專利名稱：用于鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的分子標(biāo)記及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種特征序列擴(kuò)增(Sequence Characterized Amplified Region，SCAR)標(biāo)記技術(shù)及其在種質(zhì)純度鑒定、品系鑒別和分子標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
壇紫菜(Porphyra haitanensis)屬于紅藻門(Rhodophyta)紅毛菜科(Bangiacea)紫菜屬(Porphyra)，是人工紫菜栽培的主要品種之一，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，其經(jīng)濟(jì)效益較好。但是近幾年壇紫菜栽培業(yè)普遍存在品質(zhì)下降的問題，因此，利用分子生物學(xué)手段結(jié)合傳統(tǒng)的育種方法，培育出優(yōu)良?jí)喜诵缕废稻妥兊梅浅Ｆ惹?。目前，壇紫菜?yōu)良品系的培育主要采用大田選育、利用物理誘變或化學(xué)誘變以及體細(xì)胞工程育苗等技術(shù)篩選優(yōu)良種質(zhì)，再經(jīng)過海區(qū)小規(guī)模栽培，分析主要經(jīng)濟(jì)性狀及其遺傳穩(wěn)定性等手段，過程費(fèi)時(shí)費(fèi)力，已很難滿足壇紫菜養(yǎng)殖生產(chǎn)的需要。新近我們培育出的優(yōu)良品系表現(xiàn)出比較突出的優(yōu)良性狀藻體生長(zhǎng)快，成熟晚，葉狀體長(zhǎng)度、厚度、主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(蛋白質(zhì)、葉綠素、氨基酸等)含量均優(yōu)于當(dāng)家品種，因而深受養(yǎng)殖戶的歡迎。因此，如果能夠利用特異的分子標(biāo)記技術(shù)找到與這一系列優(yōu)良性狀相關(guān)的DNA片段或者基因，進(jìn)而了解與其相關(guān)的遺傳變異信息，就可以利用這些分子標(biāo)記，最終從大量養(yǎng)殖對(duì)象或野生壇紫菜種質(zhì)資源庫(kù)中篩選到含有這些標(biāo)記的壇紫菜葉狀體，再結(jié)合其它經(jīng)濟(jì)性狀指標(biāo)，就可培育出新的栽培品系，并在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用，從而加快壇紫菜優(yōu)良品系選育的進(jìn)程，滿足生產(chǎn)的需要。
1995年由荷蘭Keygene公司的科學(xué)家Zabeau和Vos.Peter創(chuàng)建起來的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP)標(biāo)記技術(shù)，相對(duì)于其它標(biāo)記技術(shù)，該標(biāo)記技術(shù)多態(tài)性強(qiáng)，譜帶豐富、清晰可辨，而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好。SCAR標(biāo)記一般由AFLP等分子標(biāo)記轉(zhuǎn)換而來，其基本原理是根據(jù)已獲得的標(biāo)記片段的序列信息，設(shè)計(jì)一對(duì)特異的引物，然后通過PCR的方法來提示多態(tài)性。SCAR標(biāo)記是一種十分穩(wěn)定的分子標(biāo)記，在應(yīng)用上具有迅速、簡(jiǎn)便、低成本的特點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的SCAR標(biāo)記，進(jìn)而為分子標(biāo)記輔助育種提供基礎(chǔ)資料。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供由所述SCAR標(biāo)記獲得的PCR引物序列。
本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種使用方便、靈敏度高的包含由SCAR標(biāo)記獲得的PCR引物序列的用于鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的檢測(cè)試劑盒。
