專(zhuān)利名稱(chēng)：一種提高低再生力小麥基因型幼胚組織培養(yǎng)再生率的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提高低再生力小麥基因型幼胚組織培養(yǎng)再生率的方法。
背景技術(shù)：
小麥組織離體培養(yǎng)高頻率植株再生是開(kāi)展小麥細(xì)胞工程育種和轉(zhuǎn)基因育種的重要環(huán)節(jié)之一。目前為止，培養(yǎng)小麥幼胚、幼穗、花藥、成熟胚、小孢子等外植體材料先后獲得了再生植株，其中，小麥幼胚被認(rèn)為是再生率最高的外植體類(lèi)型。但是，小麥幼胚培養(yǎng)在不同基因型之間存在顯著差異，能夠高頻率獲得再生植株的基因型非常有限，尤其是一些大面積推廣的優(yōu)良小麥品種，其幼胚的再生能力往往都很低。大面積推廣優(yōu)良小麥品種的適應(yīng)性、豐產(chǎn)性和抗病性等已滿足生態(tài)條件和生產(chǎn)發(fā)展的需要，改良它們的個(gè)別缺點(diǎn)后即可在生產(chǎn)上較長(zhǎng)時(shí)間種植，因而是細(xì)胞工程育種和轉(zhuǎn)基因育種的首選起始材料。研究表明，改良培養(yǎng)基(如SD2培養(yǎng)基)和培養(yǎng)程序(如生長(zhǎng)素間歇處理)等技術(shù)策略可以提高具有中等以上培養(yǎng)力小麥品種幼胚的再生率，但對(duì)弱再生力小麥品種幼胚培養(yǎng)的效果不顯著。因此，研究用于提高弱再生力小麥品種幼胚組織培養(yǎng)再生率的培養(yǎng)方法具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種提高低再生力小麥幼胚組織培養(yǎng)再生率的方法。本發(fā)明所提供的提高低再生力小麥幼胚組織培養(yǎng)再生率的方法，通過(guò)對(duì)高、低再生力小麥品種幼胚間隔接種進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)和對(duì)小麥愈傷組織間隔接種進(jìn)行分化培養(yǎng)這兩個(gè)步驟來(lái)提高低再生力小麥幼胚組織培養(yǎng)的再生率，所述方法包括如下步驟I)將高再生力小麥品種的幼胚和低再生力小麥品種的幼胚按行間隔接種于裝有愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的同一個(gè)容器中，在黑暗條件下進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到高再生力小麥品種愈傷組織和低再生力小麥品種愈傷組織；2)將步驟I)得到的低再生力小麥品種愈傷組織和高再生力小麥品種愈傷組織按行間隔轉(zhuǎn)移到裝有分化培養(yǎng)基的同一個(gè)培養(yǎng)容器中，即仍然保持步驟I)的間隔接種方式， 在光照條件下進(jìn)行分化培養(yǎng)，得到低再生力小麥品種再生植株和高再生力小麥品種再生植株。該方法對(duì)低再生力小麥幼胚組織培養(yǎng)的再生率高于對(duì)所述低再生力小麥幼胚進(jìn)行單獨(dú)組織培養(yǎng)的再生率。對(duì)所述低再生力小麥幼胚進(jìn)行單獨(dú)組織培養(yǎng)的方法除了接種方式是單獨(dú)接種(裝有愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器內(nèi)只接種所述低再生力小麥幼胚，并且裝有分化培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器內(nèi)只接種所述低再生力小麥品種胚性愈傷組織)外，其它培養(yǎng)條件均與本發(fā)明的方法相同。所述高再生力小麥品種具體可為新春9號(hào)或科農(nóng)199，所述低再生力小麥品種具體可為中國(guó)春。