一種快速檢測(cè)獐茅種子生活力的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于種子檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測(cè)獐茅種子生活力的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 獐茅屬于禾本科植物，以營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)繁殖為主，匍匐莖是其重要的營(yíng)養(yǎng)繁殖 器官，與之相比，有性繁殖對(duì)于獐茅種群的貢獻(xiàn)不大，成穗率僅為15. 7%，籽實(shí)很小，千粒重 僅為0. 12±0.0015g。獐茅廣泛分布于中國(guó)北方各省內(nèi)陸以及沿海的鹽漬土壤地區(qū)，為鹽生 植物中的泌鹽植物，是一種固沙和鹽堿地區(qū)放牧的優(yōu)良牧草。由于獐茅耐鹽堿的生理特性 及營(yíng)養(yǎng)繁殖的生理現(xiàn)象，目前，對(duì)獐茅及其同屬植物的泌鹽生理及種群結(jié)構(gòu)等研宄較多，而 獐茅種子發(fā)芽率相對(duì)較低，對(duì)于獐茅種子萌發(fā)活力研宄較少，因此深入了解獐茅種子生活 力，通過(guò)測(cè)定獐茅種子生活力預(yù)判獐茅種子發(fā)芽率，對(duì)于草地利用和生態(tài)保護(hù)具有實(shí)踐意 義。
[0003] 四唑（2, 3, 5-氯代三苯基四氮唑，以下簡(jiǎn)稱TTC)測(cè)定技術(shù)于1942年由德國(guó)萊抗 (Lakon)教授提出，之后為世界各國(guó)所采用。目前，TTC檢測(cè)方法多用于農(nóng)作物、蔬菜、林木 等種子的測(cè)定，而用于牧草等種子的相對(duì)較少，我國(guó)《牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程》中列出了 57個(gè)屬 的草種TTC測(cè)定方法，獐茅屬尚未列其中。許多牧草尤其是禾本科和豆科牧草種子，收獲后 即使給予適宜的發(fā)芽條件也不能發(fā)芽或發(fā)芽率很低。TTC法可檢測(cè)獐茅種子的生活力，縮短 了采用發(fā)芽試驗(yàn)衡量種子生活力的時(shí)間，但傳統(tǒng)的TTC法將種子用水浸種24h左右后，再加 入TTC溶液中進(jìn)行染色6-24h，時(shí)間仍較長(zhǎng)，因此，研宄一種快速檢測(cè)獐茅種子生活力的方 法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種快速檢測(cè)獐茅種子生活力的方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)時(shí)間 長(zhǎng)的問(wèn)題，能夠快速有效的檢測(cè)獐茅種子的生活力，對(duì)于草地利用和生態(tài)保護(hù)具有重要的 實(shí)踐意義。
[0005] 本發(fā)明測(cè)定方法所依據(jù)的原理：有活力種胚中的脫氫酶可以將TTC還原成不溶性 的TTF (紅色三苯基甲），如果種胚死亡或種胚生活力衰退，則不能染色或染色較淺，因此，可 以根據(jù)種胚染色的部位或染色的深淺程度來(lái)鑒定種子的生活力，化學(xué)方程式如下：
本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： 本發(fā)明提供了一種快速檢測(cè)獐茅種子生活力的方法，包括以下步驟： (1)首先將獐茅種子在臭氧水中浸泡2-3min，取出加入含有烷基糖苷及脂肪酸甲酯乙 氧基化物的水溶液中浸種，待種子均吸脹后，沿靠近種胚3/4處橫切； (2)將獐茅種子有種胚一端用質(zhì)量百分比為0. 5~5%的TTC溶液及質(zhì)量百分比為 0. 1-0. 3%的葡萄糖酸鋅溶液的混合液置于25~35°C暗環(huán)境下染色2-4h，然后用蒸餾水 沖洗2-3遍，再以乳酸苯酚透明劑浸種處理染色后的種子，觀察獐茅種子染色情況，染色均 勻、一致，呈鮮紅色，胚形態(tài)正常，胚根尖及子葉邊緣顏色稍暗的為正常有生活力的種子；染 色異?；蛘卟蝗旧姆N子為無(wú)生活力種子，計(jì)算有生活力種子的百分率。
[0006] 進(jìn)一步的，所述臭氧水的濃度為1. 2mg/L。
[0007] 進(jìn)一步的，步驟（1)中，所述水溶液的各組分重量百分比為：烷基糖苷5-8%，脂肪 酸甲酯乙氧基化物10-15%及余量的水。
[0008] 進(jìn)一步的，步驟（2)中，所述TTC溶液同葡萄糖酸鋅溶液的體積比為5:1。