本發(fā)明所述的鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的SCAR標(biāo)記，具有如下核苷酸序列5’-AGTAAAATGGGGAACAGCGACTTCTACAGATGATTGCGAAGGTGTCGTAACAAAACAGCCTGATATGCGTCCAACTTTAGAGAATATTCAATATATTCTTCCCCAGTTCACTGGTCATGTTCAACAAACACCACCAATTTATTCTGCGATAC-3’。
獲取SCAR標(biāo)記的方法如下利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，首先提取不同紫菜樣品的葉狀體總DNA，再通過總DNA的酶切、人工接頭連接、預(yù)擴(kuò)增以及選擇性擴(kuò)增，最后經(jīng)聚丙烯凝膠電泳分析獲得壇紫菜優(yōu)良品系特有的AFLP標(biāo)記的特異性條帶；然后對(duì)特異性標(biāo)記片段進(jìn)行回收，回收產(chǎn)物PCR再擴(kuò)增并克隆到T載體上，再通過測(cè)序分析、利用引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物，最終將AFLP標(biāo)記轉(zhuǎn)化成SCAR標(biāo)記，該標(biāo)記表現(xiàn)共顯性，由此獲得與壇紫菜優(yōu)良品系的優(yōu)良性狀相連鎖的SCAR標(biāo)記。
本發(fā)明所述的由SCAR標(biāo)記獲得的PCR引物具有如下序列Marker15’-AGT AAA ATG GGG AAC AGC-3’Marker25’-ATC GCA GAA TAA ATT GGT G-3’本發(fā)明所述的用于鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的檢測(cè)試劑盒，它包含以下組分組分I10×反應(yīng)緩沖溶液250μL組分II Taq DNA聚合酶 50μL組分III 無菌雙蒸水(ddH2O) 3.0mL組分I含有50mmol/L KCl，10mmol/L Tris-Cl(pH9.0)，0.1％ Triton X-100，1.5mmol/LMg2+，50pmol/L正鏈引物Marker1，50pmol/L負(fù)鏈引物Marker2和200μmol/L dNTPs。
組分IITaq DNA聚合酶的濃度為2.5U/μL。
正鏈引物Marker1的序列為5’-AGT AAA ATG GGG AAC AGC-3’。
負(fù)鏈引物Marker2的序列為5’-ATC GCA GAA TAA ATT GGT G-3’本發(fā)明利用AFLP標(biāo)記技術(shù)，對(duì)壇紫菜優(yōu)良品系及其他一些品系進(jìn)行分析，找到優(yōu)良品系特異的AFLP標(biāo)記，并成功地將其轉(zhuǎn)換成SCAR標(biāo)記，獲得的SCAR標(biāo)記可廣泛用于品系純度鑒定、品系鑒別和分子標(biāo)記輔助育種。通過所獲得的特異引物PCR擴(kuò)增可對(duì)個(gè)體進(jìn)行鑒定，從而從大量養(yǎng)殖對(duì)象或野生壇紫菜種質(zhì)資源庫(kù)中篩選出優(yōu)良的品系，縮短了育苗周期，提高了選育的準(zhǔn)確性。并可為種質(zhì)鑒定奠定基礎(chǔ)，也為壇紫菜遺傳多樣性、基因定位和快速構(gòu)建遺傳圖譜以及分子標(biāo)記輔助育種等研究提供了參考數(shù)據(jù)。用于鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的檢測(cè)試劑盒使用方便，重復(fù)性好，可靠性高，檢測(cè)費(fèi)用低，省時(shí)省力。


圖1為利用檢測(cè)試劑盒對(duì)不同品系及野生壇紫菜進(jìn)行鑒定的凝膠電泳圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1.鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的AFLP標(biāo)記的獲得一.材料實(shí)驗(yàn)用的16個(gè)紫菜樣品(陰干-20℃保存)名稱及來源見表1。
表1. 16個(gè)紫菜樣品名稱及來源

