一種藍(lán)莓組培苗液體生根方法及專用培養(yǎng)容器的制造方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種藍(lán)莓組培苗液體生根方法以及專用培養(yǎng)容器，生根方法包括以下步驟：配制溶液，制備含一定種類和濃度激素的液體培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基分裝于吸頭盒中外盒中，放置支架，食用菌袋包裹后高壓蒸汽滅菌，接種，生根培養(yǎng)；專用培養(yǎng)容器由吸頭盒改造而來，包括：吸頭盒和設(shè)置于吸頭盒內(nèi)的支架，支架上形成有若干支架孔，支架的高度、孔數(shù)、孔徑與增殖新梢的長度、粗度相適應(yīng)。本發(fā)明的有益之處在于：通過優(yōu)化培養(yǎng)基配方、在吸頭盒中放置支架，使得藍(lán)莓組培苗瓶內(nèi)生根率大幅度提高，增殖新梢生根數(shù)、根長等根系質(zhì)量指標(biāo)也得到提升，不僅解決了液體生根技術(shù)缺少有效固定支撐物的問題，而且避免了固體培養(yǎng)基瓊脂凝固劑對(duì)組培苗的抑制。
【專利說明】一種藍(lán)莓組培苗液體生根方法及專用培養(yǎng)容器

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種促進(jìn)植物生根的方法，具體涉及一種利用液體培養(yǎng)基促進(jìn)藍(lán)莓組 培苗生根的方法，屬于植物栽培【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 藍(lán)莓（blueberry)又稱越橘，為杜鵑花科越橘屬多年生灌木，是具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià) 值和廣闊開發(fā)前景的新興樹種。果實(shí)藍(lán)色，果實(shí)大小因品種而異，單果重0.5?2. 5克。果 肉細(xì)膩、種子小，甜酸可口，風(fēng)味獨(dú)特，是當(dāng)今世界發(fā)展最快的第三代果樹的代表品種之一。 同時(shí)，藍(lán)莓果實(shí)營養(yǎng)豐富可直接鮮食，并具有極強(qiáng)的藥用價(jià)值和營養(yǎng)保健功能，在國內(nèi)外極 受歡迎，被國際糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品之一。
[0003] 植物組織培養(yǎng)是指在無菌和人工控制的環(huán)境條件下，利用人工培養(yǎng)基，對(duì)植物的 胚胎、器官、組織或細(xì)胞等進(jìn)行操作和培養(yǎng)，使其按人們的意愿增殖、生長或再生的一門學(xué) 科。植物組織培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)的主要組成部分，已滲透應(yīng)用到育種學(xué)、植物生理學(xué)、細(xì) 胞生物學(xué)及遺傳學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、林業(yè)，產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
[0004] 植物組織培養(yǎng)應(yīng)用于無性繁殖，育苗速度快，適宜于優(yōu)良品種的工廠化大規(guī)模繁 殖，還可以實(shí)現(xiàn)苗木的脫毒培養(yǎng)。
[0005] 組培苗生根是外植體通過腋芽萌發(fā)和不定芽發(fā)生再生形成完整植株的關(guān)鍵必備 步驟。
[0006] 液體生根技術(shù)是利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，完成植株再生。液體培養(yǎng)基是固 體培養(yǎng)基的對(duì)應(yīng)詞，培養(yǎng)基未加入凝固劑稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分、激素可自由擴(kuò) 散，外植體培養(yǎng)過程中一直保持均勻分布，所以有利于組織細(xì)胞生長，提高培養(yǎng)效果。
[0007] 液體生根技術(shù)應(yīng)用于藍(lán)莓增殖新梢生根缺少有效固定支撐物，故而很少見有這方 面研究報(bào)道。2011年關(guān)麗霞和韓德偉，研究了藍(lán)莓組培的淺層液體生根技術(shù)，生根效果良 好，同時(shí)，簡化了培養(yǎng)基配制、節(jié)約了成本80 %，不用洗根，減少了傷苗傷根。同年，廉家盛將 生物反應(yīng)器應(yīng)用于藍(lán)莓品種'美登'組培快繁體系建立。在其他研究中，也有采用蛭石、珍 珠巖及濾紙代替瓊脂凝固劑，進(jìn)行液體培養(yǎng)。然而，這些瓊脂替代物存在外植體易污染、接 種難操作、易受傷、不能有效固定、不能工廠化應(yīng)用等問題中的一個(gè)或多個(gè)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種簡便易行、成本低、且能夠使 藍(lán)莓組培苗瓶內(nèi)生根率、根系質(zhì)量大幅度提高的藍(lán)莓組培苗液體生根方法。
