專利名稱：耐鹽紅螺菌劑的應(yīng)用培養(yǎng)技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及耐鹽紅螺菌的選育，應(yīng)用型培養(yǎng)基配方的篩選以及應(yīng)用培養(yǎng)菌劑的方法。確切地說，它是提供了在淡水、海水養(yǎng)殖中都能應(yīng)用的光合細菌菌劑，且提供了一種能大幅度降低培養(yǎng)基成本的應(yīng)用型配方，和減少設(shè)備、降低能耗、培養(yǎng)操作工藝簡單的低成本應(yīng)用培養(yǎng)技術(shù)。
背景技術(shù)：
光合細菌是國內(nèi)外致力于開發(fā)的微生物資源。在光合細菌類群中，紅螺菌科光合細菌能在有氧、無氧下異養(yǎng)生長，因而在廢水生物處理與水產(chǎn)養(yǎng)殖的應(yīng)用中得以越來越廣泛的關(guān)注。目前，我國水產(chǎn)養(yǎng)殖微生態(tài)菌劑多為紅螺菌科細菌，如膠質(zhì)紅假單胞菌、沼澤紅假單胞菌、莢膜紅假單胞菌等。從菌劑的應(yīng)用情況看，主要存在以下問題(1)菌種耐鹽性能差，現(xiàn)有光合細菌菌劑適應(yīng)鹽濃度多為0.1～2％，由于菌劑生長鹽濃度范圍較小，造成在較高鹽度的海水養(yǎng)殖中應(yīng)用難以發(fā)揮作用；(2)菌劑培養(yǎng)成本高，現(xiàn)有菌劑培養(yǎng)多采用經(jīng)典培養(yǎng)基配方，培養(yǎng)基滅菌與燈光光源光照培養(yǎng)的技術(shù)，致使培養(yǎng)成本提高，菌劑售價偏高，影響了光合細菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的推廣應(yīng)用。為此，篩選能在淡水、海水養(yǎng)殖中應(yīng)用的耐鹽紅螺菌，開發(fā)能大幅度降低應(yīng)用培養(yǎng)紅螺菌劑的成本，和開發(fā)易于操作的培養(yǎng)技術(shù)，對推進光合細菌應(yīng)用與促進水產(chǎn)無公害養(yǎng)殖、提高魚蝦等水產(chǎn)動物養(yǎng)殖的質(zhì)量具有重要的意義。
紅螺菌科光合細菌屬于光能異養(yǎng)、兼性厭氧微生物。從營養(yǎng)成分看醋酸鹽等小分子有機物是適宜的碳源，并適宜在30℃左右、光照強度為1000～3000LX下生長。培養(yǎng)光合細菌除需要碳源、氮源、無機鹽營養(yǎng)物質(zhì)外，還需要生長素。經(jīng)典的光合細菌(紅螺菌科)培養(yǎng)基配方成分有11～13種，培養(yǎng)過程常采用培養(yǎng)基滅菌與燈光光源光照培養(yǎng)的模式(有些菌株還采用光照厭氧培養(yǎng))。
經(jīng)檢索，在微生物分類書籍及發(fā)表在《生物技術(shù)》1995年第3期、《哈爾濱師范大學自然科學學報》1999年第6期等資料中均提到光合細菌(紅螺菌科)經(jīng)典培養(yǎng)基配方為CH3COONa3.0g，CH3CH2COONa 0.3g，(NH4)2SO40.3g，MgSO4·7H2O 0.2g，K2HPO40.3g，KH2PO40.5g，CaCl250mg，酵母膏0.1g，谷氨酸0.2mg，蛋白胨10mg，MnSO42.5mg，NaCl 1.0g FeSO45mg，H2O 1L，pH7.4。由配方中可看出，培養(yǎng)基成分為13種，利用經(jīng)典配方培養(yǎng)光合細菌應(yīng)用菌劑，培養(yǎng)基成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在從根本上解決紅螺菌劑耐鹽性能與應(yīng)用海水養(yǎng)殖效果較差，以及應(yīng)用菌劑培養(yǎng)費用高的問題，提供一種耐鹽性能好、在淡水、海水養(yǎng)殖中均能發(fā)揮良好的功效、應(yīng)用型培養(yǎng)基配方的成本低的耐鹽紅螺菌劑的應(yīng)用培養(yǎng)技術(shù)。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下一株耐鹽紅螺菌劑的應(yīng)用培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于涉及的微生物為耐鹽紅螺菌()，保藏單位簡稱為CCTCC，菌種編號為CCTCCNo.M，其應(yīng)用型培養(yǎng)技術(shù)為1)分離選育獲得耐鹽紅螺菌，該菌株可在0.1～4％鹽濃度下生長；2)耐鹽紅螺菌的應(yīng)用培養(yǎng)基組分為在每升水中含有醋酸鈉3.0～3.5g，氯化銨或硫酸銨0.3～0.4g，酵母膏0.1g，鉬酸鈉與硼酸微量，pH7.4；3)應(yīng)用培養(yǎng)菌劑技術(shù)步驟首先將試管菌株接種于配方為CH3COONa 3.0g，CH3CH2COONa0.3g，(NH4)2SO40.3g，MgSO4·7H2O0.2g，K2HPO40.3g，KH2PO40.5g，CaCl250mg，酵母膏0.1g，谷氨酸0.2mg，蛋白胨10mg，MnSO42.5mg，NaCl 1.0g FeSO45mg，H2O 1L，pH7.4的光合細菌經(jīng)典培養(yǎng)基中進行一級、二級種子擴大培養(yǎng)，后接種于應(yīng)用培養(yǎng)基配方中進行三級種子擴大培養(yǎng)，最后進行菌劑生產(chǎn)應(yīng)用培養(yǎng)；其中，前三級培養(yǎng)條件為置于白熾燈光照下培養(yǎng)5～7d，溫度28～33℃，光照強度1000～1500LX；應(yīng)用生產(chǎn)菌劑以養(yǎng)殖水源為基質(zhì)，添加應(yīng)用型配方，不滅菌，分裝白色容器中，接種20～30％應(yīng)用培養(yǎng)基擴培的三級種子，置于溫度為25～35℃的白色塑料溫棚下日光光照培養(yǎng)3～5d，獲得每毫升億個細胞的菌劑；后取70～80％菌劑量用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，余20～30％量作為母種繼續(xù)進行應(yīng)用培養(yǎng)，即第一批接種擴培的種子，從第二批開始采用接種應(yīng)用菌劑。
本發(fā)明的耐鹽紅螺菌劑養(yǎng)殖試驗顯示，添加光合細菌的養(yǎng)殖水體溶氧提高，水質(zhì)較好，魚蝦生長健壯，病害減少。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)水體有害微生物如假單胞菌、氣單胞菌等病原菌數(shù)量減少。通過養(yǎng)殖應(yīng)用，表明應(yīng)用培養(yǎng)技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)質(zhì)量要求，魚苗的成活率以及魚苗的個體增重率都提高了10％以上，耐鹽紅螺菌劑在淡水海水養(yǎng)殖中均能發(fā)揮良好的應(yīng)用效果。
具體實施例方式1、耐鹽紅螺菌1)耐鹽紅螺菌的菌株特性該菌株是從海水、海泥中分離的光合細菌。耐鹽紅螺菌—莢膜紅假單胞菌(Rps.capsulata)PSB-2已于2004年 月 日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其簡稱為CCTCC，保藏號為CCTCC No.M？.耐鹽紅螺菌的形態(tài)、生理生化等特征參考(布坎南R E，吉本斯N E.伯杰細菌鑒定手冊第八版[M].北京科學出版社，198416-29.)。該菌為革蘭氏陰性細菌，極生鞭毛，具有運動性；在光照或黑暗，厭氧、微好氧和好氧條件下均能生長。細胞形態(tài)呈短桿或卵形，大多單個；細胞大小為2.0～2.2μm×0.6～1.2μm。細胞厭氧液體培養(yǎng)物呈現(xiàn)紅色、黃棕色等；可利用乙酸鈉、丙酸鈉、丙酮酸、蘋果酸、琥珀酸、酵母膏、單糖、天氡氨酸與谷氨酸等，不能利用苯甲酸鈉、硫代硫酸鈉和苯甲酸等；氫化酶、接觸酶陽性，不能液化明膠。最適生長溫度30℃，最適生長pH7.5～8.0，但在pH6.5～9均生長良好。