二.方法利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)不同品系及野生壇紫菜進(jìn)行篩選。AFLP分析參照Invortron公司的AFLP Analysis System I和AFLP Starter Primer Kit說明書進(jìn)行，并稍有改動(dòng)。
1.壇紫菜葉狀體總DNA提取(1)將復(fù)蘇后的壇紫菜葉狀體剪切成小塊，加入適量的海螺酶(1g葉狀體加10mL 3％酶液并加入適量玻璃珠)，于黑暗條件下振蕩(100r/min，26℃)酶解，0.5h后，每間隔15min鏡檢一次，至壇紫菜小塊大部分酶解成單細(xì)胞為止；(2)酶解結(jié)束后，加1倍體積的海水(比重1.030)與酶解液混合以終止酶解反應(yīng)，用200目的篩絹過濾。濾液3500g離心5min后棄上清液；(3)加入海水(比重1.030)將細(xì)胞沉淀?yè)u勻，再次離心；
(4)重復(fù)(3)三次；(5)用雙蒸水快速?zèng)_洗沉淀，4000g離心收集離心管底的細(xì)胞用于DNA提?。?6)沉淀的細(xì)胞中加入2mL葉狀體DNA提取液(0.6％ Sarcosyl，10mmol/L EDTA，O.2％ PVP，5％ β-巰基乙醇)，用槍頭混勻，避免產(chǎn)生氣泡。加入RNase A，使RNase A終濃度達(dá)到50μg/mL，混勻。37℃水浴1～1.5h，中間適當(dāng)攪拌混勻幾次，避免產(chǎn)生氣泡；(7)加入蛋白酶K，使蛋白酶K終濃度達(dá)到100μg/mL，混勻，37℃水浴2h，中間適當(dāng)攪拌混勻幾次，避免產(chǎn)生氣泡，取出離心管，加10％體積的2mol/L Tris-Cl(pH8.0)，混勻，冷卻到4℃；(8)加入Tris飽和的苯酚抽提10min，4℃12000g離心10min，取上清；(9)上清加入酚-氯仿(1∶1)抽提10min，4℃12000g離心10min，取上清；(10)重復(fù)(9)一次；(11)上清加入氯仿-異戊醇抽提10min，4℃12000g離心10min，取上清；(12)上清加1/10體積的3mol/L NaAc(pH5.4)，再加入2倍體積的-20℃無水乙醇沉淀1h，4℃ 12000g離心10min，去上清，用70％乙醇洗滌沉淀2遍，4℃12000g離心10min，沉淀放置在37℃干燥，溶解于適量TE緩沖液中，-20℃保存。
2.總DNA的酶切PCR管(0.2mL)中加入2.5μL5×酶切反應(yīng)緩沖液，125ng(≤18μL)樣品DNA，1μL EcoRI，1μL Mse I，ddH2O補(bǔ)齊到12.5μL。12000g離心10s，充分混勻，置于37℃溫育2h，再將酶切反應(yīng)混合物置于70℃水浴15min，滅活內(nèi)切酶。
3.人工接頭連接酶切后的DNA中，加入12μL接頭溶液，0.5μL T4 DNA連接酶，12000g離心10s，充分混勻，20℃連接2h(或過夜)，置于70℃水浴15min，滅活酶。
4.預(yù)擴(kuò)增25.5μL反應(yīng)體系中加入2.5μL連接反應(yīng)產(chǎn)物，20μL預(yù)擴(kuò)增引物混合溶液，2.5μL 10×PCR反應(yīng)buffer(含Mg2+)，0.5μLTaq酶(5U/μL)。預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)條件94℃，30s；56℃，1min；72℃，1min，20個(gè)循環(huán)。預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物用TE緩沖液稀釋50倍，作為選擇性擴(kuò)增的模板。
5.選擇性擴(kuò)增20μL反應(yīng)體系中加入0.18μL EcoR I引物(27.8ng/μL)，4.5μL Mse I引物(6.7ng/μL)，2μL 10×PCR反應(yīng)buffer(含Mg2+)，0.1μL Taq酶(5U/μL)，5μL模板DNA，8.14μL ddH2O。EcoR I引物和Mse I引物3’端分別為3個(gè)選擇性堿基。擴(kuò)增條件為94℃，30s；65℃，30s；72℃，1min，1個(gè)循環(huán)；94℃，30s；65℃，30s；72℃，1min(每個(gè)循環(huán)復(fù)性溫度降0.7℃)，進(jìn)行12個(gè)循環(huán)；94℃，30s；56℃，30s；72℃，1min；23個(gè)循環(huán)。選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物置于94℃水浴2min，迅速取出置于冰浴中使DNA解鏈變性。取10μL樣品進(jìn)行變性聚丙烯酰胺電泳檢測(cè)，銀染顯色，凝膠成像分析。
