGGCAAAGTAGACAAAGCATTTGTTCATTTGGAGCTTAGAGTCCAGGAGGAATACATTAGATAATGACACAATCAAATATAAATTGCAAGATGTCACAGGTGTGATGAAGGGAGAGTAGGAGAGACCATGAGTATGTGTAACAGGAGGACACAGCATTATTCTAGTGCTGTACTGTTCCGTACGGCAGCCACTACCCACATGTAACTTTTTAAGATTTAAATTTAAATTAGTTAACATTCAAAACGCAGCTCCCCAATCACACTAGCAACATTTCAAGTGCTTGAGAGCCATGCATGATTAGTGGTTACCCTATTGAATAGGTCAGAAGTAGAATCTTTTCATCATCACAGAAAGTTCTATTGGACAGTGCTCTTCTAGATCATCATAAGACTACAGAGCACTTTTCAAAGCTCATGCATGTTCATCATGTTAGTGTCGTATTTTGAGCTGGGGTTTTGAGACTCCCCTTAGAGATAGAGAAACAGACCCAAGAAATGTGCTCAATTGCAATGGGCCACATACCTAGATCTCCAGATGTCATTTCCCCTCTCTTATTTTAAGTTATGTTAAGATTACTAAAACAATAAAAGCTCCTAAAAAATCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SEQ ID NO79
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白＞gi|4507466|ref|NM_000358.1|人類68kDa的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFBI)，mRNA|qPCR據(jù)assay_on_demand情況匹配[170..194]GCTTGCCCGTCGGTCGCTAGCTCGCTCGGTGCGCGTCGTCCCGCTCCATGGCGCTCTTCGTGCGGCTGCTGGCTCTCGCCCTGGCTCTGGCCCTGGGCCCCGCCGCGACCCTGGCGGGTCCCGCCAAGTCGCCCTACCAGCTGGTGCTGCAGCACAGCAGGCTCCGGGGCCGCCAGCACGGCCCCAACGTGTGTGCTGTGCAGAAGGTTATTGGCACTAATAGGAAGTACTTCACCAACTGCAAGCAGTGGTACCAAAGGAAAATCTGTGGCAAATCAACAGTCATCAGCTACGAGTGCTGTCCTGGATATGAAAAGGTCCCTGGGGAGAAGGGCTGTCCAGCAGCCCTACCACTCTCAAACCTTTACGAGACCCTGGGAGTCGTTGGATCCACCACCACTCAGCTGTACACGGACCGCACGGAGAAGCTGAGGCCTGAGATGGAGGGGCCCGGCAGCTTCACCATCTTCGCCCCTAGCAACGAGGCCTGGGCCTCCTTGCCAGCTGAAGTGCTGGACTCCCTGGTCAGCAATGTCAACATTGAGCTGCTCAATGCCCTCCGCTACCATATGGTGGGCAGGCGAGTCCTGACTGATGAGCTGAAACACGGCATGACCCTCACCTCTATGTACCAGAATTCCAACATCCAGATCCACCACTATCCTAATGGGATTGTAACTGTGAACTGTGCCCGGCTCCTGAAAGCCGACCACCATGCAACCAACGGGGTGGTGCACCTCATCGATAAGGTCATCTCCACCATCACCAACAACATCCAGCAGATCATTGAGATCGAGGACACCTTTGAGACCCTTCGGGCTGCTGTGGCTGCATCAGGGCTCAACACGATGCTTGAAGGTAACGGCCAGTACACGCTTTTGGCCCCGACCAATGAGGCCTTCGAGAAGATCCCTAGTGAGACTTTGAACCGTATCCTGGGCGACCCAGAAGCCCTGAGAGACCTGCTGAACAACCACATCTTGAAGTCAGCTATGTGTGCTGAAGCCATCGTTGCGGGGCTGTCTGTAGAGACCCTGGAGGGCACGACACTGGAGGTGGGCTGCAGCGGGGACATGCTCACTATCAACGGGAAGGCGATCATCTCCAATAAAGACATCCTAGCCACCAACGGGGTGATCCACTACATTGATGAGCTACTCATCCCAGACTCAGCCAAGACACTATTTGAATTGGCTGCAGAGTCTGATGTGTCCACAGCCATTGACCTTTTCAGACAAGCCGGCCTCGGCAATCATCTCTCTGGAAGTGAGCGGTTGACCCTCCTGGCTCCCCTGAATTCTGTATTCAAAGATGGAACCCCTCCAATTGATGCCCATACAAGGAATTTGCTTCGGAACCACATAATTAAAGACCAGCTGGCCTCTAAGTATCTGTACCATGGACAGACCCTGGAAACTCTGGGCGGCAAAAAACTGAGAGTTTTTGTTTATCGTAATAGCCTCTGCATTGAGAACAGCTGCATCGCGGCCCACGACAAGAGGGGGAGGTACGGGACCCTGTTCACGATGGACCGGGTGCTGACCCCCCCAATGGGGACTGTCATGGATGTCCTGAAGGGAGACAATCGCTTTAGCATGCTGGTAGCTGCCATCCAGTCTGCAGGACTGACGGAGACCCTCAACCGGGAAGGAGTCTACACAGTCTTTGCTCCCACAAATGAAGCCTTCCGAGCCCTGCCACCAAGAGAACGGAGCAGACTCTTGGGAGATGCCAAGGAACTTGCCAACATCCTGAAATACCACATTGGTGATGAAATCCTGGTTAGCGGAGGCATCGGGGCCCTGGTGCGGCTAAAGTCTCTCCAAGGTGACAAGCTGGAAGTCAGCTTGAAAAACAATGTGGTGAGTGTCAACAAGGAGCCTGTTGCCGAGCCTGACATCATGGCCACAAATGGCGTGGTCCATGTCATCACCAATGTTCTGCAGCCTCCAGCCAACAGACCTCAGGAAAGAGGGGATGAACTTGCAGACTCTGCGCTTGAGATCTTCAAACAAGCATCAGCGTTTTCCAGGGCTTCCCAGAGGTCTGTGCGACTAGCCCCTGTCTATCAAAAGTTATTAGAGAGGATGAAGCATTAGCTTGAAGCACTACAGGAGGAATGCACCACGGCAGCTCTCCGCCAATTTCTCTCAGATTTCCACAGAGACTGTTTGAATGTTTTCAAAACCAAGTATCACACTTTAATGTACATGGGCCGCACCATAATGAGATGTGAGCCTTGTGCATGTGGGGGAGGAGGGAGAGAGATGTACTTTTTAAATCATGTTCCCCCTAAACATGGCTGTTAACCCACTGCATGCAGAAACTTGGATGTCACTGCCTGACATTCACTTCCAGAGAGGACCTATCCCAAATGTGGAATTGACTGCCTATGCCAAGTCCCTGGAAAAGGAGCTTCAGTATTGTGGGGCTCATAAAACATGAATCAAGCAATCCAGCCTCATGGGAAGTCCTGGCACAGTTTTTGTAAAGCCCTTGCACAGCTGGAGAAATGGCATCATTATAAGCTATGAGTTGAAATGTTCTGTCAAATGTGTCTCACATCTACACGTGGCTTGGAGGCTTTTATGGGGCCCTGTCCAGGTAGAAAAGAAATGGTATGTAGAGCTTAGATTTCCCTATTGTGACAGAGCCATGGTGTGTTTGTAATAATAAAACCAAAGAAACATA SEQ ID NO80包含EGF的纖蛋白樣細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)2＞gi|8393298|ref|NM_016938.1|人類包含EGF的纖蛋白樣細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)2(EFEMP2)，mRNA|qPCR據(jù)assay_on_demand情況匹配[1248..1272]CAAGCTTGGCACGAGGGCAGGCATTGCCCGAGCCAGCCGAGCCGCCAGAGCCGCGGGCCGCGCGGGTGTCGCGGGCCCAACCCCAGGATGCTCCCCTGCGCCTCCTGCCTACCCGGGTCTCTACTGCTCTGGGCGCTGCTACTGTTGCTCTTGGGATCAGCTTCTCCTCAGGATTCTGAAGAGCCCGACAGCTACACGGAATGCACAGATGGCTATGAGTGGGACCCAGACAGCCAGCACTGCCGGGATGTCAACGAGTGTCTGACCATCCCTGAGGCCTGCAAGGGGGAAATGAAGTGCATCAACCACTACGGGGGCTACTTGTGCCTGCCCCGCTCCGCTGCCGTCATCAACGACCTACACGGCGAGGGACCCCCGCCACCAGTGCCTCCCGCTCAACACCCCAACCCCTGCCCACCAGGCTATGAGCCCGACGATCAGGACAGCTGTGTGGATGTGGACGAGTGTGCCCAGGCCCTGCACGACTGTCGCCCCAGCCAGGACTGCCATAACTTGCCTGGCTCCTATCAGTGCACCTGCCCTGATGGTTACCGCAAGATCGGGCCCGAGTGTGTGGACATAGACGAGTGCCGCTACCGCTACTGCCAGCACCGCTGCGTGAACCTGCCTGGCTCCTTCCGCTGCCAGTGCGAGCCGGGCTTCCAGCTGGGGCCTAACAACCGCTCCTGTGTTGATGTGAACGAGTGTGACATGGGGGCCCCATGCGAGCAGCGCTGCTTCAACTCCTATGGGACCTTCCTGTGTCGCTGCCACCAGGGCTATGAGCTGCATCGGGATGGCTTCTCCTGCAGTGATATTGATGAGTGTAGCTACTCCAGCTACCTCTGTCAGTACCGCTGCGTCAACGAGCCAGGCCGTTTCTCCTGCCACTGCCCACAGGGTTACCAGCTGCTGGCCACACGCCTCTGCCAAGACATTGATGAGTGTGAGTCTGGTGCGCACCAGTGCTCCGAGGCCCAAACCTGTGTCAACTTCCATGGGGGCTACCGCTGCGTGGACACCAACCGCTGCGTGGAGCCCTACATCCAGGTCTCTGAGAACCGCTGTCTCTGCCCGGCCTCCAACCCTCTATGTCGAGAGCAGCCTTCATCCATTGTGCACCGCTACATGACCATCACCTCGGAGCGGAGAGTACCCGCTGACGTGTTCCAGATCCAGGCGACCTCCGTCTACCCCGGTGCCTACAATGCCTTTCAGATCCGTGCTGGAAACTCGCAGGGGGACTTTTACATTAGGCAAATCAACAACGTCAGCGCCATGCTGGTCCTCGCCCGGCCGGTGACGGGCCCCCGGGAGTACGTGCTGGACCTGGAGATGGTCACCATGAATTCCCTCATGAGCTACCGGGCCAGCTCTGTACTGAGGCTCACCGTCTTTGTAGGGGCCTACACCTTCTGAGGAGCAGGAGGGAGCCACCCTCCCTGCAGCTACCCTAGCTGAGGAGCCTGTTGTGAGGGGCAGAATGAGAAAGGCCCAGGGGCCCCCATTGACAGGAGCTGGGAGCTCTGCACCACGAGCTTCAGTCACCCCGAGAGGAGAGGAGGTAACGAGGAGGGCGGACTCCAGGCCCCGGCCCAGAGATTTGGACTTGGCTGGCTTGCAGGGGTCCTAAGAAACTCCACTCTGGACAGCGCCAGGAGGCCCTGGGTTCCATTCCTAACTCTGCCTCAAACTGTACATTTGGATAAGCCCTAGTAGTTCCCTGGGCCTGTTTTTCTATAAAACGAGGCAACTGGSEQ ID NO81
光亮蛋白聚糖＞gi|21359858|ref|NM_002345.2|人類光亮蛋白聚糖(LUM)，mRNA|qPCR正向引物匹配[61..84]|qPCR反向引物匹配[182..162]|qPCR探針匹配[117..152]GTATCACTCAGAATCTGGCAGCCAGTTCCGTCCTGACAGAGTTCACAGCATATATTGGTGGATTCTTGTCCATAGTGCATCTGCTTTAAGAATTAACGAAAGCAGTGTCAAGACAGTAAGGATTCAAACCATTTGCCAAAAATGAGTCTAAGTGCATTTACTCTCTTCCTGGCATTGATTGGTGGTACCAGTGGCCAGTACTATGATTATGATTTTCCCCTATCAATTTATGGGCAATCATCACCAAACTGTGCACCAGAATGTAACTGCCCTGAAAGCTACCCAAGTGCCATGTACTGTGATGAGCTGAAATTGAAAAGTGTACCAATGGTGCCTCCTGGAATCAAGTATCTTTACCTTAGGAATAACCAGATTGACCATATTGATGAAAAGGCCTTTGAGAATGTAACTGATCTGCAGTGGCTCATTCTAGATCACAACCTTCTAGAAAACTCCAAGATAAAAGGGAGAGTTTTCTCTAAATTGAAACAACTGAAGAAGCTGCATATAAACCACAACAACCTGACAGAGTCTGTGGGCCCACTTCCCAAATCTCTGGAGGATCTGCAGCTTACTCATAACAAGATCACAAAGCTGGGCTCTTTTGAAGGATTGGTAAACCTGACCTTCATCCATCTCCAGCACAATCGGCTGAAAGAGGATGCTGTTTCAGCTGCTTTTAAAGGTCTTAAATCACTCGAATACCTTGACTTGAGCTTCAATCAGATAGCCAGACTGCCTTCTGGTCTCCCTGTCTCTCTTCTAACTCTCTACTTAGACAACAATAAGATCAGCAACATCCCTGATGAGTATTTCAAGCGTTTTAATGCATTGCAGTATCTGCGTTTATCTCACAACGAACTGGCTGATAGTGGAATACCTGGAAATTCTTTCAATGTGTCATCCCTGGTTGAGCTGGATCTGTCCTATAACAAGCTTAAAAACATACCAACTGTCAATGAAAACCTTGAAAACTATTACCTGGAGGTCAATCAACTTGAGAAGTTTGACATAAAGAGCTTCTGCAAGATCCTGGGGCCATTATCCTACTCCAAGATCAAGCATTTGCGTTTGGATGGCAATCGCATCTCAGAAACCAGTCTTCCACCGGATATGTATGAATGTCTACGTGTTGCTAACGAAGTCACTCTTAATTAATATCTGTATCCTGGAACAATATTTTATGGTTATGTTTTTCTGTGTGTCAGTTTTCATAGTATCCATATTTTATTACTGTTTATTACTTCCATGAATTTTAAAATCTGAGGGAAATGTTTTGTAAACATTTATTTTTTTTAAAGAAAAGATGAAAGGCAGGCCTATTTCATCACAAGAACACACACATATACACGAATAGACATCAAACTCAATGCTTTATTTGTAAATTTAGTGTTTTTTTATTTCTACTGTCAAATGATGTGCAAAACCTTTTACTGGTTGCATGGAAATCAGCCAAGTTTTATAATCCTTAAATCTTAATGTTCCTCAAAGCTTGGATTAAATACATATGGATGTTACTCTCTTGCACCAAATTATCTTGATACATTCAAATTTGTCTGGTTAAAAAATAGGTGGTAGATATTGAGGCCAAGAATATTGCAAAATACATGAAGCTTCATGCACTTAAAGAAGTATTTTTAGAATAAGAATTTGCATACTTACCTAGTGAAACTTTTCTAGAATTATTTTTCACTCTAAGTCATGTATGTTTCTCTTTGATTATTTGCATGTTATGTTTAATAAGCTACTAGCAAAATAAAACATAGCAAATGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SE QID NO82Stannin＞gi|29893560|ref|NM_003498.3|人類stannin(SNN)，mRNAAGCGGGGCCGGACCGGGCGGGCGGAGCCGGGCCCGCGGGGCTGCTGCGGGGCGATCGGGCCGGGCCGCTGCCGCGCCATGGACTCCCGTGTCCAGCCTGAGTTCCAGCCTCACTGAGTGGCCACCCCCAAAGTGCTGCCAGCCGAGGAAGCCCCCAGCACTGACCATGTCTATTATGGACCACAGCCCCACCACGGGCGTGGTCACAGTCATCGTCATCCTCATTGCCATCGCGGCCCTGGGGGCCTTGATCCTGGGCTGCTGGTGCTACCTGCGGCTGCAGCGCATCAGCCAGTCAGAGGACGAGGAGAGCATCGTGGGGGATGGGGAGACCAAGGAACCCTTCCTGCTGGTGCAGTATTCGGCCAAGGGACCGTGCGTGGAGAGAAAGGCCAAGCTGATGACTCCCAACGGCCCGGAAGTCCACGGCTGAGCCAGGATGCAAGGCTCCTGGTCCTGTTTGCAGCCGGCCAAGAGGCGCTGGGAGGGGCAAAACCATACGGATGCGCTGCTGTCTGAGAGGAAGGGCTGACACTTGCTGGCATGGCCTCTGCGGGCTTCGTCATCGCATGCACTGATGCCCGGGGACCTGGCTGTCCTGGGCTTCCCCTCGGCCTCCAGGTGAGGCTGCCCATTGCAGGCACTGGGCAGGCCTGACCTTGCTGGGGCTCATGGCCCTGTAGCGCTTTTGTTACTTGAATGTCTAGCTGAGCCTGTTTTTGATGGAGCTACTACTGTAATGCGTGAACTAACAAACCTGTGAACTGTAAATAGGCCCCTGGAAGCACGTGCTTAAGCCCTTTTGCTGATTTTTAAAAATATCATCTAGCGCACACGGGACTGGTATTCTGGCTGTACTAATGACAAGCTGAGTCAAGACCCTGGAGGGTCATAGGCTTGTAAAGGCCCACGCCACACTCGGCAGGGGTCTCTCATGTGTGTCCATCTGCGTGTATGTCAAGGAAGTGAGATGCCAATTTGGGGTCTTGAGGCTGACCAGTTGGGGTGCTTGGGTGATCTCTGCTTCATTAGTCATGGGTGGAAGAAAAACCACACCCCCCGCACCCCTCCGTTCTTTCTGCATAGACTCACTTGTTAAATAGCAGTTCTGTTGAGAGTGGAGTTACTGCAGGGAAGCTACCGGACCTGCCTGGGAGCCAGTGAAGGGCGAGTCAGGGCACGCGTCCTGGAGGCTGCCAGCGTCCTTGTAGCAGAGCAGTTTCTTGCCGCTTGGGTCTTCAGCACGCCAAGCCCCCCACCAACCCTCCACCCCGAGTGAAGGCTTCGCTGAAATTGCTTTGGTCCTCATAGAGCCTGTGGTGGCTACTTTTGGTCTGAAACCCACTTGGCCCAGGAAAGAGAAAAGGTTGTATGTTTTGTGTTGGTGTTTCCTATTTTCTGCACTGGAGGGGAGGGGACTGTTGAGGTTCTGTCTTTTTTCTTCTTTTCCTCTTCCCTCTTCACATCACTTGGCTTCCTTTCCTCTCTGATGACCGTCCGCCTATGGGGTTCTGACTTCACTTTCCTCAGCGGGTCTCCAGTCCCCTGACCCAGCTCTAAAGGCACTTAGGACCCAGGGAACATTTCTCACGTGCACATTCCCCTAAGAGCCACCAGACTGCTTCCTGCCAGCCTGTGCTTGCGGCAGGGAGCCGGGGCAGGGCAGAGGTGAACTTGAAGTTCAGGACTTGACTCTCCCACAGGTGGTGAGCTGGTGGCTCTCTGGTGAGCTAGTGTCTCCACAGCCTGTCTCCAAGGCCTCCCCTATGTACATTTCAGTGAGCTCACTTTGATTTTTAATCCCACCACAAGCACATACTAATTTTATTTATGATTCAAATGTGACTCGTGCCTGCCCATCCCTGTAATAGATGGAAGGTCAGCCCCGGCTTAACCACAGAGCACTGGCCCTTCATGGCTGAGCTCAGAGCTCTGGCCTCCTGCTCAGACTAAAGGCACCTCCTCTGGCCTCACCCAAGCCTCTTCTAAAAACCATGTTGAATGAATCCACGTTCTGGAACCCCGAGGCGGGAGAAGTAGGGAGCTGTTCGTTTAAGCAGCATACACCTAAATTGGGGGTTTAAACATTAAGTAGGAGCTTGGGGTGGAAGAGGGACAGCCGGCTGGGCCACCTGAGCAGAAGGTGGTAATGAAACACCTCAGCTGGGCTCTTGGGAGACCTTAGGAAGCAGGAGAGGCAACACCTCTGGCTACTGATGGTGTGGCAAGTTCAGAAGAGGTGGTGGTGGGGTAGGCGTGATGTCAGCAGAAGCCCTGCAGGCTGGGTGGGCAGGACACGTGGTGGGGGCCACTGAAACCAGGCCTAGGAGGGAGAACAAGTTCCAAAGGTGCCGACTGGAAGAAGGGGGTAAAAGTTTGCTTTGGTGAGTGAGAAAAGGCTGGGGCGTGTGATCCATCCCCTCACGTTTCAGAACTTCCAGGCTTTCTACCTCGACTCTCACCACAGCCAGCACATACACCTAGGCTGTTTTTCCTTCCTCCACACCTGAGGGACGCAGCAACAGCTAGGATCTGCATTTTCAGGTTCCGAGCCTGACCCCTGGAACTGACCAGCGCTCGATTGTCAGCCTTGGCCTGGGGTTTTGACCTTGCCAGTGAAGTTTCGGTTTTGAAGTGATTAAATGTCACTTCCTCATCAGTTTCACTTCTGGAGGTTTTCTTATCCTACTCCCTGGTGCCAGGGACGTACCTGGGAGTTTGAATCAGGCCCATTTGAGCGTGGCAGCCGTGTTGGGTGAAGGTCCGGGGCTCGGTGAGGCACTGGGGGGGTTTTCGGGAGGAAAATGAAAATGCTTCTAGAATGAGTGAACCACATCATAGCTCTCACTGTTTTTTCAATAGCTACTTTTTTTAGCAGACACCAGAGCCACACTCAAATGGCTAAGTAGGTTATGACCTCTCTGGATTATTTTTGAATGCCCAACTGTTGCATTCAAGTTTTCTGACTAATAAGAAATTAAGCATTCATCCTTCGTATCACTGCAGAAGCAACAGTGGGGGCACAGGGAGGGAACTCTTGACACTGAGCCACTAAAATATGGACTAATTTTTTGGACAAATCTTCAAACGGACTGTGCTACTGTATTTGTCTCAAAGCTACCAAGTTTGTGCAATAAGTGGAAGGGATGTCATCCTTCTTCAATAAATGCTGAATGACATTCAAGCTGATTTTCTAGACCACTGAGAAAATCTTTATTTACAATAAATTTCAATAAAATTTGCATAAATATATTCCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAAAAAAAAAAAAA SEQ ID NO83分泌型磷蛋白1＞gi|38146097|ref|NM_000582.2|人類分泌型磷蛋白1(骨橋蛋白、骨唾液酸蛋白I、早期T-淋巴細(xì)胞活化劑1)(SPP1)，mRNA|qPCR據(jù)assay_on_demand情況匹配[253..277]CTCCCTGTGTTGGTGGAGGATGTCTGCAGCAGCATTTAAATTCTGGGAGGGCTTGGTTGTCAGCAGCAGCAGGAGGAGGCAGAGCACAGCATCGTCGGGACCAGACTCGTCTCAGGCCAGTTGCAGCCTTCTCAGCCAAACGCCGACCAAGGAAAACTCACTACCATGAGAATTGCAGTGATTTGCTTTTGCCTCCTAGGCATCACCTGTGCCATACCAGTTAAACAGGCTGATTCTGGAAGTTCTGAGGAAAAGCAGCTTTACAACAAATACCCAGATGCTGTGGCCACATGGCTAAACCCTGACCCATCTCAGAAGCAGAATCTCCTAGCCCCACAGACCCTTCCAAGTAAGTCCAACGAAAGCCATGACCACATGGATGATATGGATGATGAAGATGATGATGACCATGTGGACAGCCAGGACTCCATTGACTCGAACGACTCTGATGATGTAGATGACACTGATGATTCTCACCAGTCTGATGAGTCTCACCATTCTGATGAATCTGATGAACTGGTCACTGATTTTCCCACGGACCTGCCAGCAACCGAAGTTTTCACTCCAGTTGTCCCCACAGTAGACACATATGATGGCCGAGGTGATAGTGTGGTTTATGGACTGAGGTCAAAATCTAAGAAGTTTCGCAGACCTGACATCCAGTACCCTGATGCTACAGACGAGGACATCACCTCACACATGGAAAGCGAGGAGTTGAATGGTGCATACAAGGCCATCCCCGTTGCCCAGGACCTGAACGCGCCTTCTGATTGGGACAGCCGTGGGAAGGACAGTTATGAAACGAGTCAGCTGGATGACCAGAGTGCTGAAACCCACAGCCACAAGCAGTCCAGATTATATAAGCGGAAAGCCAATGATGAGAGCAATGAGCATTCCGATGTGATTGATAGTCAGGAACTTTCCAAAGTCAGCCGTGAATTCCACAGCCATGAATTTCACAGCCATGAAGATATGCTGGTTGTAGACCCCAAAAGTAAGGAAGAAGATAAACACCTGAAATTTCGTATTTCTCATGAATTAGATAGTGCATCTTCTGAGGTCAATTAAAAGGAGAAAAAATACAATTTCTCACTTTGCATTTAGTCAAAAGAAAAAATGCTTTATAGCAAAATGAAAGAGAACATGAAATGCTTCTTTCTCAGTTTATTGGTTGAATGTGTATCTATTTGAGTCTGGAAATAACTAATGTGTTTGATAATTAGTTTAGTTTGTGGCTTCATGGAAACTCCCTGTAAACTAAAAGCTTCAGGGTTATGTCTATGTTCATTCTATAGAAGAAATGCAAACTATCACTGTATTTTAATATTTGTTATTCTCTCATGAATAGAAATTTATGTAGAAGCAAACAAAATACTTTTACCCACTTAAAAAGAGAATATAACATTTTATGTCACTATAATCTTTTGTTTTTTAAGTTAGTGTATATTTTGTTGTGATTATCTTTTTGTGGTGTGAATAAATCTTTTATCTTGAATGTAATAAGAATTTGGTGGTGTCAATTGCTTATTTGTTTTCCCACGGTTGTCCAGCAATTAATAAAACATAACCTTTTTTACTGCCTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SEQ ID NO84硫酸軟骨素蛋白聚糖2
