便攜式植物花粉生活力測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物培育技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種便攜式植物花粉生活力測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]花粉生活力，又稱花粉活力，是指花粉具有存活、生長、萌發(fā)或發(fā)育的能力，其受自身遺傳特性和外界因素的影響。在育種工作中，珍貴、稀有遺傳種質(zhì)的貯備很重要，由于成熟花粉包含著植物的全部遺傳信息，其貯藏是有效利用珍稀種質(zhì)的簡捷、高效途徑，而植物花粉生活力檢測是植物育性研究的一個重要內(nèi)容。植物花粉生活力的測定是反映植物自然育性的一個重要指標(biāo)，在瀕危植物的保育工作中取到重要作用，因此，在植物花粉育種時都需要對花粉生活力進(jìn)行檢測?，F(xiàn)有植物花粉生活力測定方法較多，如碘一碘化鉀法、TTC法、無機(jī)酸法、熒光染色法、培養(yǎng)基法等，但是以上方法都是針對已采集好、儲存好的花粉進(jìn)行花粉生活力測定，不適用于野外對自然條件下植物花粉生活力的直接檢測。
[0003]上述現(xiàn)有技術(shù)中針對野外自然條件下植物花粉生活力的測定中存在以下缺點:一方面除培養(yǎng)基法外，其他測定方法的實驗藥品以液體為主不易于野外攜帶；另一方面，現(xiàn)有技術(shù)中的植物花粉均需要在短暫時間溫箱培養(yǎng)后使用顯微鏡進(jìn)行觀察統(tǒng)計，而野外實驗無法攜帶溫箱，也不便于攜帶顯微鏡；此外現(xiàn)有檢測方法均是直接采集花粉進(jìn)行儲運后在實驗室進(jìn)行測定，這一過程將對自然條件下的數(shù)據(jù)的真實度有很大的影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供了一種便攜式植物花粉生活力測定方法。
[0005]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0006]—種便攜式植物花粉生活力測定方法，包括如下步驟:
[0007]準(zhǔn)備固體培養(yǎng)基，具體為將配置好的固體培養(yǎng)基在溶化狀態(tài)下，均勻涂布在在載玻片上；
[0008]存放載玻片，具體為將涂布有固體培養(yǎng)基的載玻片存放于便攜式冷藏箱中；
[0009]植物花粉的儲存，具體為取出冷藏箱中的載玻片，將采集到的植物花粉涂布于載玻片上的固體培養(yǎng)基上后，將涂布有植物花粉的載玻片繼續(xù)放入所述便攜式冷藏箱中冷藏；
[0010]實驗室生活力檢測，具體為取出冷藏后涂布有植物花粉的載玻片，對其進(jìn)行溫箱培養(yǎng)和視野觀察。
[0011]現(xiàn)有技術(shù)在花粉貯藏過程中，一般是將采集到的花粉直接冷藏后，再在實驗室進(jìn)行花粉涂布和檢測，其中花粉的貯藏溫度條件對花粉生活力影響最大，而單純的低溫貯藏能夠延長花粉壽命但會降低花粉萌發(fā)率，可能是由于低溫會使細(xì)胞脫水從而影響花粉生活力；但本發(fā)明將植物花粉先涂布在培養(yǎng)基上，再進(jìn)行冷藏，會最大程度地減少細(xì)胞脫水，而后再提供適合植物花粉生活的微環(huán)境，使其萌發(fā)，能夠更真實地反映植物花粉野外自然萌發(fā)狀態(tài)，且延長了植物花粉的壽命。
[0012]較佳地，所述固體培養(yǎng)基包括蔗糖、硼酸、瓊脂和水，其用量和其它成分還可根據(jù)不同植物和不同的實驗要求進(jìn)行調(diào)整。
[0013]較佳地，所述固體培養(yǎng)基在所述載玻片上的厚度為1.5?2_。
[0014]較佳地，所述便攜式冷藏箱為帶有冰袋的植物花粉采集箱或車載移動冰箱。
[0015]較佳地，所述存放載玻片具體為將涂布有固體培養(yǎng)基的所述載玻片排列于玻片架上后，將所述玻片架固定于所述便攜式冷藏箱中；將所述載玻片存放于玻片架上，使其相互隔離，防止載玻片上的培養(yǎng)基沾粘，影響后續(xù)的植物花粉的生活力測定。
[0016]較佳地，所述便攜式冷藏箱中的溫度為O?6°C。
[0017]較佳地，所述“將涂布有植物花粉的載玻片繼續(xù)放入所述便攜式冷藏箱中冷藏”中的冷藏時間為O?48h，考慮到冷藏時間越長，對植物花粉的萌發(fā)影響越大，為更真實準(zhǔn)確地檢測到植物花粉生活力，因此，建議冷藏時間小于48小時，但在特殊情況下，也可以超過48小時，需根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇。
[0018]較佳地，所述溫箱培養(yǎng)具體為將涂布有植物花粉的載破片放置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，在20?35°C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2min?24h。
[0019]較佳地，所述視野觀察具體為將溫箱培養(yǎng)后的植物花粉在顯微鏡下選取視野，統(tǒng)計該視野中的植物花粉萌發(fā)率。
[0020]本發(fā)明針對野外自然條件下植物花粉生活力測定的要求，在培養(yǎng)基法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，將其涂布在載玻片上后冷藏，而方便在野外采集植物花粉后，直接涂布在載玻片上，繼續(xù)冷藏，在野外采集完成后，再進(jìn)行實驗室內(nèi)的植物花粉生活力檢測，使其可便攜于野外進(jìn)行測定。上述檢測方法操作簡單、使用方便，不但延長了植物花粉的壽命，且更真實地反映野外植物花粉自然萌發(fā)狀態(tài)。
【附圖說明】
[0021]圖1、本發(fā)明實施例的視野觀察圖；
[0022]圖2、本發(fā)明對比例的視野觀察圖。
【具體實施方式】
[0023]下面通過與現(xiàn)有技術(shù)中的培養(yǎng)基法相比較，對本發(fā)明的【具體實施方式】作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0024]在此選用野外紅樹植物角果木的花粉為植物花粉樣品，實施例選用本發(fā)明的測定方法，而對比例選用現(xiàn)有技術(shù)中固體培養(yǎng)基法來進(jìn)行測定。
[0025]首先準(zhǔn)備固體培養(yǎng)基，實施例和對比例選用同樣的培養(yǎng)基，其配方為10%的蔗糖，3%的瓊脂，0.02%的硼酸，其余為水，其中配方量單位均為g/ml ;其中蔗糖10g、瓊脂3g、硼酸0.02g和水10mL,在沸水浴中將上述瓊脂溶化在水中后與蔗糖和硼酸混合后，加水至10mL后冷卻備用。
[0026]實施例
[0027]首先將配置好的固體培養(yǎng)基溶化，在其溶化狀態(tài)下，將培養(yǎng)基均勻涂布在在載玻片上，使之固化，其中固體培養(yǎng)基在載玻片上的厚度范圍為1.5?2mm ;
[0028]隨后將涂布有固化好的培養(yǎng)基的載玻片按序排列于玻片架上后，再玻片架固定于便攜式冷藏箱中；將所述載玻片存放于玻片架上，使其相互隔離，防止載玻片上的培養(yǎng)基沾粘，影響后續(xù)的植物花粉的生活力測定；其中本實施例中的便攜式冷藏箱為帶有冰袋的植物花粉采集箱，其至少可以保持O?6°C的微環(huán)境8h，也可以選用車載小冰箱來存放，其溫度更穩(wěn)定，且可以長期保持該溫度；
[0029]接著采集紅樹植物角果木的花粉，并對其儲存，具體為取出冷藏箱中的載玻片，將采集到的植物花粉涂布于載玻片上的固體培養(yǎng)基上后，將涂布有植物花粉的載玻片繼續(xù)放入便攜式冷藏箱中冷藏，一般可冷藏O?24h，本實施例中紅樹植物角果木的花粉冷藏Sh ;
[0030]最后進(jìn)行實驗室生活力檢測，取出冷藏后涂布有植物花粉的載玻片，將其放置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，在30°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h后，進(jìn)行顯微鏡檢測，其紅樹植物角果木的花粉萌發(fā)率為34.5%，其中一視野如圖1所示。
[0031]對比例
[0032]首先將配置好的固體培養(yǎng)基溶化，在其溶化狀態(tài)下，將培養(yǎng)基均勻涂布在在載玻片上，使之固化，其中固體培養(yǎng)基在載玻片上的厚度范圍為1.5?2mm ;;接著取野外采集的紅樹植物角果木的花粉，該花粉在試管中冷藏貯存8h，將在試管中冷藏的花粉直接涂布載玻片的培養(yǎng)基上；隨后同實施例相同，將該載破片放置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，在30°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h后，進(jìn)行顯微鏡檢測，其紅樹植物角果木的花粉萌發(fā)率為8.6%，其中一視野如圖2所示。
[0033]由于花粉的貯藏溫度條件對花粉生活力影響最大，而單純的低溫貯藏能夠延長花粉壽命但會降低花粉萌發(fā)率，可能是由于低溫會使細(xì)胞脫水從而影響花粉生活力；而本發(fā)明將植物花粉先涂布在培養(yǎng)基上，再進(jìn)行冷藏，會最大程度地減少細(xì)胞脫水，而后再提供適合植物花粉生活的微環(huán)境，使其萌發(fā)，能夠更真實地反映植物花粉野外自然萌發(fā)狀態(tài)，且延長了植物花粉的壽命。
