專利名稱：誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物組織培養(yǎng)育苗技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法。
背景技術(shù)：
桉樹(shù)是桃金娘科(Myrtaceae)桉屬(Mucalyptus)植物的統(tǒng)稱。是世界上三大速生樹(shù)種之一。廣泛分布于澳大利亞，南美洲，亞洲，歐洲等地區(qū)。桉樹(shù)被廣泛應(yīng)用于纖維素工業(yè)、紙漿材和纖維板材，還可以作為提取單寧和精油的原料，桉樹(shù)提取物被應(yīng)用于化學(xué)工業(yè)，醫(yī)療等多個(gè)領(lǐng)域，目前已被多個(gè)國(guó)家和地區(qū)廣泛種植。因此桉樹(shù)具有廣泛的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。雜交種桉樹(shù)在生產(chǎn)領(lǐng)域應(yīng)用中占據(jù)很重要的部分，但由于現(xiàn)用雜交種桉樹(shù)多為傳統(tǒng)常規(guī)育種所得，遺傳雜合性高，難于定向選擇培育新品種，新興的基因工程技術(shù)解決了傳統(tǒng)育種難以解決的問(wèn)題，它能夠利用分子生物學(xué)技術(shù)將選擇需要的目的基因通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)，基因槍等方式導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)部，并通過(guò)一定的培養(yǎng)方法使植物細(xì)胞再生，發(fā)育成完整植株，具有高效性，針對(duì)性強(qiáng)的特點(diǎn)，是優(yōu)良育種的發(fā)展方向。桉樹(shù)基因育種技術(shù)大部分成功再生的實(shí)驗(yàn)材料是以種子為基礎(chǔ)，種子變異大，難以應(yīng)用于無(wú)性系的雜交桉樹(shù)。因此需要穩(wěn)定高效的組織培養(yǎng)、再生方法。目前在中國(guó)廣泛應(yīng)用的雜交樹(shù)種DH32-29，廣林九號(hào)等樹(shù)種很少有報(bào)道具有高效的再生體系以及此體系支持的基因育種。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明實(shí)施例所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，提供一種誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，以快速、穩(wěn)定地繁殖并選育優(yōu)良品種。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案一種誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，包括如下步驟
獲取腋芽步驟從生長(zhǎng)3-5年、生長(zhǎng)正常無(wú)病蟲(chóng)害的雜交種桉樹(shù)上剪取萌芽條，所得萌芽條經(jīng)消毒處理后再接入培養(yǎng)基中進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)長(zhǎng)出腋芽；
生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟切取腋芽轉(zhuǎn)移到添加有0. 1-1. Omg/L 6-芐基嘌呤和0. 01-0. 5mg/ L萘乙酸的MS培養(yǎng)基上在光照條件下進(jìn)行繼代培養(yǎng)，并每隔21- 天轉(zhuǎn)移到相同的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出符合要求的新芽，再切取新芽轉(zhuǎn)移到添加有0. 1-1. Omg/L 3-吲哚丁酸的1/2MS培養(yǎng)基上在光照條件下進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)至獲得生根苗；
新生芽培養(yǎng)步驟將生根苗切掉頂芽，保留根和基部的1-4個(gè)腋芽，接種在含質(zhì)量百分比3-10%蔗糖的MS改良培養(yǎng)基上進(jìn)行新生芽培養(yǎng)；
愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟以新生芽切段為外植體，接種在含0. 1-2. Omg/L N-苯基-N-1, 2，3-噻二唑-5-脲、0. 01-0. 15mg/L 萘乙酸、20. 0-200. Omg/L 腐胺和 3. 0-30. Omg/ L亞精胺的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)5-10天，再轉(zhuǎn)移到弱光照培養(yǎng)12-14天，獲得愈傷組織；
分化不定芽步驟將獲得的愈傷組織，轉(zhuǎn)移到含0.2-2.0mg/L 6-芐基嘌呤、