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|qPCR正向引物匹配[1050..1066]|qPCR反向引物匹配[1128..1104]|qPCR探針匹配[1071..1098]GGCTCTTCTTTGCCTCTGCTGGAGTCCGGGGAGTGGCGTTGGCTGCTAGAGCGATGCCGGGCCGGAGTTGCGTCGCCTTAGTCCTCCTGGCTGCCGCCGTCAGCTGTGCCGTCGCGCAGCACGCGCCGCCGTGGACAGAGGACTGCAGAAAATCAACCTATCCTCCTTCAGGACCAACGTACAGAGGTGCAGTTCCATGGTACACCATAAATCTTGACTTACCACCCTACAAAAGATGGCATGAATTGATGCTTGACAAGGCACCAATGCTAAAGGTTATAGTGAATTCTCTGAAGAATATGATAAATACATTCGTGCCAAGTGGAAAAGTTATGCAGGTGGTGGATGAAAAATTGCCTGGCCTACTTGGCAACTTTCCTGGCCCTTTTGAAGAGGAAATGAAGGGTATTGCCGCTGTTACTGATATACCTTTAGGAGAGATTATTTCATTCAATATTTTTTATGAATTATTTACCATTTGTACTTCAATAGTAGCAGAAGACAAAAAAGGTCATCTAATACATGGGAGAAACATGGATTTTGGAGTATTTCTTGGGTGGAACATAAATAATGATACCTGGGTCATAACTGAGCAACTAAAACCTTTAACAGTGAATTTGGATTTCCAAAGAAACAACAAAACTGTCTTCAAGGCTTCAAGCTTTGCTGGCTATGTGGGCATGTTAACAGGATTCAAACCAGGACTGTTCAGTCTTACACTGAATGAACGTTTCAGTATAAATGGTGGTTATCTGGGTATTCTAGAATGGATTCTGGGAAAGAAAGATGCCATGTGGATAGGGTTCCTCACTAGAACAGTTCTGGAAAATAGCACAAGTTATGAAGAAGCCAAGAATTTATTGACCAAGACCAAGATATTGGCCCCAGCCTACTTTATCCTGGGAGGCAACCAGTCTGGGGAAGGTTGTGTGATTACACGAGACAGAAAGGAATCATTGGATGTATATGAACTCGATGCTAAGCAGGGTAGATGGTATGTGGTACAAACAAATTATGACCGTTGGAAACATCCCTTCTTCCTTGATGATCGCAGAACGCCTGCAAAGATGTGTCTGAACCGCACCAGCCAAGAGAATATCTCATTTGAAACCATGTATGATGTCCTGTCAACAAAACCTGTCCTCAACAAGCTGACCGTATACACAACCTTGATAGATGTTACCAAAGGTCAATTCGAAACTTACCTGCGGGACTGCCCTGACCCTTGTATAGGTTGGTGAGCACACGTCTGGCCTACAGAATGCGGCCTCTGAGACATGAAGACACCATCTCCATGTGACCGAACACTGCAGCTGTCTGACCTTCCAAAGACTAAGACTCGCGGCAGGTTCTCTTTGAGTCAAAAGCTTGTCTTCGTCCATCTGTTGACAAATGACAGACCTTTTTTTTTCCCCCATCAGTTGATTTTTCTTATTTACAGATAACTTCTTTAGGGGAAGTAAAACAGTCATCTAGAATTCACTGAGTTTTGTTTCACTTTGACATTTGGGGATCTGGTGGGCAGTCGAACCATGGTGAACTCCACCTCCGTGGAATAAATGGAGATTCAGCGTGGGTGTTGAATCCAGCACGTCTGTGTGAGTAACGGGACAGTAAACACTCCACATTCTTCAGTTTTTCACTTCTACCTACATATTTGTATGTTTTTCTGTATAACAGCCTTTTCCTTCTGGTTCTAACTGCTGTTAAAATTAATATATCATTATCTTTGCTGTTATTGACAGCGATATAATTTTATTACATATGATTAGAGGGATGAGACAGACATTCACCTGTATATTTCTTTTAATGGGCACAAAATGGGCCCTTGCCTCTAAATAGCACTTTTTGGGGTTCAAGAAGTAATCAGTATGCAAAGCAATCTTTTATACAATAATTGAAGTGTTCCCTTTTTCATAATTACTGTACTTCCCAGTAACCCTAAGGAAGTTGCTAACTTAAAAAACTGCATCCCACGTTCTGTTAATTTAGTAAATAAACAAGTCAAAGACTTGTGGAAAATAGGAAGTGAACCCATATTTTAAATTCTCATAAGTAGCATTCATGTAATAAACAGGTTTTTAGTTTGTTCTTCAGATTGATAGGGAGTTTTAAAGAAATTTTAGTAGTTACTAAAATTATGTTACTGTATTTTTCAGAAATCAAACTGCTTATGAAAAGTACTAATAGAACTTGTTAACCTTTCTAACCTTCACGATTAACTGTGAAATGTACGTCATTTGTGCAAGACCGTTTGTCCACTTCATTTTGTATAATCACAGTTGTGTTCCTGACACTCAATAAACAGTCATTGGAAAGAGTGCCAGTCAGCAGTCATGCASEQ ID NO87絲氨酸蛋白酶11＞gi|21327712|ref|NM_002775.2|人類絲氨酸蛋白酶11(IGF結(jié)合絲氨酸蛋白酶)(PRSS11)，mRNA |qPCR正向引物匹配[1030..1048]|qPCR反向引物匹配[1106..1083]|qPCR探針匹配[1080..1050]CCGGCCCTCGCCCTGTCCGCCGCCACCGCCGCCGCCGCCAGAGTCGCCATGCAGATCCCGCGCGCCGCTCTTCTCCCGCTGCTGCTGCTGCTGCTGGCGGCGCCCGCCTCGGCGCAGCTGTCCCGGGCCGGCCGCTCGGCGCCTTTGGCCGCCGGGTGCCCAGACCGCTGCGAGCCGGCGCGCTGCCCGCCGCAGCCGGAGCACTGCGAGGGCGGCCGGGCCCGGGACGCGTGCGGCTGCTGCGAGGTGTGCGGCGCGCCCGAGGGCGCCGCGTGCGGCCTGCAGGAGGGCCCGTGCGGCGAGGGGCTGCAGTGCGTGGTGCCCTTCGGGGTGCCAGCCTCGGCCACGGTGCGGCGGCGCGCGCAGGCCGGCCTCTGTGTGTGCGCCAGCAGCGAGCCGGTGTGCGGCAGCGACGCCAACACCTACGCCAACCTGTGCCAGCTGCGCGCCGCCAGCCGCCGCTCCGAGAGGCTGCACCGGCCGCCGGTCATCGTCCTGCAGCGCGGAGCCTGCGGCCAAGGGCAGGAAGATCCCAACAGTTTGCGCCATAAATATAACTTTATCGCGGACGTGGTGGAGAAGATCGCCCCTGCCGTGGTTCATATCGAATTGTTTCGCAAGCTTCCGTTTTCTAAACGAGAGGTGCCGGTGGCTAGTGGGTCTGGGTTTATTGTGTCGGAAGATGGACTGATCGTGACAAATGCCCACGTGGTGACCAACAAGCACCGGGTCAAAGTTGAGCTGAAGAACGGTGCCACTTACGAAGCCAAAATCAAGGATGTGGATGAGAAAGCAGACATCGCACTCATCAAAATTGACCACCAGGGCAAGCTGCCTGTCCTGCTGCTTGGCCGCTCCTCAGAGCTGCGGCCGGGAGAGTTCGTGGTCGCCATCGGAAGCCCGTTTTCCCTTCAAAACACAGTCACCACCGGGATCGTGAGCACCACCCAGCGAGGCGGCAAAGAGCTGGGGCTCCGCAACTCAGACATGGACTACATCCAGACCGACGCCATCATCAACTATGGAAACTCGGGAGGCCCGTTAGTAAACCTGGACGGTGAAGTGATTGGAATTAACACTTTGAAAGTGACAGCTGGAATCTCCTTTGCAATCCCATCTGATAAGATTAAAAAGTTCCTCACGGAGTCCCATGACCGACAGGCCAAAGGAAAAGCCATCACCAAGAAGAAGTATATTGGTATCCGAATGATGTCACTCACGTCCAGCAAAGCCAAAGAGCTGAAGGACCGGCACCGGGACTTCCCAGACGTGATCTCAGGAGCGTATATAATTGAAGTAATTCCTGATACCCCAGCAGAAGCTGGTGGTCTCAAGGAAAACGACGTCATAATCAGCATCAATGGACAGTCCGTGGTCTCCGCCAATGATGTCAGCGACGTCATTAAAAGGGAAAGCACCCTGAACATGGTGGTCCGCAGGGGTAATGAAGATATCATGATCACAGTGATTCCCGAAGAAATTGACCCATAGGCAGAGGCATGAGCTGGACTTCATGTTTCCCTCAAAGACTCTCCCGTGGATGACGGATGAGGACTCTGGGCTGCTGGAATAGGACACTCAAGACTTTTGACTGCCATTTTGTTTGTTCAGTGGAGACTCCCTGGCCAACAGAATCCTTCTTGATAGTTTGCAGGCAAAACAAATGTAATGTTGCAGATCCGCAGGCAGAAGCTCTGCCCTTCTGTATCCTATGTATGCAGTGTGCTTTTTCTTGCCAGCTTGGGCCATTCTTGCTTAGACAGTCAGCATTTGTCTCCTCCTTTAACTGAGTCATCATCTTAGTCCAACTAATGCAGTCGATACAATGCGTAGATAGAAGAAGCCCCACGGGAGCCAGGATGGGACTGGTCGTGTTTGTGCTTTTCTCCAAGTCAGCACCCAAAGGTCAATGCACAGAGACCCCGGGTGGGTGAGCGCTGGCTTCTCAAACGGCCGAAGTTGCCTCTTTTAGGAATCTCTTTGGAATTGGGAGCACGATGACTCTGAGTTTGAGCTATTAAAGTACTTCTTACACATTG SEQ ID NO88分泌型frizzled相關(guān)蛋白2＞gi|42656988|ref|NM_050625.4|人類分泌型frizzled相關(guān)蛋白2(SFRP2)，mRNA|qPCR正向引物匹配[686..703]|qPCR反向引物匹配[750..728]|qPCR探針匹配[705..726]CCGGGTCGGAGCCCCCCGGAGCTGCGCGCGGGCTTGCAGCGCCTCGCCCGCGCTGTCCTCCCGGTGTCCCGCTTCTCCGCGCCCCAGCCGCCGGCTGCCAGCTTTTCGGGGCCCCGAGTCGCACCCAGCGAAGAGAGCGGGCCCGGGACAAGCTCGAACTCCGGCCGCCTCGCCCTTCCCCGGCTCCGCTCCCTCTGCCCCCTCGGGGTCGCGCGCCCACGATGCTGCAGGGCCCTGGCTCGCTGCTGCTGCTCTTCCTCGCCTCGCACTGCTGCCTGGGCTCGGCGCGCGGGCTCTTCCTCTTTGGCCAGCCCGACTTCTCCTACAAGCGCAGCAATTGCAAGCCCATCCCTGCCAACCTGCAGCTGTGCCACGGCATCGAATACCAGAACATGCGGCTGCCCAACCTGCTGGGCCACGAGACCATGAAGGAGGTGCTGGAGCAGGCCGGCGCTTGGATCCCGCTGGTCATGAAGCAGTGCCACCCGGACACCAAGAAGTTCCTGTGCTCGCTCTTCGCCCCCGTCTGCCTCGATGACCTAGACGAGACCATCCAGCCATGCCACTCGCTCTGCGTGCAGGTGAAGGACCGCTGCGCCCCGGTCATGTCCGCCTTCGGCTTCCCCTGGCCCGACATGCTTGAGTGCGACCGTTTCCCCCAGGACAACGACCTTTGCATCCCCCTCGCTAGCAGCGACCACCTCCTGCCAGCCACCGAGGAAGCTCCAAAGGTATGTGAAGCCTGCAAAAATAAAAATGATGATGACAACGACATAATGGAAACGCTTTGTAAAAATGATTTTGCACTGAAAATAAAAGTGAAGGAGATAACCTACATCAACCGAGATACCAAAATCATCCTGGAGACCAAGAGCAAGACCATTTACAAGCTGAACGGTGTGTCCGAAAGGGACCTGAAGAAATCGGTGCTGTGGCTCAAAGACAGCTTGCAGTGCACCTGTGAGGAGATGAACGACATCAACGCGCCCTATCTGGTCATGGGACAGAAACAGGGTGGGGAGCTGGTGATCACCTCGGTGAAGCGGTGGCAGAAGGGGCAGAGAGAGTTCAAGCGCATCTCCCGCAGCATCCGCAAGCTGCAGTGCTAGTCCCGGCATCCTGATGGCTCCGACAGGCCTGCTCCAGAGCACGGCTGACCATTTCTGCTCCGGGATCTCAGCTCCCGTTCCCCAAGCACACTCCTAGCTGCTCCAGTCTCAGCCTGGGCAGCTTCCCCCTGCCTTTTGCACGTTTGCATCCCCAGCATTTCCTGAGTTATAAGGCCACAGGAGTGGATAGCTGTTTTCACCTAAAGGAAAAGCCCACCCGAATCTTGTAGAAATATTCAAACTAATAAAATCATGAATATTTTTATGAAGTTTAAAAA SEQ ID NO89XIIB組磷脂酶A2＞gi|45505134|ref|NM_032562.2|人類XIIB組磷脂酶A2(PLA2G12B)，mRNATGTCCCTGGAATTCTGGGACACTGGCTGGGGTTTGAGGAGAGAAGCCAGTACCTACCTGGCTGCAGGATGAAGCTGGCCAGTGGCTTCTTGGTTTTGTGGCTCAGCCTTGGGGGTGGCCTGGCTCAGAGCGACACGAGCCCTGACACGGAGGAGTCCTATTCAGACTGGGGCCTTCGGCACCTCCGGGGAAGCTTTGAATCCGTCAATAGCTACTTCGATTCTTTTCTGGAGCTGCTGGGAGGGAAGAATGGAGTCTGTCAGTACAGGTGCCGATATGGAAAGGCACCAATGCCCAGACCTGGCTACAAGCCCCAAGAGCCCAATGGCTGCGGCTCCTATTTCCTGGGTCTCAAGGTACCAGAAAGTATGGACTTGGGCATTCCAGCAATGACAAAGTGCTGCAACCAGCTGGATGTCTGTTATGACACTTGCGGTGCCAACAAATATCGCTGTGATGCAAAATTCCGATGGTGTCTCCACTCGATCTGCTCTGACCTTAAGCGGAGTCTGGGCTTTGTCTCCAAAGTGGAAGCAGCCTGTGATTCCCTGGTTGACACTGTGTTCAACACCGTGTGGACCTTGGGCTGCCGCCCCTTTATGAATAGTCAGCGGGCAGCTTGCATCTGTGCAGAGGAGGAGAAGGAAGAGTTATGAGGAAGAAGTGATTCCTTCCTGGTTTTGAGTGACACCACAGCTGTCAGCCTTCAAGATGTCAAGTCTTCGAGTCAGCGTGACTCATTCATTCTTCCAACAGTTTGGACACCACAAAGCAGGAGAAAGGGAACATTTTTCTACAGCTGGAAAGTGAGTCCTATCCTTTGAGGAAATTTGAAAAAAGACATGGAGTGGTTTGAAAGCTACTCTTCATTTAAGACTGCTCTCCCCAACCAAGACACATTTGCCTGGAAATTCAGTTCTTAGCTTAAAGACTAAAATGCAAGCAAACCCTGCAATTCCTGGACCTGATAGTTATATTCATGAGTGAAATTGTGGGGAGTCCAGCCATTTGGGAGGCAATGACTTTCTGCTGGCCCATGTTTCAGTTGCCAGTAAGCTTCTCACATTTAATAAAGTGTACTTTTTAGAACATTSEQ ID NO90細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)Spondin 2＞gi|6912681|ref|NM_012445.1|人類細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)spondin 2(SPON2)，mRNAGCACGAGGGAAGAGGGTGATCCGACCCGGGGAAGGTCGCTGGGCAGGGCGAGTTGGGAAAGCGGCAGCCCCCGCCGCCCCCGCAGCCCCTTCTCCTCCTTTCTCCCACGTCCTATCTGCCTCTCGCTGGAGGCCAGGCCGTGCAGCATCGAAGACAGGAGGAACTGGAGCCTCATTGGCCGGCCCGGGGCGCCGGCCTCGGGCTTAAATAGGAGCTCCGGGCTCTGGCTGGGACCCGACCGCTGCCGGCCGCGCTCCCGCTGCTCCTGCCGGGTGATGGAAAACCCCAGCCCGGCCGCCGCCCTGGGCAAGGCCCTCTGCGCTCTCCTCCTGGCCACTCTCGGCGCCGCCGGCCAGCCTCTTGGGGGAGAGTCCATCTGTTCCGCCAGAGCCCCGGCCAAATACAGCATCACCTTCACGGGCAAGTGGAGCCAGACGGCCTTCCCCAAGCAGTACCCCCTGTTCCGCCCCCCTGCGCAGTGGTCTTCGCTGCTGGGGGCCGCGCATAGCTCCGACTACAGCATGTGGAGGAAGAACCAGTACGTCAGTAACGGGCTGCGCGACTTTGCGGAGCGCGGCGAGGCCTGGGCGCTGATGAAGGAGATCGAGGCGGCGGGGGAGGCGCTGCAGAGCGTGCACGCGGTGTTTTCGGCGCCCGCCGTCCCCAGCGGCACCGGGCAGACGTCGGCGGAGCTGGAGGTGCAGCGCAGGCACTCGCTGGTCTCGTTTGTGGTGCGCATCGTGCCCAGCCCCGACTGGTTCGTGGGCGTGGACAGCCTGGACCTGTGCGACGGGGACCGTTGGCGGGAACAGGCGGCGCTGGACCTGTACCCCTACGACGCCGGGACGGACAGCGGCTTCACCTTCTCCTCCCCCAACTTCGCCACCATCCCGCAGGACACGGTGACCGAGATAACGTCCTCCTCTCCCAGCCACCCGGCCAACTCCTTCTACTACCCGCGGCTGAAGGCCCTGCCTCCCATCGCCAGGGTGACACTGGTGCGGCTGCGACAGAGCCCCAGGGCCTTCATCCCTCCCGCCCCAGTCCTGCCCAGCAGGGACAATGAGATTGTAGACAGCGCCTCAGTTCCAGAAACGCCGCTGGACTGCGAGGTCTCCCTGTGGTCGTCCTGGGGACTGTGCGGAGGCCACTGTGGGAGGCTCGGGACCAAGAGCAGGACTCGCTACGTCCGGGTCCAGCCCGCCAACAACGGGAGCCCCTGCCCCGAGCTCGAAGAAGAGGCTGAGTGCGTCCCTGATAACTGCGTCTAAGACCAGAGCCCCGCAGCCCCTGGGGCCCCCGGAGCCATGGGGTGTCGGGGGCTCCTGTGCAGGCTCATGCTGCAGGCGGCCGAGGCACAGGGGGTTTCGCGCTGCTCCTGACCGCGGTGAGGCCGCGCCGACCATCTCTGCACTGAAGGGCCCTCTGGTGGCCGGCACGGGCATTGGGAAACAGCCTCCTCCTTTCCCAACCTTGCTTCTTAGGGGCCCCCGTGTCCCGTCTGCTCTCAGCCTCCTCCTCCTGCAGGATAAAGTCATCCCCAAGGCTCCAGCTACTCTAAATTATGGTCTCCTTATAAGTTATTGCTGCTCCAGGAGATTGTCCTTCATCGTCCAGGGGCCTGGCTCCCACGTGGTTGCAGATACCTCAGACCTGGTGCTCTAGGCTGTGCTGAGCCCACTCTCCCGAGGGCGCATCCAAGCGGGGGCCACTTGAGAAGTGAATAAATGGGGCGGTTTCGGAAGCGTCAGTGTTTCCATGTTATGGATCTCTCTGCGTTTGAATAAAGACTATCTCTGTTGCTCAC SEQ ID