一種真姬菇液體菌種的快速制備方法及使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食用菌生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種真姬菇液體菌種的快速制備方法 及使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，真姬菇的生產(chǎn)液體菌種的方法多是采用斜面母種-一級(jí)搖瓶種-二級(jí)搖瓶 種-發(fā)酵罐培養(yǎng)液的方法生產(chǎn)，這種方法生產(chǎn)液體菌種周期長，成本高，易污染；而采用固 體菌種液化所得上清液接入到培養(yǎng)液中可快速制的發(fā)酵液，同傳統(tǒng)方法相比周期短，成本 低，技術(shù)簡單，成功率高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種真姬菇液體菌種的快速制備方法及使用方 法，該方法克服現(xiàn)有液體菌種培養(yǎng)過程中周期長，投資大，操作不便等不足。
[0004] 本發(fā)明的技術(shù)方案包括以下步驟： (1) 、配制培養(yǎng)基：將洗凈新鮮的馬鈴薯去皮，稱取300g切成小塊、小條或薄片，向其中 加水1000mL，煮沸20-30min，用事先浸濕擰干的4層紗布過濾去渣，收集液汁，并向其中 加入葡萄糖30g、蛋白胨5g，消泡劑0.3g，磷酸二氫鉀Ig以及硫酸鎂0.5g攪拌均勻，并 補(bǔ)足水分定容至1000ml，最后用氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH至5. 0-6. 0得到培養(yǎng)基； (2) 、裝瓶滅菌：按照每瓶裝入的液體量為培養(yǎng)瓶體積的60%，將配好的培養(yǎng)基裝入培 養(yǎng)瓶，封口后，放入高壓滅菌鍋中滅菌；所述的培養(yǎng)瓶為三角瓶、廣口的塑料瓶或玻璃瓶； (3) 固體菌種的液化處理：在無菌超凈工作臺(tái)中將固體菌種搗碎放入無菌水中洗滌靜 置取上清液； (4) 、接種：滅菌完成后，等培養(yǎng)液溫度冷卻到22°C以下后，接入固體菌種上清液； (5) 、培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)瓶放到搖床中避光密閉培養(yǎng)，培養(yǎng)4天后即可得到真姬菇 的液體菌種；所述搖床溫度控制在20-22°C，轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分鐘，濕度保持在60-70%。 [0005] 上述方案可進(jìn)一步優(yōu)選為： 所述步驟（2)中封口采用的是中間帶透氣孔的硅膠塞。
[0006] 所述步驟（2)中的高壓滅菌程序?yàn)?21°C下保持30min。
[0007] 所述步驟（3)中的固體菌種的液化處理是指用2倍體積的無菌水處理1倍體積的 固體菌種靜置所得上清液。
[0008] 所述步驟（4)中的固體菌種上清液按培養(yǎng)基體積的10%接入培養(yǎng)瓶。
[0009] 上述快速制備方法制備的真姬菇液體菌種的使用方法：用滅過菌的接種槍將菌液 接入到培養(yǎng)基中，蓋蓋后用保鮮膜將瓶口再封一次；當(dāng)菌絲萌發(fā)覆蓋瓶口之后將保鮮膜去 除。
[0010] 與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)： 1、本發(fā)明提供的方法不使用發(fā)酵罐，不需要通氣或者攪拌培養(yǎng)，可以減少投資，降低生 產(chǎn)成本，非常適合大批量的成產(chǎn)和推廣。
[0011] 2、本發(fā)明提供的方法快速制備的真姬菇液體菌種，及時(shí)使用能保證菌絲的良好活 性，樣品中菌絲濃度適中，培養(yǎng)液清澈透亮，便于觀察菌絲生長狀況，能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理污 染的菌種，減少因?yàn)榫N污染接種造成的不必要損失。
[0012] 3、本發(fā)明提供的方法不用電，不消耗能源，對(duì)環(huán)境沒有任何污染，符合國家節(jié)能環(huán) 保的產(chǎn)業(yè)政策。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 實(shí)施例1 1、 配制培養(yǎng)基：將洗凈新鮮的馬鈴薯去皮，稱取300g切成小塊、小條或薄片，向其中加 水1000mL，煮沸20-30min，用事先浸濕擰干的4層紗布過濾去渣，收集液汁，并向其中加 入葡萄糖30g、蛋白胨5g，消泡劑0.3g，磷酸二氫鉀Ig以及硫酸鎂0.5g攪拌均勻，并補(bǔ) 足水分定容至1000ml，最后用氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH至5. 0-6. 0得到培養(yǎng)基； 2、 裝瓶滅菌：按照每瓶裝入的液體量為培養(yǎng)瓶體積的60%，將配好的培養(yǎng)基裝入培養(yǎng) 瓶，封口后，放入高壓滅菌鍋中滅菌，在121°C下保持30min;所述的培養(yǎng)瓶為三角瓶、廣口 的塑料瓶或玻璃瓶； 3固體菌種的液化處理：在無菌超凈工作臺(tái)中將固體菌種搗碎放入無菌水中洗滌靜置 取上清液；優(yōu)選用2倍體積的無菌水處理1倍體積的固體菌種靜置所得上清液。
