長(zhǎng)柄側(cè)耳菌株及其培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及真菌栽培領(lǐng)域和真菌液體發(fā)酵領(lǐng)域，尤其涉及長(zhǎng)柄側(cè)耳菌株及其培養(yǎng) 基、培養(yǎng)方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 長(zhǎng)柄側(cè)耳為擔(dān)子菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬PleurtusspodotecusFr.的子實(shí) 體。別名為灰白側(cè)耳，可食用。此菌在自然界中侵害白楊、白樺樹(shù)木，使倒木、伐木等形成白 色腐木。其子實(shí)體肉質(zhì)，中等大小，散生或叢生。菌蓋扁半球形，漸平展為扇形，寬3-10cm; 菌面光滑，白色，中央淡黃色，干后黃褐色。菌肉厚，柔軟，白色，菌柄偏生至側(cè)生，近圓柱 形，中實(shí)，白色，長(zhǎng)4-12cm，粗0.5-1.5cm。菌褶白色，延生，稍稀。孢子無(wú)色，光滑，圓柱形， 8-10. 5ymX3-4iim。秋季于闊葉樹(shù)枯干上叢生。分布地區(qū)于吉林、云南、西藏等。長(zhǎng)柄側(cè) 耳肉質(zhì)細(xì)膩，味鮮可口，營(yíng)養(yǎng)豐富，子實(shí)體干品含有豐富的蛋白質(zhì)、粗多糖、粗纖維等，還含 有多種氨基酸、維生素和礦物元素，其粗多糖具有抗腫瘤、提高免疫力的功效，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道 長(zhǎng)柄側(cè)耳子實(shí)體的水提液對(duì)小白鼠的抑瘤率為72%。長(zhǎng)柄側(cè)耳中還含有麥角留醇、洛伐他 汀、甘露醇等次級(jí)代謝物。麥角留醇具有抗炎和抗癌作用；洛伐他汀具有降血脂和預(yù)防組織 纖維化的作用；甘露醇具有脫水、利尿作用。甘露醇可以降低顱內(nèi)壓、眼內(nèi)壓、防止腎小管壞 死等；長(zhǎng)柄側(cè)耳多糖為免疫增強(qiáng)劑和免疫激活劑，提高人體的免疫力，增強(qiáng)抗病的能力。
[0003] 由于長(zhǎng)柄側(cè)耳是一種美食，同時(shí)又具有一定的藥效作用，目前市場(chǎng)對(duì)長(zhǎng)柄側(cè)耳的 需求越來(lái)越大，但是長(zhǎng)柄側(cè)耳野生資源較少，近年來(lái)的大量采摘已導(dǎo)致其種植資源瀕臨枯 竭。因此，為了開(kāi)發(fā)新資源，維護(hù)生態(tài)平衡，做到既保護(hù)資源，又利用資源，利用真菌的生物 學(xué)特性、結(jié)合長(zhǎng)柄側(cè)耳生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中靠菌絲體吸收營(yíng)養(yǎng)繁殖的特點(diǎn)，進(jìn)行分離、純化和選 育出優(yōu)良菌種并將其用于長(zhǎng)柄側(cè)耳的栽培或發(fā)酵具有重要的經(jīng)濟(jì)意義和社會(huì)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種長(zhǎng)柄側(cè)耳菌株及其培養(yǎng)基、培 養(yǎng)方法與應(yīng)用。本發(fā)明提供的長(zhǎng)柄側(cè)耳菌株生長(zhǎng)發(fā)育快，培養(yǎng)得到的子實(shí)體產(chǎn)量高，發(fā)酵得 到的菌絲代謝產(chǎn)物豐富。
[0005] 本發(fā)明提供了一種長(zhǎng)柄側(cè)耳菌，其保藏編號(hào)為CGMCCNo. 7359。
[0006] 本發(fā)明提供的菌株系從吉林省德惠市朱城子鄉(xiāng)楊樹(shù)枯木上生長(zhǎng)的長(zhǎng)柄側(cè)耳子實(shí) 體中經(jīng)過(guò)分離、純化、篩選，并通過(guò)系統(tǒng)選育而得到的性能穩(wěn)定的菌株。本發(fā)明提供的長(zhǎng)柄 側(cè)耳菌株菌落呈白色，菌絲為白色棉絮狀，茂密潔白。菌絲生長(zhǎng)發(fā)育速度快，適宜條件下4 天可長(zhǎng)滿全斜面。搖瓶培養(yǎng)或種子罐培養(yǎng)后菌液澄明，黃褐色，菌絲呈放射狀球體，有較濃 的水果香味。通過(guò)16X100倍生物顯微鏡檢查，菌絲淡黃色，粗壯，均勻，分枝多，鎖狀聯(lián)合 明顯可見(jiàn)，無(wú)雜菌污染。本發(fā)明提供的長(zhǎng)柄側(cè)耳菌株具有良好的穩(wěn)定性，代謝能力高，安全 性高，其傳代25代未見(jiàn)老化或退化，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間短，栽培生長(zhǎng)速度快，次生代謝產(chǎn)物含量 高，具有良好的食用和藥用價(jià)值。實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的發(fā)酵菌絲干燥后，長(zhǎng)柄側(cè) 耳多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)不少于3%;洛伐他汀含量不少于188. 00yg/g;麥角甾醇含量不少于 70.00yg/g〇