本發(fā)明的上述方法中，所述步驟I)和2)的同一個(gè)培養(yǎng)容器中，接種所述高再生力小麥品種的幼胚或愈傷組織的行數(shù)和接種所述低再生力小麥品種的幼胚或愈傷組織的行數(shù)最好相同，如同一個(gè)培養(yǎng)容器中，所述高再生力小麥品種和所述低再生力小麥品種的行數(shù)均為3行，其按行間隔接種方式可為第1、3和5行接種所述低再生力小麥品種，第2、4和 6行接種所述高再生力小麥品種(圖I)。本發(fā)明的上述方法中，所述步驟I)的同一個(gè)培養(yǎng)容器中，接種的所述高再生力小麥品種的幼胚的個(gè)數(shù)具體可為所述低再生力小麥品種的幼胚的個(gè)數(shù)的1-1. 14倍。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述高再生力小麥品種為新春9號(hào)，所述低再生力小麥品種為中國(guó)春，接種的新春9號(hào)的幼胚個(gè)數(shù)是中國(guó)春幼胚個(gè)數(shù)的1-1. 01倍；在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所述聞再生力小麥品種為科農(nóng)199,所述低再生力小麥品種為中國(guó)春，接種的科農(nóng) 199的幼胚個(gè)數(shù)是中國(guó)春幼胚個(gè)數(shù)的I. 13-1. 14倍；所述步驟2)的同一個(gè)培養(yǎng)容器中， 接種的所述高再生力小麥品種的愈傷組織的個(gè)數(shù)是所述低再生力小麥品種的愈傷組織的個(gè)數(shù)的O. 85-1. 21倍。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述高再生力小麥品種為新春9號(hào)，所述低再生力小麥品種為中國(guó)春，接種的新春9號(hào)的愈傷組織個(gè)數(shù)是中國(guó)春愈傷組織個(gè)數(shù)的O. 85-1. 10倍；在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所述高再生力小麥品種為科農(nóng)199，所述低再生力小麥品種為中國(guó)春，接種的科農(nóng)199的愈傷組織個(gè)數(shù)是中國(guó)春愈傷組織個(gè)數(shù)的
I.12-1. 21 倍。本發(fā)明的上述方法中，所述步驟I)中的按行間隔接種的行距(相鄰兩行中心線的垂直距離)可為O. 9-1. lcm，幼胚距(樣距)(每行中相鄰兩個(gè)幼胚中心之間的距離) 可為O. 5-0. 7cm;所述步驟2)中的按行間隔接種的行距(相鄰兩行中心線的垂直距離) 可為O. 9-1. Icm,愈傷組織距(樣距)(每行中相鄰兩個(gè)愈傷組織中心之間的距離)可為 O. 5-0. 7cm。本發(fā)明的上述方法中，所述步驟I)中的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基具體可為SD2培養(yǎng)基，所述步驟2)中的分化培養(yǎng)基具體可為FHCK培養(yǎng)基。其中，SD2培養(yǎng)基的組成為 NH4N031650mg/L、KN031900mg/L、CaCl2 · 2H20 440mg/L、MgSO4 · 7H20370mg/L、KH2P041700mg/ L、KIO. 83mg/L、H3B036 . 2mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、ZnSO4 · 7H208. 6mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、CoCl2 · 6H200. 025mg/L, FeSO4 · 7H2027. 8mg/L、 Na2-EDTA · 2H2037. 3mg/L、蔗糖 30g/L、維生素 BJOmg/L、谷氨酰胺 150mg/L、2，4-D2. Omg/ L、植物凝膠 2. 4g/L，pH 值為 6. 0。FHCK 培養(yǎng)基的組成為NH4N031650mg/L、KN031900mg/L、 CaCl2 · 2H20440mg/L、MgSO4 · 7H20370mg/L、KH2PO41700mg/L、KIO. 83mg/L、H3B036. 