[0014] 4、接種：滅菌完成后，等培養(yǎng)液溫度冷卻到22°C以下后，按體積比為10%的比例接 入固體菌種濾液； 5、培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)瓶放到搖床中避光密閉培養(yǎng)，培養(yǎng)4天后即可得到真姬菇的 液體菌種；所述搖床溫度控制在20-22°C，轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分鐘，濕度保持在60-70%。
[0015] 6、使用：用滅過菌的接種槍將20ml菌液接入到培養(yǎng)基中，蓋蓋后用保鮮膜將瓶口 再封一次。
[0016] 下面將傳統(tǒng)制備的液體菌種與本發(fā)明制備的液體菌種做比較，結(jié)果如下表：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種真姬菇液體菌種的快速制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 、配制培養(yǎng)基：將洗凈新鮮的馬鈴薯去皮，稱取300g切成小塊、小條或薄片，向其中 加水1000mL，煮沸20-30min，用事先浸濕擰干的4層紗布過濾去渣，收集液汁，并向其中 加入葡萄糖30g、蛋白胨5g，消泡劑0.3g，磷酸二氫鉀Ig以及硫酸鎂0.5g攪拌均勻，并 補(bǔ)足水分定容至1000ml，最后用氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH至5. 0-6. 0得到培養(yǎng)基； (2) 、裝瓶滅菌：按照每瓶裝入的液體量為培養(yǎng)瓶體積的60%，將配好的培養(yǎng)基裝入培 養(yǎng)瓶，封口后，放入高壓滅菌鍋中滅菌；所述的培養(yǎng)瓶為三角瓶、廣口的塑料瓶或玻璃瓶； (3) 固體菌種的液化處理：在無菌超凈工作臺(tái)中將固體菌種搗碎放入無菌水中洗滌靜 置，得固體菌種的上清液； (4) 、接種：滅菌完成后，等培養(yǎng)液溫度冷卻到22°C以下后，接入固體菌種上清液； (5) 、培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)瓶放到搖床中避光密閉培養(yǎng)，培養(yǎng)4天后即可得到真姬菇 的液體菌種；所述搖床溫度控制在20-22°C，轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分鐘，濕度保持在60-70%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的真姬菇液體菌種的快速制備方法，其特征在于：所述步驟（2) 中封口采用的是中間帶透氣孔的硅膠塞。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的北蟲草液體菌種的快速制備方法，其特征在于：所述步驟（2) 中的高壓滅菌程序?yàn)?21°C下保持30min。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的真姬菇液體菌種的快速制備方法，其特征在于，所述步驟（3) 中的固體菌種的液化處理是指用2倍體積的無菌水洗滌1倍體積的固體菌種靜置所得上清 液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的真姬菇液體菌種的快速制備方法，其特征在于，所述步驟（4) 中的固體菌種上清液按培養(yǎng)基體積的10%接入培養(yǎng)瓶。
6. 權(quán)利要求1-5任一所述的快速制備方法制備的真姬菇液體菌種的使用方法，其特征 在于：用滅過菌的接種槍將菌液接入到培養(yǎng)基中，蓋蓋后用保鮮膜將瓶口再封一次；當(dāng)菌 絲萌發(fā)覆蓋瓶口之后將保鮮膜去除。
【專利摘要】一種真姬菇液體菌種的快速制備方法及使用方法，包括以下步驟：（1）、配制培養(yǎng)基：（2）、裝瓶滅菌：將配好的培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)瓶，封口后，放入高壓滅菌鍋中滅菌；（3）、固體菌種的液化處理：用無菌水洗滌靜置，取固體菌種所得的上清液；（4）接種：滅菌完成后，等培養(yǎng)液溫度冷卻后，接入固體菌種上清液；（5）、培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)瓶放到搖床中避光密閉培養(yǎng)，培養(yǎng)4天后即可得到真姬菇的液體菌種。本發(fā)明不使用發(fā)酵罐，不需要通氣或者攪拌培養(yǎng)，可以減少投資，降低生產(chǎn)成本，非常適合大批量的成產(chǎn)和推廣；制備的真姬菇液體菌種，及時(shí)使用能保證菌絲的良好活性，樣品中菌絲濃度適中，培養(yǎng)液清澈透亮，便于觀察菌絲生長狀況，能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理污染的菌種，減少因?yàn)榫N污染接種造成的不必要損失。
【IPC分類】A01G1-04
【公開號(hào)】CN104541975
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510000657
【發(fā)明人】劉霞, 周元科, 陳永民, 劉群濤, 劉濤
【申請(qǐng)人】山東晨陽菌業(yè)有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2015年1月4日