一種花粉淀粉培養(yǎng)基及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于作物育種領(lǐng)域，具體涉及一種花粉淀粉培養(yǎng)基及其制備方法。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種花粉淀粉培養(yǎng)基，由以下成分組成：馬鈴薯淀粉、葡萄糖、硝酸鉀、磷酸二氫鉀，上述花粉淀粉培養(yǎng)基還可以包括食用色素，上述花粉淀粉培養(yǎng)基還可以包括花粉。本發(fā)明還提供了上述花粉淀粉培養(yǎng)基的制備方法，將上述原料按比例混合保存即可。
【專利說明】一種花粉淀粉培養(yǎng)基及其制備方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于作物育種領(lǐng)域，具體涉及一種花粉淀粉煙草培養(yǎng)基及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]水稻育種著名專家、中國工程院院士袁隆平先生于上世紀(jì)60年底初在全球率先應(yīng)用水稻雄性不育系成功的突破技術(shù)難題，實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)應(yīng)用“雜交水稻”。之后，世界各農(nóng)學(xué)強(qiáng)國應(yīng)用雜交水稻技術(shù)理論，即選擇配合力強(qiáng)的母本X父本得到優(yōu)秀Fl用于生產(chǎn)，先后在糧食作物、經(jīng)濟(jì)作物獲得重大成就。上世紀(jì)90年代中后期，煙葉生產(chǎn)大國:美國、巴西、津巴布韋等研究并大面積推廣煙草雄性不育系Fl代雜交種。
[0003]目前，我國年種植烤煙雄性不育系Fl代雜交種53萬hm2?？緹熛登芽萍t花煙屬植物，花朵有一個(gè)雌蕊、五個(gè)雄蕊，自花授粉，在雄性不育系Fl繁殖良種時(shí)，父本雄蕊產(chǎn)花粉非常有限，故繁殖Fl代種子時(shí)，需要種植較大面積的父本煙株才能保證母本結(jié)足夠的種子。如果父母本煙株在開花時(shí)，遇到陰雨連綿，或者花期不遇，用人工采摘化朵進(jìn)行雜交，得到的Fl代種子也很少。我國最大的烤煙良種繁殖中心一玉溪中煙煙草種子有限責(zé)任公司的繁種基地原設(shè)在云南玉溪市，2009年搬到了西雙版納，此舉就是利用當(dāng)?shù)責(zé)釒в炅謿夂蚨痉e溫高、降雨少、夜雨晝晴的良好條件冬繁種子，種子繁殖量從過去5kg/667m2提高到現(xiàn) 15kg/667m2 左右。
[0004]為了能充分利用父本花粉，避免不必要的浪費(fèi)，2011年，馬文廣、鄧盛斌等報(bào)道:授粉前，在花粉中添加適量介質(zhì)作為填充物對花粉加以稀釋，可節(jié)約花粉用量，降低種子生產(chǎn)成本，認(rèn)為用純水溶性淀粉或純葡萄糖為介質(zhì)，花粉:介質(zhì)=1: 0.5~1.0 (w/w,重量t匕)為最佳。水溶性淀粉是一種介于淀粉和淀粉糖之間，經(jīng)人工控制降解而成的低程度水解產(chǎn)物，該物水化力較強(qiáng)，在常溫下即可溶解，有良好濕度的粘性，對植物細(xì)胞生產(chǎn)而言無營養(yǎng)成分，也易吸水、不易保存。天然作物淀粉由直鏈淀粉和支鏈淀粉兩類組成，且營養(yǎng)很豐富，淀粉螺旋中央空穴能容下作物礦質(zhì)營養(yǎng)元素。但是馬鈴薯淀粉粘性足，操作過程中不利于將花粉授予花柱上。在干燥條件下純葡萄糖對花粉細(xì)胞并無不良反映，但當(dāng)遇水時(shí)，高濃度葡萄糖液將引起花粉細(xì)胞液反滲，出現(xiàn)質(zhì)壁分離，對花粉萌發(fā)不利。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問題是提供一種花粉淀粉培養(yǎng)基。該花粉淀粉培養(yǎng)基由以下重量配比的成分組成:馬鈴薯淀粉87~89%，葡萄糖10~12%，硝酸鉀0.1~