2)耐鹽紅螺菌的選育包括分離單菌落與菌種選育。其過程為從海水海泥中富集紅螺菌—→平板分離單菌落—→耐鹽性能檢測—→凈化水質(zhì)等功能檢測—→耐鹽紅螺菌優(yōu)化菌株。富集培養(yǎng)基每升水中含氯化銨1g，磷酸氫二鈉0.5g，硫酸鎂或氯化鎂0.2g，氯化鈉2g，酵母膏或蛋白胨1～2g。溶解各組分后，121℃蒸汽滅菌20min，后加入過濾除菌的10％碳酸氫鈉溶液50ml，乙醇或4％丙氨酸1.5～2.0ml，用0.1N磷酸調(diào)pH至7.0；富集培養(yǎng)液置于白熾燈光照下培養(yǎng)15～20天(溫度25～30℃，光照強度1500～2000LX)，當培養(yǎng)物深紅色后取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入第二次富集培養(yǎng)，如此反復2～3次。后取紅色培養(yǎng)液稀釋，涂布固體培養(yǎng)基上，于厭氧光照下培養(yǎng)7～10天，挑起紅色單菌落斜面培養(yǎng)。菌種選育以光合細菌培養(yǎng)基(CH3COONa 3.0g，CH3CH2COONa 0.3g，(NH4)2SO40.3g，MgSO4·7H2O 0.2g，K2HPO40.3g，KH2PO40.5g，CaCl250mg，酵母膏0.1g，谷氨酸0.2mg，蛋白胨10mg，MnSO42.5mg，NaCl 1.0gFeSO45mg，H2O 1L，pH7.4)為基礎(chǔ)，并改變配方中鹽含量使配制成0.1～4％鹽濃度的培養(yǎng)基，滅菌后接種光合細菌，在有氧條件下光照培養(yǎng)7天，測定各菌種在不同鹽濃度下的生長力；凈化水質(zhì)以池塘水與模擬海水為基質(zhì)，分別設(shè)置0.1～4％鹽濃度，并在培養(yǎng)液中添加氯化銨、亞硝酸鈉物質(zhì)，滅菌接種后進行有氧光照培養(yǎng)1天，測定各菌種在不同鹽濃度下對氨氮、亞硝基氮的降解能力。最后選育出能在0.1～4％鹽濃度下良好生長、凈化水質(zhì)能力較強的耐鹽紅螺菌株。
2、應(yīng)用型耐鹽紅螺菌的菌劑培養(yǎng)技術(shù)包括應(yīng)用型培養(yǎng)基優(yōu)化和降低能耗和設(shè)備投入簡單的培養(yǎng)技術(shù)。應(yīng)用培養(yǎng)基通過篩選優(yōu)化獲得耐鹽紅螺菌應(yīng)用型配方。應(yīng)用型配方在每升水中含有醋酸鈉3.0～3.5g，氯化銨或硫酸銨0.3～0.4g，酵母膏0.1g，鉬鹽、硼酸鹽等微量，pH7.4。應(yīng)用型配方可大大降低培養(yǎng)基成本，培養(yǎng)成本較經(jīng)典配方下降40～47％(例培養(yǎng)1噸光合細菌菌劑，經(jīng)典培養(yǎng)基配方成本120.12元，應(yīng)用型配方56.32元)，并具有配制方便等特點。
培養(yǎng)技術(shù)流程為耐鹽紅螺菌種斜面→小三角瓶一級種子培養(yǎng)→大三角瓶二級種子培養(yǎng)→應(yīng)用培養(yǎng)基三級種子培養(yǎng)→應(yīng)用生產(chǎn)菌劑培養(yǎng)。應(yīng)用培養(yǎng)菌劑技術(shù)試管菌株先以經(jīng)典培養(yǎng)基(CH3COONa 3.0g，CH3CH2COONa 0.3g，(NH4)2SO40.3g，MgSO4·7H2O 0.2g，K2HPO40.3g，KH2PO40.5g，CaCl250mg，酵母膏0.1g，谷氨酸0.2mg，蛋白胨10mg，MnSO42.5mg，NaCl 1.0g FeSO45mg，H2O 1L，pH7.4)進行一級、二級種子擴大培養(yǎng)，后接種于應(yīng)用培養(yǎng)基配方中進行三級種子擴大培養(yǎng)，最后進行菌劑生產(chǎn)應(yīng)用培養(yǎng)。其中，前三級培養(yǎng)條件為置于白熾燈光照下培養(yǎng)5～7d，溫度28～33℃，光照強度1000～1500LX；應(yīng)用生產(chǎn)菌劑以養(yǎng)殖水源(自來水除氯)過濾后添加應(yīng)用型配方，分裝白色容器中，接種20～30％應(yīng)用培養(yǎng)的種子，置于白色塑料溫棚中光照培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25～35℃，時間2～7天(氣溫高培養(yǎng)2～3天，氣溫低培養(yǎng)時間延長)，耐鹽紅螺菌應(yīng)用培養(yǎng)菌劑達到使用濃度后，取70～80％菌劑量用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，余20～30％量作為母種繼續(xù)進行應(yīng)用培養(yǎng)，即第一批接種擴培種子，從第二批開始采用接種應(yīng)用菌劑。