三.結(jié)果根據(jù)AFLP初步分析的結(jié)果，從25對(duì)引物中篩選出11對(duì)有效引物，用這11對(duì)引物對(duì)優(yōu)良品系和部分紫菜的總DNA進(jìn)行特異性AFLP標(biāo)記分析，結(jié)果顯示獲得了優(yōu)良品系的特異性條帶ACA-CAC(340)、ACA-CAC(203)、AAC-CAC(177)共3個(gè)，分子量大小分別為340bp、203bp和177bp。
實(shí)施例2.優(yōu)良品系特異的SCAR標(biāo)記的獲得一、材料紫菜樣品同實(shí)施例1，大腸桿菌DH5α，pMD18-T Vector二、方法1.特異AFLP片段的回收根據(jù)獲得的AFLP聚丙烯凝膠電泳圖譜，尋找優(yōu)良品系特異的AFLP標(biāo)記條帶，用鋒利的刀片切下含有該條帶的凝膠。回收的凝膠塊溶于400μL高鹽溶液(20％ ethanol，1mol/L LiCL和10mmol/L Tris-HCL，Ph7.5)中，室溫放置24h，65℃溫育2h，無水乙醇沉淀DNA并溶于20μL TE中。
2.特異AFLP片段的PCR再擴(kuò)增取5μL回收的DNA為模板，用與選擇性擴(kuò)增時(shí)相同的引物按下列程序94℃ 30S；56℃ 30S；72℃ 60S擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)。
3.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的回收PCR擴(kuò)增出的特異片段經(jīng)1.2％瓊脂糖凝膠電泳后，用上海生物工程公司生產(chǎn)的UNIQ-5柱離心式DNA膠回收試劑盒回收，操作依試劑盒說明進(jìn)行。
4.連接反應(yīng)按TaKaRa pMD 18-T Vector說明書進(jìn)行操作；5.感受態(tài)大腸桿菌的制備(1)大腸桿菌DH5α單菌落接種于5mL的LB培養(yǎng)液中，37℃震蕩培養(yǎng)3～4h(OD260為0.2～0.4)，停止培養(yǎng)；(2)冰浴30min，無菌操作倒入5mL管中，12000g離心1min收集沉淀；(3)加入0.1mol/LCaCl2(預(yù)冷)1mL，混勻后轉(zhuǎn)入1.5mL管，再12000g離心1min，去上清；(4)沉淀加入200μL 0.1mol/LCaCl2(預(yù)冷)，混勻，4℃過夜或凍存于-70℃。
6.連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化(1)取感受態(tài)細(xì)胞懸液100μL，加入連接產(chǎn)物(含量小于50ng)，輕輕搖勻，冰浴30min；(2)42℃水浴中熱擊90s(不要搖動(dòng)管)，迅速置于冰浴3～5min；(3)然后向管中加入1mL LB培養(yǎng)液，搖床上50r/min震蕩培養(yǎng)2～3h；(4)取200μL菌液涂布到含80μg/mL的Amp抗生素的篩選板上，待吸收后，倒置，37℃培養(yǎng)過夜。堿裂解法提取質(zhì)粒，用PCR和酶切的方法鑒定，將陽(yáng)性克隆的新鮮菌液加等體積的60％甘油保存，送至上海生物工程公司測(cè)序。
三.結(jié)果獲得了多個(gè)優(yōu)良品系特異的AFLP標(biāo)記條帶，對(duì)其中的標(biāo)記條帶ACA-CAC(203)進(jìn)行了PCR再擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物回收連接到T載體的測(cè)序結(jié)果為AFLP標(biāo)記條帶ACA-CAC(203)的序列為5’-GATTGACTGCGTACCAATTCACAGTAAAATGGGGAACAGCGACTTCTACAGATGATTGCGAAGGTGTCGTAACAAAACAGCCTGATATGCGTCCAACTTTAGAGAATATTCAATATATTCTTCCCCAGTTCACTGGTCATGTTCAACAAACACCACCAATTTATTCTGCGATACGTGTTACTCAGGACTCATCAATCGTCGAC-3’。