[0007] 本發(fā)明提供的保藏編號(hào)為CGMCCNo.7359的長(zhǎng)柄側(cè)耳菌的菌種保存于2°C~4°C， 長(zhǎng)期保存的菌種，須在180天左右轉(zhuǎn)管一次。如發(fā)現(xiàn)菌種的菌落稀薄，白色絮狀菌絲纖細(xì)、 顏色變深，說(shuō)明菌種已老化，則需進(jìn)行菌種復(fù)壯。
[0008]菌種復(fù)壯的方法為菌種基內(nèi)菌絲分離復(fù)壯、斷橋式脫毒技術(shù)或改變菌種培養(yǎng)基的 方法復(fù)壯菌種。
[0009]其中，菌種基內(nèi)菌絲分離復(fù)壯：選擇無(wú)污染、生長(zhǎng)旺盛的菌種，用解剖針挑取先端 菌絲，接種在PDA培養(yǎng)基上，25 °C培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)。
[0010] 斷橋式脫毒技術(shù)：用常規(guī)法制備PDA培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基凝固后，在無(wú)菌條件下，用 接種耙把培養(yǎng)基斜面最前端較薄的培養(yǎng)基斷開(kāi)約1厘米，把待接母種接在試管中間培養(yǎng)基 上，當(dāng)菌絲長(zhǎng)到斷開(kāi)處時(shí)，則會(huì)繼續(xù)伸長(zhǎng)，穿越斷開(kāi)處，伸入前端的小塊培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)斷裂 又伸長(zhǎng)，菌絲顯得格外粗壯、有力。轉(zhuǎn)接時(shí)，挑取小塊培養(yǎng)基最前端的一塊組織，按常規(guī)接 種，這樣經(jīng)過(guò)3-4次尖端挑取培養(yǎng)，便可甩掉病毒。
[0011] 改變菌種培養(yǎng)基的方法復(fù)壯菌種：將菌種PDA培養(yǎng)基換成馬鈴薯綜合培養(yǎng)基（葡 萄糖2%，馬鈴薯20%，瓊脂2%，腿250 40.3%，]\%5040.15%，￥810.001%邛11自然）或換成 完全培養(yǎng)基（葡萄糖2%，蛋白胨0.2%，瓊脂1.5%，KH2S040 . 046%，MgS040.05%，，pH自 然）培養(yǎng)。選擇無(wú)污染、生長(zhǎng)旺盛的菌種，用解剖針挑取先端菌絲，接種在PDA培養(yǎng)基上， 25 °C培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)。
[0012] 本發(fā)明提供的保藏編號(hào)為CGMCCNo.7359的長(zhǎng)柄側(cè)耳菌的菌種保存過(guò)程中的培養(yǎng) 基為PDA培養(yǎng)基。
[0013]PDA培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為：葡萄糖2%，馬鈴薯20%，瓊脂2%，pH自然。
[0014] 本發(fā)明提供的保藏編號(hào)為CGMCCNo. 7359的長(zhǎng)柄側(cè)耳菌的菌種用于栽培或發(fā)酵罐 培養(yǎng)前，需先制備種子。
[0015] 本發(fā)明提供了保藏編號(hào)為CGMCCNo.7359的長(zhǎng)柄側(cè)耳菌的種子培養(yǎng)基，包括斜面 培養(yǎng)基、搖瓶培養(yǎng)基、種子罐培養(yǎng)基；
[0016] 其中，斜面培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基；
[0017]搖瓶培養(yǎng)基中包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：2. 5 %~3. 5 %碳源、1 %~2 %氮源、 0? 1%~0? 15%KH2S04、0. 1%~0? 15%MgS04,自然pH值；
[0018] 種子罐培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：1 %~4%碳源、0. 2%~4%氮源和 0? 1%~0? 15%KH2P04,自然pH值；
[0019] 搖瓶培養(yǎng)基中，碳源為蔗糖或葡萄糖；氮源為蛋白胨或酵母粉；
[0020] 種子罐培養(yǎng)基中，碳源為蔗糖、葡萄糖或玉米粉中一種或兩者以上的混合物；氮源 為麥麩汁、蛋白胨、酵母粉或豆餅粉中一種或兩者以上的混合物。
[0021] 在一些實(shí)施例中，搖瓶培養(yǎng)基中包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：蔗糖2%~3%，蛋白 胨 1%~2%，KH2S040. 1%~0? 15%，0. 1%~0? 15%MgS04,自然pH值。
[0022] 在一些實(shí)施例中，搖瓶培養(yǎng)基中包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：葡萄糖2%~3%，酵 母粉 1%~2%，KH2S040. 1%~0? 15%，0. 1%~0? 15%MgS04，自然pH值。