2mg/L、 MnSO4 · 4H2022. 3mg/L、ZnSO4 · 7H208. 6mg/L、Na2MoO4 · 2H200. 25mg/L、CuSO4 · 5H200. 025mg/ UCoCl2 · 6H200. 025mg/L, FeSO4 · 7H2027. 8mg/L、Na2-EDTA · 2H2037. 3mg/L、維生素 BJmg/L、 維生素B6O. 5mg/L、煙酸0. 5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、鹿糖20g/L、植物凝膠2. 4g/ L，pH 值為 6.0。本發(fā)明的上述方法中，所述高再生力小麥品種的幼胚和低再生力小麥品種的幼胚均可為開(kāi)花授粉后12-14天、大小I. 0-1. 2mm的幼胚。本發(fā)明的上述方法中，所述步驟I)中的誘導(dǎo)培養(yǎng)溫度為24°C -26°C、時(shí)間為20_25 天；所述步驟2)中的光照條件為每天以3500LX的光強(qiáng)光照10小時(shí)，所述分化培養(yǎng)的溫度為 24°C -26°C、時(shí)間為 20-25 天。現(xiàn)有的小麥組織培養(yǎng)程序中，將來(lái)源同一小麥品種的相同外植體材料接種在一個(gè)培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)，先后誘導(dǎo)愈傷組織和分化植株，本發(fā)明的小麥組織培養(yǎng)方法，將來(lái)源高、
4低再生力的2個(gè)小麥品種的幼胚按行間隔接種在同一個(gè)培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)，依次誘導(dǎo)愈傷組織和分化植株，顯著提高了低再生小麥品種的再生率、胚性愈傷組織誘導(dǎo)率和愈傷組織分化率。實(shí)驗(yàn)證明，將小麥中國(guó)春(低再生力小麥品種)幼胚和小麥新春9號(hào)(高再生力小麥品種)幼胚按照本發(fā)明的的方法進(jìn)行培養(yǎng)，小麥中國(guó)春再生率為18. 59%，小麥新春9號(hào)的再生率為49. 82%，單獨(dú)培養(yǎng)的小麥中國(guó)春再生率為O. 37%，小麥新春9號(hào)的再生率為 41. 61 % (表I);將小麥中國(guó)春(低再生力小麥品種)幼胚和小麥科農(nóng)199 (高再生力小麥品種)幼胚按照本發(fā)明的的方法進(jìn)行培養(yǎng)，小麥中國(guó)春再生率為67. 98%，小麥科農(nóng)199 的再生率為251. 94%，單獨(dú)培養(yǎng)的小麥中國(guó)春再生率為3. 03%，小麥科農(nóng)199的再生率為 176. 82% (表 2)。本發(fā)明通過(guò)改進(jìn)小麥幼胚接種培養(yǎng)方法，顯著提高了弱再生力小麥基因型的再生頻率、胚性愈傷組織誘導(dǎo)率和愈傷組織分化率，對(duì)于利用細(xì)胞工程技術(shù)和基因工程技術(shù)改良大面積推廣小麥品種的個(gè)別缺點(diǎn)具有重要意義。


圖I為高再生力小麥品種幼胚、低再生力小麥品種幼胚間隔培養(yǎng)方式圖示圖2為小麥中國(guó)春幼胚與新春9號(hào)幼胚單獨(dú)培養(yǎng)及間隔培養(yǎng)再生植株效果A為小麥中國(guó)春幼胚單獨(dú)培養(yǎng)-對(duì)照培養(yǎng)方法B為小麥新春9號(hào)幼胚單獨(dú)培養(yǎng)-對(duì)照培養(yǎng)方法C為小麥中國(guó)春幼胚與新春9號(hào)幼胚間隔培養(yǎng)——本發(fā)明培養(yǎng)方法圖3為小麥中國(guó)春幼胚與科農(nóng)199幼胚單獨(dú)培養(yǎng)及間隔培養(yǎng)再生植株效果A為小麥中國(guó)春幼胚單獨(dú)培養(yǎng)-對(duì)照培養(yǎng)方法B為科農(nóng)199幼胚單獨(dú)培養(yǎng)——對(duì)照培養(yǎng)方法C為小麥中國(guó)春幼胚與科農(nóng)199幼胚間隔培養(yǎng)--本發(fā)明培養(yǎng)方法
