亚洲狠狠干,亚洲国产福利精品一区二区,国产八区,激情文学亚洲色图

小黃魚精子冷凍保存液及小黃魚精子冷凍保存方法

文檔序號(hào):8927825閱讀:680來源:國知局
小黃魚精子冷凍保存液及小黃魚精子冷凍保存方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及小黃魚精子冷凍保存液及小黃魚精子冷凍保存方法。
【背景技術(shù)】
[0002]小黃魚(Larimichthys polyactis)是我國重要經(jīng)濟(jì)魚類,在我國沿海均有分布,由于地理隔離已經(jīng)形成了包括山東青島、江蘇啟東、浙江舟山和福建寧德等幾個(gè)地理種群。小黃魚生性敏感,極易受驚,遠(yuǎn)距離運(yùn)輸死亡率極高,難易運(yùn)用常規(guī)方法使不同地理種群進(jìn)行自然交配達(dá)到雜交育種的目的。而魚類精子超低溫凍存則是解決這一難題的有效途徑:將某一地理群體的雄性小黃魚精液進(jìn)行冷凍保存,然后再與另一種群雌性小黃魚進(jìn)行人工授精,即可達(dá)到雜交育種的目的。
[0003]小黃魚精子冷凍保存技術(shù)還在魚類種質(zhì)資源保護(hù)、遠(yuǎn)緣雜交和魚類的雌核發(fā)育、雄核發(fā)育等方面具有應(yīng)用參考價(jià)值。
[0004]不同魚類的精子對(duì)外界環(huán)境的敏感性不同,其冷凍方式和復(fù)溫方法均會(huì)大幅影響精子的活力。目前魚類多采用離心管和麥細(xì)管進(jìn)行冷凍保存,但在降溫和復(fù)溫的過程中,管中心位置的溫度變化與管壁并不同步,會(huì)降低精子復(fù)活后的活力,從而導(dǎo)致受精率和孵化率的下降。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題,本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供小黃魚精子冷凍保存液及小黃魚精子冷凍保存方法的技術(shù)方案。
[0006]所述的一種小黃魚精子冷凍保存液,其特征在于由保存液和抗凍劑組成,所述的保存液由氯化鈉6?10g,氯化鉀0.2?0.6g,氯化鈣0.3?0.7g,檸檬酸鈉0.1?0.4g,用滅菌后的超純水溶解,然后定容至1000ML得到;所述的抗凍劑包括甘油和乙二醇;所述的保存液:甘油:乙二醇的體積比為85?95:6?10:1?5。
[0007]所述的一種小黃魚精子冷凍保存液,其特征在于所述的保存液由氯化鈉7?9g,氯化鉀0.3?0.5g,氯化鈣0.4?0.6g,檸檬酸鈉0.2?0.3g,用滅菌后的超純水溶解,然后定容至1000ML得到。
[0008]所述的一種小黃魚精子冷凍保存液,其特征在于所述的保存液:甘油:乙二醇的體積比為88?92:7?9:2?4。
[0009]利用一種小黃魚精子冷凍保存液進(jìn)行小黃魚精子的冷凍保存方法,其特征在于包括以下步驟:
(1)挑選性腺發(fā)育良好的雄性小黃魚,用純水沖洗其生殖孔后擦干,輕壓其腹部,用一次性吸管收集精液;
(2)將收集的小黃魚精液用小黃魚精子冷凍保存液按1:4的比例稀釋,制成混合液;
(3)準(zhǔn)備一塊長10cm,寬5cm的醫(yī)用紗布; (4)將其置于高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌30min;
(5)將5ml的混合液均勻噴在醫(yī)用紗布上,紗布應(yīng)雙面噴灑;
(6)將紗布置于0°C環(huán)境下,保持伸展?fàn)顟B(tài),穩(wěn)定1min;
(7)將紗布置于-80°C冰箱內(nèi),保持伸展?fàn)顟B(tài),穩(wěn)定8min;
(8)將紗布直接投入液氮罐內(nèi),應(yīng)置于液面以下-196°C冷凍保存,得到小黃魚冷凍精液。
[0010]所述的冷凍保存方法,其特征在于所述的小黃魚冷凍精液的使用步驟如下;設(shè)定供箱溫度為43 C,待供箱溫度穩(wěn)定后,將液氣冷凍后的紗布置于一 1000ML燒杯中,放入43°C烘箱3min 1s后取出即可。