0.5%，磷酸二氫鉀0.1~0.5%ο
[0006]優(yōu)選的，上述花粉淀粉培養(yǎng)基，還包括:食用色素，其添加量為上述花粉淀粉培養(yǎng)基重量的0.0001~0.0002%。
[0007]優(yōu)選的，上述花粉淀粉培養(yǎng)基，所述食用色素為胭脂紅，其添加量為上述花粉淀粉培養(yǎng)基重量的0.0001%。
[0008]優(yōu)選的，上述花粉淀粉培養(yǎng)基，由以下重量配比的成分組成:馬鈴薯淀粉89%，葡萄糖10.6%，硝酸鉀0.2%，磷酸二氫鉀0.2%、占前四種物質(zhì)總重量0.0001%的胭脂紅。
[0009]本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是提供一種營養(yǎng)授體花粉。該營養(yǎng)授體花粉由以下重量配比的成分組成:花粉48~52%，上述花粉淀粉培養(yǎng)基48~52%。
[0010]優(yōu)選的，上述營養(yǎng)授體花粉，所述的花粉為煙草花粉、水稻花粉或玉米花粉。
[0011]本發(fā)明所要解決的第三個(gè)技術(shù)問題是提供上述花粉淀粉培養(yǎng)基的制備方法。該方法包括以下步驟:
[0012]a、在馬鈴薯淀粉中加入水，反復(fù)浸洗，在洗時(shí)過100目分樣網(wǎng)篩，取篩下物，讓淀粉沉淀，倒去清水，得沉淀物，將沉淀物在35~40°C干燥至含水量為4~5wt%，備用；[0013]b、將能過100目篩的葡萄糖、硝酸鉀、磷酸二氫鉀，分別在50~60°C烘干至含水量為4~5wt%,備用；
[0014]C、將上述備用的四種物質(zhì)混合均勻，即得花粉淀粉培養(yǎng)基。
[0015]上述花粉淀粉培養(yǎng)基的制備方法，在花粉淀粉培養(yǎng)基中加入食用色素，混勻，即得著色花粉淀粉培養(yǎng)基。
[0016]本發(fā)明所要解決的第四個(gè)技術(shù)問題是提供上述營養(yǎng)授體花粉的制備方法。該方法包括以下步驟:
[0017]在上述花粉淀粉培養(yǎng)基中，加入花粉，混勻，即得營養(yǎng)授體花粉。
[0018]優(yōu)選的，上述營養(yǎng)授體花粉的制備方法，處理花粉的方法包括以下步驟:將花藥放在200~230目網(wǎng)篩內(nèi)，置入鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，保持溫度20~30°C干燥I~3h，取出，倒入60目分樣網(wǎng)篩中，收集能過60目分樣篩的花粉，保持溫度20~30°C將此花粉干燥至含水量為3~6wt%即可。
[0019]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):a、培養(yǎng)基給花粉提供全價(jià)營養(yǎng)和能量，提高花粉活力；b、花粉培養(yǎng)基加花粉，經(jīng)低溫干燥儲(chǔ)藏在3~5°C冰箱里，花粉停止呼吸作用而休眠，隨時(shí)可以取用，有益于避開逆境條件(陰雨、高溫等)、花期不遇、勞力不足等；C、添加鮮艷的食用色素，使?fàn)I養(yǎng)授體花粉染上鮮艷標(biāo)記色，將營養(yǎng)授體花粉授于母本花朵柱頭上，被授粉的母本花朵柱頭上染上鮮艷的標(biāo)記色，此可避免母本花朵柱頭漏授粉、重復(fù)授粉情況，既節(jié)約了花粉、又降低勞動(dòng)強(qiáng)度。
【具體實(shí)施方式】
[0020]一種花粉淀粉培養(yǎng)基，由以下重量配比的成分組成:馬鈴薯淀粉87~89%，葡萄糖10~12%，硝酸鉀0.1~0.5%，磷酸二氫鉀0.1~0.5%ο
[0021]優(yōu)選的，上述花粉淀粉培養(yǎng)基，還包括:食用色素，其添加量為上述花粉淀粉培養(yǎng)基重量的0.0001~0.0002%。
[0022]優(yōu)選的，上述花粉淀粉培養(yǎng)基，所述食用色素為胭脂紅，其添加量為上述花粉淀粉培養(yǎng)基重量的0.0001%。
