一種斑茅的快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物栽培技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種斑茅的快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]斑茅(Saccharumarundinaceum(Retz) Jeswiet.)是禾本科(Poaceae)蜀泰族(高梁族)(Andropogoneae)甘鹿屬(Saccharum)多年生、密叢高大草本，是一種C4植物，植株高大，野生狀態(tài)株高4米以上，甚至6?7米，莖粗2厘米左右，根系發(fā)達(dá)，耐瘠薄和干旱，對環(huán)境友好，在丘陵坡地、河岸、路旁和礫石沙灘荒洲上生長良好，在我國熱帶、亞熱帶至暖溫帶地區(qū)廣泛分布，印度、緬甸、泰國、越南、馬來西亞等國也有豐富的野生資源。因其優(yōu)良的植物學(xué)特性，斑茅已被廣泛用于對栽培甘蔗的遺傳改良上，通過遠(yuǎn)緣雜交、基因?qū)氲仁侄螌呙┲仓旮叽?、抗逆性?qiáng)、分蘗多、宿根性好等優(yōu)良性狀轉(zhuǎn)移到甘蔗中，培育了大量的優(yōu)良栽培甘蔗新品種。近年，隨著生物質(zhì)原料的發(fā)展，能源草研究逐步成為熱點(diǎn)，斑茅因其具有高光效、高生物產(chǎn)量、高干物質(zhì)積累和高木質(zhì)纖維素含量等特點(diǎn)，符合以木質(zhì)纖維素為原料的第三代生物質(zhì)燃料要求，被認(rèn)為是我國南方極具開發(fā)潛力的本土能源植物，受到廣泛關(guān)注與研究，國內(nèi)學(xué)者在資源收集、產(chǎn)能潛力評價(jià)等方面作了初步研究，但是與國外對柳枝稷等能源草的研究應(yīng)用還有較大差距。要實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，首先要解決原材料擴(kuò)繁問題，由于斑茅種子細(xì)小且具較長的纖毛，不易收獲，常規(guī)條件下發(fā)芽率也不高，靠種子擴(kuò)繁效率較低，繁殖系數(shù)高是植物組織培養(yǎng)的主要優(yōu)勢，也是國際上種子繁殖困難物種實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn)種苗的有效途徑。
[0003]目前，關(guān)于斑茅組織培養(yǎng)的方法有:“斑茅幼葉的組織培養(yǎng)”，李富生，楊清輝，蕭鳳，何麗蓮，植物資源與環(huán)境，1998，7(1):63?64.其具體公開了如下培養(yǎng)方法:
[0004]誘導(dǎo)培養(yǎng)基:Ms附加2，4-D 1?3mg/L ;分化培養(yǎng)基:Ms附加0.5mg/L IBA和lmg/L KT ;生根培養(yǎng)基:Ms附加IAA 2mg/L和活性炭0.5%的液體培養(yǎng)基。
[0005]培養(yǎng)過程:取莖梢?guī)~鞘的部位，用75%酒精表面消毒，剝?nèi)ネ鈱永先~鞘，留下3?4層的嫩葉鞘。將生長點(diǎn)以上0?4cm的嫩葉鞘切成約5mm長的小塊，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。每個(gè)材料在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上接種40?50塊外植體，于27?28°C的暗室內(nèi)培養(yǎng)20d后統(tǒng)計(jì)各處理的愈傷組織誘導(dǎo)率平均為59.71%?78.26%。將產(chǎn)生的愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，每種轉(zhuǎn)接20?30塊，在溫度27?28°C，光強(qiáng)1500?20001x，每日光照12h的條件下培養(yǎng)，幼葉愈傷組織經(jīng)過20d左右培養(yǎng)分化成苗，但分化率較低，在60%以下。待分化成苗后，分化苗移入生根培養(yǎng)基，同等條件下培養(yǎng)兩周后即可長出較多粗壯的白根。但是，該培養(yǎng)方法存在的缺陷是:
[0006]以幼嫩葉鞘為外植體，對取樣要求高，操作難度大，取樣不到位很容易導(dǎo)致愈傷誘導(dǎo)失敗；而且該方法產(chǎn)生的愈傷組織大多屬于松軟型(只能偶爾分化出根)和粘糊型(不具有胚性能力)，分化能力較弱，分化率較低，在25%?59.09%。
[0007]“甘蔗近緣屬斑茅組織培養(yǎng)高頻再生體系的建立”吳轉(zhuǎn)娣，劉家勇，陸鑫，張敏，林秀琴，趙培方，吳才文.，中國糖料，2012，2 =9-10+14.，具體公開了如下培養(yǎng)方法:
[0008]誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS附加2，4-D 3.0mg/L+6-BA 0.4mg/L ;繼代培養(yǎng)基:Ms附加2，4-D3.0mg/L ;分化培養(yǎng)基:Ms附加KT 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L ;培養(yǎng)基中蔗糖質(zhì)量濃度均為308/1，瓊脂0.4%，？!1為5.8。
[0009]培養(yǎng)過程:取回斑茅的頂端分生區(qū)約50cm長，第一次剝開部分老的葉鞘，保留材料下端(頂芽部分)完整，切除多余的老葉鞘，約25?30cm，以75%乙醇溶液消毒表面，放入超凈工作臺(tái)中，剝?nèi)ダ先~鞘，在無菌濾紙上切去老的葉鞘剩下10cm長的幼嫩葉鞘，此時(shí)能在材料的上端看到兩片葉脈，外表面無毛，離材料下端2?3cm處有一個(gè)葉鞘與葉片連接的肥厚帶，即材料已經(jīng)剝到位，將材料切片，置于培養(yǎng)基上培養(yǎng)。愈傷組織誘導(dǎo)、愈傷組織繼代均為暗培養(yǎng)，溫度均為25±2°C。分化培養(yǎng)則在光照度為1000?20001x的光照條件下，25±2°C培養(yǎng)。暗培養(yǎng)15?25d觀察生長情況，全部材料一皿換一皿繼代1次。但是，同樣，該方法存在如下缺陷:
[0010]該方案對取樣要求高，操作難度大，取樣不到位很容易導(dǎo)致愈傷誘導(dǎo)失敗而增加生產(chǎn)成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明的目的在于解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種愈傷組織誘導(dǎo)率高，分化率高，增殖系數(shù)高的斑茅的繁殖方法。
[0012]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，采用以下技術(shù)方案:
[0013]—種斑茅的繁殖方法，包括以下步驟:
[0014]步驟一:植體選擇與滅菌
[0015]以種子為外植體，將采集回的種子選取顆粒飽滿的用鑷子剝出，無菌水浸泡12h備用；消毒處理為70%酒精浸泡30秒，無菌水漂洗3-5次，用0.1 %取(:12表面滅菌7?lOmin，無菌水漂洗5_7次；
[0016]步驟二:愈傷組織的誘導(dǎo)
[0017]將消毒處理好的種子，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)瓶內(nèi)每瓶接種10塊外植體，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH為5.8，放置于25 °C下暗培養(yǎng)，培養(yǎng)5?7天開始形成愈傷組織；
[0018]步驟三:愈傷組織的增殖培養(yǎng)
[0019]暗培養(yǎng)條件下，將在愈傷組織培養(yǎng)基上培養(yǎng)出的胚性愈傷組織，剝離后轉(zhuǎn)到繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基PH為5.8，溫度25± 1°C，每20d?28d為一個(gè)增殖周期；
[0020]步驟四:芽分化
[0021]經(jīng)過繼代培養(yǎng)，將呈現(xiàn)出結(jié)構(gòu)致密、顆粒狀、淡黃色的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)移至芽分化培養(yǎng)基上，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基PH為5.8，溫度25± 1°C，加1500-2500LX光照，3?5天開始分化出芽點(diǎn)；
[0022]步驟五:生根與增殖
[0023]將長2cm以上的叢生芽轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基上，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基PH為5.8，溫度25±1°C，加2000Lx光照，5?7天開始分化出根；
[0024]步驟六:移栽
[0025]選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，將生根幼苗移栽到基質(zhì)中。
[0026]進(jìn)一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:
[0027]Ms+2, 4-D+6-BA+ 蔗糖 + 瓊脂，其中，2，4-D 的濃度為:1.0mg/L ?3.0mg/L, 6-BA 的濃度為0.lmg/L?0.2mg/L，蔗糖的濃度為30g/L，瓊脂的濃度為7g/L。
[0028]進(jìn)一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:Ms+2，4_D+蔗糖+瓊脂，其中，2，4-D的濃度為:0.5mg/L，蔗糖的濃度為30g/L，瓊脂的濃度為7g/L。
[0029]進(jìn)一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，所述繼代培養(yǎng)基為:Ms+2，4-D+6-BA+蔗糖+瓊脂，其中2，4-D的濃度為lmg/L、6-BA的濃度為0.2?0.5mg/L，蔗糖的濃度為30g/L，瓊脂的濃度為7g/L。
[0030]進(jìn)一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，所述芽分化培養(yǎng)基為MS+6-BA+KT+蔗糖+瓊脂；其中，6-BA的濃度為:0.5mg/L，KT的濃度為:1.0mg/L?2.0mg/L，蔗糖的濃度為30g/L，瓊脂的濃度為7g/L。
[0031]進(jìn)一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，步驟五中所述培養(yǎng)基為:l/2Ms+蔗糖+瓊脂，其中，蔗糖的濃度為20g/L，瓊脂的濃度為7g/L。
[0032]進(jìn)一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，步驟六中所述基質(zhì)包括:營養(yǎng)土、蛭石、珍珠巖，所述營養(yǎng)土、蛭石、珍珠巖三者的質(zhì)量比為:2:1:1。
[0033]本發(fā)明提供的斑茅繁殖方法，該方法取樣簡便，培養(yǎng)的愈傷組織誘導(dǎo)率高，分化率高，增值系數(shù)高，穩(wěn)定性好，能在較短時(shí)間內(nèi)獲得大量生長健壯的試管苗，而且該方法可操作性強(qiáng)，生產(chǎn)成本低，應(yīng)用價(jià)值高，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0034]圖1為斑茅種子愈傷誘導(dǎo)不意圖；
[0035]圖2為斑茅愈傷繼代示意圖；
[0036]圖3為斑茅愈傷組織分化成出芽點(diǎn)示意圖；
[0037]圖4為斑茅分化形成叢生