應(yīng)用培養(yǎng)耐鹽紅螺菌劑，細胞濃度受菌種母液質(zhì)量、氣溫、光照及接種的影響。如氣溫太高時需打開溫棚門，氣溫較低時需關(guān)閉溫棚門，使培養(yǎng)溫度控制在25～35℃，在冬天氣溫太低溫度達不到時，可采用適當措施(如夜晚燈源光照)來提高培養(yǎng)溫度。應(yīng)用培養(yǎng)菌劑顏色為均勻紅色，表面無白膜，并具有一定香氣。如培養(yǎng)過程出現(xiàn)顏色較淡或表面長白膜、有臭氣，說明菌劑質(zhì)量差或染菌。應(yīng)用培養(yǎng)采用培養(yǎng)基不滅菌，除加大接種量外，還應(yīng)對使用容器進行清洗消毒后使用。
耐鹽紅螺菌菌劑在上述應(yīng)用培養(yǎng)條件下，每毫升可達到億個細胞的使用濃度要求。
3、耐鹽紅螺菌劑應(yīng)用培養(yǎng)及在淡水海水養(yǎng)殖中的應(yīng)用2001年10月至12月(第一批)，2002年4月至6月(第二批)在福建漳州(詔安)進行菌劑應(yīng)用培養(yǎng)與養(yǎng)殖試驗。菌劑培養(yǎng)利用詔安養(yǎng)殖海水(38‰鹽度)添加應(yīng)用型配方，以20L或50L白色塑料桶為容器，接種光合細菌培養(yǎng)母液，置于搭建的白色塑料棚中日光培養(yǎng)3-4d，光合細菌菌劑呈現(xiàn)紫紅色，OD值達到1.0左右(每毫升億個細胞濃度，下同)。菌劑用于養(yǎng)殖將耐鹽紅螺菌培養(yǎng)液應(yīng)用于10口南美白對蝦池養(yǎng)殖(養(yǎng)殖池面積400m2)，養(yǎng)殖過程實驗池每隔5-7d添加光合細菌培養(yǎng)菌劑10-100ppm，對照組不添加光合細菌。養(yǎng)殖結(jié)果為第一批蝦苗(投苗約0.8cm)養(yǎng)殖2個月，增重率較對照池提高80％以上，第二批蝦苗(約3cm)養(yǎng)殖2個月，增重率較對照池提高23％以上。
淡水養(yǎng)殖應(yīng)用在福州市淡水育苗基地進行。2001年3月至4月(第一批)，2002年6月至7月(第二批)以閩江水源配料光合細菌應(yīng)用型配方，分裝白色塑料桶，接種后置于白色塑料溫棚中日光培養(yǎng)3-4d，光合細菌培養(yǎng)菌液呈現(xiàn)紫紅色，OD值達到1.0左右。第一批養(yǎng)殖用4口(5-10m2)水泥池進行斑點叉尾鮰、彭澤鯽魚苗的養(yǎng)殖試驗，兩種魚苗的實驗池約每隔5d添加100ppm光合細菌培養(yǎng)液，養(yǎng)殖一個月，兩種魚苗的個體增重率較對照池提高12-17％；2002年6月在2口(1畝面積)養(yǎng)殖魚池中分別投放18000尾斑點叉尾鮰(約0.5cm)，實驗池約隔5d添加10ppm光合細菌菌劑，養(yǎng)殖一個月，斑點叉尾鮰苗成活率較對照池提高10％。
耐鹽紅螺菌劑養(yǎng)殖試驗還顯示，添加光合細菌的養(yǎng)殖水體溶氧提高，水質(zhì)較好，魚蝦生長健壯，病害減少。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)水體有害微生物如假單胞菌、氣單胞菌等病原菌數(shù)量減少。通過養(yǎng)殖應(yīng)用，表明應(yīng)用培養(yǎng)技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)質(zhì)量要求，耐鹽紅螺菌劑在淡水海水養(yǎng)殖中均能發(fā)揮良好的應(yīng)用效果。
實施例以下通過具體實例對本發(fā)明作進一步的詳細描述。