0.05-0. 5mg/L萘乙酸、10. 0-40. Omg/L腐胺和0. 5-3. Omg/L亞精胺的分化培養(yǎng)基上在光照條件下繼代培養(yǎng)，且每隔21天轉(zhuǎn)移到相同的分化培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)14-100天即獲得不定芽。進(jìn)一步地，獲取腋芽步驟中，對(duì)所得萌芽條進(jìn)行如下消毒處理將萌芽條剪去葉片置于自來(lái)水下沖洗30分鐘，然后再將萌芽條截為每段包含1-2個(gè)腋芽的小段，用體積百分比75%乙醇浸泡20-30秒，再用無(wú)菌水沖洗2次以及用質(zhì)量百分比0. 1%升汞浸泡5分鐘， 倒出升汞，用無(wú)菌水沖洗萌牙條小段4-6次；修剪成0. 5-1. Ocm長(zhǎng)的帶腋芽的莖段，質(zhì)量百分比0. 1%升汞浸泡2分鐘；倒出升汞，用無(wú)菌水沖洗4-6次。進(jìn)一步地，獲取腋芽步驟中，接入培養(yǎng)基的萌芽條在溫度為2348°C的條件下暗培養(yǎng)21- 天，等待腋芽萌發(fā)，所采用的培養(yǎng)基是MS基本培養(yǎng)基，其含有質(zhì)量百分比3%蔗糖和質(zhì)量百分比0. 7%瓊脂，ρΗ5· 8。進(jìn)一步地，生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟，所切取的腋芽長(zhǎng)0. 5^1. Ocm,而切取的新芽長(zhǎng)
1.5 2· Ocm0進(jìn)一步地，生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中，腋芽的繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是光照16h/天，光照強(qiáng)度1500-100001x，且溫度為2348°C。進(jìn)一步地，生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中，生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是14-30天，光照16h/天， 光照強(qiáng)度1500-100001x，且溫度為2348°C。進(jìn)一步地，新生芽培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是暗培養(yǎng)14-35天且溫度為2348°C。進(jìn)一步地，愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中，暗培養(yǎng)及弱光照培養(yǎng)的溫度范圍均為 23-28°C，弱光照培養(yǎng)時(shí)，光照16h/天且光照強(qiáng)度為20-1001x。進(jìn)一步地，愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中，新生芽切段成長(zhǎng)度為3-10mm的外植體。進(jìn)一步地，分化不定芽步驟中，培養(yǎng)條件為光照16h/天，光照強(qiáng)度500-30001X且溫度為23- °C。通過(guò)采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明至少具有如下有益效果本發(fā)明以無(wú)性系成年桉樹(shù)的萌芽條為基礎(chǔ)，再生系統(tǒng)的再生效率達(dá)60%左右，可以應(yīng)用于DH32-29、廣林九號(hào)等優(yōu)良品系，為利用現(xiàn)代生物技術(shù)對(duì)桉樹(shù)的遺傳改良奠定了良好的基礎(chǔ)，具有十分重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，本發(fā)明一方面可以快速繁殖并選育優(yōu)良品種，另一方面為基因轉(zhuǎn)化提供優(yōu)良系統(tǒng)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)例詳述描述本發(fā)明的實(shí)施方案。需要說(shuō)明的是，下述實(shí)例是說(shuō)明性的， 不是限定性的，不能以下述實(shí)例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明提供一種誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，包括如下步驟
51、獲取腋芽步驟從生長(zhǎng)3-5年、生長(zhǎng)正常無(wú)病蟲(chóng)害的雜交種桉樹(shù)上剪取萌芽條，所得萌芽條經(jīng)消毒處理后再接入培養(yǎng)基中進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)長(zhǎng)出腋芽；
52、生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟切取腋芽轉(zhuǎn)移到添加有0.1-1. Omg/L 6-芐基嘌呤和 0. 01-0. 5mg/L萘乙酸的MS培養(yǎng)基上在光照條件下進(jìn)行繼代培養(yǎng)，并每隔2148天轉(zhuǎn)移到相同的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出符合要求的新芽，再切取新芽轉(zhuǎn)移到添加有0. 1-1. Omg/L 3-吲哚丁酸的1/2MS培養(yǎng)基上在光照條件下進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)至獲得生根苗；
53、新生芽培養(yǎng)步驟將生根苗切掉頂芽，保留根和基部的1-4個(gè)腋芽，接種在含質(zhì)量百分比3-10%蔗糖的MS改良培養(yǎng)基上進(jìn)行新生芽培養(yǎng)；