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)試劑，如無(wú)特殊說(shuō)明，下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實(shí)施例I和2中所用的小麥如下小麥品種中國(guó)春(石珍源等，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011,44(2) :225_232)(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所)；小麥品種科農(nóng)199(石珍源等，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011,44(2) :225-232)(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所)；小麥品種新春9號(hào)(丁文靜等，作物學(xué)報(bào)，2007，33 (6) =955-960)(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所)。下述實(shí)施例I和2中所用的SD2培養(yǎng)基和FHCK培養(yǎng)基如下SD2 培養(yǎng)基組成為:NH4N031650mg/L、KN031900mg/L、CaCl2 · 2H20 440mg/L、 MgSO4 · 7H20370mg/L、KH2P041700mg/L、KIO. 83mg/L、H3B036. 2mg/L、MnSO4 · 4H2022. 3mg/L、ZnSO4 · 7H208. 6mg/L、Na2MoO4 · 2H200. 25mg/L、CuSO4 · 5H200. 025mg/L、CoCl2 · 6H200. 025mg/ L，F(xiàn)eSO4 · 7H2027. 8mg/L、Na2-EDTA · 2H2037. 3mg/L、蔗糖 30g/L、維生素 BJOmg/L、谷氨酰胺 150mg/L、2，4-D2. Omg/L、Phytagel (植物凝膠)2. 4g/L，pH 值為 6. 0。以上成分采用 121。。 高壓濕熱滅菌20分鐘。FHCK 培養(yǎng)基組成為:NH4N031650mg/L、KN031900mg/L、CaCl2 · 2H20440mg/L、 MgSO4 · 7H20370mg/L、KH2PO41700mg/L、KIO. 83mg/L、H3B036 . 2mg/L、MnSO4 · 4H2022. 3mg/L、 ZnSO4 · 7H208. 6mg/L、Na2MoO4 · 2H200. 25mg/L、CuSO4 · 5H200. 025mg/L、CoCl2 · 6H200. 025mg/ L, FeSO4 · 7H2027. 8mg/L、Na2-EDTA · 2H2037. 3mg/L、維生素 BJmg/L、維生素 B6O. 5mg/L、煙酸 0. 5mg/L、甘氨酸 2mg/L、肌醇 100mg/L、鹿糖 20g/L、Phytagel (植物凝膠)2. 4g/L, pH 值為
6.0。以上成分采用121°C高壓濕熱滅菌20分鐘。下述實(shí)施例I和2中所用的培養(yǎng)皿均相同，直徑為9. Ocm0下述實(shí)施例I和2中的胚性愈傷組織誘導(dǎo)率、愈傷組織分化率、綠苗獲得率(再生率)的計(jì)算公式如下胚性愈傷組織誘導(dǎo)率(％ )=(胚性愈傷組織數(shù)+接種幼胚數(shù))X 100 ;愈傷組織分化率(％ )=(分化愈傷組織數(shù)+接種幼胚數(shù))X 100 ;綠苗獲得率(％ )=(分化綠苗數(shù)+接種幼胚數(shù))X 100。