(1)分離紅螺菌 100ml量筒為容器。將海水、海泥培養(yǎng)于表層添加液體石蠟的光合細菌富集培養(yǎng)液中，于30℃，1500LX燈光光照下培養(yǎng)10天，吸取20～30ml紅色培養(yǎng)液再轉(zhuǎn)入100ml量筒富集培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。如此2至3次，后吸取紅色培養(yǎng)液1ml，按10倍稀釋法依次稀釋，取10-3、10-4、10-5、10-6稀釋管0.1ml涂布在光合細菌全成分平板上，置于厭氧罐中厭氧光照培養(yǎng)8天，在平板上挑取到36株單菌落斜面培養(yǎng)。
(2)耐鹽紅螺菌選育配制0.1％、1％、2％、3％、4％NaCl濃度的光合細菌培養(yǎng)基，滅菌，將36株單菌落分別接種于試管培養(yǎng)液中(接種量5％)，在好氧下以燈光光源光照培養(yǎng)7天(光照強度1500LX，培養(yǎng)溫度30℃)，用721分光光度計測定菌體生長量(OD660nm)，從實驗中選育出5株能在有氧條件下，在0.1～4％NaCl濃度下生長良好的菌株。后配制不同鹽濃度和含有18mg/L、6mg/L氨氮與亞硝基氮的養(yǎng)殖水體培養(yǎng)基，滅菌，接種5％光合細菌，同上述光照培養(yǎng)1天，測定菌種在不同鹽濃度下對水體氨氮、亞硝基氮的下降率。通過比較，篩選出2株能在不同鹽濃度下凈化養(yǎng)殖水質(zhì)良好的耐鹽紅螺菌。在功能菌株選育中，考慮到養(yǎng)殖水體具有較高溶解氧濃度，為此，菌種選育均在好氧條件下實驗，這樣選育淘汰了只能在厭氧下生長，或好氧下生長差的菌株，使菌株具有耐鹽性、生長快、凈化水質(zhì)功能較好與適應(yīng)于養(yǎng)殖水體的溶氧環(huán)境。
(3)應(yīng)用型培養(yǎng)基配方優(yōu)化以光合細菌經(jīng)典配方為基礎(chǔ)，一一設(shè)計各碳源、氮源、無機鹽、生長素的添加或缺少對菌體生長的影響。試驗按設(shè)計的配方配制培養(yǎng)基，121℃滅菌20min，后接種10％活化的耐鹽紅螺菌種，于30℃、1500LX光照強度下光照培養(yǎng)5天，以分光光度計法測定各配方的菌體生長量。在各成分添加與不添加的培養(yǎng)對比試驗中，篩選影響菌種生長權(quán)重大的成分，淘汰對菌種生長影響小的成分。優(yōu)化培養(yǎng)基經(jīng)反復與經(jīng)典培養(yǎng)基培養(yǎng)比較，確定其培養(yǎng)效果后作為應(yīng)用培養(yǎng)基配方。試驗結(jié)果優(yōu)化的應(yīng)用型配方為每升水中含有醋酸鈉3.0～3.5g，氯化銨或硫酸銨0.3～0.4g，酵母膏0.1g，鉬鹽、硼酸鹽等微量，pH7.4。在這些成分中，醋酸鈉、硫酸銨(或氯化銨)、酵母膏是經(jīng)典配方中影響菌體生長權(quán)重很大的成分。而無機鹽中硼與鉬鹽較經(jīng)典配方中的無機鹽對菌體生長的影響要大，添加少量硼、鉬對菌體保持活力，減緩衰亡期與提高其生長量具有良好的作用。因此，應(yīng)用型配方中的無機鹽為硼酸與鉬酸鈉。應(yīng)用型配方培養(yǎng)成分5～6種，培養(yǎng)基成分成本下降47％，但其培養(yǎng)效果在同樣條件下與采用經(jīng)典培養(yǎng)基配方相近(表1)，表1 光合細菌經(jīng)典培養(yǎng)基與應(yīng)用培養(yǎng)基培養(yǎng)效果比較(OD660NM)

(4)應(yīng)用型培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用生產(chǎn)菌劑采用應(yīng)用型培養(yǎng)基，配制后不滅菌并加大接種量，在日光光照下培養(yǎng)與操作。具體過程為以養(yǎng)殖水體(自來水除氯、江水、海水過濾沉淀)為基質(zhì)，添加應(yīng)用型配方，于25L白色塑料桶分裝20L培養(yǎng)液，接種5L擴培的耐鹽紅螺菌種子液，置于白色塑料溫棚內(nèi)(28℃)日光光照培養(yǎng)4～5天(每天攪拌一次)，待菌體呈現(xiàn)均勻紅色(菌濃度達到109個/m1)后，取20L菌劑應(yīng)用于養(yǎng)殖，余5L菌劑作為母種添加應(yīng)用型培養(yǎng)液，繼續(xù)日光光照培養(yǎng)生產(chǎn)用于淡水海水養(yǎng)殖的耐鹽紅螺菌劑。
