菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種配方和培養(yǎng)法。
【背景技術(shù)】
[0002] 食用菌是中國(guó)最具現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展特征的優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)之一。這不僅因?yàn)橹袊?guó)是世界最 大的食用菌生產(chǎn)和消費(fèi)國(guó)，食用菌生產(chǎn)量大面廣，而且更重要的是食用菌產(chǎn)業(yè)在生物技術(shù) 產(chǎn)業(yè)化和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展中的良好載體和突出地位。目前我國(guó)的食用菌產(chǎn)業(yè)體系，有很多 不適應(yīng)全球市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的要素，其中最主要的是產(chǎn)業(yè)經(jīng)營(yíng)的集約化、專(zhuān)業(yè)化程度低，生產(chǎn)要素 落后，生產(chǎn)工藝不盡完善，缺乏關(guān)鍵技術(shù)的支撐，其中最具代表性的是菌種的集約化高效繁 育技術(shù)，成了產(chǎn)業(yè)面臨的主要瓶頸。目前普遍采用的傳統(tǒng)三級(jí)固體菌種繁育工藝，生產(chǎn)效率 低，培養(yǎng)周期長(zhǎng)，菌種染菌率高，無(wú)法突破手工化、作坊式低效生產(chǎn)模式，使規(guī)模企業(yè)與散戶(hù) 制種處在同一競(jìng)爭(zhēng)平臺(tái)，這是造成目前食用菌生產(chǎn)安全、質(zhì)量事故頻發(fā)的主要根源，也是食 用菌企業(yè)效益欠佳的主要原因。國(guó)外如日本、韓國(guó)食用菌工廠化生產(chǎn)中目前已普遍采用液 體菌種技術(shù)，而我國(guó)在此領(lǐng)域缺乏規(guī)模化生產(chǎn)成功的經(jīng)驗(yàn)與技術(shù)，所以加強(qiáng)菌種在規(guī)?；?生產(chǎn)中應(yīng)用的研發(fā)，利用現(xiàn)代生物科技和生物工程技術(shù)，實(shí)現(xiàn)菌種（菌袋）的高效繁育已迫 在眉睫。
[0003] 傳統(tǒng)三級(jí)固體菌種繁育工藝有3步（試管母種-瓶裝原種-瓶裝栽培種）：第1級(jí) 為試管母種，配方為PDA為主（去皮鮮馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂20、水1000ml)，培 養(yǎng)時(shí)間7-15天（根據(jù)菇種而異），1支母種轉(zhuǎn)接5瓶原種。第2級(jí)為瓶裝原種（750ml)，配 方以木屑、麩皮培養(yǎng)基為主（如香菇原種配方細(xì)木屑78%、麩皮20%、白糖1%、石膏1%， 含水量60% )，培養(yǎng)時(shí)間45-60天（根據(jù)菇種而異），1瓶原種可轉(zhuǎn)接50瓶栽培種。第3級(jí) 為瓶裝栽培種（750ml)，配方以木屑、麩皮培養(yǎng)基為主（同原種配方，培養(yǎng)時(shí)間35-45天（根 據(jù)菇種而異），1瓶栽培種（濕重600克培養(yǎng)料）可轉(zhuǎn)接20個(gè)出菇袋，每袋出菇袋需要固體 菌種30克。上述3級(jí)種工藝全程培養(yǎng)周期87-120天。該方法所得的菌種按照常規(guī)的接種 出菇袋法培育鮮菇時(shí)染菌率一般為5-10%。備注說(shuō)明：上述固體菌種在原種（第2級(jí)）、栽 培種（第3級(jí)）階段由于培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，培養(yǎng)環(huán)境差，加上封口不規(guī)范，會(huì)在發(fā)滿(mǎn)菌絲的成品 菌種表面隱形染菌，這種隱性感染的菌種被接種后，會(huì)變成顯性的污染（此時(shí)雜菌比食用 菌菌絲生長(zhǎng)快）。所以現(xiàn)有固體菌種風(fēng)險(xiǎn)很大，且很難避免。
[0004]目前現(xiàn)有的食用菌液體發(fā)酵菌種（也稱(chēng)深層發(fā)酵）工藝流程為3步（試管母 種-三角瓶搖床發(fā)酵液體原種-發(fā)酵罐深層發(fā)酵液體栽培種）：第1級(jí)為母種，（制作法 同前）培養(yǎng)時(shí)間7-15天（根據(jù)菇種而異），1支母種轉(zhuǎn)接2-3瓶三角瓶搖床發(fā)酵液體原種 (200ml)。第2級(jí)為三角瓶搖床發(fā)酵液體原種（500ml三角瓶中放入200ml培養(yǎng)液），配方 以去皮鮮馬鈴薯、葡萄糖、酵母膏、蛋白胨等為主，搖床培養(yǎng)時(shí)間7-10天（根據(jù)菇種而異）， 1瓶液體原種可轉(zhuǎn)接2000ml的3級(jí)發(fā)酵罐培養(yǎng)液（10%接種量）。第3級(jí)為發(fā)酵罐深層發(fā) 酵液體栽培種，配方同三角瓶搖床液體原種培養(yǎng)基，發(fā)酵需專(zhuān)用深層發(fā)酵罐或發(fā)酵系統(tǒng)，培 養(yǎng)時(shí)間3-5天（根據(jù)菇種而異），1升液體菌種可轉(zhuǎn)接100個(gè)出菇袋。