[0023] 在一些實(shí)施例中，搖瓶培養(yǎng)基中包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：蔗糖3%，蛋白胨2%， KH2S040. 1 %，MgS040. 1 %，自然pH值。
[0024] 在一些實(shí)施例中，種子罐培養(yǎng)基中包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：蔗糖1%~3%，麥 麩汁 1%~3%，KH2P040. 1%~0? 15%，自然pH值。
[0025] 在一些實(shí)施例中，種子罐培養(yǎng)基中包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：葡萄糖1%~3%， 蛋白胨 0? 2%~2%，KH2P040. 1%~0? 15%，自然pH值。
[0026] 在一些實(shí)施例中，種子罐培養(yǎng)基中包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：玉米粉2%~4%， 酵母粉 0? 2%~2%，KH2P040. 1%~0? 15%，自然pH值。
[0027] 在一些實(shí)施例中，種子罐培養(yǎng)基中包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：玉米粉2%~4%， 豆餅粉2%~4%，KH2P040. 1%~0? 15%，自然pH值。
[0028] 在一些實(shí)施例中，種子罐培養(yǎng)基中包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：鹿糖3%，麥麩汁 2%，KH2P040. 1%，自然pH值。
[0029] 本發(fā)明還提供了保藏編號(hào)為CGMCCNo. 7359的長(zhǎng)柄側(cè)耳菌的種子培養(yǎng)方法，包括 以下步驟：
[0030] 步驟1 :將保藏編號(hào)為CGMCCNo. 7359的菌種接種于本發(fā)明提供的斜面培養(yǎng)基， 25°C±3°C培養(yǎng)90h~96h，獲得斜面菌絲；
[0031] 步驟2 :將斜面菌絲接種于本發(fā)明提供的搖瓶培養(yǎng)基，25°C±3°C，轉(zhuǎn)速160r/ min~220r/min，培養(yǎng)140h~150h，獲得搖瓶菌液；
[0032] 步驟3 :將搖瓶菌液接種于本發(fā)明提供的種子罐培養(yǎng)基，25°C±3°C培養(yǎng)100h~ 150h，獲得保藏編號(hào)為CGMCCNo. 7359的長(zhǎng)柄側(cè)耳菌種子。
[0033] 作為優(yōu)選，步驟1中培養(yǎng)的溫度為25°C± 1°C。
[0034] 在一些實(shí)施例中，斜面菌絲在接種于搖瓶培養(yǎng)基前可于2°C~4°C保存。
[0035] 在一些實(shí)施例中，斜面菌絲的保存時(shí)間不大于30d。
[0036] 作為優(yōu)選，步驟2中斜面菌絲與搖瓶培養(yǎng)基的比例為1:6。
[0037] 具體的，步驟2中每個(gè)斜面培養(yǎng)基接種6個(gè)搖瓶。
[0038] 作為優(yōu)選，步驟2中培養(yǎng)的溫度為25°C± 1°C，時(shí)間為144h。
[0039] 作為優(yōu)選，經(jīng)步驟2培養(yǎng)，每升發(fā)酵液中菌絲干重不小于12g。
[0040] 經(jīng)步驟2培養(yǎng)，菌液澄明，黃褐色，菌絲呈放射狀球體，有較濃的水果香味，無(wú)雜菌 污染。
[0041] 作為優(yōu)選，步驟3中，搖瓶菌液與種子罐培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:10。
[0042] 作為優(yōu)選，步驟3中培養(yǎng)的條件為通入無(wú)菌空氣，氣流量為1:lv/vmin。
[0043] 作為優(yōu)選，步驟2中培養(yǎng)的溫度為25°C± 1°C，時(shí)間為120h。
[0044] 作為優(yōu)選，經(jīng)步驟3培養(yǎng)，每升發(fā)酵液中菌絲干重不小于15g，pH值為5. 5~6,還 原糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%~5%，氨基氮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~20%。
[0045] 經(jīng)步驟3培養(yǎng)，鏡檢菌絲均勻，粗壯，分枝多，鎖狀聯(lián)合明顯可見(jiàn)；發(fā)酵液呈黃棕 色、澄明，有淡淡的水果香味；無(wú)雜菌污染。
[0046] 采用本發(fā)明提共的方法活化培養(yǎng)種子，得到的種子生命力強(qiáng)，活性高，長(zhǎng)勢(shì)好，代 謝產(chǎn)物多。
[0047] 一種保藏編號(hào)為CGMCCNo. 7359的柄側(cè)耳菌的固體培養(yǎng)基，包括如下質(zhì)量份的組 分：碳源60份~90份、氮源5份~38份、石膏0份~2份、蔗糖0份~2份、石灰0份~2 份；
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