白色塑料溫棚日光培養(yǎng)光合細菌，應(yīng)使用白色容器(如白色玻璃、塑料桶，有機玻璃、塑料袋等)。培養(yǎng)過程每天攪拌1次，使菌種能更好吸收營養(yǎng)與快速生長。
權(quán)利要求
1.一株耐鹽紅螺菌劑的應(yīng)用培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于涉及的微生物為耐鹽紅螺菌( )，保藏單位簡稱為CCTCC，菌種編號為CCTCCNo.M ，其應(yīng)用型培養(yǎng)技術(shù)為1)分離選育獲得耐鹽紅螺菌，該菌株可在0.1～4％鹽濃度下生長；2)耐鹽紅螺菌的應(yīng)用培養(yǎng)基組分為在每升水中含有醋酸鈉3.0～3.5g，氯化銨或硫酸銨0.3～0.4g，酵母膏0.1g，鉬酸鈉與硼酸微量，pH7.4；3)應(yīng)用培養(yǎng)菌劑技術(shù)步驟首先將試管菌株接種于配方為CH3COONa 3.0g，CH3CH2COONa0.3g，(NH4)2SO40.3g，MgSO4.7H2O0.2g，K2HPO40.3g，KH2PO40.5g，CaCl250mg，酵母膏0.1g，谷氨酸0.2mg，蛋白胨10mg，MnSO42.5mg，NaCl 1.0g FeSO45mg，H2O 1L，pH7.4的光合細菌經(jīng)典培養(yǎng)基中進行一級、二級種子擴大培養(yǎng)，后接種于應(yīng)用培養(yǎng)基配方中進行三級種子擴大培養(yǎng)，最后進行菌劑生產(chǎn)應(yīng)用培養(yǎng)；其中，前三級培養(yǎng)條件為置于白熾燈光照下培養(yǎng)5～7d，溫度28～33℃，光照強度1000～1500LX；應(yīng)用生產(chǎn)菌劑以養(yǎng)殖水源為基質(zhì)，添加應(yīng)用型配方，不滅菌，分裝白色容器中，接種20～30％應(yīng)用培養(yǎng)基擴培的三級種子，置于溫度為25～35℃的白色塑料溫棚下日光光照培養(yǎng)3～5d，獲得每毫升億個細胞的菌劑；后取70～80％菌劑量用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，余20～30％量作為母種繼續(xù)進行應(yīng)用培養(yǎng)，即第一批接種擴培的種子，從第二批開始采用接種應(yīng)用菌劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種應(yīng)用海水養(yǎng)殖效果好、應(yīng)用菌劑培養(yǎng)費用低的耐鹽紅螺菌劑的應(yīng)用培養(yǎng)技術(shù)。耐鹽紅螺菌的選育為從海水中富集、平板分離、菌株功能選育、耐鹽紅螺菌功能優(yōu)化菌株。應(yīng)用培養(yǎng)技術(shù)包括培養(yǎng)基優(yōu)化與應(yīng)用培養(yǎng)工藝條件的改進。培養(yǎng)基優(yōu)化是從碳源、氮源、無機鹽及生長因子等成分進行優(yōu)化，獲得降低47％培養(yǎng)基成本的應(yīng)用型配方。應(yīng)用菌劑培養(yǎng)采用應(yīng)用型配方，接種后置于白色塑料溫棚下日光培養(yǎng)。本發(fā)明的耐鹽紅螺菌株可在0.1～4％NaCl濃度下生長，在淡水、海水養(yǎng)殖中均可收到良好的應(yīng)用效果。其應(yīng)用培養(yǎng)技術(shù)大大降低了光合細菌培養(yǎng)的成本與設(shè)備投入。耐鹽紅螺菌劑的應(yīng)用培養(yǎng)在上述條件下達到每毫升億個細胞的使用濃度要求。
文檔編號C12N1/20GK1603403SQ20041006095
公開日2005年4月6日 申請日期2004年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月11日
發(fā)明者邱宏端, 袁重桂, 林本興, 林娟, 朱航, 鄭杰華 申請人:福州大學