上述液體菌種繁育工 藝全程培養(yǎng)周期17-30天。該方法所得的菌種按照常規(guī)的接種出菇袋法培育鮮菇時(shí)染菌率 一般為2-5%。備注說(shuō)明：液體發(fā)酵菌種工藝?yán)碚撋暇N純度高，大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)的染菌率 在1%-5%之間（3級(jí)發(fā)酵罐中），加上染菌（細(xì)菌性為主）往往在發(fā)酵后期，常規(guī)在線檢驗(yàn) 很難發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致用液體發(fā)酵菌種接種產(chǎn)生大批量出菇袋污染的生產(chǎn)事故，教訓(xùn)慘痛。另外， 液體菌種由于培養(yǎng)需用高濃度的有機(jī)氮和糖源等營(yíng)養(yǎng)成分，這些成分殘留在菌液中被接入 出菇袋，由于操作時(shí)不可避免有雜菌帶入，所以殘留的營(yíng)養(yǎng)就成為了雜菌的溫床，增加了出 菇袋接種后的污染風(fēng)險(xiǎn)。這是液體發(fā)酵菌種不能大規(guī)模應(yīng)用于食用菌生產(chǎn)的主要問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種培養(yǎng)周期短、菌種質(zhì)量高的菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌 種培養(yǎng)法。
[0006] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)法，將菇類(lèi)母種 依次進(jìn)行以下步驟：
[0007] 1)、菌種制作：
[0008] 將菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)瓶中，蓋好微孔膜透氣蓋，高溫高壓滅菌 (即在121°C、0.llMpa下進(jìn)行高溫高壓滅菌90分鐘），得滅菌后培養(yǎng)基；
[0009] 備注說(shuō)明：可選用上海頌拓實(shí)業(yè)有限公司ZP14-200透氣培養(yǎng)瓶，其自帶微孔膜透 氣蓋。
[0010] 按照每200g的菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基對(duì)應(yīng)4. 8~5. 2g(較佳為5g)菇類(lèi)母種 的接種量，于無(wú)菌條件下在滅菌后培養(yǎng)基中接入菇類(lèi)母種，17~25°C黑暗培養(yǎng)19~26天， 得液化專(zhuān)用固體菌種；此時(shí)菌絲發(fā)滿(mǎn)全瓶；
[0011] 備注說(shuō)明：
[0012] 1、菇類(lèi)母種按照常規(guī)技術(shù)即可獲得；
[0013] 2、為了證明本發(fā)明所得液化專(zhuān)用固體菌種的純度和種性，可對(duì)步驟1)所得的液 化專(zhuān)用固體菌種進(jìn)行以下檢驗(yàn)：
[0014] ①、純度檢驗(yàn)，包括霉菌檢驗(yàn)、細(xì)菌檢驗(yàn)，采用顯微鏡檢驗(yàn)和常規(guī)細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)；
[0015] 霉囷的檢測(cè)種類(lèi)為：木霉、青霉；
[0016]細(xì)菌的檢測(cè)種類(lèi)為：枯草芽孢桿菌。
[0017] ②、活力檢驗(yàn)，采用ttc法；
[0018] ③、感官檢驗(yàn)：包括無(wú)原基形成（即，沒(méi)有幼小的菇蕾形成）、培養(yǎng)瓶蓋完整密封、 標(biāo)簽正確等。
[0019] 2)、液化菌種制備：
[0020] 將液化專(zhuān)用固體菌種在無(wú)菌條件下先經(jīng)高速均質(zhì)（于8000~10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn) 速下均質(zhì)1~1. 5分鐘），然后按照1:100的稀釋度（即，在1重量份的液化專(zhuān)用固體菌種 中加入99重量份的無(wú)菌水；備注說(shuō)明：屬于二級(jí)稀釋?zhuān)┫♂專(zhuān)♂尯蟮乃梦铮╬H值自然為 6. 5-7. 0)在稀釋罐內(nèi)于溫度為20-23°C、通氣比為1 :0. 4(v/v/min)的條件下液化4~6分 鐘（較佳為5分鐘）；得菇類(lèi)液化菌種。
[0021] 作為本發(fā)明的菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法的改進(jìn)，所述菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基由以下 重量份的成分組成：