NO91嗅介蛋白1，轉(zhuǎn)錄物變體3＞gi|34335282|ref|NM_058199.2|人類嗅介蛋白1(OLFM1)，轉(zhuǎn)錄物變體3，mRNACCCGCCCCCGCCCCTTCCGAGCAAACTTTTGGCACCCACCGCAGCCCAGCGCGCGTTCGTGCTCCGCAGGGCGCGCCTCTCTCCGCCAATGCCAGGCGCGCGGGGGAGCCATTAGGAGGCGAGGAGAGAGGAGGGCGCAGCTCCCGCCCAGCCCAGCCCTGCCCAGCCCTGCCCGGAGGCAGACGCGCCGGAACCGGGACGCGATAAATATGCAGAGCGGAGGCTTCGCGCAGCAGAGCCCGCGCGCCGCCCGCTCCGGGTGCTGAATCCAGGCGTGGGGACACGAGCCAGGCGCCGCCGCCGGAGCCAGCGGAGCCGGGGCCAGAGCCGGAGCGCGTCCGCGTCCACGCAGCCGCCGGCCGGCCAGCACCCAGGGCCCTGCATGCCAGGTCGTTGGAGGTGGCAGCGAGACATGCACCCGGCCCGGAAGCTCCTCAGCCTCCTCTTCCTCATCCTGATGGGCACTGAACTCACTCAAAATAAAAGAGAAAACAAAGCAGAGAAGATGGGAGGGCCAGAGAGCGAGAGGAAGACCACAGGAGAGAAGACACTGAACGAGCTTCCCTTGTTTTGCCTGGAAGCCCACGCTGGCTCCCTGGCTCTGCCCAGGATGTGCAGTCCAAATCCCAATCCAGCAGTGGGGTTATGTCGTCCCGCTTACCCTCAGAGCCCTTCTCCTGGTGCTGCCCAGACGATCAGCCAGTCCCTCCTGGAGAGGTTCTGCATGGCCTCTAGGAGAGAAGTTTTCTTGGCCCCAGGAAGGCCTGGTGGAGGGTGGTGGTTGTGCACTGTTGCTGGACAGATGCATTCATTCATGTGCACACACACACACACACATGCACACACAGGGGAGCAGATACCTGCAGAGAAGAGCCAACCAGGTCCTGATTAGTGGCAAGCTGCCCCACAAAGGGCTATGCCTGTGTCTTATTGAGACACCTTGGCAAAGAGATGGCTGATTCTGGGTGGTCCTGGACATGGCCGCACCCAAGGGCCCTCCAAGCCTTAATGGCACCCTGAAGCCTCCATGCCCAGGCCAAAAGATGCTTTTCCTCCCTAAAAAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO92包含重復(fù)的血小板反應(yīng)蛋白1＞gi|38016903|ref|NM_019032.2|人類包含重復(fù)的血小板反應(yīng)蛋白1(TSRC1)，mRNAGGGGCCCCAGTGGCCGCCGCGGAGCGAGGTTGCCTGGAGAGAGCGCCTGGGCGCAGAAGGGTTAACGGGCCACCGGGGGCTCGCAGAGCAGGAGGGTGCTCTCGGACGGTGTGTCCCCCACTGCACTCCTGAACTTGGAGGACAGGGTCGCCGCGAGGGACGCAGAGAGCACCCTCCACGCCCAGATGCCTGCGTAGTTTTTGTGACCAGTCCGCTCCTGCCTCCCCCTGGGGCAGTAGAGGGGGAGCGATGGAGAACTGGACTGGCAGGCCCTGGCTGTATCTGCTGCTGCTTCTGTCCCTCCCTCAGCTCTGCTTGGATCAGGAGGTGTTGTCCGGACACTCTCTTCAGACACCTACAGAGGAGGGCCAGGGCCCCGAAGGTGTCTGGGGACCTTGGGTCCAGTGGGCCTCTTGCTCCCAGCCCTGCGGGGTGGGGGTGCAGCGCAGGAGCCGGACATGTCAGCTCCCTACAGTGCAGCTCCACCCGAGTCTGCCCCTCCCTCCCCGGCCCCCAAGACATCCAGAAGCCCTCCTCCCCCGGGGCCAGGGTCCCAGACCCCAGACTTCTCCAGAAACCCTCCCCTTGTACAGGACACAGTCTCGGGGAAGGGGTGGCCCACTTCGAGGTCCCGCTTCCCACCTAGGGAGAGAGGAGACCCAGGAGATTCGAGCGGCCAGGAGGTCCCGGCTTCGAGACCCCATCAAGCCAGGAATGTTCGGTTATGGGAGAGTGCCCTTTGCATTGCCACTGCACCGGAACCGCAGGCACCCTCGGAGCCCACCCAGATCTGAGCTGTCCCTGATCTCTTCTAGAGGGGAAGAGGCTATTCCGTCCCCTACTCCAAGAGCAGAGCCATTCTCCGCAAACGGCAGCCCCCAAACTGAGCTCCCTCCCACAGAACTGTCTGTCCACACCCCATCCCCCCAAGCAGAACCTCTAAGCCCTGAAACTGCTCAGACAGAGGTGGCCCCCAGAACCAGGCCTGCCCCCCTACGGCATCACCCCAGAGCCCAGGCCTCTGGCACAGAGCCCCCCTCACCCACGCACTCCTTAGGAGAAGGTGGCTTCTTCCGTGCATCCCCTCAGCCACGAAGGCCAAGTTCCCAGGGTTGGGCCAGTCCCCAG GTAGCAGGGAGACGCCCTGATCCTTTTCCTTCGGTCCCTCGGGGCCGAGGCCAGCAGGGCCAAGGGCCTTGGGGAACGGGGGGGACTCCTCACGGGCCCCGCCTGGAGCCTGACCCTCAGCACCCGGGCGCCTGGCTGCCCCTGCTGAGCAACGGCCCCCATGCCAGCTCCCTCTGGAGCCTCTTTGCTCCCAGTAGCCCTATTCCAAGATGTTCTGGGGAGAGTGAACAGCTAAGAGCCTGCAGCCAAGCGCCCTGCCCCCCTGAGCAGCCAGACCCCCGGGCCCTGCAGTGCGCAGCCTTTAACTCCCAGGAATTCATGGGCCAGCTGTATCAGTGGGAGCCCTTCACTGAAGTCCAGGGCTCCCAGCGCTGTGAACTGAACTGCCGGCCCCGTGGCTTCCGCTTCTATGTCCGTCACACTGAAAAGGTCCAGGATGGGACCCTGTGTCAGCCTGGAGCCCCTGACATCTGTGTGGCTGGAC
GCTGTCTGAGCCCCGGCTGTGATGGGATCCTTGGCTCTGGCAGGCGTCCTGATGGCTGTGGAGTCTGTGGGGGTGATGATTCTACCTGTCGCCTTGTTTCGGGGAACCTCACTGACCGAGGGGGCCCCCTGGGCTATCAGAAGATCTTGTGGATTCCAGCGGGAGCCTTGCGGCTCCAGATTGCCCAGCTCCGGCCTAGCTCCAACTACCTGGCACTTCGTGGCCCTGGGGGCCGGTCCATCATCAATGGGAACTGGGCTGTGGATCCCCCTGGGTCCTACAGGGCCGGCGGGACCGTCTTTCGATATAACCGTCCTCCCAGGGAGGAGGGCAAAGGGGAGAGTCTGTCGGCTGAAGGCCCCACCACCCAGCCTGTGGATGTCTATATGATCTTTCAGGAGGAAAACCCAGGCGTTTTTTATCAGTATGTCATCTCTTCACCTCCTCCAATCCTTGAGAACCCCACCCCAGAGCCCCCTGTCCCCCAGCTTCAGCCGGAGATTCTGAGGGTGGAGCCCCCACTTGCTCCGGCACCCCGCCCAGCCCGGACCCCAGGCACCCTCCAGCGTCAGGTGCGGATCCCCCAGATGCCCGCCCCGCCCCATCCCAGGACACCCCTGGGGTCTCCAGCTGCGTACTGGAAACGAGTGGGACACTCTGCATGCTCAGCGTCCTGCGGGAAAGGTGTCTGGCGCCCCATTTTCCTCTGCATCTCCCGTGAGTCGGGAGAGGAACTGGATGAACGCAGCTGTGCCGCGGGTGCCAGGCCCCCAGCCTCCCCTGAACCCTGCCACGGCACCCCATGCCCCCCATACTGGGAGGCTGGCGAGTGGACATCCTGCAGCCGCTCCTGTGGCCCCGGCACCCAGCACCGCCAGCTGCAGTGCCGGCAGGAATTTGGGGGGGGTGGCTCCTCGGTGCCCCCGGAGCGCTGTGGACATCTCCCCCGGCCCAACATCACCCAGTCTTGCCAGCTGCGCCTCTGTGGCCATTGGGAAGTTGGCTCTCCTTGGAGCCAGTGCTCCGTGCGGTGCGGCCGGGGCCAGAGAAGCCGGCAGGTTCGCTGTGTTGGGAACAACGGTGATGAAGTGAGCGAGCAGGAGTGTGCGTCAGGCCCCCCGCAGCCCCCCAGCAGAGAGGCCTGTGACATGGGGCCCTGTACTACTGCCTGGTTCCACAGCGACTGGAGCTCCAAGTGCTCAGCCGAGTGTGGGACGGGAATCCAGCGGCGCTCTGTGGTCTGCCTTGGGAGTGGGGCAGCCCTCGGGCCAGGCCAGGGGGAAGCAGGAGCAGGAACTGGGCAGAGCTGTCCAACAGGAAGCCGGCCCCCTGACATGCGCGCCTGCAGCCTGGGGCCCTGTGAGAGAACTTGGCGCTGGTACACAGGGCCCTGGGGTGAGTGCTCCTCCGAATGTGGCTCTGGCACACAGCGTAGAGACATCATCTGTGTATCCAAACTGGGGACGGAGTTCAACGTGACTTCTCCGAGCAACTGTTCTCACCTCCCCAGGCCCCCTGCCCTGCAGCCCTGTCAAGGGCAGGCCTGCCAGGACCGATGGTTTTCCACGCCCTGGAGCCCATGTTCTCGCTCCTGCCAAGGGGGAACGCAGACACGGGAGGTCCAGTGCCTGAGCACCAACCAGACCCTCAGCACCCGATGCCCTCCTCAACTGCGGCCCTCCAGGAAGCGCCCCTGTAACAGCCAACCCTGCAGCCAGCGCCCTGATGATCAATGCAAGGACAGCTCTCCACATTGCCCCCTGGTGGTACAGGCCCGGCTCTGCGTCTACCCCTACTACACAGCCACCTGTTGCCGCTCTTGCGCACATGTCCTGGAGCGGTCTCCCCAGGATCCCTCCTGAAAGGGGTCCGGGGCACCTTCACGGTTTTCTGTGCCACCATCGGTCACCCATTGATCGGCCCACTCTGAACCCCCTGGCTCTCCAGCCTGTCCCAGTCTCAGCAGGGATGTCCTCCAGGTGACAGAGGGTGGCAAGGTGACTGACACAAAGTGACTTTCAGGGCTGTGGTCAGGCCCATGTGGTGGTGTGATGGGTGTGTGCACATATGCCTCAGGTGTGCTTTTGGGACTGCATGGATATGTGTGTGCTCAAACGTGTATCACTTTTCAAAAAGAGGTTACACAGACTGAGAAGGACAAGACCTGTTTCCTTGAGACTTTCCTAGGTGGAAAGGAAAGCAAGTCTGCAGTTCCTTGCTAATCTGAGCTACTTAGAGTGTGGTCTCCCCACCAACTCCAGTTTTGTGCCCTAAGCCTCATTTCTCATGTTCAGACCTCACATCTTCTAAGCCGCCCTGTGTCTCTGACCCCTTCTCATTTGCCTAGTATCTCTGCCCCTGCCTCCCTAATTAGCTAGGGCTGGGGTCAGCCACTGCCAATCCTGCCTTACTCAGGAAGGCAGGAGGAAAGAGACTGCCTCTCCAGAGCAAGGCCCAGCTGGGCAGAGGGTGAAAAAGAGAAATGTGAGCATCCGCTCCCCCACCACCCCGCCCAGCCCCTAGCCCCACTCCCTGCCTCCTGAAATGGTTCCCACCCAGAACTAATTTATTTTTTATTAAAGATGGTCATGACAAATGAAAAAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO93血小板反應(yīng)蛋白2＞gi|40317627|ref|NM_003247.2|人類血小板反應(yīng)蛋白2(THBS2)，mRNA|qPCR正向引物匹配[3558..3580]|qPCR反向引物匹配[3682..3655]|qPCR探針匹配[3597..3623]GAGGAGGAGACGGCATCCAGTACAGAGGGGCTGGACTTGGACCCCTGCAGCAGCCCTGCACAGGAGAAGCGGCATATAAAGCCGCGCTGCCCGGGAGCCGCTCGGCCACGTCCACCGGAGCATCCTGCACTGCAGGGCCGGTCTCTCGCTCCAGCAGAGCCTGCGCCTTTCTGACTCGGTCCGGAACACTGAAACCAGTCATCACTGCATCTTTTTGGCAAACCAGGAGCTCAGCTGCAGGAGGCAGGATGGTCTGGAGGCTGGTCCTGCTGGCTCTGTGGGTGTGGCCCAGCACGCAAGCTGGTCACCAGGACAAAGACACGACCTTCGACCTTTTCAGTATCAGCAACATCAACCGCAAGACCATTGGCGCCAAGCAGTTCCGCGGGCCCGACCCCGGCGTGCCGGCTTACCGCTTCGTGCGCTTTGACTACATCCCACCGGTGAACGCAGATGACCTCAGCAAGATCACCAAGATCATGCGGCAGAAGGAGGGCTTCTTCCTCACGGCCCAGCTCAAGCAGGACGGCAAGTCCAGGGGCACGCTGTTGGCTCTGGAGGGCCCCGGTCTCTCCCAGAGGCAGTTCGAGATCGTCTCCAACGGCCCCGCGGACACGCTGGATCTCACCTACTGGATTGACGGCACCCGGCATGTGGTCTCCCTGGAGGACGTCGGCCTGGCTGACTCGCAGTGGAAGAACGTCACCGTGCAGGTGGCTGGCGAGACCTACAGCTTGCACGTGGGCTGCGACCTCATAGACAGCTTCGCTCTGGACGAGCCCTTCTACGAGCACCTGCAGGCGGAAAAGAGCCGGATGTACGTGGCCAAAGGCTCTGCCAGAGAGAGTCACTTCAGGGGTTTGCTTCAGAACGTCCACCTAGTGTTTGAAAACTCTGTGGAAGATATTCTAAGCAAGAAGGGTTGCCAGCAAGGCCAGGGAGCTGAGATCAACGCCATCAGTGAGAACACAGAGACGCTGCGCCTGGGTCCGCATGTCACCACCGAGTACGTGGGCCCCAGCTCGGAGAGGAGGCCCGAGGTGTGCGAACGCTCGTGCGAGGAGCTGGGAAACATGGTCCAGGAGCTCTCGGGGCTCCACGTCCTCGTGAACCAGCTCAGCGAGAACCTCAAGAGAGTGTCGAATGATAACCAGTTTCTCTGGGAGCTCATTGGTGGCCCTCCTAAGACAAGGAACATGTCAGCTTGCTGGCAGGATGGCCGGTTCTTTGCGGAAAATGAAACGTGGGTGGTGGACAGCTGCACCACGTGTACCTGCAAGAAATTTAAAACCATTTGCCACCAAATCACCTGCCCGCCTGCAACCTGCGCCAGTCCATCCTTTGTGGAAGGCGAATGCTGCCCTTCCTGCCTCCACTCGGTGGACGGTGAGGAGGGCTGGTCTCCGTGGGCAGAGTGGACCCAGTGCTCCGTGACGTGTGGCTCTGGGACCCAGCAGAGAGGCCGGTCCTGTGACGTCACCAGCAACACCTGCTTGGGGCCCTCCATCCAGACACGGGCTTGCAGTCTGAGCAAGTGTGACACCCGCATCCGGCAGGACGGCGGCTGGAGCCACTGGTCACCTTGGTCTTCATGCTCTGTGACCTGTGGAGTTGGCAATATCACACGCATCCGTCTCTGCAACTCCCCAGTGCCCCAGATGGGGGGCAAGAATTGCAAAGGGAGTGGCCGGGAGACCAAAGCCTGCCAGGGCGCCCCATGCCCAATCGATGGCCGCTGGAGCCCCTGGTCCCCGTGGTCGGCCTGCACTGTCACCTGTGCCGGTGGGATCCGGGAGCGCACCCGGGTCTGCAACAGCCCTGAGCCTCAGTACGGAGGGAAGGCCTGCGTGGGGGATGTGCAGGAGCGTCAGATGTGCAACAAGAGGAGCTGCCCCGTGGATGGCTGTTTATCCAACCCCTGCTTCCCGGGAGCCCAGTGCAGCAGCTTCCCCGATGGGTCCTGGTCATGCGGCTCCTGCCCTGTGGGCTTCTTGGGCAATGGCACCCACTGTGAGGACCTGGACGAGTGTGCCCTGGTCCCCGACATCTGCTTCTCCACCAGCAAGGTGCCTCGCTGTGTCAACACTCAGCCTGGCTTCCACTGCCTGCCCTGCCCGCCCCGATACAGAGGGAACCAGCCCGTCGGGGTCGGCCTGGAAGCAGCCAAGACGGAAAAGCAAGTGTGTGAGCC 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SEQ ID NO94Adlican＞gi|18390318|ref|NM_015419.1|人類adlican(DKFZp564I1922)，mRNA|qPCR據(jù)assay_on_demand情況匹配[694..718]ATGCCCAAGCGCGCGCACTGGGGGGCCCTCTCCGTGGTGCTGATCCTGCTTTGGGGCCATCCGCGAGTGGCGCTGGCCTGCCCGCATCCTTGTGCCTGCTACGTCCCCAGCGAGGTCCACTGCACGTTCCGATCCCTGGCTTCCGTGCCCGCTGGCATTGCTAGACACGTGGAAAGAATCAATTTGGGGTTTAATAGCATACAGGCCCTGTCAGAAACCTCATTTGCAGGACTGACCAAGTTGGAGCTACTTATGATTCACGGCAATGAGATCCCAAGCATCCCCGATGGAGCTTTAAGAGACCTCAGCTCTCTTCAGGTTTTCAAGTTCAGCTACAACAAGCTGAGAGTGATCACAGGACAGACCCTCCAGGGTCTCTCTAACTTAATGAGGCTGCACATTGACCACAACAAGATCGAGTTTATCCACCCTCAAGCTTTCAACGGCTTAACGTCTCTGAGGCTACTCCATTTGGAAGGAAATCTCCTCCACCAGCTGCACCCCAGCACCTTCTCCACGTTCACATTTTTGGATTATTTCAGACTCTCCACCATAAGGCACCTCTACTTAGCAGAGAACATGGTTAGAACTCTTCCTGCCAGCATGCTTCGGAACATGCCGCTTCTGGAGAATCTTTACTTGCAGGGAAATCCGTGGACCTGCGATTGTGAGATGAGATGGTTTTTGGAATGGGATGCAAAATCCAGAGGAATTCTGAAGTGTAAAAAGGACAAAGCTTATGAAGGCGGTCAGTTGTGTGCAATGTGCTTCAGTCCAAAGAAGTTGTACAAACATGAGATACACAAGCTGAAGGACATGACTTGTCTGAAGCCTTCAATAGAGTCCCCTCTGAGACAGAACAGGAGCAGGAGTATTGAGGAGGAGCAAGAACAGGAAGAGGATGGTGGCAGCCAGCTCATCCTGGAGAAATTCCAACTGCCCCAGTGGAGCATCTCTTTGAATATGACCGACGAGCACGGGAACATGGTGAACTTGGTCTGTGACATCAAGAAACCAATGGATGTGTACAAGATTCACTTGAACCAAACGGATCCTCCAGATATTGACATAAATGCAACAGTTGCCTTGGACTTTGAGTGTCCAATGACCCGAGAAAACTATGAAAAGCTATGGAAATTGATAGCATACTACAGTGAAGTTCCCGTGAAGCTACACAGAGAGCTCATGCTCAGCAAAGACCCCAGAGTCAGCTACCAGTACAGGCAGGATGCTGATGAGGAAGCTCTTTACTACACAGGTGTGAGAGCCCAGATTCTTGCAGAACCAGAATGGGTCATGCAGCCATCCATAGATATCCAGCTGAACCGACGTCAGAGTACGGCCAAGAAGGTGCTACTTTCCTACTACACCCAGTATTCTCAAACAATATCCACCAAAGATACAAGGCAGGCTCGGGGCAGAAGCTGGGTAATGATTGAGCCTAGTGGAGCTGTGCAAAGAGATCAGACTGTCCTGGAAGGGGGTCCATGCCAGTTGAGCTGCAACGTGAAAGCTTCTGAGAGTCCATCTATCTTCTGGGTGCTTCCAGATGGCTCCATCCTGAAAGCGCCCATGGATGACCCAGACAGCAAGTTCTCCATTCTCAGCAGTGGCTGGCTGAGGATCAAGTCCATGGAGCCATCTGACTCAGGCTTGTACCAGTGCATTGCTCAAGTGAGGGATGAAATGGACCGCATGGTATATAGGGTACTTGTGCAGTCTCCCTCCACTCAGCCAGCCGAGAAAGACACAGTGACAATTGGCAAGAACCCAGGGGAGTCGGTGACATTGCCTTGCAATGCTTTAGCAATACCCGAAGCCCACCTTAGCTGGATTCTTCCAAACAGAAGGATAATTAATGATTTGGCTAACACATCACATGTATACATGTTGCCAAATGGAACTCTTTCCATCCCAAAGGTCCAAGTCAGTGATAGTGGTTACTACAGATGTGTGGCTGTCAACCAGCAAGGGGCAGACCATTTTACGGTGGGAATCACAGTGACCAAGAAAGGGTCTGGCTTGCCATCCAAAAGAGGCAGACGCCCAGGTGCAAAGGCTCTTTCCAGAGTCAGAGAAGACATCGTGGAGGATGAAGGGGGCTCGGGCATGGGAGATGAAGAGAACACTTCAAGGAGACTTCTGCATCCAAAGGACCAAGAGGTGTTCCTCAAAACAAAGGATGATGCCATCAATGGAGACAAGAAAGCCAAGAAAGGGAGAAGAAAGCTGAAACTCTGGAAGCATTCGGAAAAAGAACCAGAGACCAATGTTGCAGAAGGTCGCAGAGTGTTTGAATCTAGACGAAGGATAAACATGGCAAACAAACAGATTAATCCGGAGCGCTGGGCTGATATTTTAGCCAAAGTCCGTGGGAAAAATCTCCCTAAGGGCACAGAAGTACCCCCGTTGATTAAAACCACAAGTCCTCCATCCTTGAGCCTAGAAGTCACACCACCTTTTCCTGCTGTTTCTCCCCCCTCAGCATCTCCTGTGCAGACAGTAACCAGTGCTGAAGAATCCTCAGCAGATGTACCTCTACTTGGTGAAGAAGAGCACGTTTTGGGTACCATTTCCTCAGCCAGCATGGGGCTAGAACACAACCACAATGGAGTTATTCTTGTTGAACCTGAAGTAACAAGCACACCTCTGGAGGAAGTTGTTGATGACCTTTCTGAGAAGACTGAGGAGATAACTTCCACTGAAGGAGACCTGAAGGGGACAGCAGCCCCTACACTTATATCTGAGCCTTATGAACCATCTCCTACTCTGCACACATTAGACACAGTCTATGAAAAGCCCACCCATGAAGAGACGGCAACAGAGGGTTGGTCTGCAGCAGATGTTGGATCGTCACCAGAGCCCACATCCAGTGAGTATGAGCCTCCATTGGATGCTGTCTCCTTGGCTGAGTCTGAGCCCATGCAATACTTTGACCCAGATTTGGAGACTAAGTCACAACCAGATGAGGATAAGATGAAAGAAGACACCTTTGCACACCTTACTCCAACCCCCACCATCTGGGTTAATGACTCCAGTACATCACAGTTATTTGAGGATTCTACTATAGGGGAACCAGGTGTCCCAGGCCAATCACATCTACAAGGACTGACAGACAACATCCACCTTGTGAAAAGTAGTCTAAGCACTCAAGACACCTTACTGATTAAAAAGGGTATGAAAGAGATGTCTCAGACACTACAGGGAGGAAATATGCTAGAGGGAGACCCCACACACTCCAGAAGTTCTGAGAGTGAGGGCCAAGAGAGCAAATCCATCACTTTGCCTGACTCCACACTGGGTATAATGAGCAGTATGTCTCCAGTTAAGAAGCCTGCGGAAACCACAGTTGGTACCCTCCTAGACAAAGACACCACAACAGTAACAACAACACCAAGGCAAAAAGTTGCTCCGTCATCCACCATGAGCACTCACCCTTCTCGAAGGAGACCCAACGGGAGAAGGAGATTACGCCCCAACAAATTCCGCCACCGGCACAAGCAAACCCCACCCACAACTTTTGCCCCATCAGAGACTTTTTCTACTCAACCAACTCAAGCACCTGACATTAAGATTTCAAGTCAAGTGGAGAGTTCTCTGGTTCCTACAGCTTGGGTGGATAACACAGTTAATACCCCCAAACAGTTGGAAATGGAGAAGAATGCAGAACCCACATCCAAGGGAACACCACGGAGAAAACACGGGAAGAGGCCAAACAAACATCGATATACCCCTTCTACAGTGAGCTCAAGAGCGTCCGGATCCAAGCCCAGCCCTTCTCCAGAAAATAAACATAGAAACATTGTTACTCCCAGTTCAGAAACTATACTTTTGCCTAGAACTGTTTCTCTGAAAACTGAGGGCCCTTATGATTCCTTAGATTACATGACAACCACCAGAAAAATATATTCATCTTACCCTAAAGTCCAAGAGACACTTCCAGTCACATATAAACCCACATCAGATGGAAAAGAAATTAAGGATGATGTTGCCACAAATGTTGACAAACATAAAAGTGACATTTTAGTCACTGGTGAATCAATTACTAATGCCATACCAACTTCTCGCTCCTTGGTCTCCACTATGGGAGAATTTAAGGAAGAATCCTCTCCTGTAGGCTTTCCAGGAACTCCAACCTGGAATCCCTCAAGGACGGCCCAGCCTGGGAGGCTACAGACAGACATACCTGTTACCACTTCTGGGGAAAATCTTACAGACCCTCCCCTTCTTAAAGAGCTTGAGGATGTGGATTTCACTTCCGAGTTTTTGTCCTCTTTGACAGTCTCCACACCATTTCACCAGGAAGAAGCTGGTTCTTCCACAACTCTCTCAAGCATAAAAGTGGAGGTGGCTTCAAGTCAGGCAGAAACCACCACCCTTGATCAAGATCATCTTGAAACCACTGTGGCTATTCTCCTTTCTGAAACTAGACCACAGAATCACACCCCTACTGCTGCCCGGATGAAGGAGCCAGCATCCTCGTCCCCATCCACAATTCTCATGTCTTTGGGACAAACCACCACCACTAAGCCAGCACTTCCCAGTCCAAGAATATCTCAAGCATCTAGAGATTCCAAGGAAAATGTTTTCTTGAATTATGTGGGGAATCCAGAAACAGAAGCAACCCCAGTCAACAATGAAGGAACACAGCATATGTCAGGGCCAAATGAATTATCAACACCCTCTTCCGACCGGGATGCATTTAACTTGTCTACAAAGCTGGAATTGGAAAAGCAAGTATTTGGTAGTAGGAGTCTACCACGTGGCCCAGATAGCCAACGCCAGGATGGAAGAGTTCATGCTTCTCATCAACTAACCAGAGTCCCTGCCAAACCCATCCTACCAACAGCAACAGTGAGGCTACCTGAAATGTCCACACAAAGCGCTTCCAG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SEQ ID NO95半胱氨酸蛋白酶抑制劑SA＞gi|19882252|ref|NM_001322.2|人類半胱氨酸蛋白酶抑制劑SA(CST2)，mRNA|qPCR正向引物匹配[302..320]|qPCR反向引物匹配[393..370]|qPCR探針匹配[341..369]GCCTCCGAGGAGACCATGGCCTGGCCCCTGTGCACCCTGCTGCTCCTGCTGGCCACCCAGGCTGTGGCCCTGGCCTGGAGCCCCCAGGAGGAGGACAGGATAATCGAGGGTGGCATCTATGATGCAGACCTCAATGATGAGCGGGTACAGCGTGCCCTTCACTTTGTCATCAGCGAGTATAACAAGGCCACTGAAGATGAGTACTACAGACGCCTGCTGCGGGTGCTACGAGCCAGGGAGCAGATCGTGGGCGGGGTGAATTACTTCTTCGACATAGAGGTGGGCCGAACCATATGTACCAAGTCCCAGCCCAACTTGGACACCTGTGCCTTCCATGAACAGCCAGAACTGCAGAAGAAACAGTTGTGCTCTTTCCAGATCTACGAAGTTCCCTGGGAGGACAGAATGTCCCTGGTGAATTCCAGGTGTCAAGAAGCCTAGGGATCTGTGCCAGGGAGTCACACTGACCACCTCCTACTCCCACCCCTTGTAGTGCTCCCACCCCTGGACTGGTGGCCCCCACCCTGTGGGAGGTCTCCCCATGCACCTGCAGCAGGAGAAGACAGAGAAGGCTGCAGGAGGCCTTTGTTGCTCAGCAGGGGACTCTGCCCTCCCTCCTTCCTTTTGCTTCTCATAGCCCTGGTACATGGTACACACACCCCCACCTCCTGCAATTAAACAGTAGCATCACCTCSEQ ID NO96半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN＞gi|19882250|ref|NM_001898.2|人類半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN(CST1)，mRNA|qPCR正向引物匹配[358..376]|qPCR反向引物匹配[449..426]|qPCR探針匹配[397..425]GGGCTCCCTGCCTCGGGCTCTCACCCTCCTCTCCTGCAGCTCCAGCTTTGTGCTCTGCCTCTGAGGAGACCATGGCCCAGTATCTGAGTACCCTGCTGCTCCTGCTGGCCACCCTAGCTGTGGCCCTGGCCTGGAGCCCCAAGGAGGAGGATAGGATAATCCCGGGTGGCATCTATAACGCAGACCTCAATGATGAGTGGGTACAGCGTGCCCTTCACTTCGCCATCAGCGAGTATAACAAGGCCACCAAAGATGACTACTACAGACGTCCGCTGCGGGTACTAAGAGCCAGGCAACAGACCGTTGGGGGGGTGAATTACTTCTTCGACGTAGAGGTGGGCCGCACCATATGTACCAAGTCCCAGCCCAACTTGGACACCTGTGCCTTCCATGAACAGCCAGAACTGCAGAAGAAACAGTTGTGCTCTTTCGAGATCTACGAAGTTCCCTGGGAGAACAGAAGGTCCCTGGTGAAATCCAGGTGTCAAGAATCCTAGGGATCTGTGCCAGGCCATTCGCACCAGCCACCACCCACTCCCACCCCCTGTAGTGCTCCCACCCCTGGACTGGTGGCCCCCACCCTGCGGGAGGCCTCCCCATGTGCCTGCGCCAAGAGACAGACAGAGAAGGCTGCAGGAGTCCTTTGTTGCTCAGCAGGGCGCTCTGCCCTCCCTCCTTCCTTCTTGCTTCTAATAGCCCTGGTACATGGTACACACCCCCCCACCTCCTGCAATTAAACAGTAGCATCGCCTCCCTCTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO97賴氨酰氧化酶樣酶2＞gi|4505010|ref|NM_002318.1|人類賴氨酰氧化酶樣酶2(LOXL2)，mRNA|qPCR正向引物匹配[2205..2223]|qPCR反向引物匹配[2286..2269]|qPCR探針匹配[2261..2229]ACTCCAGCGCGCGGCTACCTACGCTTGGTGCTTGCTTTCTCCAGCCATCGGAGACCAGAGCCGCCCCCTCTGCTCGAGAAAGGGGCTCAGCGGCGGCGGAAGCGGAGGGGGACCACCGTGGAGAGCGCGGTCCCAGCCCGGCCACTGCGGATCCCTGAAACCAAAAAGCTCCTGCTGCTTCTGTACCCCGCCTGTCCCTCCCAGCTGCGCAGGGCCCCTTCGTGGGATCATCAGCCCGAAGACAGGGATGGAGAGGCCTCTGTGCTCCCACCTCTGCAGCTGCCTGGCTATGCTGGCCCTCCTGTCCCCCCTGAGCCTGGCACAGTATGACAGCTGGCCCCATTACCCCGAGTACTTCCAGCAACCGGCTCCTGAGTATCACCAGCCCCAGGCCCCCGCCAACGTGGCCAAGATTCAGCTGCGCCTGGCTGGGCAGAAGAGGAAGCACAGCGAGGGCCGGGTGGAGGTGTACTATGATGGCCAGTGGGGCACCGTGTGCGATGACGACTTCTCCATCCACGCTGCCCACGTCGTCTGCCGGGAGCTGGGCTATGTGGAGGCCAAGTCCTGGACTGCCAGCTCCTCCTACGGCAAGGGAGAAGGGCCCATCTGGTTAGACAATCTCCACTGTACTGGCAACGAGGCGACCCTTGCAGCATGCACCTCCAATGGCTGGGGCGTCACTGACTGCAAGCACACGGAGGATGTCGGTGTGGTGTGCAGCGACAAAAGGATTCCTGGGTTCAAATTTGACAATTCGTTGATCAACCAGATAGAGAACCTGAATATCCAGGTGGAGGACATTCGGATTCGAGCCATCCTCTCAACCTACCGCAAGCGCACCCCAGTGATGGAGGGCTACGTGGAGGTGAAGGAGGGCAAGACCTGGAAGCAGATCTGTGACAAGCACTGGACGGCCAAGAATTCCCGCGTGGTCTGCGGCATGTTTGGCTTCCCTGGGGAGAGGACATACAATACCAAAGTGTACAAAATGTTTGCCTCACGGAGGAAGCAGCGCTACTGGCCATTCTCCATGGACTGCACCGGCACAGAGGCCCACATCTCCAGCTGCAAGCTGGGCCCCCAGGTGTCACTGGACCCCATGAAGAATGTCACCTGCGAGAATGGGCTGCCGGCCGTGGTGAGTTGTGTGCCTGGGCAGGTCTTCAGCCCTGACGGACCCTCGAGATTCCG 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ID NO98甲狀腺球蛋白＞gi|33589851|ref|NM_003235.3|人類甲狀腺球蛋白(TG)，mRNA|qPCR正向引物匹配[886..905]|qPCR反向引物匹配[962..941]|qPCR探針匹配[915..939]GCAGTGGTTTCTCCTCCTTCCTCCCAGGAAGGGCCAGGAAAATGGCCCTGGTCCTGGAGATCTTCACCCTGCTGGCCTCCATCTGCTGGGTGTCGGCCAATATCTTCGAGTACCAGGTTGATGCCCAGCCCCTTCGTCCCTGTGAGCTGCAGAGGGAAACGGCCTTTCTGAAGCAAGCAGACTACGTGCCCCAGTGTGCAGAGGATGGCAGCTTCCAGACTGTCCAGTGCCAGAACGACGGCCGCTCCTGCTGGTGTGTGGGTGCCAACGGCAGTGAAGTGCTGGGCAGCAGGCAGCCAGGACGGCCTGTGGCTTGTCTGTCATTTTGTCAGCTACAGAAACAGCAGATCTTACTGAGTGGCTACATTAACAGCACAGACACCTCCTACCTCCCTCAGTGTCAGGATTCAGGGGACTACGCGCCTGTTCAGTGTGATGTGCAGCATGTCCAGTGCTGGTGTGTGGACGCAGAGGGGATGGAGGTGTATGGGACCCGCCAGCTGGGGAGGCCAAAGCGATGTCCAAGGAGCTGTGAAATAAGAAATCGTCGTCTTCTCCACGGGGTGGGAGATAAGTCACCACCCCAGTGTTCTGCGGAGGGAGAGTTTATGCCTGTCCAGTGCAAATTTGTCAACACCACAGACATGATGATTTTTGATCTGGTCCACAGCTACAACAGGTTTCCAGATGCATTTGTGACCTTCAGTTCCTTCCAGAGGAGGTTCCCTGAGGTATCTGGGTATTGCCACTGTGCTGACAGCCAAGGGCGGGAACTGGCTGAGACAGGTTTGGAGTTGTTACTGGATGAAATTTATGACACCATTTTTGCTGGCCTGGACCTTCCTTCCACCTTCACTGAAACCACCCTGTACCGGATACTGCAGAGACGGTTCCTCGCAGTTCAATCAGTCATCTCTGGCAGATTCCGATGCCCCACAAAATGTGAAGTGGAGCGGTTTACAGCAACCAGCTTTGGTCACCCCTATGTTCCAAGCTGCCGCCGAAATGGCGACTATCAGGCGGTGCAGTGCCAGACGGAAGGGCCCTGCTGGTGTGTGGACGCCCAGGGGAAGGAAATGCATGGAACCCGGCAGCAAGGGGAGCCGCCATCTTGTGCTGAAGGCCAATCTTGTGCCTCCGAAAGGCAGCAGGCCTTGTCCAGACTCTACTTTGGGACCTCAGGCTACTTCAGCCAGCACGACCTGTTCTCTTCCCCAGAGAAAAGATGGGCCTCTCCAAGAGTAGCCAGATTTGCCACATCCTGCCCACCCACGATCAAGGAGCTCTTTGTGGACTCTGGGCTTCTCCGCCCAATGGTGGAGGGACAGAGCCAACAGTTTTCTGTCTCAGAAAATCTTCTCAAAGAAGCCATCCGAGCAATTTTTCCCTCCCGAGGGCTGGCTCGTCTTGCCCTTCAGTTTACCACCAACCCAAAGAGACTCCAGCAAAACCTTTTTGGAGGGAAATTTTTGGTGAATGTTGGCCAGTTTAACTTGTCTGGAGCCCTTGGCACAAGAGGCACATTTAACTTCAGTCAATTTTTCCAGCAACTTGGTCTTGCAAGCTTCTTGAATGGAGGGAGACAAGAAGATTTGGCCAAGCCACTCTCTGTGGGATTAGATTCAAATTCTTCCACAGGAACCCCTGAAGCTGCTAAGAAGGATGGTACTATGAATAAGCCAACTGTGGGCAGCTTTGGCTTTGAAATTAACCTACAAGAGAACCAAAATGCCCTCAAATTCCTTGCTTCTCTCCTGGAGCTTCCAGAATTCCTTCTCTTCTTGCAACATGCTATCTCTGTGCCAGAAGATGTGGCAAGAGATTTAGGTGATGTGATGGAAACGGTACTCGACTCCCAGACCTGTGAGCAGACACCTGAAAGGCTATTTGTCCCATCATGCACGACAGAAGGAAGCTATGAGGATGTCCAATGCTTTTCCGGAGAGTGCTGGTGTGTGAATTCCTGGGGCAAAGAGCTTCCAGGCTCAAGAGTCAGAGATGGACAGCCAAGGTGCCCCACAGACTGTGAAAAGCAAAGGGCTCGCATGCAAAGCCTCATGGGCAGCCAGCCTGCTGGCTCCACCTTGTTTGTCCCTGCTTGTACTAGTGAGGGACATTTCCTGCCTGTCCAGTGCTTCAACTCAGAGTGCTACTGTGTTGATGCTGAGGGTCAGGCCATTCCTGGAACTCGAAGTGCAATAGGGAAGCCCAAGAAATGCCCCACGCCCTGTCAATTACAGTCTGAGCAAGCTTTCCTCAGGACGGTGCAGGCCCTGCTCTCTAACTCCAGCATGCTACCCACCCTTTCCGACACCTACATCCCACAGTGCAGCACCGATGGGCAGTGGAGACAAGTGCAATGCAATGGGCCTCCTGAGCAGGTCTTCGAGTTGTACCAACGATGGGAGGCTCAGAACAAGGGCCAGGATCTGACGCCTGCCAAGCTGCTAGTGAAGATCATGAGCTACAGAGAAGCAGCTTCCGGAAACTTCAGTCTCTTTATTCAAAGTCTGTATGAGGCTGGCCAGCAAGATGTCTTCCCGGTGCTGTCACAATACCCTTCTCTGCAAGATGTCCCACTAGCAGCACTGGAAGGGAAACGGCCCCAGCCCAGGGAGAATATCCTCCTGGAGCCCTACCTCTTCTGGCAGATCTTAAATGGCCAACTCAGCCAATACCCGGGGTCCTACTCAGACTTCAGCACTCCTTTGGCACATTTTGATCTTCGGAACTGCTGGTGTGTGGATGAGGCTGGCCAAGAACTGGAAGGAATGCGGTCTGAGCCAAGCAAGCTCCCAACGTGTCCTGGCTCCTGTGAGGAAGCAAAGCTCCGTGTACTGCAGTTCATTAGGGAAACGGAAGAGATTGTTTCAGCTTCCAACAGTTCTCGGTTCCCTCTGGGGGAGAGTTTCCTGGTGGCCAAGGGAATCCGGCTGAGGAATGAGGACCTCGGCCTTCCTCCGCTCTTCCCGCCCCGGGAGGCTTTCGCGGAGTTTCTGCGTGGGAGTGATTACGCCATTCGCCTGGCGGCTCAGTCTACCTTAAGCTTCTATCAGAGACGCCGCTTTTCCCCGGACGACTCGGCTGGAGCATCCGCCCTTCTGCGGTCGGGCCCCTACATGCCACAGTGTGATGCGTTTGGAAGTTGGGAGCCTGTGCAGTGCCACGCTGGGACTGGGCACTGCTGGTGTGTAGATGAGAAAGGAGGGTTCATCCCTGGCTCACTGACTGCCCGCTCTCTGCAGATTCCACAGTGCCCGACAACCTGCGAGAAATCTCGAACCAGTGGGCTGCTTTCCAGTTGGAAACAGGCTAGATCCCAAGAAAACCCATCTCCAAAAGACCTGTTCGTCCCAGCCTGCCTAGAAACAGGAGAATATGCCAGGCTGCAGGCATCGGGGGCTGGCACCTGGTGTGTGGACCCTGCATCAGGAGAAGAGTTGCGGCCTGGCTCGAGCAGCAGTGCCCAGTGCCCAAGCCTCTGCAATGTGCTCAAGAGTGGAGTCCTCTCTAGGAGAGTCAGCCCAGGCTATGTCCCAGCCTGCAGGGCAGAGGATGGGGGCTTTTCCCCAGTGCAATGTGACCAGGCCCAGGGCAGCTGCTGGTGTGTCATGGACAGCGGAGAAGAGGTGCCTGGGACGCGCGTGACCGGGGGCCAGCCCGCCTGTGAGAGCCCGCGGTGTCCGCTGCCATTCAACGCGTCGGAGGTGGTTGGTGGAACAATCCTGTGTGAGACAATCTCGGGCCCCACAGGCTCTGCCATGCAGCAGTGCCAATTGCTGTGCCGCCAAGGCTCCTGGAGCGTGTTTCCACCAGGGCCATTGATATGTAGCCTGGAGAGCGGACGCTGGGAGTCACAGCTGCCTCAGCCCCGGGCCTGCCAACGGCCCCAGCTGTGGCAGACCATCCAGACCCAAGGGCACTTTCAGCTCCAGCTCCCGCCGGGCAAGATGTGCAGTGCTGACTACGCGGGTTTGCTGCAGACTTTCCAGGTTTTCATATTGGATGAGCTGACAGCCCGCGGCTTCTGCCAGATCCAGGTGAAGACTTTTGGCACCCTGGTTTCCATTCCTGTCTGCAACAACTCCTCTGTGCAGGTGGGTTGTCTGACCAGGGAGCGTTTAGGAGTGAATGTTACATGGAAATCACGGCTTGAGGACATCCCAGTGGCTTCTCTTCCTGACTTACATGACATTGAGAGAGCCTTGGTGGGCAAGGATCTCCTTGGGCGCTTCACAGATCTGATCCAGAGTGGCTCATTCCAGCTTCATCTGGACTCCAAGACGTTCCCAGCGGAAACCATCCGCTTCCTCCAAGGGGACCACTTTGGCACCTCTCCTAGGACACGGTTTGGGTGCTCGGAAGGATTCTACCAAGTCTTGACAAGTGAGGCCAGTCAGGACGGACTGGGATGCGTTAAGTGCCATGAAGGAAGCTATTCCCAAGATGAGGAATGCATTCCTTGTCCTGTTGGATTCTACCAAGAACAGGCAGGGAGCTTGGCCTGTGTCCCATGTCCTGTGGGCAGAACGACCATTTCTGCCGGAGCTTTCAGCCAGACTCACTGTGTCACTGACTGTCAGAGGAACGAAGCAGGCCTGCAATGTGACCAGAATGGCCAGTATCGAGCCAGCCAGAAGGACAGGGGCAGTGGGAAGGCCTTCTGTGTGGACGGCGAGGGGCGGAGGCTGCCATGGTGGGAAACAGAGGCCCCTCTTGAGGACTCACAGTGTTTGATGATGCAGAAGTTTGAGAAGGTTCCAGAATCAAAGGTGATCTTCGACGCCAATGCTCCTGTGGCTGTCAGATCCAAAGTTCCTGATTCTGAGTTCCCCGTGATGCAGTGCTTGACAGATTGCACAGAGGACGAGGCCTGCAGCTTC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SEQ ID NO99轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，β1＞gi|10863872|ref|NM_000660.1|人類轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，β1(卡-恩病)(TGFB1)，mRNA|qPCR正向引物匹配[1651..1668]|qPCR反向引物匹配[1539..1557]|qPCR探針匹配[1687..1713]ACCTCCCTCCGCGGAGCAGCCAGACAGCGAGGGCCCCGGCCGGGGGCAGGGGGGACGCCCCGTCCGGGGCACCCCCCCCGGCTCTGAGCCGCCCGCGGGGCCGGCCTCGGCCCGGAGCGGAGGAAGGAGTCGCCGAGGAGCAGCCTGAGGCCCCAGAGTCTGAGACGAGCCGCCGCCGCCCCCGCCACTGCGGGGAGGAGGGGGAGGAGGAGCGGGAGGAGGGACGAGCTGGTCGGGAGAAGAGGAAAAAAACTTTTGAGACTTTTCCGTTGCCGCTGGGAGCCGGAGGCGCGGGGACCTCTTGGCGCGACGCTGCCCCGCGAGGAGGCAGGACTTGGGGACCCCAGACCGCCTCCCTTTGCCGCCGGGGACGCTTGCTCCCTCCCTGCCCCCTACACGGCGTCCCTCAGGCGCCCCCATTCCGGACCAGCCCTCGGGAGTCGCCGACCCGGCCTCCCGCAAAGACTTTTCCCCAGACCTCGGGCGCACCCCCTGCACGCCGCCTTCATCCCCGGCCTGTCTCCTGAGCCCCCGCGCATCCTAGACCCTTTCTCCTCCAGGAGACGGATCTCTCTCCGACCTGCCACAGATCCCCTATTCAAGACCACCCACCTTCTGGTACCAGATCGCGCCCATCTAGGTTATTTCCGTGGGATACTGAGACACCCCCGGTCCAAGCCTCCCCTCCACCACTGCGCCCTTCTCCCTGAGGAGCCTCAGCTTTCCCTCGAGGCCCTCCTACCTTTTGCCGGGAGACCCCCAGCCCCTGCAGGGGCGGGGCCTCCCCACCACACCAGCCCTGTTCGCGCTCTCGGCAGTGCCGGGGGGCGCCGCCTCCCCCATGCCGCCCTCCGGGCTGCGGCTGCTGCCGCTGCTGCTACCGCTGCTGTGGCTACTGGTGCTGACGCCTGGCCCGCCGGCCGCGGGACTATCCACCTGCAAGACTATCGACATGGAGCTGGTGAAGCGGAAGCGCATCGAGGCCATCCGCGGCCAGATCCTGTCCAAGCTGCGGCTCGCCAGCCCCCCGAGCCAGGGGGAGGTGCCGCCCGGCCCGCTGCCCGAGGCCGTGCTCGCCCTGTACAACAGCACCCGCGACCGGGTGGCCGGGGAGAGTGCAGAACCGGAGCCCGAGCCTGAGGCCGACTACTACGCCAAGGAGGTCACCCGCGTGCTAATGGTGGAAACCCACAACGAAATCTATGACAAGTTCAAGCAGAGTACACACAGCATATATATGTTCTTCAACACATCAGAGCTCCGAGAAGCGGTACCTGAACCCGTGTTGCTCTCCCGGGCAGAGCTGCGTCTGCTGAGGAGGCTCAAGTTAAAAGTGGAGCAGCACGTGGAGCTGTACCAGAAATACAGCAACAATTCCTGGCGATACCTCAGCAACCGGCTGCTGGCACCCAGCGACTCGCCAGAGTGGTTATCTTTTGATGTCACCGGAGTTGTGCGGCAGTGGTTGAGCCGTGGAGGGGAAATTGAGGGCTTTCGCCTTAGCGCCCACTGCTCCTGTGACAGCAGGGATAACACACTGCAAGTGGACATCAACGGGTTCACTACCGGCCGCCGAGGTGACCTGGCCACCATTCATGGCATGAACCGGCCTTTCCTGCTTCTCATGGCCACCCCGCTGGAGAGGGCCCAGCATCTGCAAAGCTCCCGGCACCGCCGAGCCCTGGACACCAACTATTGCTTCAGCTCCACGGAGAAGAACTGCTGCGTGCGGCAGCTGTACATTGACTTCCGCAAGGACCTCGGCTGGAAGTGGATCCACGAGCCCAAGGGCTACCATGCCAACTTCTGCCTCGGGCCCTGCCCCTACATTTGGAGCCTGGACACGCAGTACAGCAAGGTCCTGGCCCTGTACAACCAGCATAACCCGGGCGCCTCGGCGGCGCCGTGCTGCGTGCCGCAGGCGCTGGAGCCGCTGCCCATCGTGTACTACGTGGGCCGCAAGCCCAAGGTGGAGCAGCTGTCCAACATGATCGTGCGCTCCTGCAAGTGCAGCTGAGGTCCCGCCCCGCCCCGCCCCGCCCCGGCAGGCCCGGCCCCACCCCGCCCCGCCCCCGCTGCCTTGCCCATGGGGGCTGTATTTAAGGACACCGTGCCCCAAGCCCACCTGGGGCCCCATTAAAGATGGAGAGAGGACTGCGGATCTCTGTGTCATTGGGCGCCTGCCTGGGGTCTCCATCCCTGACGTTCCCCCACTCCCACTCCCTCTCTCTCCCTCTCTGCCTCCTCCTGCCTGTCTGCACTATTCCTTTGCCCGGCATCAAGGCACAGGGGACCAGTGGGGAACACTACTGTAGTTAGATCTATTTATTGAGCACCTTGGGCACTGTTGAAGTGCCTTACATTAATGAACTCATTCAGTCACCATAGCAACACTCTGAGATGGCAGGGACTCTGATAACACCCATTTTAAAGGTTGAGGAAACAAGCCCAGAGAGGTTAAGGGAGGAGTTCCTGCCCACCAGGAACCTGCTTTAGTGGGGGATAGTGAAGAAGACAATAAAAGATAGTAGTTCAGGCCAGGCGGGGTGCTCACGCCTGTAATCCTAGCACTTTTGGGAGGCAGAGATGGGAGGATACTTGAATCCAGGCATTTGAGACCAGCCTGGGTAACATAGTGAGACCCTATCTCTACAAAACACTTTTAAAAAATGTACACCTGTGGTCCCAGCTACTCTGGAGGCTAAGGTGGGAGGATCACTTGATCCTGGGAGGTCAAGGCTGCAGSEQ ID NO100絲氨酸蛋白酶抑制劑，進(jìn)化枝H，成員1＞gi|32454740|ref|NM_001235.2|人類絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制劑，進(jìn)化枝H(熱休克蛋白47)成員1(膠原結(jié)合蛋白1)(SERPINH1)，mRNA|qPCR據(jù)assay_on_demand情況匹配[184..208]TCTTTGGCTTTTTTTGGCGGAGCTGGGGCGCCCTCCGGAAGCGTTTCCAACTTTCCAGAAGTTTCTCGGGACGGGCAGGAGGGGGTGGGGACTGCCATATATAGATCCCGGGAGCAGGGGAGCGGGCTAAGAGTAGAATCGTGTCGCGGCTCGAGAGCGAGAGTCACGTCCCGGCGCTAGCCCAGCCCGACCCAGGCCCACCGTGGTGCACGCAAACCACTTCCTGGCCATGCGCTCCCTCCTGCTTCTCAGCGCCTTCTGCCTCCTGGAGGCGGCCCTGGCCGCCGAGGTGAAGAAACCTGCAGCCGCAGCAGCTCCTGGCACTGCGGAGAAGTTGAGCCCCAAGGCGGCCACGCTTGCCGAGCGCAGCGCCGGCCTGGCCTTCAGCTTGTACCAGGCCATGGCCAAGGACCAGGCAGTGGAGAACATCCTGGTGTCACCCGTGGTGGTGGCCTCGTCGCTAGGGCTCGTGTCGCTGGGCGGCAAGGCGACCACGGCGTCGCAGGCCAAGGCAGTGCTGAGCGCCGAGCAGCTGCGCGACGAGGAGGTGCACGCCGGCCTGGGCGAGCTGCTGCGCTCACTCAGCAACTCCACGGCGCGCAACGTGACCTGGAAGCTGGGCAGCCGACTGTACGGACCCAGCTCAGTGAGCTTCGCTGATGACTTCGTGCGCAGCAGCAAGCAGCACTACAACTGCGAGCACTCCAAGATCAACTTCCGCGACAAGCGCAGCGCGCTGCAGTCCATCAACGAGTGGGCCGCGCAGACCACCGACGGCAAGCTGCCCGAGGTCACCAAGGACGTGGAGCGCACGGACGGCGCCCTGCTAGTCAACGCCATGTTCTTCAAGCCACACTGGGATGAGAAATTCCACCACAAGATGGTGGACAACCGTGGCTTCATGGTGACTCGGTCCTATACCGTGGGTGTCATGATGATGCACCGGACAGGCCTCTACAACTACTACGACGACGAGAAGGAAAAGCTGCAAATCGTGGAGATGCCCCTGGCCCACAAGCTCTCCAGCCTCATCATCCTCATGCCCCATCACGTGGAGCCTCTCGAGCGCCTTGAAAAGCTGCTAACCAAAGAGCAGCTGAAGATCTGGATGGGGAAGATGCAGAAGAAGGCTGTTGCCATCTCCTTGCCCAAGGGTGTGGTGGAGGTGACCCATGACCTGCAGAAACACCTGGCTGGGCTGGGCCTGACTGAGGCCATTGACAAGAACAAGGCCGACTTGTCACGCATGTCAGGCAAGAAGGACCTGTACCTGGCCAGCGTGTTCCACGCCACCGCCTTTGAGTTGGACACAGATGGCAACCCCTTTGACCAGGACATCTACGGGCGCGAGGAGCTGCGCAGCCCCAAGCTGTTCTACGCCGACCACCCCTTCATCTTCCTAGTGCGGGACACCCAAAGCGGCTCCCTGCTATTCATTGGGCGCCTGGTCCGGCCTAAGGGTGACAAGATGCGAGACGAGTTATAGGGCCTCAGGGTGCACACAGGATGGCAGGAGGCATCCAAAGGCTCCTGAGACACATGGGTGCTATTGGGGTTGGGGGGGAGGTGAGGTACCAGCCTTGGATACTCCATGGGGTGGGGGTGGAAAAACAGACCGGGGTTCCCGTGTGCCTGAGCGGACCTTCCCAGCTAGAATTCACTCCACTTGGACATGGGCCCCAGATACCATGATGCTGAGCCCGGAAACTCCACATCCTGTGGGACCTGGGCCATAGTCATTCTGCCTGCCCTGAAAGTCCCAGATCAAGCCTGCCTCAATCAGTATTCATATTTATAGCCAGGTACCTTCTCACCTGTGAGACCAAATTGAGCTAGGGGGGTCAGCCAGCCCTCTTCTGACACTAAAACACCTCAGCTGCCTCCCCAGCTCTATCCCAACCTCTCCCAACTATAAAACTAGGTGCTGCAGCCCCTGGGACCAGGCACCCCCAGAATGACCTGGCCGCAGTGAGGCGGATTGAGAAGGAGCTCCCAGGAGGGGCTTCTGGGCAGACTCTGGTCAAGAAGCATCGTGTCTGGCGTTGTGGGGATGAACTTTTTGTTTTGTTTCTTCCTTTTTTAGTTCTTCAAAGATAGGGAGGGAAGGGGGAACATGAGCCTTTGTTGCTATCAATCCAAGAACTTATTTGTACATTTTTTTTTTCAATAAAACTTTTCCAATGACATTTTGTTGGAGCGTGGAAAAAA SEQ ID NO101絲氨酸蛋白酶抑制劑，進(jìn)化枝B，成員5＞gi|4505788|ref|NM_002639.1|人類絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制劑，進(jìn)化枝B(卵清蛋白)，成員5(SERPINB5)，mRNA|qPCR正向引物匹配[36..56]|qPCR反向引物匹配[106..86]|qPCR探針匹配[60..80]GGCACGAGTTGTGCTCCTCGCTTGCCTGTTCCTTTTCCACGCATTTTCCAGGATAACTGTGACTCCAGGCCCGCAATGGATGCCCTGCAACTAGCAAATTCGGCTTTTGCCGTTGATCTGTTCAAACAACTATGTGAAAAGGAGCCACTGGGCAATGTCCTCTTCTCTCCAATCTGTCTCTCCACCTCTCTGTCACTTGCTCAAGTGGGTGCTAAAGGTGACACTGCAAATGAAATTGGACAGGTTCTTCATTTTGAAAATGTCAAAGATATACCCTTTGGATTTCAAACAGTAACATCGGATGTAAACAAACTTAGTTCCTTTTACTCACTGAAACTAATCAAGCGGCTCTACGTAGACAAATCTCTGAATCTTTCTACAGAGTTCATCAGCTCTACGAAGAGACCCTATGCAAAGGAATTGGAAACTGTTGACTTCAAAGATAAATTGGAAGAAACGAAAGGTCAGATCAACAACTCAATTAAGGATCTCACAGATGGCCACTTTGAGAACATTTTAGCTGACAACAGTGTGAACGACCAGACCAAAATCCTTGTGGTTAATGCTGCCTACTTTGTTGGCAAGTGGATGAAGAAATTTCCTGAATCAGAAACAAAAGAATGTCCTTTCAGACTCAACAAGACAGACACCAAACCAGTGCAGATGATGAACATGGAGGCCACGTTCTGTATGGGAAACATTGACAGTATCAATTGTAAGATCATAGAGCTTCCTTTTCAAAATAAGCATCTCAGCATGTTCATCCTACTACCCAAGGATGTGGAGGATGAGTCCACAGGCTTGGAGAAGATTGAAAAACAACTCAACTCAGAGTCACTGTCACAGTGGACTAATCCCAGCACCATGGCCAATGCCAAGGTCAAACTCTCCATTCCAAAATTTAAGGTGGAAAAGATGATTGATCCCAAGGCTTGTCTGGAAAATCTAGGGCTGAAACATATCTTCAGTGAAGACACATCTGATTTCTCTGGAATGTCAGAGACCAAGGGAGTGGCCCTATCAAATGTTATCCACAAAGTGTGCTTAGAAATAACTGAAGATGGTGGGGATTCCATAGAGGTGCCAGGAGCACGGATCCTGCAGCACAAGGATGAATTGAATGCTGACCATCCCTTTATTTACATCATCAGGCACAACAAAACTCGAAACATCATTTTCTTTGGCAAATTCTGTTCTCCTTAAGTGGCATAGCCCATGTTAAGTCCTCCCTGACTTTTCTGTGGATGCCGATTTCTGTAAACTCTGCATCCAGAGATTCATTTTCTAGATACAATAAATTGCTAATGTTGCTGGATCAGGAAGCCGCCAGTACTTGTCATATGTAGCCTTCACACAGATAGACCTTTTTTTTTTTCCAATTCTATCTTTTGTTTCCTTTTTTCCCATAAGACAATGACATACGCTTTTAATGAAAAGGAATCACGTTAGAGGAAAAATATTTATTCATTATTTGTCAAATTGTCCGGGGTAGTTGGCAGAAATACAGTCTTCCACAAAGAAAATTCCTATAAGGAAGATTTGGAAGCTCTTCTTCCCAGCACTATGCTTTCCTTCTTTGGGATAGAGAATGTTCCAGACATTCTCGCTTCCCTGAAAGACTGAAGAAAGTGTAGTGCATGGGACCCACGAAACTGCCCTGGCTCCAGTGAAACTTGGGCACATGCTCAGGCTACTATAGGTCCAGAAGTCCTTATGTTAAGCCCTGGCAGGCAGGTGTTTATTAAAATTCTGAATTTTGGGGATTTTCAAAAGATAATATTTTACATACACTGTATGTTATAGAACTTCATGGATCAGATCTGGGGCAGCAACCTATAAATCAACACCTTAATATGCTGCAACAAAATGTAGAATATTCAGACAAAATGGATACATAAAGACTAAGTAGCCCATAAGGGGTCAAAATTTGCTGCCAAATGCGTATGCCACCAACTTACAAAAACACTTCGTTCGCAGAGCTTTTCAGATTGTGGAATGTTGGATAAGGAATTATAGACCTCTAGTAGCTGAAATGCAAGACCCCAAGAGGAAGTTCAGATCTTAATATAAATTCACTTTCATTTTTGATAGCTGTCCCATCTGGTCATGTGGTTGGCACTAGACTGGTGGCAGGGGCTTCTAGCTGACTCGCACAGGGATTCTCACAATAGCCGATATCAGAATTTGTGTTGAAGGAACTTGTCTCTTCATCTAATATGATAGCGGGAAAAGGAGAGGAAACTACTGCCTTTAGAAAATATAAGTAAAGTGATTAAAGTGCTCACGTTACCTTGACACATAGTTTTTCAGTCTATGGGTTTAGTTACTTTAGATGGCAAGCATGTAACTTATATTAATAGTAATTTGTAAAGTTGGGTGGATAAGCTATCCCTGTTGCCGGTTCATGGATTACTTCTCTATAAAAAATATATATTTACCAAAAAATTTTGTGACATTCCTTCTCCCATCTCTTCCTTGACATGCATTGTAAATAGGTTCTTCTTGTTCTGAGATTCAATATTGAATTTCTCCTATGCTATTGACAATAAAATATTATTGAACTACCSEQ ID NO102癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子5＞gi|11386170|ref|NM_004363.1|人類癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子5(CEACAM5)，mRNA|qPCR據(jù)assay_on_demand情況匹配[2128..2152]CTCAGGGCAGAGGGAGGAAGGACAGCAGACCAGACAGTCACAGCAGCCTTGACAAAACGTTCCTGGAACTCAAGCTCTTCTCCACAGAGGAGGACAGAGCAGACAGCAGAGACCATGGAGTCTCCCTCGGCCCCTCCCCACAGATGGTGCATCCCCTGGCAGAGGCTCCTGCTCACAGCCTCACTTCTAACCTTCTGGAACCCGCCCACCACTGCCAAGCTCACTATTGAATCCACGCCGTTCAATGTCGCAGAGGGGAAGGAGGTGCTTCTACTTGTCCACAATCTGCCCCAGCATCTTTTTGGCTACAGCTGGTACAAAGGTGAAAGAGTGGATGGCAACCGTCAAATTATAGGATATGTAATAGGAACTCAACAAGCTACCCCAGGGCCCGCATACAGTGGTCGAGAGATAATATACCCCAATGCATCCCTGCTGATCCAGAACATCATCCAGAATGACACAGGATTCTACACCCTACACGTCATAAAGTCAGATCTTGTGAATGAAGAAGCAACTGGCCAGTTCCGGGTATACCCGGAGCTGCCCAAGCCCTCCATCTCCAGCAACAACTCCAAACCCGTGGAGGACAAGGATGCTGTGGCCTTCACCTGTGAACCTGAGACTCAGGACGCAACCTACCTGTGGTGGGTAAACAATCAGAGCCTCCCGGTCAGTCCCAGGCTGCAGCTGTCCAATGGCAACAGGACCCTCACTCTATTCAATGTCACAAGAAATGACACAGCAAGCTACAAATGTGAAACCCAGAACCCAGTGAGTGCCAGGCGCAGTGATTCAGTCATCCTGAATGTCCTCTATGGCCCGGATGCCCCCACCATTTCCCCTCTAAACACATCTTACAGATCAGGGGAAAATCTGAACCTCTCCTGCCACGCAGCCTCTAACCCACCTGCACAGTACTCTTGGTTTGTCAATGGGACTTTCCAGCAATCCACCCAAGAGCTCTTTATCCCCAACATCACTGTGAATAATAGTGGATCCTATACGTGCCAAGCCCATAACTCAGACACTGGCCTCAATAGGACCACAGTCACGACGATCACAGTCTATGCAGAGCCACCCAAACCCTTCATCACCAGCAACAACTCCAACCCCGTGGAGGATGAGGATGCTGTAGCCTTAACCTGTGAACCTGAGATTCAGAACACAACCTACCTGTGGTGGGTAAATAATCAGAGCCTCCCGGTCAGTCCCAGGCTGCAGCTGTCCAATGACAACAGGACCCTCACTCTACTCAGTGTCACAAGGAATGATGTAGGACCCTATGAGTGTGGAATCCAGAACGAATTAAGTGTTGACCACAGCGACCCAGTCATCCTGAATGTCCTCTATGGCCCAGACGACCCCACCATTTCCCCCTCATACACCTATTACCGTCCAGGGGTGAACCTCAGCCTCTCCTGCCATGCAGCCTCTAACCCACCTGCACAGTATTCTTGGCTGATTGATGGGAACATCCAGCAACACACACAAGAGCTCTTTATCTCCAACATCACTGAGAAGAACAGCGGACTCTATACCTGCCAGGCCAATAACTCAGCCAGTGGCCACAGCAGGACTACAGTCAAGACAATCACAGTCTCTGCGGAGCTGCCCAAGCCCTCCATCTCCAGCAACAACTCCAAACCCGTGGAGGACAAGGATGCTGTGGCCTTCACCTGTGAACCTGAGGCTCAGAACACAACCTACCTGTGGTGGGTAAATGGTCAGAGCCTCCCAGTCAGTCCCAGGCTGCAGCTGTCCAATGGCAACAGGACCCTCACTCTATTCAATGTCACAAGAAATGACGCAAGAGCCTATGTATGTGGAATCCAGAACTCAGTGAGTGCAAACCGCAGTGACCCAGTCACCCTGGATGTCCTCTATGGGCCGGACACCCCCATCATTTCCCCCCCAGACTCGTCTTACCTTTCGGGAGCGAACCTCAACCTCTCCTGCCACTCGGCCTCTAACCCATCCCCGCAGTATTCTTGGCGTATCAATGGGATACCGCAGCAACACACACAAGTTCTCTTTATCGCCAAAATCACGCCAAATAATAACGGGACCTATGCCTGTTTTGTCTCTAACTTGGCTACTGGCCGCAATAATTCCATAGTCAAGAGCATCACAGTCTCTGCATCTGGAACTTCTCCTGGTCTCTCAGCTGGGGCCACTGTCGGCATCATGATTGGAGTGCTGGTTGGGGTTGCTCTGATATAGCAGCCCTGGTGTAGTTTCTTCATTTCAGGAAGACTGACAGTTGTTTTGCTTCTTCCTTAAAGCATTTGCAACAGCTACAGTCTAAAATTGCTTCTTTACCAAGGATATTTACAGAAAAGACTCTGACCAGAGATCGAGACCATCCTAGCCAACATCGTGAAACCCCATCTCTACTAAAAATACAAAAATGAGCTGGGCTTGGTGGCGCGCACCTGTAGTCCCAGTTACTCGGGAGGCTGAGGCAGGAGAATCGCTTGAACCCGGGAGGTGGAGATTGCAGTGAGCCCAGATCGCACCACTGCACTCCAGTCTGGCAACAGAGCAAGACTCCATCTCAAAAAGAAAAGAAAAGAAGACTCTGACCTGTACTCTTGAATACAAGTTTCTGATACCACTGCACTGTCTGAGAATTTCCAAAACTTTAATGAACTAACTGACAGCTTCATGAAACTGTCCACCAAGATCAAGCAGAGAAAATAATTAATTTCATGGGACTAAATGAACTAATGAGGATTGCTGATTCTTTAAATGTCTTGTTTCCCAGATTTCAGGAAACTTTTTTTCTTTTAAGCTATCCACTCTTACAGCAATTTGATAAAATATACTTTTGTGAACAAAAATTGAGACATTTACATTTTCTCCCTATGTGGTCGCTCCAGACTTGGGAAACTATTCATGAATATTTATATTGTATGGTAATATAGTTATTGCACAAGTTCAATAAAAATCTGCTCTTTGTATAACAGAAAAA SEQ ID NO103基質(zhì)金屬蛋白酶2＞gi|113426651ref|NM_004530.1|人類基質(zhì)金屬蛋白酶2(明膠酶A，72kDa明膠酶，72kDa IV型膠原酶)(MMP2)，mRNA|qPCR正向引物匹配[1713..1732]|qPCR反向引物匹配[1793..1775]|qPCR探針匹配[1751..1773]TGTTTCCGCTGCATCCAGACTTCCTCAGGCGGTGGCTGGAGGCTGCGCATCTGGGGCTTTAAACATACAAAGGGATTGCCAGGACCTGCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGGGGCTGGGGCGCGGGGGCCGGACCATGAGCCGCTGAGCCGGGCAAACCCCAGGCCACCGAGCCAGCGGACCCTCGGAGCGCAGCCCTGCGCCGCGGACCAGGCTCCAACCAGGCGGCGAGGCGGCCACACGCACCGAGCCAGCGACCCCCGGGCGACGCGCGGGGCCAGGGAGCGCTACGATGGAGGCGCTAATGGCCCGGGGCGCGCTCACGGGTCCCCTGAGGGCGCTCTGTCTCCTGGGCTGCCTGCTGAGCCACGCCGCCGCCGCGCCGTCGCCCATCATCAAGTTCCCCGGCGATGTCGCCCCCAAAACGGACAAAGAGTTGGCAGTGCAATACCTGAACACCTTCTATGGCTGCCCCAAGGAGAGCTGCAACCTGTTTGTGCTGAAGGACACACTAAAGAAGATGCAGAAGTTCTTTGGACTGCCCCAGACAGGTGATCTTGACCAGAATACCATCGAGACCATGCGGAAGCCACGCTGCGGCAACCCAGATGTGGCCAACTACAACTTCTTCCCTCGCAAGCCCAAGTGGGACAAGAACCAGATCACATACAGGATCATTGGCTACACACCTGATCTGGACCCAGAGACAGTGGATGATGCCTTTGCTCGTGCCTTCCAAGTCTGGAGCGATGTGACCCCACTGCGGTTTTCTCGAATCCATGATGGAGAGGCAGACATCATGATCAACTTTGGCCGCTGGGAGCATGGCGATGGATACCCCTTTGACGGTAAGGACGGACTCCTGGCTCATGCCTTCGCCCCAGGCACTGGTGTTGGGGGAGACTCCCATTTTGATGACGATGAGCTATGGACCTTGGGAGAAGGCCAAGTGGTCCGTGTGAAGTATGGCAACGCCGATGGGGAGTACTGCAAGTTCCCCTTCTTGTTCAATGGCAAGGAGTACAACAGCTGCACTGATACTGGCCGCAGCGATGGCTTCCTCTGGTGCTCCACCACCTACAACTTTGAGAAGGATGGCAAGTACGGCTTCTGTCCCCATGAAGCCCTGTTCACCATGGGCGGCAACGCTGAAGGACAGCCCTGCAAGTTTCCATTCCGCTTCCAGGGCACATCCTATGACAGCTGCACCACTGAGGGCCGCACGGATGGCTACCGCTGGTGCGGCACCACTGAGGACTACGACCGCGACAAGAAGTATGGCTTCTGCCCTGAGACCGCCATGTCCACTGTTGGTGGGAACTCAGAAGGTGCCCCCTGTGTCTTCCCCTTCACTTTCCTGGGCAACAAATATGAGAGCTGCACCAGCGCCGGCCGCAGTGACGGAAAGATGTGGTGTGCGACCACAGCCAACTACGATGACGACCGCAAGTGGGGCTTCTGCCCTGACCAAGGGTACAGCCTGTTCCTCGTGGCAGCCCACGAGTTTGGCCACGCCATGGGGCTGGAGCACTCCCAAGACCCTGGGGCCCTGATGGCACCCATTTACACCTACACCAAGAACTTCCGTCTGTCCCAGGATGACATCAAGGGCATTCAGGAGCTCTATGGGGCCTCTCCTGACATTGACCTTGGCACCGGCCCCACCCCCACACTGGGCCCTGTCACTCCTGAGATCTGCAAACAGGACATTGTATTTGATGGCATCGCTCAGATCCGTGGTGAGATCTTCTTCTTCAAGGACCGGTTCATTTGGCGGACTGTGACGCCACGTGACAAGCCCATGGGGCCCCTGCTGGTGGCCACATTCTGGCCTGAGCTCCCGGAAAAGATTGATGCGGTATACGAGGCCCCACAGGAGGAGAAGGCTGTGTTCTTTGCAGGGAATGAATACTGGATCTACTCAGCCAGCACCCTGGAGCGAGGGTACCCCAAGCCACTGACCAGCCTGGGACTGCCCCCTGATGTCCAGCGAGTGGATGCCGCCTTTAACTGGAGCAAAAACAAGAAGACATACATCTTTGCTGGAGACAAATTCTGGAGATACAATGAGGTGAAGAAGAAAATGGATCCTGGCTTTCCCAAGCTCATCGCAGATGCCTGGAATGCCATCCCCGATAACCTGGATGCCGTCGTGGACCTGCAGGGCGGCGGTCACAGCTACTTCTTCAAGGGTGCCTATTACCTGAAGCTGGAGAACCAAAGTCTGAAGAGCGTGAAGTTTGGAAGCATCAAATCCGACTGGCTAGGCTGCTGAGCTGGCCCTGGCTCCCACAGGCCCTTCCTCTCCACTGCCTTCGATACACCGGGCCTGGAGAACTAGAGAAGGACCCGGAGGGGCCTGGCAGCCGTGCCTTCAGCTCTACAGCTAATCAGCATTCTCACTCCTACCTGGTAATTTAAGATTCCAGAGAGTGGCTCCTCCCGGTGCCCAAGAATAGATGCTGACTGTACTCCTCCCAGGCGCCCCTTCCCCCTCCAATCCCACCAACCCTCAGAGCCACCCCTAAAGAGATCCTTTGATATTTTCAACGCAGCCCTGCTTTGGGCTGCCCTGGTGCTGCCACACTTCAGGCTCTTCTCCTTTCACAACCTTCTGTGGCTCACAGAACCCTTGGAGCCAATGGAGACTGTCTCAAGAGGGCACTGGTGGCCCGACAGCCTGGCACAGGGCAGTGGGACAGGGCATGGCCAGGTGGCCACTCCAGACCCCTGGCTTTTCACTGCTGGCTGCCTTAGAACCTTTCTTACATTAGCAGTTTGCTTTGTATGCACTTTGTTTTTTTCTTTGGGTCTTGTTTTTTTTTTCCACTTAGAAATTGCATTTCCTGACAGAAGGACTCAGGTTGTCTGAAGTCACTGCACAGTGCATCTCAGCCCACATAGTGATGGTTCCCCTGTTCACTCTACTTAGCATGTCCCTACCGAGTCTCTTCTCCACTGGATGGAGGAAAACCAAGCCGTGGCTTCCCGCTCAGCCCTCCCTGCCCCTCCTTCAACCATTCCCCATGGGAAATGTCAACAAGTATGAATAAAGACACCTACTGAGTGGC