[0011]本發(fā)明以紗布為平面,無論是降溫,還是復(fù)溫,精液的溫度變化都很均勻,保證了精子活力的一致性。采用本發(fā)明的冷凍保存液及方法進(jìn)行冷凍保存的精子復(fù)活后能夠保持鮮精活力,利用復(fù)活的精子進(jìn)行受精后,受精率達(dá)到85%以上,孵化率達(dá)到79%以上。
【具體實(shí)施方式】
[0012]為了使本發(fā)明更加容易理解,下面結(jié)合具體實(shí)施例,進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解,這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限止本發(fā)明的范圍,下列實(shí)施例中未提及的具體實(shí)驗(yàn)方法,通常按常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。
[0013]實(shí)施例1:一種小黃魚精子冷凍保存液的制備
該冷凍保存液由小黃魚精子保存液和抗凍劑組成,其中小黃魚精子保存液的配制方法為:氯化鈉Sg,氯化鉀0.4g,氯化鈣0.5g,檸檬酸鈉0.2g,用滅菌后的超純水溶解,然后定容至1000ML ;抗凍劑為甘油和乙二醇;將小黃魚精子保存液、甘油和乙二醇按體積比90:8:2的比例混合,即得到小黃魚精子冷凍保存液。
[0014]實(shí)施例2:—種小黃魚精子冷凍保存液的制備
該冷凍保存液由小黃魚精子保存液和抗凍劑組成,其中小黃魚精子保存液的配制方法為:氯化鈉6g,氯化鉀0.2g,氯化鈣0.3g,檸檬酸鈉0.lg,用滅菌后的超純水溶解,然后定容至1000ML ;抗凍劑為甘油和乙二醇;將小黃魚精子保存液、甘油和乙二醇按體積比85:10:5的比例混合,即得到小黃魚精子冷凍保存液。
[0015]實(shí)施例3:—種小黃魚精子冷凍保存液的制備
該冷凍保存液由小黃魚精子保存液和抗凍劑組成,其中小黃魚精子保存液的配制方法為:氯化鈉10g,氯化鉀0.6g,氯化鈣0.7g,檸檬酸鈉0.4g,用滅菌后的超純水溶解,然后定容至1000ML ;抗凍劑為甘油和乙二醇;將小黃魚精子保存液、甘油和乙二醇按體積比92:7:I的比例混合,即得到小黃魚精子冷凍保存液。
[0016]實(shí)施例4:小黃魚精子的冷凍保存方法
(1)挑選性腺發(fā)育良好的雄性小黃魚,用純水沖洗其生殖孔后擦干,輕壓其腹部,用一次性吸管收集精液;
(2)將收集的小黃魚精液用實(shí)施例1制得的小黃魚精子冷凍保存液按1:4的比例稀釋,制成混合液;
(3)準(zhǔn)備一塊長10cm,寬5cm的醫(yī)用紗布;
(4)將其置于高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌30min; (5)將5ml的混合液均勻噴在醫(yī)用紗布上,紗布應(yīng)雙面噴灑;
(6)將紗布置于0°C環(huán)境下,保持伸展?fàn)顟B(tài),穩(wěn)定1min;
(7)將紗布置于-80°C冰箱內(nèi),保持伸展?fàn)顟B(tài),穩(wěn)定8min;
(8)將紗布直接投入液氮罐內(nèi),應(yīng)置于液面以下_196°C,48h后取出進(jìn)行復(fù)活實(shí)驗(yàn);
(9)小黃魚冷凍精液的復(fù)活:設(shè)定烘箱溫度為43°C,待烘箱溫度穩(wěn)定后,將該實(shí)施例得到的液氮冷凍后的紗布置于一 1000ML燒杯中,放入43°C烘箱3min 1s后取出,即可;
(10)挑選性腺發(fā)育良好的雌性小黃魚,用純水沖洗其生殖孔后擦干,輕壓其腹部,采集卵子;
(11)取100ML新鮮卵子置于放有解凍后紗布的燒杯中;
(12)向燒杯中加入500ML20°C新鮮海水,期間不停攪拌,使紗布與卵子充分接觸;
(13)30s后取出紗布,擰干;
(14)向燒杯中加水至800ML;
(15)Ih后統(tǒng)計(jì)其受精率為8
當(dāng)前第1頁1 2 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1