[0022]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法，其特征是：將菇類(lèi)母種依次進(jìn)行以下步驟： 1) 、囷種制作： 將菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)瓶中，蓋好微孔膜透氣蓋，高溫高壓滅菌，得滅菌 后培養(yǎng)基； 按照每200g的菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基對(duì)應(yīng)4. 8~5. 2g菇類(lèi)母種的接種量，于無(wú)菌 條件下在滅菌后培養(yǎng)基中接入菇類(lèi)母種，17~25°C黑暗培養(yǎng)19~26天，得液化專(zhuān)用固體 菌種； 2) 、液化菌種制備： 將液化專(zhuān)用固體菌種在無(wú)菌條件下先經(jīng)高速均質(zhì)，然后按照1:100的稀釋度稀釋?zhuān)?釋后的所得物在稀釋罐內(nèi)于溫度為20-23°C、通氣比為I:0.4(v/v/min)的條件下液化4~ 6分鐘；得菇類(lèi)液化菌種。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法,其特征是： 所述菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基由以下重量份的成分組成：
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法，其特征是：菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基 的制備方法為： 將玉米淀粉、細(xì)麩皮、小麥纖維素以及可能包含的石膏混合均勻，得配料I; 將葡萄糖、酵母浸膏、牛肉蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂加入水中，充分?jǐn)嚢?，得配料II; 將配料I和配料II充分混合后，得菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1~3任一所述的菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法，其特征是： 所述菇類(lèi)為香菇、木耳、金針菇、杏鮑菇、秀珍菇、海鮮菇、滑菇、真姬菇。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法，其特征是： 杏鮑菇液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基，其由以下重量份的成分組成：
步驟1)中，21~23°C黑暗培養(yǎng)19~21天，得液化專(zhuān)用固體菌種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法，其特征是： 金針菇液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基，其由以下重量份的成分組成：
步驟1)中，17~19°C黑暗培養(yǎng)19~21天，得液化專(zhuān)用固體菌種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法，其特征是： 秀珍菇液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基，其由以下重量份的成分組成：
步驟1)中，23~25°C黑暗培養(yǎng)19~21天，得液化專(zhuān)用固體菌種。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法，其特征是： 海鮮菇液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基，其由以下重量份的成分組成：
步驟1)中，20~22°C黑暗培養(yǎng)20~22天，得液化專(zhuān)用固體菌種。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法，其特征是： 香菇液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基，其由以下重量份的成分組成：
步驟1)中，22~24°C黑暗培養(yǎng)25~26天，得液化專(zhuān)用固體菌種。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種菇類(lèi)液化菌種培養(yǎng)法，依次進(jìn)行以下步驟：1)、菌種制作：將菇類(lèi)液化專(zhuān)用菌種培養(yǎng)基高溫高壓滅菌，于無(wú)菌條件下在滅菌后培養(yǎng)基中接入菇類(lèi)母種，17～25℃黑暗培養(yǎng)19～26天；2)、液化菌種制備：將所得的液化專(zhuān)用固體菌種經(jīng)稀釋處理，得菇類(lèi)液化菌種。采用本發(fā)明的方法能獲得具有高純度和高穩(wěn)定性的液化專(zhuān)用固體菌種，從而實(shí)現(xiàn)菌絲體高效增殖，可應(yīng)用于香菇、木耳、金針菇、杏鮑菇、秀珍菇、海鮮菇、滑菇、真姬菇等木腐菌液化。
【IPC分類(lèi)】A01G1-04
【公開(kāi)號(hào)】CN104620852
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510028909
【發(fā)明人】陳再鳴, 何伯偉, 陳青, 余維良, 鄭明海
【申請(qǐng)人】浙江大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年5月20日
【申請(qǐng)日】2015年1月20日