SEQ ID NO104前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin類型5＞gi|20336245|ref|NM_006200.2|人類前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin類型5(PCSK5)，mRNA|qPCR正向引物匹配[2677..2697]|qPCR反向引物匹配[2821..2801]|qPCR探針匹配[2737..2765]CGGAGGGAGCGCTGGGAGCGAGCAAGCGAGCGTTTGGAGCCCGGGCCAGCAGAGGGGGCGCCCGGTCGCTGCCTGTACCGCTCCCGCTGGTCATCTCCGCCGCGCTCGGGGGCCCCGGGAGGAGCGAGACCGAGTCGGAGAGTCCGGGAGCCAAGCCGGGCGAAACCCAACTGCGGAGGACGCCCGCCCCACTCAGCCTCCTCCTGCGTCCGAGCCGGGGAGCATCGCCGAGCGCCCCACGGGCCGGAGAGCTGGGAGCACAGGTCCCGGCAGCCCCAGGGATGGTCTAGGAGCCGGCGTAAGGCTCGCTGCTCTGCTCCCTGCCGGGGCTAGCCGCCTCCTGCCGATCGCCCGGGGCTGCGAGCTGCGGCGGCCCGGGGCTGCTCGCCGGGCGGCGCAGGCCGGAGAAGTTAGTTGTGCGCGCCCTTAGTGCGCGGAACCAGCCAGCGAGCGAGGGAGCAGCGAGGCGCCGGGACCATGGGCTGGGGGAGCCGCTGCTGCTGCCCGGGACGTTTGGACCTGCTGTGCGTGCTGGCGCTGCTCGGGGGCTGCCTGCTCCCCGTGTGTCGGACGCGCGTCTACACCAACCACTGGGCAGTCAAAATCGCCGGGGGCTTCCCGGAGGCCAACCGTATCGCCAGCAAGTACGGATTCATCAACATAGGACAGATAGGGGCCCTGAAGGACTACTACCACTTCTACCATAGCAGGACGATTAAAAGGTCAGTTATCTCGAGCAGAGGGACCCACAGTTTCATTTCAATGGAACCAAAGGTGGAATGGATCCAACAGCAAGTGGTAAAAAAGCGGACAAAGAGGGATTATGACTTCAGTCGTGCCCAGTCTACCTATTTCAATGATCCCAAGTGGCCCAGCATGTGGTATATGCACTGCAGTGACAATACACATCCCTGCCAGTCTGACATGAATATCGAAGGAGCCTGGAAGAGAGGCTACACGGGAAAGAACATTGTGGTCACTATCCTGGATGACGGAATTGAGAGAACCCATCCAGATCTGATGCAAAACTACGATGCTCTGGCAAGTTGCGACGTGAATGGGAATGACTTGGACCCAATGCCTCGTTATGATGCAAGCAACGAGAACAAGCATGGGACTCGCTGTGCTGGAGAAGTGGCAGCCGCTGCAAACAATTCGCACTGCACAGTCGGAATTGCTTTCAACGCCAAGATCGGAGGAGTGCGAATGCTGGACGGAGATGTCACGGACATGGTTGAAGCAAAATCAGTTAGCTTCAACCCCCAGCACGTGCACATTTACAGCGCCAGCTGGGGCCCGGATGATGATGGCAAGACTGTGGACGGACCAGCCCCCCTCACCCGGCAAGCCTTTGAAAACGGCGTTAGAATGGGGCGGAGAGGCCTCGGCTCTGTGTTTGTTTGGGCATCTGGAAATGGTGGAAGGAGCAAAGACCACTGCTCCTGTGATGGCTACACCAACAGCATCTACACCATCTCCATCAGCAGCACTGCAGAAAGCGGAAAGAAACCTTGGTACCTGGAAGAGTGTTCATCCACGCTGGCCACAACCTACAGCAGCGGGGAGTCCTACGATAAGAAAATCATCACTACAGATCTGAGGCAGCGTTGCACGGACAACCACACTGGGACGTCAGCCTCAGCCCCCATGGCTGCAGGCATCATTGCGCTGGCCCTGGAAGCCAATCCGTTTCTGACCTGGAGAGACGTACAGCATGTTATTGTCAGGACTTCCCGTGCGGGACATTTGAACGCTAATGACTGGAAAACCAATGCTGCTGGTTTTAAGGTGAGCCATCTTTATGGATTTGGACTGATGGACGCAGAAGCCATGGTGATGGAGGCAGAGAAGTGGACCACCGTTCCCCGGCAGCACGTGTGTGTGGAGAGCACAGACCGACAAATCAAGACAATCCGCCCTAACAGTGCAGTGCGCTCCATCTACAAAGCTTCAGGCTGCTCGGATAACCCCAACCGCCATGTCAACTACCTGGAGCACGTCGTTGTGCGCATCACCATCACCCACCCCAGGAGAGGAGACCTGGCCATCTACCTGACCTCGCCCTCTGGAACTAGGTCTCAGCTTTTGGCCAACAGGCTATTTGATCACTCCATGGAAGGATTCAAAAACTGGGAGTTCATGACCATTCATTGCTGGGGAGAAAGAGCTGCTGGTGACTGGGTCCTTGAAGTTTATGATACTCCCTCTCAGCTAAGGAACTTTAAGACTCCAGGTAAATTGAAAGAATGGTCTTTGGTCCTCTACGGCACCTCCGTGCAGCCATATTCACCAACCAATGAATTTCCGAAAGTGGAACGGTTCCGCTATAGCCGAGTTGAAGACCCCACAGACGACTATGGCACAGAGGATTATGCAGGTCCCTGCGACCCTGAGTGCAGTGAGGTTGGCTGTGACGGGCCAGGACCAGACCACTGCAATGACTGTTTGCACTACTACTACAAGCTGAAAAACAATACCAGGATCTGTGTCTCCAGCTGCCCCCCTGGCCACTACCACGCCGACAAGAAGCGCTGCAGGAAGTGTGCCCCCAACTGTGAGTCCTGCTTTGGGAGCCATGGTGACCAATGCATGTCCTGCAAATATGGATACTTTCTGAATGAAGAAACCAACAGCTGTGTTACTCACTGCCCTGATGGGTCATATCAGGATACCAAGAAAAATCTTTGCCGGAAATGCAGTGAAAACTGCAAGACATGTACTGAATTCCATAACTGTACAGAATGTAGGGATGGGTTAAGCCTGCAGGGATCCCGGTGCTCTGTCTCCTGTGAAGATGGACGGTATTTCAACGGCCAGGACTGCCAGCCCTGCCACCGCTTCTGCGCCACTTGTGCTGGGGCAGGAGCTGATGGGTGCATTAACTGCACAGAGGGCTACTTCATGGAGGATGGGAGATGCGTGCAGAGCTGTAGTATCAGCTATTACTTTGACCACTCTTCAGAGAATGGATACAAATCCTGCAAAAAATGTGATATCAGTTGTTTGACGTGCAATGGCCCAGGATTCAAGAACTGTACAAGCTGCCCTAGTGGGTATCTCTTAGACTTAGGAATGTGTCAAATGGGAGCCATTTGCAAGGATGCAACGGAAGAGTCCTGGGCGGAAGGAGGCTTCTGTATGCTTGTGAAAAAGAACAATCTGTGCCAACGGAAGGTTCTTCAACAACTTTGCTGCAAAACATGTACATTTCAAGGCTGAGCAGCCATCTTAGATTTCTTTGTTCCTGTAGACTTATAGATTATTCCATATTATTAAAAAGAAAAAAAAAAGCCAAAAAG SEQ ID NO105羧肽酶N，多肽2，83kDa＞gi|18554966|ref|NM_087358.1|人類羧肽酶N，多肽2,83kDa(CPN2)，mRNAATGGGTTGTGACTGCTTCGTCCAGGAGGTGTTCTGCTCAGATGAGGAGCTTGCCACCGTCCCGCTGGACATCCCGCCATATACGAAAAACATCATCTTTGTGGAGACCTCGTTCACCACATTGGAAACCAGAGCTTTTGGCAGTAACCCCAACTTGACCAAGGTGGTCTTCCTCAACACTCAGCTCTGCCAGTTTAGGCCGGATGCCTTTGGGGGGCTGCCCAGGCTGGAGGACCTGGAGGTCACAGGCAGTAGCTTCTTGAACCTCAGCACCAACATCTTCTCCAACCTGACCTCGCTGGGCAAGCTCACCCTCAACTTCAACATGCTGGAGGCTCTGCCCGAGGGTCTTTTCCAGCACCTGGCTGCCCTGGAGTCCCTCCACCTGCAGGGGAACCAGCTCCAGGCCCTGCCCAGGAGGCTCTTCCAGCCTCTGACCCATCTGAAGACACTCAACCTGGCCCAGAACCTCCTGGCCCAGCTCCCGGAGGAGCTGTTCCACCCACTCACCAGCCTGCAGACCCTGAAGCTGAGCAACAACGCGCTCTCTGGTCTCCCCCAGGGTGTGTTTGGCAAACTGGGCAGCCTGCAGGAGCTCTTCCTGGACAGCAACAACATCTCGGAGCTGCCCCCTCAGGTGTTCTCCCAGCTCTTCTGCCTAGAGAGGCTGTGGCTGCAACGCAACGCCATCACGCACCTGCCGCTCTCCATCTTTGCCTCCCTGGGTAATCTGACCTTTCTGAGCTTGCAGTGGAACATGCTTCGGGTCCTGCCTGCCGGCCTCTTTGCCCACACCCCATGCCTGGTTGGCCTGTCTCTGACCCATAACCAGCTGGAGACTGTCGCTGAGGGCACCTTTGCCCACCTGTCCAACCTGCGTTCCCTCATGCTCTCATACAATGCCATTACCCACCTCCCAGCTGGCATCTTCAGAGACCTGGAGGAGTTGGTCAAACTCTACCTGGGCAGCAACAACCTTACGGCGCTGCACCCAGCCCTCTTCCAGAACCTGTCCAAGCTGGAGCTGCTCAGCCTCTCCAAGAACCAGCTGACCACACTTCCGGAGGGCATCTTCGACACCAACTACAACCTGTTCAACCTGGCCCTGCACGGTAACCCCTGGCAGTGCGACTGCCACCTGGCCTACCTCTTCAACTGGCTGCAGCAGTACACCGATCGGCTCCTGAACATCCAGACCTACTGCGCTGGCCCTGCCTACCTCAAAGGCCAGGTGGTGCCCGCCTTGAATGAGAAGCAGCTGGTGTGTCCCGTCACCCGGGACCACTTGGGCTTCCAGGTCACGTGGCCGGACGAAAGCAAGGCAGGGGGCAGCTGGGATCTGGCTGTGCAGGAAAGGGCAGCCCGGAGCCAGTGCACCTACAGCAACCCCGAGGGCACCGTGGTGCTCGCCTGTGACCAGGCCCAGTGTCGCTGGCTGAACGTCCAGCTCTCTCCTTGGCAGGGCTCCCTGGGACTGCAGTACAATGCTAGTCAGGAGTGGGACCTGAGGTCGAGCTGCGGTTCTCTGCGGCTCACCGTGTCTATCGAGGCTCGGGCAGCAGGGCCCTAGTAGCAGCGCATACAGGAGCTGGGGAAGGGGGCTTTGGGGCCTGCCCACGCGACAGGTAGGGGCGGAGGGGAGCTGAGTCTCCGAAGCTTGGCTTTSEQ ID NO106透明質(zhì)酸和蛋白聚糖連接蛋白4＞gi|30794471|ref|NM_023002.1|人類透明質(zhì)酸和蛋白聚糖連接蛋白4(HAPLN4)，mRNACGGGGGCCGCGCGGGCAAGATGGTGTGCGCTCGGGCGGCCCTCGGTCCCGGCGCGCTCTGGGCCGCGGCCTGGGGCGTCCTGCTGCTCACAGCCCCTGCGGGGGCGCAGCGTGGCCGGAAGAAGGTCGTGCACGTGCTGGAGGGTGAGTCGGGCTCGGTAGTGGTACAGACAGCGCCTGGGCAGGTGGTAAGCCACCGTGGTGGCACCATCGTCTTGCCCTGCCGCTACCACTATGAGGCAGCCGCCCACGGTCACGACGGCGTCCGGCTCAAGTGGACAAAGGTGGTGGACCCGCTGGCCTTCACCGACGTCTTCGTGGCACTAGGCCCCCAGCACCGGGCATTCGGCAGCTACCGTGGGCGGGCTGAGCTGCAGGGCGACGGGCCTGGGGATGCCTCCCTGGTCCTCCGCAACGTCACGCTGCAAGACTACGGGCGCTATGAGTGCGAAGTCACCAATGAGCTGGAAGATGACGCTGGCATGGTCAAGCTGGACCTGGAAGGCGTGGTCTTTCCCTACCACCCCCGTGGAGGCCGATACAAGCTGACCTTCGCGGAGGCGCAGCGCGCGTGCGCCGAGCAGGACGGCATCCTGGCATCTGCAGAACAGCTGCACGCGGCCTGGCGCGACGGCCTGGACTGGTGCAACGCGGGCTGGTTGCGCGACGGCTCAGTGCAATACCCCGTGAACCGGCCCCGGGAGCCCTGCGGCGGCCTGGGGGGGACCGGGAGTGCAGGGGGCGGCGGTGATGCCAACGGGGGCCTGCGCAACTACGGGTATCGCCATAACGCCGAGGAACGCTACGACGCCTTCTGCTTCACGTCCAACCTGCCGGGGCGCGTGTTCTTCCTGAAGCCGCTGCGACCTGTACCCTTCTCCGGAGCTGCGCGCGCGTGTGCTGCGCGTGGCGCGGCCGTGGCCAAGGTGGGGCAGCTGTTCGCCGCGTGGAAGCTGCAGCTGCTAGACCGCTGCACCGCGGGTTGGCTGGCCGATGGCAGTGCGCGCTACCCCATCGTGAACCCGCGAGCGCGCTGCGGAGGCCGCAGGCCTGGTGTGCGCAGCCTCGGCTTCCCGGACGCCACCCGACGGCTCTTCGGCGTCTACTGCTACCGCGCTCCAGGAGCACCGGACCCGGCACCTGGCGGCTGGGGCTGGGGCTGGGCGGGCGGCGGCGGCTGGGCAGGGGGCGCGCGCGATCCTGCTGCCTGGACCCCTCTGCACGTCTAGGCTGGGAGTAGGCGGACAGCCAGGGCGCTTGACCACTGGTCTAGAGCCCTGTGGTCCCCTGGAGCCTGGCCACGCCCTTGAAGCCCTGGACACTGGCCACATTCCCTGTGGTCCCTTACAAACTAACTGTGCCCCTGGGGTCCCTGAAGACTGGCTAGTCCTGGCAGAACAGTACTTTGGAGTTCCCTGGAGCCTGGCCAGCCCTCACCTCTTCTGGATAGAGGATTCCCCCAACTCCCCAACTTTCTCCATGAGGGTCACGCCCCCTGAGGACCTCAGGAGGCCAGCAGAACCCGCAGGCTCCTGAAGACTGGCCACGCCTCCTGAGACCACTTGGAAACAGACCAACTGCCCCCGTGGTCGCCTGGTGGCTGGACCCCCGGGATTGACTAGAGACCGGCCGTACACCTTCTGCATCTCACTGGAGACTGAACACTAGTCCCTTGCGGTCACGTGGGACACTGGGCGCCTCCTCCTCCCCCTCCTCCTCACCTGGAGAGACTACAGGAACTTCAGGGTCACTCCCCGTGGTCACATGGAGGTTGTGGGCCGAGGCGCTTATTTTCCCTTATGGTGACCTGAGTCCTGGAGACTCCCATTCTCCCCCTCTCCCTGAGAGTCCCCTGCAGTTTCTGGGTAACAGGGCACACCCCTCTAGTTTCATGGGCGAGCACCCCCATCTGCCACCTCAGACTGACACACAGCCAGCTGGCTCACTTACTGGGGGCCACGTCCCACCCCTCAGATATTTCTTTGAAGGGAGAGCAAACCCACCCTGTCCTCTGACGTCCCTTTCCCAACTGTCACCAAACAGACCATCTTCCCAGGCCTGGGGACCGGTAAGATCCATGTCACTAGTTATGCAGAGCAGTTGCCTTGGGTCCCACTGTCACCAAGGCAACCAGTCCTGCTGCTACCTGTCACCTAGAGTCACACACCCCTTCCCTCATCAGGCACACCCATGAAGACAGTGCCTCCCTCCTCCAGCTGTAACCATGGATACCACACATTTCTCATCTCATTGGCCCCCACCCCAGAGACCTCCACCTCAACTTCTGGCTGTCCCTACCCTGACTCACCGCCATGGAGATCACCCTCCCCGAAGCTGTCGCCAGGGTGACCCAACATCCAGTTCTCCGGCTCTCACCATGGAAACAAACTGTCCCTGTCCCCAGGCCCACTCCAGTTCCAGACCACCCTCCATGCTCCACCCCCAGGCGGTTTGGACCCCACCACTGTTGCCATGGTGACCAAACTCTGGAGTCCGAGGTAACAGAACACCTGTCCCCCTAGGCTTTTCCTTGTGGACAACGGGGCCCTGTTCACCAAGCTGTTGCCATAGAGACTGTCAACGTTGTCCTCATGACAACCAGACTTCCAGTTCTCAGGAACTTCTCATTGTGGGCCAGAAGTCCTGGGTGCCTCCTACTAGGGCTACCCTACTGCACCCCATCAGGGGCCTGATGGCTGCCCCTTCCCCAGACAGGGCTGGACTTCTGGAGCTGCTAAGCCACCCTCCGTTTGCACGTTAACTCTATGCCGGATAGCAGCTGTGCACGAGACAATCTTGCAACACCCGGGCATGTTTGTCGTCGTCCTACAAATGAGGAAACCGAGCCTATGGCGTGCCCTGGTCTGTTGAGATATGCAAGCACTGAGCTCCTCTTTTGTCCTCTGAGACCCCATCTCCATTCTCACCCAGTTCCTCTCTCCTTCCCTGACCCCCACCCACATTTCCCTCCTTAGAGATCCAGGAGGGATGGAATGTTCTTTAAAATTCAACACCCACCAGGCTCTAAGCGGCGATCTGTGCTAAGAGGTCAGGACCCAGCCGAAGTCCTCGGCGTTGACAGGCAGCTGGGGGGACATGATCCATGGACAAGGCCATCCCGGCCGTGGGAGACCCCAGTCCCGAAGTCTTGCCTGCAGGAGTACTGGGGTCCCCCTGGGGCCCTCTTTACTGTCACGTCATCTCTAGGAAACCTATCTCTGAGTTTTGGGACCAGGTCGGTTTGGGTTTGAATTCTGCCTCTTCTTGCTCACTGTGTGACCAAGTGACAAACTCCTTCTGAACCTGTGTTCTCCCACTGTACCAGGGCTGTTCTGTGGTCCCCGTGAGTGCCAAGCATACAGTAGGGGCTCAATAAATCCTTGTSEQ ID NO107免疫組織化學(xué)從組織塊切下8μM厚的冰凍切片并粘貼于APES玻片上。將組織切片放入丙酮中固定10分鐘后空氣干燥。然后玻片在含有0.3％過氧化氫的甲醇中浸潤(rùn)10分鐘，再用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗。通過用20％的適當(dāng)動(dòng)物血清孵育玻片來(lái)封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，再次用PBS沖洗。用含有1％血清的PBS稀釋初級(jí)抗體，然后滴加到玻片上。孵育1小時(shí)后，再次用PBS沖洗玻片，然后用次級(jí)抗體再孵育1小時(shí)。PBS最后沖洗之后，使用溶解于Tris緩沖鹽溶液(TBS)的二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽檢測(cè)次級(jí)抗體，再用TBS和水沖洗。然后玻片經(jīng)蘇木素復(fù)染，并置于光學(xué)顯微鏡下觀察。
在某些實(shí)施方案中，可以使用基于本發(fā)明癌癥標(biāo)記物的染色對(duì)胃腫瘤進(jìn)行原位(in situ)定位。至少一種標(biāo)記物可形成淀粉樣結(jié)構(gòu)從而能用剛果紅或等效的、非特異性的淀粉樣蛋白染色劑進(jìn)行顯色。
體液中胃癌標(biāo)記物的檢測(cè)在幾個(gè)實(shí)施方案中，可以對(duì)從血液、血漿、血清、諸如使用腹膜灌洗獲得的腹膜液或其它體液如尿液、淋巴液、腦脊液、胃液或者糞便樣品中獲得的樣品如愿地進(jìn)行GTM分析。