[0023]優(yōu)選的，上述花粉淀粉培養(yǎng)基，由以下重量配比的成分組成:馬鈴薯淀粉89%，葡萄糖10.6%，硝酸鉀0.2%，磷酸二氫鉀0.2%，占前四種物質(zhì)總重量0.0001%的胭脂紅。
[0024]一種營養(yǎng)授體花粉，由以下重量配比的成分組成:花粉48~52%，上述花粉淀粉培養(yǎng)基48~52%。
[0025]優(yōu)選的，上述營養(yǎng)授體花粉，所述的花粉為煙草花粉、水稻花粉或玉米花粉。[0026]上述花粉淀粉培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟:
[0027]a、在馬鈴薯淀粉中加入水，反復(fù)浸洗，在洗時(shí)過100目分樣網(wǎng)篩，取篩下物，讓淀粉沉淀，倒去清水，得沉淀物，將沉淀物在35~40°C干燥至含水量為4~5wt%，備用；
[0028]b、將能過100目篩的葡萄糖、硝酸鉀、磷酸二氫鉀，分別在50~60°C烘干至含水量為4~5wt%,備用；
[0029]C、將上述備用的四種物質(zhì)混合均勻，即得花粉淀粉培養(yǎng)基。
[0030]上述花粉淀粉培養(yǎng)基的制備方法，在花粉淀粉培養(yǎng)基中加入食用色素，混勻，即得著色花粉淀粉培養(yǎng)基。
[0031]上述營養(yǎng)授體花粉的制備方法，在上述花粉淀粉培養(yǎng)基中，加入花粉，混勻，即得營養(yǎng)授體花粉。
[0032]優(yōu)選的，上述營養(yǎng)授體花粉的制備方法，所述的花粉，處理方法包括以下步驟:將花藥放在200~230目網(wǎng)篩內(nèi)，置入鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，保持溫度20~30°C干燥I~3h，取出，倒入60目分樣網(wǎng)篩中，收集能過60目分樣篩的花粉，保持溫度20~30°C將此花粉干燥至含水量為3~6wt%即可。
[0033]本發(fā)明所述的營養(yǎng)授體花粉是指給予母本花粉的物質(zhì)。
[0034]本發(fā)明所制備的上述花粉淀粉培養(yǎng)基或營養(yǎng)授體花粉，為了防止微生物滋生，應(yīng)當(dāng)?shù)蜏乇４?，最?yōu)在3~5°C保存。
[0035]本發(fā)明方法的原料處理中，采用水洗馬鈴薯淀粉，是為了將馬鈴薯淀粉中的大分子(比如纖維素等)除去，提高馬鈴薯淀粉中淀粉的純度，得到符合要求的含馬鈴薯淀粉、少量蛋白質(zhì)、脂肪和維生素的原料?；瘜W(xué)純馬鈴薯淀粉純度高，但是營養(yǎng)比較單一，純凈多糖、即純碳水化合物，而食用馬鈴薯淀粉純度較化學(xué)純的馬鈴薯淀粉純度低，但是營養(yǎng)較豐富，所以本發(fā)明優(yōu)選采用食用馬鈴薯淀粉。
[0036]實(shí)施例1
[0037]配制基礎(chǔ)花粉淀粉培養(yǎng)基:取預(yù)處理后的馬鈴薯淀粉8.9g，取過100目篩的葡萄糖1.06g、硝酸鉀0.02g和磷酸二氫鉀0.02g，分別在電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)35°C干燥至含水量4wt%，然后混合均勻得到花粉淀粉培養(yǎng)基10g，裝入棕色瓶里，放在4°C冰箱，待用。
[0038]實(shí)施例2
[0039]配制著色花粉淀粉培養(yǎng)基:取預(yù)處理后的馬鈴薯淀粉8.9g，取過100目篩的葡萄糖1.06g、硝酸鉀0.02g和磷酸二氫鉀0.02g，分別在電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)35°C干燥至含水量4wt%,然后混合均勻得到花粉淀粉培養(yǎng)基10g，再加入胭脂紅色素0.0Olmg,再混合均勻得到著色花粉淀粉培養(yǎng)基，裝入棕色瓶里，放在4°C冰箱，待用。
[0040]實(shí)施例3
[0041]配制營養(yǎng)授體花粉A:取預(yù)處理后的馬鈴薯淀粉8.9g，取過100目篩的葡萄糖