取該序列中間的152個(gè)堿基作為優(yōu)良品系特異的SCAR標(biāo)記，其序列為5’-AGTAAAATGGGGAACAGCGACTTCTACAGATGATTGCGAAGGTGTCGTAACAAAACAGCCTGATATGCGTCCAACTTTAGAGAATATTCAATATATTCTTCCCCAGTTCACTGGTCATGTTCAACAAACACCACCAATTTATTCTGCGATAC-3’。
實(shí)施例3.由SCAR標(biāo)記獲得的PCR引物序列一.方法以ACA-CAC(203)的SCAR標(biāo)記序列為引物設(shè)計(jì)模板，通過Primer 5.0引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物。
二.引物設(shè)計(jì)原則1.兩引物中的GC含量應(yīng)盡量相似；2.引物內(nèi)部避免具有明顯的二級(jí)結(jié)構(gòu)；3.兩引物之間避免有互補(bǔ)序列，以免形成“引物二聚體”；4.引物與靶序列片段的配對(duì)須精確、嚴(yán)格，特別是在3’末端；5.特異引物應(yīng)具有一定的退火溫度(不低于50℃)和一定的長(zhǎng)度(不小于18個(gè)bp)。
三.結(jié)果根據(jù)SCAR標(biāo)記序列設(shè)計(jì)了特異引物，其序列為Marker15’-AGT AAA ATG GGG AAC AGC-3’Marker25’-ATC GCA GAA TAA ATT GGT G-3’。
該引物的優(yōu)點(diǎn)擴(kuò)增條帶清晰，且擴(kuò)增穩(wěn)定，重復(fù)性好，擴(kuò)增片段的大小為152bp。
實(shí)施例4.鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的PCR檢測(cè)試劑盒一.材料紫菜樣品為實(shí)施例1中的壇紫菜7個(gè)(LSD、NH、JJS、BBD、DXY、GL1、CCS0401)，條斑紫菜2個(gè)(LYG和RD)；Marker 1/Marker 2特異引物組合。
二.檢測(cè)試劑盒的組分壇紫菜優(yōu)良品系特異SCAR標(biāo)記檢測(cè)試劑盒，它包括以下含量的各組分組分I10×反應(yīng)緩沖溶液 250μL組分II Taq DNA聚合酶 50μL組分III 無菌雙蒸水(ddH2O) 3.0mL其中組分I含有50mmol/L KCl，10mmol/L Tris-Cl(pH9.0)，0.1％ Triton X-100，1.5mmol/L Mg2+，50pmol/L正鏈引物Marker1，50pmol/L負(fù)鏈引物Marker2和200μmol/LdNTPs。組分II的濃度為2.5U/μL。
三.使用方法在25μL PCR反應(yīng)體系中加入組分I 2.5μL，組分II 0.5μL，模板DNA 20ng(參照實(shí)施例1中的DNA提取方法提取)，組分III補(bǔ)至25μL。以下述PCR反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)95℃，3min，預(yù)變性1個(gè)循環(huán)。95℃，1min；55℃，40s；72℃，90s；35個(gè)循環(huán)。72℃，延伸5min。擴(kuò)增產(chǎn)物取5μL進(jìn)行12％ PAGE凝膠電泳檢測(cè)，銀染顯色，凝膠成像分析。
四.規(guī)格該檢測(cè)試劑盒可檢測(cè)100個(gè)樣品。
優(yōu)點(diǎn)該檢測(cè)試劑盒使用方便，擴(kuò)增方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，可靠性高。檢測(cè)費(fèi)用低，省時(shí)省力。
五.結(jié)果如圖1所示，泳道1～7分別為壇紫菜樣品LSD、NH、JJS、BBD、DXY、GL1和優(yōu)良品系CCS0401的擴(kuò)增結(jié)果，8、9泳道為兩種條斑紫菜樣品RD和LYG的擴(kuò)增結(jié)果，M為pUC MixMarker，條帶大小從上到下依次為1116、883、692、501、489、404、331、242、190、147、111和67bp。從圖中可以看到，只有CCS0401能擴(kuò)增出1條大小約為150bp的條帶。
權(quán)利要求