實(shí)施例I、利用小麥新春9號(hào)提高小麥中國(guó)春的幼胚組織培養(yǎng)再生率本實(shí)施例以小麥中國(guó)春(低再生力小麥品種)、小麥新春9號(hào)(高再生力小麥品種)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象闡明本發(fā)明所保護(hù)的提高低再生力小麥幼胚組織培養(yǎng)再生率的方法，具體如下I、小麥幼胚的獲得將小麥中國(guó)春和小麥新春9號(hào)種植在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)農(nóng)場(chǎng) (4-5月份小麥生長(zhǎng)期間溫度15-30°C )，開(kāi)花授粉后12-14天，收集小麥中國(guó)春和小麥新春 9號(hào)的幼胚(心形期,大小為I. 0-1. 2mm)。2、組織培養(yǎng)I)誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織將上述二種小麥幼胚按行間隔接種在SD2培養(yǎng)基上培養(yǎng)(稱(chēng)為間隔培養(yǎng))，以二種小麥幼胚分別單獨(dú)接種在SD2培養(yǎng)基上培養(yǎng)作為對(duì)照。上述培養(yǎng)條件均為25°C、黑暗條件下培養(yǎng)20天得到愈傷組織。其中，上述二種小麥幼胚按行間隔接種在SD2培養(yǎng)基上的方法如下將小麥中國(guó)春幼胚和小麥新春9號(hào)幼胚按行間隔接種于同一個(gè)培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿中小麥中國(guó)春幼胚和小麥新春9號(hào)幼胚各接種三行，第1、3和5行接種小麥中國(guó)春幼胚，第2、4和6行接種小麥新春9號(hào)幼胚。行距(相鄰兩行中心線的垂直距離)為0.9-1. lcm，樣距(或胚距) (每行中相鄰兩個(gè)幼胚中心之間的距離)為0. 5-0. 7cm。小麥中國(guó)春幼胚和小麥新春9號(hào)幼胚按行間隔接種10個(gè)培養(yǎng)皿中，總共接種了 271個(gè)小麥新春9號(hào)幼胚和269個(gè)小麥中國(guó)春幼胚。其中，第I-第8個(gè)培養(yǎng)皿中,每個(gè)培養(yǎng)皿中小麥新春9號(hào)幼胚共27個(gè),小麥中國(guó)春幼胚共27個(gè),小麥新春9號(hào)幼胚的個(gè)數(shù)是小麥中國(guó)春幼胚的I倍；第9個(gè)培養(yǎng)皿中，小麥新春9號(hào)幼胚共28個(gè)，小麥中國(guó)春幼胚27個(gè)，小麥新春9號(hào)幼胚的個(gè)數(shù)是小麥中國(guó)春幼胚的I. 01倍；第10個(gè)培養(yǎng)皿中，小麥新春9號(hào)幼胚共27個(gè)，小麥中國(guó)春幼胚26個(gè)，小麥新春9號(hào)幼胚的個(gè)數(shù)是小麥中國(guó)春幼胚的I. 01倍。該間隔培養(yǎng)共得到262個(gè)小麥新春9號(hào)愈傷組織和248個(gè)中國(guó)春愈傷組織。小麥中國(guó)春幼胚單獨(dú)接種在SD2培養(yǎng)基上的方法如下在一個(gè)培養(yǎng)皿中只按行接種小麥中國(guó)春幼胚，樣距(或胚距)與行距與上述間隔培養(yǎng)相同。小麥中國(guó)春幼胚共接種5 個(gè)培養(yǎng)皿，總共接種了 267個(gè)小麥中國(guó)春幼胚。該小麥中國(guó)春幼胚單獨(dú)培養(yǎng)共得到260個(gè)愈傷組織。小麥新春9號(hào)幼胚單獨(dú)接種在SD2培養(yǎng)基上的方法如下在一個(gè)培養(yǎng)皿中只按行接種小麥新春9號(hào)幼胚，樣距(或胚距)與行距與上述間隔培養(yǎng)相同。小麥新春9號(hào)幼胚共接種5個(gè)培養(yǎng)皿，總共接種了 274個(gè)小麥新春9號(hào)幼胚。該小麥新春9號(hào)幼胚單獨(dú)培養(yǎng)共得到259個(gè)愈傷組織。