[0009] 為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：
[0010] 一種藍(lán)莓組培苗液體生根方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0011] (一）、配制溶液：配制B5培養(yǎng)基的大量元素母液、微量元素母液、有機(jī)物母液和鐵 鹽母液4種試驗(yàn)?zāi)敢?，配制lmg/ml IBA、lmg/ml IAA、lmg/ml NAA3種激素溶液；
[0012] (二）、制備培養(yǎng)基：稱取鹿糖30g，放入1000ml容器中，加冷蒸饋水500ml，加熱 攪拌使鹿糖溶化，依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有機(jī)物母液和5ml 鐵鹽母液加入到上述容器中，再分別添加〇.5ml IBA、0.3ml IAA、0. lml NAA3種激素溶液， 攪拌均勻，加蒸餾水至l〇〇〇ml，調(diào)pH至5. 4,趁熱將培養(yǎng)基分裝于吸頭盒外盒中，每盒裝 100ml，然后在吸頭盒外盒中放置支架，最后用食用菌袋包裹，高壓蒸汽滅菌；
[0013] (三）、接種：選取生長勢(shì)強(qiáng)的2-3cm增殖新梢作為外植體，超凈工作臺(tái)內(nèi)無菌操 作，每盒接種10-30個(gè)外植體，封口膜封邊；
[0014] (四）、生根培養(yǎng)：將接種有外植體的吸頭盒外盒擺放于組培室培養(yǎng)架上培養(yǎng)，待 根5條以上、平均根長lcm以上時(shí)，打開吸頭盒外盒移栽入基質(zhì)進(jìn)行馴化。
[0015] 前述的藍(lán)莓組培苗液體生根方法，其特征在于，在步驟（三）中，前述增殖新梢包 括：初代培養(yǎng)腋芽和繼代培養(yǎng)的不定芽、叢生芽。
[0016] 前述的藍(lán)莓組培苗液體生根方法，其特征在于，在步驟（四）中，生根培養(yǎng)的條件 為：
[0017] 培養(yǎng)溫度晝25°C、夜15°C，先暗培養(yǎng)1周，然后光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度30001X，光周期 16h光照/8h黑暗。
[0018] 本發(fā)明的有益之處在于：
[0019] 1、對(duì)培養(yǎng)基的配方進(jìn)行了優(yōu)化，使得藍(lán)莓組培苗生根率大幅度提高，增殖新梢生 根數(shù)、根長等根系質(zhì)量指標(biāo)也得到提升。
[0020] 2、在吸頭盒外盒中放置支架，解決了液體生根技術(shù)缺少有效固定支撐物的問題， 使得藍(lán)莓組培苗瓶內(nèi)生根率大幅度提高，增殖新梢生根數(shù)、根長等根系質(zhì)量指標(biāo)也得到提 升；另外，因不使用瓊脂凝固劑，故根系不易受傷、且降低了成本，方法簡便易行。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021] 圖1是本發(fā)明的用于藍(lán)莓組培苗液體生根的專用培養(yǎng)容器的一個(gè)具體實(shí)施例的 結(jié)構(gòu)示意圖。
[0022] 圖中附圖標(biāo)記的含義：1-吸頭盒外盒，2-支架，21-支架孔。

【具體實(shí)施方式】
[0023] 以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作具體的介紹。
[0024] 實(shí)施本發(fā)明的藍(lán)莓組培苗液體生根的方法時(shí)，需要使用專門的培養(yǎng)容器與其配 套，參照?qǐng)D1，該專用的培養(yǎng)容器由吸頭盒改造而來，具體包括兩大部分：吸頭盒外盒1和支 架2,支架2上設(shè)計(jì)有若干支架孔21。使用時(shí)，將支架2設(shè)置于吸頭盒外盒1內(nèi)即可，支架 2的高度、孔數(shù)、孔徑與增殖新梢的長度、粗度相適應(yīng)。
[0025] 下面介紹藍(lán)莓組培苗液體生根方法，該方法包括以下步驟：
[0026] 一、配制溶液
[0027] 1、配制B5培養(yǎng)基的大量元素母液、微量元素母液、有機(jī)物母液和鐵鹽母液4種 試驗(yàn)?zāi)敢?，配方和配制方法按照《NUTRIENT REQUIREMENTS OF SUSPENSION CULTURES 0F SOYBEAN ROOT CELLS》（Experimental Cell Research50, 151-158(1968))中的記載配制。
[0028] 2、配制 lmg/ml IBA、lmg/ml IAA、lmg/ml NAA3 種激素溶液。
[0029] 二、制備培養(yǎng)基
[0030] 1、稱取蔗糖30g，放入1000ml搪瓷杯中，加冷蒸餾水500ml，加熱攪拌使蔗糖溶化。
[0031] 2、依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有機(jī)物母液和5ml鐵鹽母 液加入到上述搪瓷杯中。