[0034]上述實施例，只是本發(fā)明的較佳實施例，并非用來限制本發(fā)明實施范圍，故凡以本發(fā)明權(quán)利要求所述的構(gòu)造、特征及原理所做的等效變化或修飾，均應(yīng)包括在本發(fā)明權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種便攜式植物花粉生活力測定方法，其特征在于，包括如下步驟: 準(zhǔn)備固體培養(yǎng)基，具體為將配置好的固體培養(yǎng)基在溶化狀態(tài)下，均勻涂布在載玻片上; 存放載玻片，具體為將涂布有固體培養(yǎng)基的載玻片存放于便攜式冷藏箱中； 植物花粉的儲存，具體為取出冷藏箱中的載玻片，將采集到的植物花粉涂布于載玻片上的固體培養(yǎng)基上后，將涂布有植物花粉的載玻片繼續(xù)放入所述便攜式冷藏箱中冷藏；實驗室生活力檢測，具體為取出冷藏后涂布有植物花粉的載玻片，對其進(jìn)行溫箱培養(yǎng)和視野觀察。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便攜式植物花粉生活力測定方法，其特征在于:所述固體培養(yǎng)基包括蔗糖、硼酸、瓊脂和水。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便攜式植物花粉生活力測定方法，其特征在于:所述固體培養(yǎng)基在所述載玻片上的厚度為1.5?2mm。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便攜式植物花粉生活力測定方法，其特征在于:所述便攜式冷藏箱為帶有冰袋的植物花粉采集箱或車載移動冰箱。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便攜式植物花粉生活力測定方法，其特征在于:所述存放載玻片具體為將涂布有固體培養(yǎng)基的所述載玻片排列于玻片架上后，將所述玻片架固定于所述便攜式冷藏箱中。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便攜式植物花粉生活力測定方法，其特征在于:所述便攜式冷藏箱中的溫度為O?6°C。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便攜式植物花粉生活力測定方法，其特征在于:所述“將涂布有植物花粉的載玻片繼續(xù)放入所述便攜式冷藏箱中冷藏”中的冷藏時間為O?48h。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便攜式植物花粉生活力測定方法，其特征在于:所述溫箱培養(yǎng)具體為將涂布有植物花粉的載破片放置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，在20?35°C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2min?24h。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便攜式植物花粉生活力測定方法，其特征在于:所述視野觀察具體為將溫箱培養(yǎng)后的植物花粉在顯微鏡下選取視野，統(tǒng)計該視野中的植物花粉萌發(fā)率。
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物培育技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種便攜式植物花粉生活力測定方法，首先準(zhǔn)備固體培養(yǎng)基，將配置好的固體培養(yǎng)基在溶化狀態(tài)下，均勻涂布在載玻片上；隨后存放載玻片，將涂布有固體培養(yǎng)基的載玻片存放于便攜式冷藏箱中；接著進(jìn)行植物花粉的儲存，取出冷藏箱中的載玻片，將采集到的植物花粉涂布于載玻片上的固體培養(yǎng)基上后，將涂布有植物花粉的載玻片繼續(xù)放入所述便攜式冷藏箱中冷藏；最后進(jìn)行實驗室植物花粉生活力檢測；本發(fā)明操作簡單、使用方便，不但延長了植物花粉的壽命，并且能夠更真實地反映植物花粉野外自然萌發(fā)狀態(tài)。
【IPC分類】C12Q1/02
【公開號】CN105132516
【申請?zhí)枴緾N201510597870
【發(fā)明人】張穎
【申請人】海南師范大學(xué), 張穎, 嚴(yán)延良
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年9月18日