2)分化培養(yǎng)得到小麥再生植株將步驟I)間隔培養(yǎng)產(chǎn)生的262個(gè)小麥新春9號(hào)愈傷組織和248個(gè)小麥中國(guó)春愈傷組織按行間隔轉(zhuǎn)移到裝有FHCK培養(yǎng)基的10個(gè)培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿中小麥中國(guó)春愈傷組織和小麥新春9號(hào)愈傷組織各接種三行，第1、3和5行接種小麥中國(guó)春愈傷組織，第2、4 和6行接種小麥新春9號(hào)愈傷組織(圖2中C)。行距(相鄰兩行中心線的垂直距離)為 O. 9-1. 1cm，樣距(每行中相鄰兩個(gè)愈傷組織中心之間的距離)為O. 5-0. 7cm。其中，第I-第 8個(gè)培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿中小麥新春9號(hào)愈傷組織共27個(gè)，小麥中國(guó)春愈傷組織共25個(gè)， 小麥新春9號(hào)愈傷組織的個(gè)數(shù)是小麥中國(guó)春愈傷組織的I. 08倍；第9個(gè)培養(yǎng)皿中，小麥新春9號(hào)愈傷組織共23個(gè)，小麥中國(guó)春愈傷組織27個(gè)，小麥新春9號(hào)愈傷組織的個(gè)數(shù)是小麥中國(guó)春愈傷組織的O. 85倍；第10個(gè)培養(yǎng)皿中，小麥新春9號(hào)愈傷組織共23個(gè)，小麥中國(guó)春愈傷組織21個(gè),小麥新春9號(hào)愈傷組織的個(gè)數(shù)是小麥中國(guó)春愈傷組織的I. 10倍。同時(shí)，將步驟I)小麥中國(guó)春幼胚單獨(dú)接種培養(yǎng)產(chǎn)生的260個(gè)愈傷組織轉(zhuǎn)移到裝有 FHCK培養(yǎng)基的5個(gè)培養(yǎng)皿中，樣距與行距與上述間隔培養(yǎng)相同(圖2中A);將步驟I)小麥新春9號(hào)幼胚單獨(dú)接種培養(yǎng)產(chǎn)生的259個(gè)愈傷組織轉(zhuǎn)移到裝有FHCK培養(yǎng)基的5個(gè)培養(yǎng)皿中，樣距與行距與上述間隔培養(yǎng)相同(圖2中B)。將這些愈傷組織均在如下條件下培養(yǎng)20天，分化得到小麥再生植株每天以 3500Lx的光強(qiáng)光照10小時(shí)，分化培養(yǎng)的溫度為25°C。結(jié)果表明步驟I)間隔培養(yǎng)產(chǎn)生的 262個(gè)小麥新春9號(hào)愈傷組織中有121個(gè)是胚性愈傷組織，其中有92個(gè)胚性愈傷組織發(fā)生分化，共得到135個(gè)小麥再生苗；步驟I)間隔培養(yǎng)產(chǎn)生的248個(gè)小麥中國(guó)春愈傷組織中有 52個(gè)是胚性愈傷組織，其中有29個(gè)胚性愈傷組織發(fā)生分化，共得到50個(gè)小麥再生苗；步驟 I)小麥中國(guó)春幼胚單獨(dú)接種培養(yǎng)產(chǎn)生的260個(gè)愈傷組織中有I是個(gè)胚性愈傷組織，分化出 I個(gè)再生苗；步驟I)小麥新春9號(hào)幼胚單獨(dú)接種培養(yǎng)產(chǎn)生的259個(gè)愈傷組織中有90個(gè)是胚性愈傷組織，其中有72個(gè)胚性愈傷組織發(fā)生分化，共得到114個(gè)小麥再生苗。整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表I。小麥中國(guó)春幼胚和小麥新春9號(hào)幼胚間隔培養(yǎng)情況下，小麥中國(guó)春再生率為18. 59%，小麥新春9號(hào)的再生率為49. 82% ;小麥中國(guó)春幼胚和小麥新春 9號(hào)幼胚單獨(dú)培養(yǎng)情況下，小麥中國(guó)春再生率為O. 37%，小麥新春9號(hào)的再生率為41.61%。表I.小麥新春9號(hào)和中國(guó)春幼胚單獨(dú)接種及間隔接種組織培養(yǎng)情況
權(quán)利要求