一般而言，用于分析這些液體中的寡核苷酸、蛋白質(zhì)和肽的方法是本領(lǐng)域技術(shù)中已知的。寡核苷酸的檢測(cè)可以采用雜交方法如Northern印跡、Southern印跡或微陣列方法或者qPCR進(jìn)行。檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法包括例如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、具有抗體的蛋白質(zhì)芯片、懸浮珠放射免疫測(cè)定(RIA)、Western印跡和凝集素結(jié)合試驗(yàn)。然而，為了說(shuō)明的目的，可以使用夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)對(duì)液體中GTM水平進(jìn)行定量檢測(cè)。對(duì)于血漿分析，在微量滴定板的孔中加入5μL的適當(dāng)稀釋樣品的等分試樣或連續(xù)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)GTM和75μL結(jié)合有過氧化物酶的抗人GTM抗體。30℃孵育30分鐘之后，用含0.05％Tween 20的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗滌各孔以除去未結(jié)合的抗體。然后，將GTM和抗GTM抗體的結(jié)合復(fù)合物用含有H2O2的鄰苯二胺于30℃孵育15分鐘。加入1MH2SO4終止反應(yīng)，并用微量滴定板讀板機(jī)測(cè)定492nm處的吸光度。
應(yīng)該意識(shí)到，抗GTM抗體可以是單克隆抗體或者多克隆抗血清。還應(yīng)該意識(shí)到，任何其它的體液能夠進(jìn)行適當(dāng)?shù)难芯俊?br> 已知一些標(biāo)記物存在于血漿或血清中。這些標(biāo)記物包括骨橋蛋白(Hotte等人，Cancer 95(3)507-510(2002))、前列腺特異性抗原(Martin等人，Prostate Cancer Prostatic Dis.(2004年3月9日)(Pub Med NoPMID15007379))、甲狀腺球蛋白(Hall等人，Laryngoscope 113(1)77-81(2003)；Mazzaferri等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.88(4)1433-14421(2003))、基質(zhì)金屬蛋白酶2和9(Kuo等人，Clin.Chem.Acta.294(1-2)157-168(2000))、CEA和TIMP1(Pellegrini等人，Cancer Immunol.Immunother.49(7)388-394(2000))。因此，由于上述標(biāo)記物中的一些對(duì)于GTM也是有用的標(biāo)記物，所以對(duì)它們進(jìn)行檢測(cè)和定量的血漿、血清或其它體液分析法早已經(jīng)是可得的。因?yàn)樵S多蛋白質(zhì)或者是(1)由細(xì)胞分泌、或者是(2)從細(xì)胞膜脫落、或者是(3)處于細(xì)胞死亡的細(xì)胞丟失的，所以其它GTM也可存在于體液如血漿、血清等中。因此，在本發(fā)明的實(shí)施方案中，對(duì)方便獲得的樣品進(jìn)行GTM檢測(cè)是有用且合意的，并能作為胃癌診斷的基礎(chǔ)。
Western分析使用TriReagent和鹽酸胍提取法從胃組織中抽提出蛋白質(zhì)。從TriReagent提取RNA獲得的非水相與1.5倍體積乙醇混合并離心去除DNA和OCT介質(zhì)。將0.5mL上清液與0.75mL異丙醇混合，室溫孵育10分鐘，然后離心。沉淀物用1mL含0.3M鹽酸胍的95％乙醇洗滌3次，再單用乙醇洗滌1次，然后重懸于50μL的1％SDS中。
采用標(biāo)準(zhǔn)方法，將蛋白質(zhì)定量并進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。簡(jiǎn)言之，按照標(biāo)準(zhǔn)方法學(xué)使用BioRad(trans-biot電轉(zhuǎn)槽)將分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。然后用含有脫脂奶粉的溶液封閉30分鐘，再用初級(jí)抗體室溫孵育2小時(shí)。洗滌之后，加次級(jí)抗體室溫孵育1小時(shí)。最后一次洗滌之后，用ECL檢測(cè)系統(tǒng)(Amersham Biosciences)顯色所結(jié)合抗體。
通過用已知方法準(zhǔn)備血清樣品，然后或者使用寡核苷酸探針或者使用抗目的蛋白質(zhì)的抗體對(duì)血清樣品進(jìn)行分析，從而完成血清中標(biāo)記物的檢測(cè)。包括Western印跡分析在內(nèi)的免疫印跡對(duì)于確定備選表達(dá)的蛋白質(zhì)在血清中是否存在是特別有用的。另外，包括腹膜液、腦脊液等在內(nèi)的其它體液中可能包含標(biāo)記物。有用的標(biāo)記物沒有必要是生理學(xué)意義上被分泌的。相反地，標(biāo)記物蛋白質(zhì)或基因進(jìn)入血清的任何機(jī)制都能有效產(chǎn)生可檢測(cè)的、可量化水平的標(biāo)記物。因此，可溶性蛋白質(zhì)從細(xì)胞中正常分泌、膜蛋白從質(zhì)膜脫落、可變剪接形式的mRNA或從其表達(dá)的蛋白質(zhì)的分泌、細(xì)胞死亡(或者凋亡細(xì)胞)能夠產(chǎn)生足夠水平的有用標(biāo)記物。對(duì)于血清標(biāo)記物作為多種癌癥類型的診斷和/或治療效果評(píng)價(jià)工具的用途得到越來(lái)越多的支持。
Yoshikawa等人(Cancer Letters，15181-86(2000))描述了胃癌患者血漿中的基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑1。
Rudland等人(Cancer Research 623417-3427(2002))描述了作為人乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的骨橋蛋白。
Buckhaults等人(Cancer Research 616996-7001(2002))描述了結(jié)腸直腸腫瘤中的某些分泌的和細(xì)胞表面表達(dá)的基因。
Kim等人(JAMA 287(13)1671-1679(2002))描述了作為潛在的卵巢癌診斷生物標(biāo)記物的骨橋蛋白。
Hotte等人(AJ.American Cancer Society 95(3)507-512(2002))描述了作為人體液中可檢測(cè)蛋白質(zhì)以及與某些惡性腫瘤相關(guān)的骨橋蛋白。
Martin等人(Prostate Cancer Prostatic Dis.2004年3月9日(PMID15007379))(摘要)描述了人激肽釋放酶2、前列腺特異性抗原(PSA)和游離PSA作為檢測(cè)前列腺癌的標(biāo)記物的用途。
Hall等人(Laryngoscope 113(1)77-81(2003)(PMID12679418))(摘要)描述了甲狀腺癌患者血清甲狀腺球蛋白的預(yù)測(cè)值。
Mazzaferri等人(J.Clin.Endocrinol.Metab.88(4)1433-1441(2003))(摘要)描述了作為甲狀腺癌患者潛在監(jiān)測(cè)方法的甲狀腺球蛋白。
Whitley等人(Clin.Lab.Med.24(1)29-47(2004))(摘要)描述了作為甲狀腺癌血清標(biāo)記物的甲狀腺球蛋白。
Kuo等人(Clin.Chim.Acta.294(1-2)157-168(2000))(摘要)描述了HCV和HBV感染患者的血清基質(zhì)金屬蛋白酶2和9。
Koopman等人(Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev 13(3)487-491(2004))(摘要)描述了作為胰腺癌生物標(biāo)記物的骨橋蛋白。
Pellegrini等人(Cancer Immunol.Immunother.49(7)388-394(2000))(摘要)描述了作為侵襲前結(jié)腸直腸癌標(biāo)記物的可溶性癌胚抗原和TIMP1的測(cè)定。
因此，我們已經(jīng)鑒定了對(duì)于研發(fā)檢測(cè)和評(píng)價(jià)胃癌的試劑、裝置和試劑盒有用的許多基因和/或蛋白質(zhì)?？梢詥为?dú)或聯(lián)合使用一種或多種胃癌標(biāo)記物以便提供用于胃癌檢測(cè)的可靠分子檢驗(yàn)。
實(shí)施例本文描述的實(shí)施例其目的是為說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案。其它的實(shí)施方案、方法和分析類型處于分子診斷技術(shù)領(lǐng)域中普通技術(shù)人員所掌握的范圍內(nèi)，從而不必在此詳細(xì)描述?？梢詫⒈炯夹g(shù)領(lǐng)域范圍內(nèi)的其它實(shí)施方案看作是本發(fā)明的一部分。
實(shí)施例1胃惡性腫瘤標(biāo)記物的鑒定圖2描述了使用經(jīng)上述標(biāo)準(zhǔn)所選擇的38種胃腫瘤標(biāo)記物進(jìn)行研究的結(jié)果列表。圖2包括基因的符號(hào)(“符號(hào)”)、MWG oligo號(hào)、NCBI mRNA參考序列號(hào)、蛋白質(zhì)參考序列號(hào)、腫瘤和非腫瘤基因表達(dá)之間的變化倍數(shù)、在微陣列分析中相對(duì)于其它基因的變化倍數(shù)的等級(jí)、原始未調(diào)整的Student′s t-檢驗(yàn)結(jié)果、經(jīng)Bonferroni調(diào)整的p值結(jié)果和兩個(gè)樣品的Wilcoxon檢驗(yàn)結(jié)果。
這34種基因的中值變化倍數(shù)(腫瘤組織非惡性腫瘤組織)范圍是1.6-7，并且變化倍數(shù)等級(jí)的中值變化范圍為-16,995-25,783。變化倍數(shù)秩中最大的可能變化是-29,718。對(duì)于每一種顯示的標(biāo)記物，它們作為癌癥標(biāo)記物的特異性具有極其高的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一般來(lái)說(shuō)，Bonferroni調(diào)整的p值全部低于10-6或更低，這提示使用這些標(biāo)記物進(jìn)行的診斷與胃癌的相關(guān)性非常高。
三種半胱氨酸蛋白酶抑制劑(CST1、CST2和CST4)高度同源并且在微陣列上為同一寡核苷酸，除非另外說(shuō)明，將它們集體稱作“CST1，2，4”。
通過使用SMART軟件包(歐洲分子生物實(shí)驗(yàn)室)預(yù)測(cè)，圖2中描述的所有蛋白質(zhì)均具有信號(hào)肽。已知信號(hào)肽能引導(dǎo)合成的蛋白質(zhì)到達(dá)細(xì)胞外區(qū)室，因而分泌至組織液，其可以從組織液進(jìn)入血液。事實(shí)上，本發(fā)明的一些蛋白質(zhì)已經(jīng)在血清中檢測(cè)到。
圖2中描述的每一種基因顯示了強(qiáng)度等級(jí)大于陣列中對(duì)應(yīng)于CEA的2個(gè)寡核苷核的變化，CEA為在監(jiān)控胃癌進(jìn)展的的臨床實(shí)踐中最常用的標(biāo)記物。
實(shí)施例2qPCR分析對(duì)于圖3中顯示的基因亞類，使用qPCR獲得基因表達(dá)的更加靈敏和精確的定量。在從46份腫瘤樣品和49非惡性腫瘤樣品得到的RNA中分析了通過微陣列分析(圖2)鑒定的23個(gè)基因，結(jié)果見圖3。圖3包括基因符號(hào)、在癌組織和正常組織之間的變化倍數(shù)中值，以及表達(dá)高于非腫瘤樣品中表達(dá)水平第95百分位數(shù)的腫瘤樣品的百分比(％)。由于高(＞75％)的正常細(xì)胞污染、高程度的壞死(＞40％)或者在微陣列上雜交信號(hào)較差，將12份腫瘤樣品和9份正常樣品排除在外，不進(jìn)行分析。這23個(gè)基因的倍數(shù)變化中值范圍從3倍至525倍(圖3)。
對(duì)于≥90％的情況，基因ASPN、CST1，2，4、LOXL2、TIMP1、SPP1、SFRP4、INHBA、THBS2和SPARC在腫瘤中表達(dá)水平高于在非惡性腫瘤中表達(dá)范圍的第95百分位數(shù)(圖3)。對(duì)于剩余的基因，在＞50％的樣品中，其在腫瘤中的表達(dá)高于第95百分位數(shù)。每一個(gè)腫瘤中至少7個(gè)基因的過表達(dá)高于第95百分位數(shù)，這表明標(biāo)記物組合將全面覆蓋所有胃腫瘤。
實(shí)施例3使用qPCR對(duì)微陣列數(shù)據(jù)的驗(yàn)證使用24種基因的探針對(duì)腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品進(jìn)行定量實(shí)時(shí)PCR(qPCR)來(lái)驗(yàn)證微陣列數(shù)據(jù)。在所有研究的24種基因中，有20種基因顯示了兩種技術(shù)之間具有強(qiáng)烈的相關(guān)性。圖4a-4d顯示了這些分析中的四個(gè)分析，這些圖描述了使用微陣列和qPCR方法檢測(cè)四種所選癌癥標(biāo)記物的相對(duì)表達(dá)圖。對(duì)于圖4中的每一個(gè)圖，橫軸代表微陣列檢測(cè)基因表達(dá)的變化倍數(shù)的log2數(shù)值，而縱軸代表qPCR檢測(cè)基因表達(dá)的變化倍數(shù)的log2數(shù)值。我們發(fā)現(xiàn)，如由兩種方法之間的協(xié)變關(guān)系所表明，這兩種方法之間具有強(qiáng)烈的相關(guān)性。這種強(qiáng)烈的相關(guān)性提示微陣列和qPCR的變化倍數(shù)分析是檢測(cè)胃癌標(biāo)記物基因表達(dá)變化的合適方法，并且因此能用作精確的、敏感的篩選方法。從圖4a-4d還可以理解qPCR比微陣列方法能更靈敏地檢測(cè)表達(dá)的變化。因此，在尤其需要早期檢測(cè)的情況下，qPCR特別有用。
圖5a-5w描述了對(duì)于正常組織(未填充直條)和腫瘤組織(黑色直條)，比較一系列23種基因中每一種基因表達(dá)的觀測(cè)頻率(縱軸)和此基因表達(dá)變化倍數(shù)的log2數(shù)值(橫軸)關(guān)系的柱狀圖。我們意外發(fā)現(xiàn)這23種基因中的每一種基因在正常組織和腫瘤組織之間的頻率分布基本上是分離的，這如頻率分布曲線之間的低重疊程度所反映。例如，圖5b描述了CST1，2，4的結(jié)果，其中只有一份正常樣品的表達(dá)水平在腫瘤表達(dá)水平范圍內(nèi)。在其它情況中(例如，圖5n；PRS11)，每一個(gè)頻率分布曲線相對(duì)狹窄并有一定程度的重疊。然而，甚至對(duì)于此標(biāo)記物，變化倍數(shù)log2數(shù)值的中值顯示基因表達(dá)量間基本上是分離的。在其它情況中(例如，圖5a；ASPN)，盡管頻率分布曲線有些重疊，但在正常樣品和腫瘤樣品之間的表達(dá)倍數(shù)log2數(shù)值中值明顯分離。
圖6描述了與正常樣品相比，腫瘤樣品中顯示表達(dá)明顯增加(“過表達(dá)”)的基因數(shù)量(縱軸)和各個(gè)測(cè)試樣品之間關(guān)系的柱狀圖。在每一情況中，腫瘤樣品表現(xiàn)為的多重基因表達(dá)水平升高。在E123樣品中，表達(dá)升高的基因數(shù)量最低，為7個(gè)基因。此發(fā)現(xiàn)說(shuō)明，在多重基因相對(duì)正常組織過表達(dá)的情況下，癌癥檢測(cè)的可靠性非常高，從而使癌癥診斷更加確定。然而，在一些情況中，單一標(biāo)記物基因的表達(dá)升高足以對(duì)癌癥做出診斷。
對(duì)于與血清標(biāo)記物CEA(當(dāng)前最常用于胃癌檢測(cè))的先前比較是基于腫瘤樣品和正常樣品之間微陣列數(shù)據(jù)強(qiáng)度等級(jí)的差別。使用標(biāo)記物和CEA的qPCR數(shù)據(jù)驗(yàn)證該比較。
圖7a-7c描述了與腫瘤標(biāo)記物基因CEA的表達(dá)相比，在各個(gè)腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品中標(biāo)記物的相對(duì)log2表達(dá)(與參考RNA制品相比)圖。CEA是當(dāng)前最常用的監(jiān)測(cè)胃癌進(jìn)展的血清標(biāo)記物。零點(diǎn)定義為每一種標(biāo)記物的正常表達(dá)中值?？梢钥吹紺EA基因(CEACAM5)的表達(dá)在腫瘤樣品和正常樣品之間具有廣泛重疊。而在胃癌標(biāo)記物ASPN、CSPG2、CST1，2，4、IGFBP7、INHBA、LOXL2、LUM、SFRP4、SPARC、SPP1、THBS2、TIMP1、adlican、LEPRE1和EFEMP2中該種重疊明顯減少。對(duì)于圖7b-7c中的其它標(biāo)記物ASAH1、SFRP2、GGH、MMP12、KLK10、TG、PRSS11和TGFBI，在腫瘤組織中表達(dá)范圍和非惡性腫瘤組織中表達(dá)范圍之間的重疊大于上述標(biāo)記物的表達(dá)重疊情況，但仍然低于CEA的表達(dá)重疊情況，這說(shuō)明本文描述的所有新標(biāo)記物在定量上好于CEA，因此能提供更加可靠的診斷。
為了把不同組織處理的影響減到最低，使用來(lái)自同一患者的腫瘤組織和非惡性腫瘤組織樣品的qPCR數(shù)據(jù)來(lái)計(jì)算腫瘤正常(非惡性腫瘤)變化倍數(shù)。這樣的配對(duì)分析校正了基因在不同個(gè)體表達(dá)的背景水平的差異，并將組織處理對(duì)RNA定量的影響降到最低。例如，如果將切除的胃在室溫下放置1小時(shí)，則正常樣品和腫瘤樣品中轉(zhuǎn)錄物的降解程度相同。
圖8總結(jié)了通過qPCR測(cè)定的標(biāo)記物的T:N表達(dá)水平，但是使用了來(lái)自同一個(gè)體的配對(duì)數(shù)據(jù)(即腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品)。圖8還包括了圖3中未包括的六種基因的表達(dá)數(shù)據(jù)。這些額外研究基因是MMP2、CGR11、TGFB1、PCSK5、SERPINB5和SERPINH1。鑒定信息和探針顯示于圖1和圖2。圖8顯示了29種胃癌標(biāo)記物在這些40位患者“配對(duì)”樣品中的T:N變化倍數(shù)中值和T:N變化倍數(shù)最大值。在29種標(biāo)記物中有27種標(biāo)記物T:N變化倍數(shù)中值大于或等于在先技術(shù)標(biāo)記物CEA的T:N變化倍數(shù)中值。全部29種標(biāo)記物具有較高的、在腫瘤樣品中的表達(dá)超過正常樣品中的表達(dá)的配對(duì)樣品百分比。
圖9a-9d描述了來(lái)自同一個(gè)體腫瘤組織和正常組織的數(shù)據(jù)的散點(diǎn)圖。每一個(gè)點(diǎn)代表了標(biāo)記物在患者腫瘤組織中表達(dá)相對(duì)于在非腫瘤組織中表達(dá)的變化倍數(shù)。所有研究的標(biāo)記物均比CEA具有更好的區(qū)別腫瘤組織和非腫瘤組織的能力。CST1，2，4、ASPN和SFRP4三種標(biāo)記物能夠?qū)ε鋵?duì)的腫瘤和正常樣品進(jìn)行100％的區(qū)別。即這些標(biāo)記物在每一個(gè)腫瘤組織中的表達(dá)高于來(lái)自同一個(gè)體的相應(yīng)非腫瘤組織。在其它許多標(biāo)記物中，例如Adlican、CSPG2、EFEMP2、IGFBP7、INHBA、LOXL2、LUM、SERPINH1、SPARC、SPP1、TGFbI、THBS2和TIMP1，每一種標(biāo)記物在腫瘤組織中的表達(dá)低于非腫瘤組織的個(gè)別點(diǎn)僅有2個(gè)或3個(gè)。因此，對(duì)于這些標(biāo)記物而言，在任何一組配對(duì)腫瘤組織和非腫瘤組織中可能產(chǎn)生假陰性的可能性相對(duì)低(例如，40份中有3份為陰性或7.5％的假陰性，40份中有2份為陰性或5％的假陰性，40份中有1份為陰性或2.5％的假陰性)。因此，即使使用上面剛剛列舉的其它標(biāo)記物，使用來(lái)自同一患者的多個(gè)樣品也能產(chǎn)生可靠的診斷信息。
上文顯示了這些標(biāo)記物的基因序列，以及用來(lái)檢測(cè)它們的引物和探針的位置。
為了確定標(biāo)記物基因過表達(dá)是否不依賴于胃腫瘤的分期，將配對(duì)T:N變化倍數(shù)的log2數(shù)值對(duì)腫瘤分期作圖(圖10a-10ad)。觀察發(fā)現(xiàn)，對(duì)于圖8中列舉的26種標(biāo)記物在腫瘤中的表達(dá)不具有腫瘤分期依賴性。這些標(biāo)記物在腫瘤早期和腫瘤晚期的過表達(dá)情況類似。然而，KLK10在腫瘤1期和2期的過表達(dá)更一致，而PCSK5和SERPINB5在腫瘤4期的過表達(dá)更一致。因此KLK10、PCSK5和SERPINB5能用于確定胃腫瘤的時(shí)期。
在類似的分析中，將配對(duì)T:N變化倍數(shù)的log2數(shù)值對(duì)腫瘤Lauren分類(或者為擴(kuò)散型或者為腸型)作圖。圖11a-11ab顯示不管腫瘤類型是腸型(I)或是擴(kuò)散型(D)，29種GTM中的每一個(gè)能夠區(qū)別腫瘤組織和非腫瘤組織。
實(shí)施例4多重標(biāo)記物的使用如上面所描述，某些標(biāo)記物表現(xiàn)出具有在100％的樣品中區(qū)別腫瘤組織和非腫瘤組織的能力?？梢詫⑼瑸樯鲜龅钠渌鼧?biāo)記物組合使用，以便實(shí)現(xiàn)非常高程度地區(qū)分腫瘤組織和非腫瘤組織。圖12描述了三種標(biāo)記物SERPINH1、CST1，2，4和INHBA表達(dá)的三維圖，其表示為在一系列胃腫瘤樣品和非惡性腫瘤胃樣品中T:N變化倍數(shù)的log2數(shù)值。兩組樣品發(fā)生完全分離。
通過總結(jié)于圖13的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析進(jìn)一步說(shuō)明了使用標(biāo)記物的組合成功區(qū)別腫瘤樣品和非腫瘤樣品的可靠性。此分析比較了使用qPCR產(chǎn)生的來(lái)自配對(duì)的腫瘤和非惡性腫瘤樣品基因表達(dá)數(shù)據(jù)的正態(tài)分布，分析顯示增加用來(lái)區(qū)別腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品的標(biāo)記物數(shù)量對(duì)檢測(cè)敏感性(將特異性固定在95％)的影響。盡管此分析中29種標(biāo)記物(如圖8所示)在單獨(dú)應(yīng)用時(shí)很少具有大于90％、95％或99％的敏感性，但是兩種或三種標(biāo)記物的組合能夠達(dá)到使用大量組合所能達(dá)到的高敏感性。例如，三種標(biāo)記物的50種組合能以≥99％的敏感性和≥95％的特異性區(qū)別腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品。
實(shí)施例5胃腫瘤標(biāo)記物蛋白質(zhì)的檢測(cè)在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，GTM蛋白質(zhì)可以作為診斷的基礎(chǔ)來(lái)檢測(cè)。在某些情況下，特殊樣品(如不含細(xì)胞的樣品)中的mRNA濃度很難使用微陣列或qPCR方法來(lái)檢測(cè)基因表達(dá)的提高。因此，在某些實(shí)施方案中，使用抗完整蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段(肽)或蛋白質(zhì)核心的抗體實(shí)現(xiàn)GTM蛋白質(zhì)的檢測(cè)。檢測(cè)和定量蛋白質(zhì)和肽表達(dá)的方法在本技術(shù)領(lǐng)域是已知的，并且包括依靠抗蛋白質(zhì)或肽的特異性抗體的方法。單克隆抗體和多克隆抗血清的制備可以使用本技術(shù)領(lǐng)域眾所周知的方法進(jìn)行，因而不需要在本文中進(jìn)一步描述。
為了證明GTM蛋白質(zhì)能用來(lái)區(qū)分腫瘤組織和非腫瘤組織，得到了商品化的抗SPARC抗體(R&D Systems；目錄號(hào)AF941)、抗THBS2抗體(Santa Cruz Biotechnology Inc；目錄號(hào)sc-7655)、抗CSPG2抗體(Calbiochem；目錄號(hào)428060)和抗IGFBP7抗體(R&D Systems；目錄號(hào)AF1334)。另外的抗半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN肽序列50-66(C)FAISEYNKATKDDYYRR(SEQ ID NO108)的多克隆抗體在家兔中產(chǎn)生。
在腫瘤胃組織和非惡性腫瘤胃組織的免疫組織化學(xué)分析或Western分析中使用這些抗體。這些標(biāo)記物中的每一個(gè)在蛋白質(zhì)水平顯示了強(qiáng)的腫瘤正常差異。這證實(shí)在RNA水平所觀察到的這些基因的高表達(dá)同樣也發(fā)生在蛋白質(zhì)水平。
圖14顯示了使用抗由SPARC、CST1(半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN)、IGFBP7和THBS2所編碼蛋白質(zhì)的抗體對(duì)兩份配對(duì)從腫瘤組織和非惡性腫瘤組織中提取的總蛋白進(jìn)行的Western印跡分析。對(duì)于每一個(gè)標(biāo)記物，在腫瘤樣品中的信號(hào)明顯高于非腫瘤樣品。
