1.一種蕨類孢子的消毒及接種方法，其特征在于該方法先收集蕨類孢子，把蕨類孢子葉裝入硫酸紙袋中，標(biāo)記代號后置于通風(fēng)干燥處，待孢子自由脫落；把DNA純化柱，規(guī)格：吸附柱1ml、收集管2ml、1ml槍頭、純凈水在121℃高溫滅菌20-30min備用；用對折過的硫酸紙收集脫落在紙袋中的孢子，簡單的去除雜質(zhì)碎葉、環(huán)帶、鱗毛后沿著折痕倒入已滅菌的吸附柱中，蓋好蓋子，放入收集管中，并做好標(biāo)記，放置于離心管架上；在無菌條件下，加入600μl 75％乙醇，倒立純化柱1-2次，之后200-1200rpm離心20s；從加乙醇開始，直到完成離心，整個操作過程控制在25-35s內(nèi)；倒棄收集管中廢液，在無菌條件下加入600μl無菌水，反復(fù)吸打溶液使孢子懸濁，充分漂洗孢子，然后200-1200rpm離心20s，重復(fù)1-2次，洗脫乙醇；倒棄收集管中廢液，在無菌條件下加入600μl 0.1-0.2％氯化汞滅菌2-4min或2％次氯酸鈉消毒6-8min，反復(fù)吸打溶液使孢子懸濁充分滅菌，然后200-1200rpm離心20s；倒棄收集管中廢液，在無菌條件下加入600μl無菌水，反復(fù)吸打使孢子懸濁，充分漂洗孢子，然后200-1200rpm離心20s，此操作重復(fù)3-4次，使消毒液徹底洗脫；再向離心之后的吸附柱中添加600μl無菌水，反復(fù)吸打使之呈孢子懸濁液，吸取100μl孢子懸濁液接種到培養(yǎng)基上，實(shí)現(xiàn)接種。
2.一種蕨類孢子的消毒及接種方法，其特征在于該方法包括下述步驟：
步驟1：收集孢子，把蕨類孢子葉片裝入硫酸紙袋中，標(biāo)記代號后置于通風(fēng)干燥處，等孢子自由脫落；
步驟2：把DNA純化柱，規(guī)格：吸附柱1ml，收集管2ml、1ml槍頭、純凈水在121℃高溫滅菌20-30min備用；
步驟3：在對折過的硫酸紙片上鋪一層擦鏡紙，把自由脫落在硫酸紙袋中的孢子倒在擦鏡紙上，輕微抖動擦鏡紙進(jìn)行簡單的過濾，孢子可以通過擦鏡紙的孔隙，而碎葉、環(huán)帶、鱗毛等雜質(zhì)會留在擦鏡紙上達(dá)到簡單過濾的目的，然后把過濾后的孢子沿著折痕倒入已滅菌的吸附柱中，蓋好蓋子，放入收集管中，做好標(biāo)記，放置于離心管架上；
步驟4：在無菌操作臺上，打開吸附柱蓋，用1ml移液槍加入600μl 75％乙醇，蓋好蓋子消毒30s，期間倒立純化柱1-2次，在孢子消毒的同時，吸附柱內(nèi)部也得到滅菌，然后200-1200rpm離心20s，加乙醇，倒立純化柱，離心完成盡量控制在30s內(nèi)；
步驟5：取出吸附柱，倒棄收集管中廢液。吸附柱放回收集管中，放置于離心管架上。在無菌操作臺中，打開吸附柱蓋，用1ml移液槍加入600μl無菌水，反復(fù)吸打溶液充分漂洗孢子，然后200-1200rpm離心20s，重復(fù)1-2次；
步驟6：取出吸附柱，倒棄收集管中廢液，吸附柱放回收集管中，放置于離心管架，在無菌操作臺中，打開吸附柱蓋，用1ml移液槍加入600μl 0.1-0.2％氯化汞滅菌2-4min或2％次氯酸鈉消毒6-8min，反復(fù)吸打溶液使孢子懸濁充分滅菌，然后200-1200rpm離心20s；
步驟7：取出吸附柱，倒棄收集管中廢液，吸附柱放回收集管中，放置于離心管架上，在無菌操作臺中，打開吸附柱蓋，此時吸附柱及孢子已經(jīng)過乙醇，氯化汞或次氯酸鈉消毒處于無菌狀態(tài)，用1ml移液槍加入600μl無菌水，反復(fù)吸打使孢子懸濁，充分漂洗孢子，然后200-1200rpm離心20s；
步驟8：重復(fù)步驟7，3-4次；
步驟9：用1ml移液槍取600μl無菌水加入吸附柱中，反復(fù)吸打使之呈孢子懸濁液，吸取100μl孢子懸濁液接種到培養(yǎng)基上；
步驟10：把培養(yǎng)物移到溫度25±2℃暗培養(yǎng)3-5天，再移至光照條件培養(yǎng)2周后孢子萌發(fā)。
3.權(quán)利要求1或2所述的一種蕨類孢子的消毒及接種方法在蕨類離體保存過程中的應(yīng)用。