1.06g、硝酸鉀0.02g和磷酸二氫鉀0.02g,分別在電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)35°C干燥至含水量4wt%,然后混合均勻，得到花粉淀粉培養(yǎng)基10g，再加入食用色素胭脂紅0.0Olmg,再混合均勻，得到著色花粉淀粉培養(yǎng)基a，裝入棕色瓶里，放在3~5°C冰箱里待用。將田間烤煙生長至花蕾期的花朵采回實(shí)驗(yàn)室 ，將花藥從雄蕊花絲上取下，取下的花藥達(dá)到一定數(shù)量后，將花藥放在200~230目網(wǎng)篩內(nèi)，將網(wǎng)篩連同花藥置入電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，保持溫度25°C干燥I~3h (當(dāng)環(huán)境空氣相對濕度50%~60%時(shí)，干燥2h)，待花藥干燥后，從干燥箱內(nèi)取出，倒Λ60目分樣網(wǎng)篩中，在分樣網(wǎng)篩下墊一張白紙(紙表面需光滑)，用毛刷反復(fù)刷動(dòng)花藥，并振動(dòng)網(wǎng)篩，使花藥內(nèi)花粉粒全部刷出，并全部篩漏在墊的白紙上。將花粉粒集中后，盛在培養(yǎng)皿。再放入電熱鼓風(fēng)干燥箱，溫度25°c干燥至水為5wt%，取出得到需要的純花粉b (簡稱:烘干法花粉)。裝入棕色瓶里，放在3~5°C冰箱里待用。之后，按重量將a取50%，b取50%混合均勻得到配制發(fā)明營養(yǎng)授體花粉A，裝入棕色瓶里，放在4°C冰箱，待用。
[0042]對照例I
[0043]按重量取葡萄糖5g，用實(shí)施例3方法，分離得到的純花粉5g混合均勻得到葡萄糖介質(zhì)花粉10g，裝入棕色瓶里，放在冰箱4°C，待用。
[0044]對照例2
[0045]配制營養(yǎng)授體常規(guī)花粉B:取預(yù)處理后的馬鈴薯淀粉8.9g，取過100目篩的葡萄糖1.06g、硝酸鉀0.02g和磷酸二氫鉀0.02g，分別在電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)35°C干燥至含水量4wt%,然后混合均勻，得到花粉淀粉培養(yǎng)基10g，再加入食用色素胭脂紅0.0Olmg,再混合均勻，得到著色花粉淀粉培養(yǎng)基a，裝入棕色瓶里，放在冰箱4°C待用。將大田父本植株生長至花蕾期的花朵整齊擺放在容器里帶回實(shí)驗(yàn)室，剝掉花冠，將余下的花器官放在大盤里、置于太陽下曬晾2d，讓花粉從花藥中爆出，再將大盤里全部花器官倒入200~230目分樣篩中，自然冷卻至室溫，篩動(dòng)篩子，使花粉分離出，得到純花粉，然后再將純花粉粒放入電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，在25°C干燥至含水量5wt%，得到需要的純花粉b (簡稱:晾曬法花粉)，裝入棕色瓶里，放在4°C冰箱里待用。之后，按重量將a取5g，b取5g混合均勻得到配制營養(yǎng)授體常規(guī)花粉B，裝入棕色瓶里，放在4°C冰箱，待用。
[0046]試驗(yàn)例I測定花粉活力
[0047]1、花粉測定:
[0048]a、TTC法染色:在載玻片上放少許花粉或花粉混合物，用TTC液染色，在顯微鏡下進(jìn)行鏡檢，著紅色的為有活力花粉，再加入碘酊稀釋液將淀粉染為藍(lán)色，以便識(shí)別有活力花粉、淀粉粒、無活力花粉，在顯微鏡視野中計(jì)數(shù)，計(jì)算花粉活力百分比；
[0049]b、蔗糖懸液培養(yǎng):在微生物培養(yǎng)載玻片中央滴上蔗糖懸液體培養(yǎng)基，將花粉、花粉混合物放入液體培養(yǎng)基內(nèi)恒溫28°C培養(yǎng)2h使花粉萌發(fā)，生長出花粉管，用碘酊稀釋液染色，以便區(qū)別淀粉粒，在顯微鏡視野中計(jì)數(shù)，計(jì)算花粉萌發(fā)百分比；