[0009] 進(jìn)一步的，所述TTC溶液最優(yōu)化的質(zhì)量百分比為1%，所述葡萄糖酸鋅溶液最優(yōu)化 的質(zhì)量百分比為0.3%。
[0010] 進(jìn)一步的，所述染色的最優(yōu)化的溫度為30°c。
[0011] 進(jìn)一步的，所述乳酸苯酚透明劑浸種處理的條件為：溫度38°C，處理時(shí)間30min。
[0012] 本發(fā)明中所述染色異常為染色很淡或顏色深暗，未呈現(xiàn)鮮紅色，并且有雜色斑、白 斑，胚根、胚芽、胚軸不染色。
[0013] 本發(fā)明將獐茅種子預(yù)先經(jīng)烷基糖苷及脂肪酸甲酯乙氧基化物的水溶液進(jìn)行浸泡， 獐茅種子表皮含有的蠟質(zhì)結(jié)構(gòu)，是一層天然的疏水屏障，不利于浸潤(rùn)，傳統(tǒng)的機(jī)械方法去除 表面蠟質(zhì)易破壞種子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)且去除穎皮后仍需長(zhǎng)時(shí)間水浸泡使其吸脹，脂肪酸甲基乙 氧基化物能夠溶解種子表面的蠟質(zhì)，加快種子的吸脹，烷基糖苷同脂肪酸甲基乙氧基化物 協(xié)同作用，加快表面蠟質(zhì)的溶解，同時(shí)，烷基糖苷具有較強(qiáng)的廣譜抗菌活性，能夠避免后期 浸泡染色導(dǎo)致種子發(fā)生霉變，影響檢測(cè)效率及檢測(cè)結(jié)果。本發(fā)明發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量試驗(yàn)后發(fā) 現(xiàn)，葡萄糖酸鋅中的鋅離子能夠加速種子的呼吸作用，從而縮短染色所需時(shí)間，提高染色效 率。
[0014] 本發(fā)明的有益效果為： (1)本發(fā)明將獐茅種子通過(guò)含有烷基糖苷及脂肪酸甲酯乙氧基化物的水溶液進(jìn)行預(yù)處 理，能夠縮短浸泡時(shí)間，減少對(duì)種子的機(jī)械性損傷，同時(shí)減少染色過(guò)程中種子霉變。
[0015] (2)本發(fā)明將TTC溶液同葡萄糖酸鋅溶液進(jìn)行復(fù)配，能夠快速有效的檢測(cè)獐茅種 子生活力，對(duì)于草地利用和生態(tài)保護(hù)具有重要的實(shí)踐意義。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 圖1為獐茅種子染色后200倍顯微鏡下圖譜。
[0017] 其中：（1)_ (5)為生活力的種子，（6)- (9)為無(wú)生活力種子。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明。
[0019] 溶液的制備： 1. TTC溶液的配制方法：準(zhǔn)備兩種溶液：溶液I :在1000ml水中溶解9. 078g磷酸二氫 鉀（KH2P04);溶液II :在1000ml水中溶解9. 472g磷酸氫二鈉（Na2HP04)，或在1000ml水中 溶解11. 876g磷酸氫二鈉（Na2HP04 ? 2H20)。取溶液I 2份和溶液II 3份混合得到緩沖溶 液。緩沖溶液PH值保持在6. 5-7. 5范圍內(nèi)。按照比例在緩沖溶液里溶入四氮唑粉末，獲得 確定濃度。裝入棕色試劑瓶，貯存于4°C條件下備用。
[0020] 2.乳酸苯酚透明級(jí)的配制方法：將10g苯酚加入10mL的蒸餾水，加熱溶解后，加 入l〇g乳酸（比重1. 21)及20g甘油即可。
[0021] 獐茅種子生活力的計(jì)算方法：獐茅種子生活力=胚部染成紅色的種子數(shù)/種子總 數(shù) X100%。
[0022] 本發(fā)明所使用的烷基糖苷為APG0810。
[0023] 實(shí)施例1 一種快速檢測(cè)獐茅種子生活力的方法，包括以下步驟： (1) 首先將50粒獐茅種子（2014年在山東省壽光縣北部采集）在1. 2mg/L臭氧水中浸 泡2min，取出加入含有8%烷基糖苷及12%脂肪酸甲酯乙氧基化物的水溶液中浸種，待種子 吸脹均一后，然后沿靠近種胚3/4處橫切； (2) 將獐茅種子有種胚一端用質(zhì)量百分比為1%的TTC溶液及質(zhì)量百分比為0. 3%的葡 萄糖酸鋅溶液(本發(fā)明所使用的葡萄糖酸鋅溶液為葡萄糖酸鋅的水溶液，以下實(shí)施例均同 此)按照質(zhì)量比5:1組成的混合液置于30°C暗環(huán)境下染色，然后用蒸餾水沖洗2遍，再以乳 酸苯酚透明劑在38°C條件下浸種處理30min染色后的種子，觀察獐茅種子染色情況，染色 均勻、一致，呈鮮紅色，胚形態(tài)正常，胚根尖及子葉邊緣顏色稍暗的為正常有生活力的