1.一種提高低再生力小麥幼胚組織培養(yǎng)再生率的方法，其特征在于所述方法通過(guò)對(duì)高、低再生力小麥品種幼胚間隔接種進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)和對(duì)小麥愈傷組織間隔接種進(jìn)行分化培養(yǎng)這兩個(gè)步驟來(lái)提高低再生力小麥幼胚組織培養(yǎng)的再生率，所述方法包括如下步驟.1)將高再生力小麥品種的幼胚和低再生力小麥品種的幼胚按行間隔接種于裝有愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的同一個(gè)容器中，在黑暗條件下進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到高再生力小麥品種愈傷組織和低再生力小麥品種愈傷組織；.2)將步驟I)得到的低再生力小麥品種愈傷組織和高再生力小麥品種愈傷組織按行間隔轉(zhuǎn)移到裝有分化培養(yǎng)基的同一個(gè)培養(yǎng)容器中，在光照條件下進(jìn)行分化培養(yǎng)，得到低再生力小麥品種再生植株和高再生力小麥品種再生植株。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述高再生力小麥品種為新春9號(hào)或科農(nóng)199,所述低再生力小麥品種為中國(guó)春。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述步驟I)的同一個(gè)培養(yǎng)容器中，接種所述高再生力小麥品種的幼胚的行數(shù)和接種所述低再生力小麥品種的幼胚的行數(shù)相同；所述步驟2)的同一個(gè)培養(yǎng)容器中，接種所述高再生力小麥品種愈傷組織的行數(shù)和接種所述低再生力小麥品種愈傷組織的行數(shù)相同。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟I)的同一個(gè)培養(yǎng)容器中，接種的所述高再生力小麥品種的幼胚的個(gè)數(shù)是所述低再生力小麥品種的幼胚的個(gè)數(shù)的1-1. 14 倍；所述步驟2)的同一個(gè)培養(yǎng)容器中，接種的所述高再生力小麥品種的愈傷組織的個(gè)數(shù)是所述低再生力小麥品種的愈傷組織的個(gè)數(shù)的O. 85-1. 21倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任一所述的方法，其特征在于所述步驟I)和2)中的按行間隔接種的行距均是O. 9-1. 1cm，每行中相鄰兩個(gè)幼胚或愈傷組織中心之間的距離均是.O.5-0. 7cm。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種提高低再生力小麥基因型幼胚組織培養(yǎng)再生率的方法。該方法包括如下步驟1)將高再生力小麥品種的幼胚和低再生力小麥品種的幼胚按行間隔接種于裝有愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的同一個(gè)容器中，在黑暗條件下進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到高再生力小麥品種愈傷組織和低再生力小麥品種愈傷組織；2)將步驟1)得到的低再生力小麥品種愈傷組織和高再生力小麥品種愈傷組織按行間隔轉(zhuǎn)移到裝有分化培養(yǎng)基的同一個(gè)培養(yǎng)容器中，在光照條件下進(jìn)行分化培養(yǎng)，得到低再生力小麥品種再生植株和高再生力小麥品種再生植株。該方法顯著提高了低再生小麥品種幼胚培養(yǎng)的植株再生率、胚性愈傷組織誘導(dǎo)率和愈傷組織分化率。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102599059SQ201210085450
公開(kāi)日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月28日
發(fā)明者葉興國(guó), 周曉鴻, 張偉, 徐惠君, 李欣, 杜麗璞, 林志珊, 殷桂香, 王新敏, 王軻, 肖樂(lè)樂(lè) 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所