1.用于鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的分子標(biāo)記，其特征在于所述的特征序列擴(kuò)增(SCAR)標(biāo)記具有如下核苷酸序列5’-AGTAAAATGGGGAACAGCGACTTCTACAGATGATTGCGAAGGTGTCGTAACAAAACAGCCTGATATGCGTCCAACTTTAGAGAATATTCAATATATTCTTCCCCAGTTCACTGGTCATGTTCAACAAACACCACCAATTTATTCTGCGATAC-3’獲取SCAR標(biāo)記的方法如下利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，首先提取不同紫菜樣品的葉狀體總DNA，再通過總DNA的酶切、人工接頭連接、預(yù)擴(kuò)增以及選擇性擴(kuò)增，最后經(jīng)聚丙烯凝膠電泳分析獲得壇紫菜優(yōu)良品系特有的AFLP標(biāo)記的特異性條帶；然后對(duì)特異性標(biāo)記片段進(jìn)行回收、回收產(chǎn)物PCR再擴(kuò)增并克隆到T載體上，再通過測(cè)序分析、利用引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物，最終將AFLP標(biāo)記轉(zhuǎn)化成SCAR標(biāo)記，該標(biāo)記表現(xiàn)共顯性，由此獲得與壇紫菜優(yōu)良品系的優(yōu)良性狀相連鎖的SCAR標(biāo)記。
2.由權(quán)利要求1所述的SCAR標(biāo)記獲得的PCR引物，其特征在于所述的PCR引物具有如下序列Marker15’-AGT AAA ATG GGG AAC AGC-3’Marker25’-ATC GCA GAA TAA ATT GGT G-3’。
3.用于鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的檢測(cè)試劑盒，其特征在于檢測(cè)試劑盒包含以下組分組分I 10×反應(yīng)緩沖溶液 250μL組分II Taq DNA聚合酶50μL組分III無菌雙蒸水(ddH2O)3.0mL其中組分I含有50mmol/L KCl，10mmol/L Tris-Cl(pH9.0)，0.1％Triton X-100，1.5mmol/L Mg2+，50pmol/L正鏈引物Marker1，50pmol/L負(fù)鏈引物Marker2和200μmol/L dNTPs；組分II Taq DNA聚合酶的濃度為2.5U/μL；所述正鏈引物Marker1的序列為5’-AGT AAA ATG GGG AAC AGC-3’；所述負(fù)鏈引物Marker2的序列為5’-ATC GCA GAA TAA ATT GGT G-3’。
全文摘要
用于鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的分子標(biāo)記及其應(yīng)用，涉及一種SCAR標(biāo)記技術(shù)及其應(yīng)用。利用AFLP標(biāo)記技術(shù)，對(duì)壇紫菜優(yōu)良品系等進(jìn)行分析，找到優(yōu)良品系特異的AFLP標(biāo)記，并將其轉(zhuǎn)換成SCAR標(biāo)記，用SCAR標(biāo)記設(shè)計(jì)特異引物Marker1和Marker2，并將特異引物做成用于鑒定壇紫菜優(yōu)良品系的檢測(cè)試劑盒，通過特異引物PCR擴(kuò)增對(duì)個(gè)體進(jìn)行鑒定，從養(yǎng)殖對(duì)象或野生壇紫菜種質(zhì)資源庫(kù)中篩選出優(yōu)良品系，縮短育苗周期，提高選育準(zhǔn)確性。廣泛用于品系純度與品系鑒別和分子標(biāo)記輔助育種。為種質(zhì)鑒定奠定基礎(chǔ)，為壇紫菜遺傳多樣性、基因定位和快速構(gòu)建遺傳圖譜及分子標(biāo)記輔助育種等研究提供參考數(shù)據(jù)。檢測(cè)試劑盒使用方便，重復(fù)性好，可靠性高，檢測(cè)費(fèi)用低，省時(shí)省力。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK1661097SQ20041008238
公開日2005年8月31日 申請(qǐng)日期2004年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月31日
發(fā)明者左正宏, 陳奕欣, 李博文, 王重剛, 陳驍, 趙揚(yáng), 陳昌生 申請(qǐng)人:廈門大學(xué), 集美大學(xué)