[0032] 3、分別添加0. 5ml IBA、0. 3ml IAA、0. lml NAA3種激素溶液到上述搪瓷杯中，攪 拌均勻，加蒸餾水至l〇〇〇ml，此時(shí)培養(yǎng)基中IBA、ΙΑΑ、NAA3種激素的濃度分別是0. 5mg/L、 0· 3mg/L、0. lmg/L，最后調(diào)培養(yǎng)基的pH至5. 4。
[0033] 具體研究中，不同藍(lán)莓品種其培養(yǎng)基中IBA、ΙΑΑ、NAA3種激素的濃度可分別在 0· 3-0. 7mg/L、0. 2-0. 4mg/L、0. 06-0. 14mg/L 范圍內(nèi)適當(dāng)調(diào)整。
[0034] 4、趁熱將培養(yǎng)基分裝于吸頭盒外盒中，每盒裝100ml，然后在吸頭盒外盒中放置支 架，最后用食用菌袋包裹，高壓蒸汽滅菌。
[0035] 吸頭盒外盒：長120mm X寬85mm X高80mm ;
[0036] 支架：長 115mmX 寬 80mmX 高 25mm，28 孔，孔徑 8mm。
[0037] 三、接種
[0038] 選取生長勢(shì)強(qiáng)的2-3cm增殖新梢作為外植體，超凈工作臺(tái)內(nèi)無菌操作，每盒接種 10-28個(gè)外植體，封口膜封邊。
[0039] 增殖新梢既可以是初代培養(yǎng)腋芽，也可以是繼代培養(yǎng)的不定芽、叢生芽。
[0040] 四、生根培養(yǎng)
[0041] 將接種有外植體的吸頭盒外盒擺放于組培室培養(yǎng)架上培養(yǎng)，培養(yǎng)的條件為：培養(yǎng) 溫度晝25、°C夜15, °C先暗培養(yǎng)1周，然后光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度30001x，光周期16h光照/8h 黑暗。
[0042] 待根5條以上、平均根長1cm以上時(shí)（大約30天左右），打開吸頭盒外盒移栽入基 質(zhì)進(jìn)行馴化。依據(jù)季節(jié)，馴化選擇在溫室或露地進(jìn)行。
[0043] 將本發(fā)明的方法與使用固體培養(yǎng)基的方法進(jìn)行比較，實(shí)施效果見表1。
[0044] 表1實(shí)施效果比較表
[0045]

【權(quán)利要求】
1. 藍(lán)莓組培苗液體生根方法，其特征在于，包括以下步驟： (一） 、配制溶液：配制B5培養(yǎng)基的大量元素母液、微量元素母液、有機(jī)物母液和鐵鹽母 液4種試驗(yàn)?zāi)敢海渲苐mg/ml IBA、lmg/ml IAA、lmg/ml NAA3種激素溶液； (二） 、制備培養(yǎng)基：稱取鹿糖30g，放入1000ml容器中，加冷蒸饋水500ml，加熱攪拌使 鹿糖溶化，依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有機(jī)物母液和5ml鐵鹽母 液加入到上述容器中，再分別添加〇.5ml IBA、0.3ml IAA、0. lml NAA3種激素溶液，攪拌均 勻，加蒸餾水至l〇〇〇ml，調(diào)pH至5. 4,趁熱將培養(yǎng)基分裝于吸頭盒外盒中，每盒裝100ml，然 后在吸頭盒外盒中放置支架，最后用食用菌袋包裹，高壓蒸汽滅菌； (三） 、接種：選取生長勢(shì)強(qiáng)的2-3cm增殖新梢作為外植體，超凈工作臺(tái)內(nèi)無菌操作，每 盒接種10-30個(gè)外植體，封口膜封邊； (四） 、生根培養(yǎng)：將接種有外植體的吸頭盒外盒擺放于組培室培養(yǎng)架上培養(yǎng)，待根5條 以上、平均根長lcm以上時(shí)，打開吸頭盒外盒移栽入基質(zhì)進(jìn)行馴化。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)莓組培苗液體生根方法，其特征在于，在步驟（三）中，所 述增殖新梢包括：初代培養(yǎng)腋芽和繼代培養(yǎng)的不定芽、叢生芽。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)莓組培苗液體生根方法，其特征在于，在步驟（四）中，生 根培養(yǎng)的條件為： 培養(yǎng)溫度晝25°C、夜15°C，先暗培養(yǎng)1周，然后光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度30001x，光周期16h光 照/8h黑暗。
4. 一種用于藍(lán)莓組培苗液體生根的培養(yǎng)容器，其特征在于，由吸頭盒改造而來，包括： 吸頭盒外盒和設(shè)置于所述吸頭盒外盒內(nèi)的支架，所述支架上設(shè)計(jì)有若干支架孔，支架的高 度、孔數(shù)、孔徑與增殖新梢的長度、粗度相適應(yīng)。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104137776SQ201410356395
【公開日】2014年11月12日 申請(qǐng)日期:2014年7月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月24日
【發(fā)明者】秦公偉, 李新生, 曹小勇, 張澤平, 張靜, 蔣景龍 申請(qǐng)人:陜西理工學(xué)院, 陜西定軍山藍(lán)莓科技有限公司