[0050]2、授粉檢測:在雄性不育母本植株盛花期花朵柱頭上進(jìn)行授粉，待子房膨大生長成蒴果，計(jì)算結(jié)蒴果百分比；[0051]3、授粉株蒴果成熟后，單果采收，自然干燥，脫粒，精選、檢測千粒重，發(fā)芽勢、發(fā)芽率。
[0052]表1不同實(shí)施例在冰箱4°C儲(chǔ)藏30d花粉活力檢測結(jié)果
[0053]
【權(quán)利要求】
1.花粉淀粉培養(yǎng)基，其特征在于:由以下重量配比的成分組成:馬鈴薯淀粉87~89%，葡萄糖10~12%，硝酸鉀0.1~0.5%，磷酸二氫鉀0.1~0.5%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花粉淀粉培養(yǎng)基，其特征在于:還包括食用色素，其添加量為權(quán)利要求1所述的花粉淀粉培養(yǎng)基重量的0.0001~0.0002%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的花粉淀粉培養(yǎng)基，其特征在于:所述食用色素為胭脂紅，其添加量為權(quán)利要求1所述的花粉淀粉培養(yǎng)基重量的0.0001%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的花粉淀粉培養(yǎng)基，其特征在于:由以下重量配比的成分組成:馬鈴薯淀粉89%，葡萄糖10.6%，硝酸鉀0.2%，磷酸二氫鉀0.2%，占前四種物質(zhì)總重量0.0001%的胭脂紅。
5.營養(yǎng)授體花粉，其特征在于:由以下重量配比的成分組成:花粉48%~52%，權(quán)利要求I~4任一項(xiàng)所述的花粉淀粉培養(yǎng)基48%~52%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的營養(yǎng)授體花粉，其特征在于:所述的花粉為煙草花粉、水稻花粉或玉米花粉。
7.權(quán)利要求1所述的花粉淀粉培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于: a、在馬鈴薯淀粉中加入水，反復(fù)浸洗，在洗時(shí)過100目分樣網(wǎng)篩，取篩下物，讓淀粉沉淀，倒去清水，得沉淀物，將沉淀物在35~40°C干燥至含水量為4~5wt%，備用； b、將能過100目篩的葡萄糖、硝酸鉀、磷酸二氫鉀，分別在50~60°C烘干至含水量為4~5wt%,備用； C、將上述備用的四種物質(zhì)混合均勻，即得花粉淀粉培養(yǎng)基。
8.權(quán)利要求2~4任一項(xiàng)所述的花粉淀粉培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于:在權(quán)利要求I所述的花粉淀粉培養(yǎng)基中加入食用色素，混勻。
9.權(quán)利要求5~6任一項(xiàng)所述的營養(yǎng)授體花粉的制備方法,其特征在于:在權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的花粉淀粉培養(yǎng)基中加入花粉，混勻。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的營養(yǎng)授體花粉的制備方法，其特征在于:處理花粉的方法包括以下步驟:將花藥放在200~230目網(wǎng)篩內(nèi)，置入鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，保持溫度20~30°C干燥I~3h，取出，倒入60目分樣網(wǎng)篩中，收集能過60目分樣篩的花粉，保持溫度20~30°C將此花粉干燥至含水量為3~6wt%即可。
【文檔編號(hào)】C05G1/06GK103539507SQ201310456229
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月29日
【發(fā)明者】杜如萬, 邢小軍, 殷雪艷, 徐明康, 王勇, 劉東陽, 羅文祥, 劉賢芬 申請人:四川省煙草公司涼山州公司