抗半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN抗體檢測(cè)到三條主要條帶，其分別對(duì)應(yīng)大約34、45和65kDa的分子量。圖14顯示最低分子量條帶。該蛋白質(zhì)種類大于對(duì)照半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN蛋白質(zhì)，提示腫瘤產(chǎn)生的蛋白質(zhì)已經(jīng)經(jīng)過翻譯后修飾或多聚化。圖14說(shuō)明無(wú)論引起CST蛋白質(zhì)分子量差異的機(jī)制如何，CST在非腫瘤組織中低表達(dá)，但是在腫瘤來(lái)源蛋白質(zhì)印跡中容易觀察到CST表達(dá)。
圖14還顯示SPARC蛋白質(zhì)在腫瘤組織中以高于非腫瘤組織的程度相當(dāng)大地表達(dá)。SPARC蛋白質(zhì)的凝膠遷移率慢于血清中檢測(cè)到的該蛋白質(zhì)形式(圖15)，這還提示惡性胃腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)出現(xiàn)不同的翻譯后修飾。不管引起任何此種修飾的機(jī)制如何，關(guān)于SPARC在腫瘤組織相對(duì)非惡性腫瘤組織過表達(dá)的這一發(fā)現(xiàn)提示SPARC是一種有用的蛋白質(zhì)標(biāo)記物。同樣地，IGFBP7和THBS2在腫瘤組織中相對(duì)非惡性腫瘤組織過表達(dá)。
使用抗由CSPG2(多功能蛋白聚糖)和CST1(半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN)所編碼蛋白質(zhì)的抗體對(duì)腫瘤組織和非惡性腫瘤組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析。使用抗多功能蛋白聚糖抗體對(duì)組織的免疫組織化學(xué)分析鑒定出在腫瘤組織的細(xì)胞外基質(zhì)有強(qiáng)染色，但在非惡性腫瘤組織中沒有。使用抗半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN抗體，能夠在腫瘤細(xì)胞外周區(qū)域觀察到強(qiáng)染色。在非惡性腫瘤細(xì)胞中，使用該抗體的染色較弱，并只在組織的粘模表面和胃小凹內(nèi)層(lining)觀察到。這說(shuō)明在非惡性腫瘤細(xì)胞中，半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN蛋白質(zhì)被指引出細(xì)胞至粘模表面而不進(jìn)入細(xì)胞外間隙。因此，不但半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN蛋白質(zhì)在腫瘤組織中的產(chǎn)生量高于非惡性腫瘤組織，而且與非惡性腫瘤組織產(chǎn)生的蛋白質(zhì)不同，腫瘤組織產(chǎn)生的半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與組織的脈管系統(tǒng)直接接觸。為了擴(kuò)大這些觀察，使用單克隆抗體(R&D Systems；目錄號(hào)MAB1285)從胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS上清液中免疫沉淀半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN(圖16)。在上清液中檢測(cè)到大量的半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN，這證實(shí)該蛋白質(zhì)由胃上皮細(xì)胞產(chǎn)生并分泌。
實(shí)施例6血清中腫瘤標(biāo)記物的分析對(duì)于能用于快速篩選的標(biāo)記物，需要標(biāo)記物在血清中達(dá)到足以檢測(cè)的水平。在圖8中描述的某些蛋白質(zhì)能夠從胃癌分泌入血達(dá)到可檢測(cè)的水平。TIMP1是一個(gè)已知的從胃腫瘤分泌入血達(dá)到可檢測(cè)水平的標(biāo)記物。然而，如果蛋白質(zhì)是從粘模表面以外的任何細(xì)胞表面分泌或脫落，那么它將與間質(zhì)液接觸。該蛋白質(zhì)能從間質(zhì)液通過毛細(xì)管直接進(jìn)入血流或經(jīng)過淋巴系統(tǒng)進(jìn)入血流。因此，任何脫落的GTM將存在于血液中。以前已經(jīng)描述過骨橋蛋白、甲狀腺球蛋白以及MMP和激肽釋放酶的家族成員在上皮癌患者血清中濃度升高，而在胃癌患者血清中不升高。然而，以前已經(jīng)觀察到TIMP1在胃癌患者血清中有所升高。這些發(fā)現(xiàn)提示本研究中標(biāo)記物的選擇標(biāo)準(zhǔn)(即分泌的蛋白質(zhì)在腫瘤組織中過表達(dá)但不在非惡性腫瘤組織中過表達(dá))能有效用于檢測(cè)血清中標(biāo)記物，并且因此基本上具有臨床用途且不必進(jìn)行組織或器官活檢。
根據(jù)圖15，很明顯血清中SPARC具有不同的分子量(此處以Western印跡圖示)，腫瘤SPARC的分子量低于血細(xì)胞產(chǎn)生的SPARC。因此，即使SPARC由腫瘤和非腫瘤的血細(xì)胞產(chǎn)生，腫瘤SPARC的存在也能夠使用分子大小進(jìn)行確定(如通過Western分析確定)或使用對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的糖基化蛋白質(zhì)特異的抗體來(lái)確定。
在其它研究中，我們檢測(cè)了胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS上清液中的半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN。圖16描述了單獨(dú)培養(yǎng)基或培養(yǎng)的AGS細(xì)胞上清液中的Western分析。圖16中右側(cè)泳道顯示出對(duì)應(yīng)半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN蛋白質(zhì)的致密條帶。
因此，我們從圖10推斷本發(fā)明GTM適于診斷疾病進(jìn)展早期、中期或晚期的胃癌。
盡管某些標(biāo)記物蛋白質(zhì)能被糖基化，但糖基化模式的變化在某些情況下能夠?qū)е聦?duì)缺少常見糖基化模式的GTM形式的錯(cuò)誤檢測(cè)。因此，在本發(fā)明某些實(shí)施方案中，GTM免疫原包括去糖基化的GTM或去糖基化的GTM片段。可使用本技術(shù)領(lǐng)域中已知的一種或多種糖苷酶完成去糖基化。備選地，GTM eDNA能夠在糖基化缺陷細(xì)胞系如包括大腸肝菌(E.coli)的原核細(xì)胞中表達(dá)，從而產(chǎn)生非糖基化的蛋白質(zhì)或肽。還應(yīng)該意識(shí)到糖基化的水平和質(zhì)量對(duì)糖側(cè)鏈必需前體的存在敏感。因此，在缺乏必需糖質(zhì)的情況下，“正常”糖基化不會(huì)發(fā)生，但是可以發(fā)現(xiàn)更短的或缺失側(cè)鏈的糖。此種“糖基化變體”可以用作免疫原，從便產(chǎn)生對(duì)不同類型標(biāo)記物基因特異的抗體。
另外，某些GTM可以形成同源二聚體或異二聚體或其它類型多聚體形式。例如，抑制蛋白βA是47kDa的蛋白質(zhì)，其能形成分子量97kDa的同源二聚體(激活蛋白A)，并與45kDa的蛋白質(zhì)抑制蛋白βB形成92kDa的異源二聚體(也稱作激活蛋白AB)。因此，應(yīng)該意識(shí)到Western分析或者提供分子量的其它類型分析不必僅限于檢測(cè)GTM的單體形式。相反，人們能夠容易地意識(shí)到可以檢測(cè)任何形式的GTM而不管其分子量如何。因此，對(duì)GTM多聚體形式的檢測(cè)可以容易地用于診斷胃癌的存在。此外，對(duì)于那些對(duì)胃腫瘤分期(1-4)或胃腫瘤類型(擴(kuò)散型或腸型)有選擇性的GTM，對(duì)其多聚體形式的檢測(cè)能提供用于評(píng)價(jià)胃癌分期或類型的指標(biāo)。
一旦產(chǎn)生抗GTM的抗體或抗血清，此種抗體制品能用于多種方法。首先，使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)或放射免疫測(cè)定(RIA)方法定量GTM的蛋白質(zhì)或肽。使用免疫組織化學(xué)可以在組織樣品中進(jìn)行免疫檢測(cè)。這些方法在本技術(shù)領(lǐng)域中全部已知，因此不必在本文進(jìn)一步描述。
實(shí)施例7包含GTM寡核苷酸的載體本發(fā)明其它實(shí)施方案包括對(duì)于標(biāo)記物基因或其部分(“標(biāo)記物肽”)、或標(biāo)記物基因產(chǎn)物片段的體外表達(dá)有用的載體。例如，可制備具有編碼GTM的寡核苷酸的載體。許多此類載體基于本技術(shù)領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)載體。本發(fā)明還包括能用于轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞系以制備產(chǎn)GTM細(xì)胞系的載體，其中所述細(xì)胞能用來(lái)產(chǎn)生所需量的GTM從而開發(fā)用于GTM檢測(cè)或GTM標(biāo)準(zhǔn)化改良測(cè)定法的特異性抗體或其它試劑。
應(yīng)當(dāng)理解為了制備這樣的載體，把包含完整可讀框或編碼待表達(dá)蛋白質(zhì)部分的此可讀框部分的寡核苷酸插入含有啟動(dòng)子區(qū)、一個(gè)或多個(gè)增強(qiáng)子區(qū)域的載體中，其中啟動(dòng)子區(qū)和增強(qiáng)子區(qū)可操作性地與具有起始密碼子、可讀框和終止密碼子的寡核苷酸連接。產(chǎn)生表達(dá)載體的方法在本技術(shù)領(lǐng)域是已知的從而不必在本文重復(fù)。
還應(yīng)該意識(shí)到可以將一個(gè)或多個(gè)選擇標(biāo)記插入表達(dá)載體，以便允許選擇出的含有目的表達(dá)載體的細(xì)胞系擴(kuò)大培養(yǎng)。而且，還可以在框架中插入本技術(shù)領(lǐng)域已知的前導(dǎo)區(qū)，從而指引蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段的分泌、內(nèi)部貯存或膜插入。
實(shí)施例8用包含GTM的載體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在仍然進(jìn)一步的實(shí)施方案中，提供的細(xì)胞能表達(dá)GTM、GTM片段或肽標(biāo)記物。原核細(xì)胞和真核細(xì)胞都能如此使用。例如，大腸肝菌(一種原核細(xì)胞)能用來(lái)產(chǎn)生大量的缺乏成熟糖基化的GTM(如果特定GTM在正常情況下是糖基化的)。COS細(xì)胞、293細(xì)胞和多種其它真核細(xì)胞能用來(lái)產(chǎn)生糖基化的或者具有正確折疊(并因此具有天然形式GTM蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu))的GTM。轉(zhuǎn)染此種細(xì)胞的方法在本技術(shù)領(lǐng)域中是已知的從而不必在本文中進(jìn)一步描述。
實(shí)施例9試劑盒以本發(fā)明發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)，可生產(chǎn)幾種類型的檢測(cè)試劑盒。首先，試劑盒能制備成具有預(yù)先裝載檢測(cè)分子(或“捕獲試劑”)的檢測(cè)裝置。在檢測(cè)GTMmRNA的實(shí)施方案中，此種裝置包括基質(zhì)(如玻璃、硅、石英、金屬等)，在其上面是作為可與待檢測(cè)的RNA雜交的捕獲試劑的寡核苷酸。在一些實(shí)施方案中，通過mRNA(標(biāo)記有cy3、cy5、放射性標(biāo)記或其它標(biāo)記)與基質(zhì)上的寡核苷酸雜交完成對(duì)mRNA的直接檢測(cè)。在其它實(shí)施方案中，通過先制備目的mRNA的互補(bǔ)DNA(cDNA)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)mRNA的檢測(cè)。然后標(biāo)記的cDNA與基質(zhì)上的寡核苷酸雜交并檢測(cè)。
無(wú)論采用的是何種檢測(cè)方法，要對(duì)測(cè)試的GTM表達(dá)與標(biāo)準(zhǔn)的表達(dá)測(cè)定比較。例如，RNA表達(dá)要對(duì)總的細(xì)胞DNA，組成型表達(dá)RNA(例如，核糖體RNA)的表達(dá)或者其它相對(duì)恒定的標(biāo)記物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。
抗體還可在試劑盒中用作捕獲試劑。在一些實(shí)施方案中，基質(zhì)(如多孔板)可以具有連接于其上的特異GTM捕獲試劑。在一些實(shí)施方案中，試劑盒內(nèi)附有封閉試劑。封閉試劑用于減少非特異性結(jié)合。例如，使用任何方便來(lái)源但不含有GTM寡核苷酸的過量DNA如鮭精DNA能減少非特異的寡核苷酸結(jié)合。使用過量封閉蛋白質(zhì)如血清白蛋白能減少非特異性抗體結(jié)合。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到檢測(cè)寡核苷酸和蛋白質(zhì)的許多方法在本技術(shù)領(lǐng)域中已知，并且在本發(fā)明范圍內(nèi)可以使用和考慮能夠特異性檢測(cè)GTM相關(guān)分子的任何策略。
在依靠抗體檢測(cè)的實(shí)施方案中，GTM蛋白質(zhì)或肽可以基于每個(gè)細(xì)胞來(lái)表示，或者基于總的細(xì)胞、組織或液體蛋白質(zhì)、液體體積、組織質(zhì)量(重量)來(lái)表示。此外，血清中GTM可以基于相對(duì)高豐度血清蛋白質(zhì)如白蛋白來(lái)表示。
檢測(cè)試劑盒除了包括基質(zhì)外還包括捕獲試劑(如探針)，洗滌溶液(如SSC、其它鹽類、緩沖液、去污劑等)以及檢測(cè)部分(如cy3、cy5、放射性標(biāo)記等)。試劑盒還包括使用說(shuō)明書和包裝物。
盡管本發(fā)明關(guān)于其中特定的實(shí)施方案進(jìn)行了描述，但應(yīng)該認(rèn)識(shí)到可以在不脫離本發(fā)明的范圍在內(nèi)使用涉及使用本公開標(biāo)記物的其它實(shí)施方案。
工業(yè)適用性用于檢測(cè)GTM家族成員的方法包括使用微陣列和/或?qū)崟r(shí)PCR方法檢測(cè)核苷酸以及檢測(cè)蛋白質(zhì)和肽。本發(fā)明的組合物和方法可用于診斷裝置和試劑盒的制造、疾病的診斷、治療效果的評(píng)價(jià)，并且也可用于生產(chǎn)適于在生物樣品中測(cè)定GTM家族成員表達(dá)的試劑。
序列表<110>環(huán)太平洋生物技術(shù)有限公司查爾斯·戴維斯·小法默<120>用于胃癌檢測(cè)的標(biāo)記物<130>JX225559<140>PCT/US2004/0122959<141>2004-07-16<150>US60/487,906<151>2003-07-17<160>108<170>PatentIn版本3.3<210>1<211>26<212>DNA<213>人類<400>1aaatacaaaa ggacacattc aaagga 26<210>2<211>20<212>DNA<213>人類<400>2gccagtggaa ggatgttccc 20<210>3<211>19<212>DNA<213>人類<400>3agtcccagcc caacttgga 19<210>4<211>17<212>DNA<213>人類<400>4gtggcaatgc cgctgaa 17<210>5<211>18
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權(quán)利要求
1.用于檢測(cè)胃癌的方法，其包括(a)準(zhǔn)備生物學(xué)樣品；和(b)檢測(cè)上述樣品中GTM家族成員的過表達(dá)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述GTM家族成員選自羧肽酶N，多肽2,83kDa鏈(CPN2)、基質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP12)、抑制素(“INHBA”)、胰島素樣生長(zhǎng)因子7(“IGFBP7”)、γ-谷氨酰水解酶(“GGH”)、富含亮氨酸脯氨酸的蛋白多糖(“LEPRE1”)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑S(“CST4”)、分泌型frizzled相關(guān)蛋白4(“SFRP4”)、asporin(“ASPN”)、具有EF手型結(jié)構(gòu)域1的細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子(“CGREF1”)、激肽釋放酶10(KLK10)、金屬蛋白酶組織抑制劑1(“TIMP1”)、富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白質(zhì)(“SPARC”)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(“TGFBI”)、包含EGF的纖蛋白樣細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)2(“EFEMP2”)，光亮蛋白聚糖(“LUM”)，stannin(“SNN”)、分泌型磷蛋白1(“SPP1”)、硫酸軟骨素蛋白聚糖2(“CSPG2”)、N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶(“ASAH1”)、絲氨酸蛋白酶11(“PRSS11”)、分泌型frizzled相關(guān)蛋白2(“SFRP2”)、XIIB組磷脂酶A2(“PLA2G12B”)、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)spondin 2(“SPON2”)、嗅介蛋白1(“OLFM1”)、包含重復(fù)的血小板反應(yīng)蛋白1(“TSRC1”)、血小板反應(yīng)蛋白2(“THBS2”)、adlican、半胱氨酸蛋白酶抑制劑SA(“CST2”)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN(“CST1”)、賴氨酰氧化酶樣酶2(“LOXL2”)、甲狀腺球蛋白(“TG”)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(“TGFB1”)、絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進(jìn)化枝H(“SERPINH1”)、絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進(jìn)化枝B(“SERPINB5”)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(“MMP2”)、前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin類型5(“PCSK5”)和透明質(zhì)酸糖蛋白連接蛋白4(“HAPLN4”)。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述檢測(cè)步驟通過檢測(cè)GTM mRNA的過表達(dá)實(shí)現(xiàn)。
4.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述檢測(cè)步驟通過檢測(cè)GTM cDNA的過表達(dá)實(shí)現(xiàn)。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述檢測(cè)步驟使用與所述GMT cDNA的至少一部分互補(bǔ)的寡核苷酸實(shí)現(xiàn)。
6.權(quán)利要求4的方法，其中所述檢測(cè)步驟使用利用正向引物和反向引物的qPCR方法實(shí)現(xiàn)。
7.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述檢測(cè)步驟通過檢測(cè)GTM蛋白質(zhì)的過表達(dá)實(shí)現(xiàn)。
8.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述檢測(cè)步驟通過檢測(cè)GTM肽的過表達(dá)實(shí)現(xiàn)。
9.權(quán)利要求7或8的方法，其中所述檢測(cè)步驟使用抗所述GTM的抗體實(shí)現(xiàn)。
10.權(quán)利要求7-9中任意一項(xiàng)的方法，其中所述檢測(cè)步驟使用夾心型免疫測(cè)定法實(shí)現(xiàn)。
11.權(quán)利要求7-10中任意一項(xiàng)的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
12.權(quán)利要求7-10中任意一項(xiàng)的方法，其中所述抗體是多克隆抗血清。
13.檢測(cè)GTM的裝置，其包括在其上具有GTM捕獲試劑的基質(zhì)；和與所述基質(zhì)關(guān)聯(lián)的檢測(cè)器，所述檢測(cè)器能夠檢測(cè)與所述捕獲試劑有關(guān)的GTM。
14.權(quán)利要求13的裝置，其中所述GTM捕獲試劑是寡核苷酸。
15.權(quán)利要求13的裝置，其中所述GTM捕獲試劑是對(duì)GTM寡核苷酸、GTM蛋白質(zhì)或者GTM肽特異性的抗體。
16.檢測(cè)癌癥的試劑盒，其包括在其上具有GTM捕獲試劑的基質(zhì)；用于顯現(xiàn)所述GTM捕獲試劑和GTM的復(fù)合物的裝置；試劑；和使用說(shuō)明書。
17.權(quán)利要求16的試劑盒，其中所述GTM捕獲試劑是GTM特異性寡核苷酸。
18.權(quán)利要求16的試劑盒，其中所述GTM捕獲試劑是對(duì)GTM寡核苷酸、GTM蛋白質(zhì)或者GTM肽具有選擇性的GTM特異性抗體。
19.檢測(cè)胃癌的方法，其包括步驟從懷疑患有胃癌的患者制備測(cè)試樣品；測(cè)定所述測(cè)試樣品中GTM蛋白質(zhì)的存在；和將所述測(cè)試樣品中存在的GTM數(shù)量與來(lái)自未患有胃癌的受試者的對(duì)照樣品中的數(shù)值相比較。
20.篩選胃癌的方法，其包括步驟從測(cè)試受試者制備測(cè)試樣品；測(cè)定所述測(cè)試樣品中GTM的存在；和將所述測(cè)試樣品中存在的GTM數(shù)量與來(lái)自未患有胃癌的受試者的對(duì)照樣品中的數(shù)值相比較。
21.權(quán)利要求19的方法，其中所述GTM是GTM蛋白質(zhì)或肽。
22.權(quán)利要求19的方法，其中所述GTM是對(duì)GTM特異性的寡核苷酸。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述寡核苷酸是DNA。
24.權(quán)利要求22的方法，其中所述寡核苷酸是RNA。
25.權(quán)利要求18-24中任意一項(xiàng)的方法，其中所述測(cè)定步驟使用ELISA測(cè)定法。
26.權(quán)利要求19-21中任意一項(xiàng)的方法，其中所述測(cè)試樣品從血漿中獲得。
27.權(quán)利要求19-21中任意一項(xiàng)的方法，其中所述測(cè)試樣品從組織、尿液、胃液、血清和糞便中獲得。
全文摘要
腫瘤的早期檢測(cè)是患有腫瘤(包括胃腫瘤)的患者存活的主要決定因素。GTM基因家族成員在胃腫瘤組織和其它腫瘤組織中過表達(dá)，因此其可以用作胃癌和其它類型癌癥的標(biāo)記物。GTM蛋白質(zhì)可以從癌細(xì)胞中釋放出來(lái)，并在血清和/或其它體液中達(dá)到足夠高的濃度從而得以檢測(cè)它們。因此，用于GTM檢測(cè)和定量的方法和檢測(cè)試劑盒能夠提供胃癌診斷的有價(jià)值的工具。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK1867679SQ200480026675
公開日2006年11月22日 申請(qǐng)日期2004年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月17日
發(fā)明者P·J·吉爾福德, A·J·霍利約克 申請(qǐng)人:環(huán)太平洋生物技術(shù)有限公司