54、愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟以新生芽切段為外植體，接種在含0.1-2. Omg/L N-苯基-N-1, 2，3-噻二唑-5-脲、0. 01-0. 15mg/L 萘乙酸、20. 0-200. Omg/L腐胺和 3. 0_30mg/L 亞精胺的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)5-10天，再轉(zhuǎn)移到弱光照培養(yǎng)12-14天，獲得愈傷組織；
55、分化不定芽步驟將獲得的愈傷組織，轉(zhuǎn)移到含0.2-2.Omg/L 6-芐基嘌呤、
0.05-0. 5mg/L萘乙酸、10. 0-40. Omg/L腐胺和0. 5-3. 0mg/L亞精胺的分化培養(yǎng)基上在光照條件下繼代培養(yǎng)，且每隔21天轉(zhuǎn)移到相同的分化培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)14-100天即獲得不定芽。其中，在獲取腋芽步驟中，對(duì)所得萌芽條進(jìn)行的消毒處理具體如下將萌芽條剪去葉片置于自來(lái)水下沖洗30分鐘，然后再將萌芽條截為每段包含1-2個(gè)腋芽的小段，用體積百分比75%乙醇浸泡20-30秒，再用無(wú)菌水沖洗2次以及用質(zhì)量百分比0. 1%升汞浸泡5分鐘，倒出升汞，用無(wú)菌水沖洗萌牙條小段4-6次；修剪成0. 5-1. Ocm長(zhǎng)的帶腋芽的莖段，質(zhì)量百分比0. 1%升汞浸泡2分鐘；倒出升汞，用無(wú)菌水沖洗4-6次。此外，獲取腋芽步驟中，接入培養(yǎng)基的萌芽條在溫度為2348°C的條件下暗培養(yǎng) 21-28天，等待腋芽萌發(fā)，所采用的培養(yǎng)基是MS基本培養(yǎng)基+質(zhì)量百分比3%蔗糖+質(zhì)量百分比0. 7%瓊脂，pH5. 8。而在生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟，所切取的腋芽長(zhǎng)0.5 1.0cm，而切取的新芽長(zhǎng)
1.5^2. Ocm ；腋芽的繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是光照16h/天，光照強(qiáng)度1500_100001x，且溫度為2348°C;而生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是14-30天，光照16h/天，光照強(qiáng)度1500_100001χ，且溫度為23- °C。在新生芽培養(yǎng)步驟中，其培養(yǎng)條件是暗培養(yǎng)14-35天且溫度為2348°C。在愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中，新生芽切段成長(zhǎng)度為3-10mm的外植體，暗培養(yǎng)及弱光照培養(yǎng)的溫度范圍均為23-28°C，弱光照培養(yǎng)時(shí)，光照16h/天且光照強(qiáng)度為20-1001X。在分化不定芽步驟中，培養(yǎng)條件為光照16h/天，光照強(qiáng)度500-30001X且溫度為 23- "C。以下通過(guò)幾個(gè)實(shí)例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明方法的具體操作過(guò)程。實(shí)例1
選取自行采集的桉樹(shù)DH3249三年生植株，砍掉樹(shù)冠，保留0. 5-1. 5米高的樹(shù)樁。20-30 天后采集新生的不帶腋芽的萌芽條，切成2. Ocm長(zhǎng)的帶腋芽的莖段，體積百分比70%乙醇中浸泡20s，無(wú)菌水沖洗2次，然后在質(zhì)量百分比0. 1%升汞中消毒5min，無(wú)菌水沖洗4次，修剪成1. Ocm長(zhǎng)的帶腋芽的莖段，再于質(zhì)量百分比0. 1%升汞中消毒2min，無(wú)菌水沖洗6次。 晾干后接種在MS培養(yǎng)基中，每瓶接1-2顆，25°C暗培養(yǎng)觀天，得到萌發(fā)的腋芽。切1. Ocm左右長(zhǎng)的腋芽，轉(zhuǎn)移到MS培養(yǎng)基+0. lmg/L 6_芐基嘌呤+0. 01mg/L萘乙酸的培養(yǎng)基上，每隔3-4周轉(zhuǎn)移到相同的培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，光照16h/天，光照強(qiáng)度 30001x，25°C。選定新生長(zhǎng)出來(lái)的1. 5cm左右長(zhǎng)的芽，轉(zhuǎn)移到1/2MS+0. 5mg/L3_吲哚丁酸的培養(yǎng)基上進(jìn)行生根誘導(dǎo)3周，光照16h/d，光照強(qiáng)度30001x，25°C。
6
將生根苗保留根和基部的2個(gè)腋芽，切掉其余部分，接種在含蔗糖7% (質(zhì)量百分比)的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行新生芽培養(yǎng)，暗培養(yǎng)21d，24°C。將新生芽切為3-5毫米的小段轉(zhuǎn)移到含有0. lmg/L N-苯基_N_1，2，3_噻二唑-5-脲+0. 0lmg/L萘乙酸的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)7天，25°C ；轉(zhuǎn)移到弱光照培養(yǎng)14 天，光照16h/天，光照強(qiáng)度501x，25°C。將獲得的愈傷組織，轉(zhuǎn)移到含有0. 5mg/L 6_芐基嘌呤+0. lmg/L萘乙酸的分化培養(yǎng)基中，每隔21天轉(zhuǎn)移到相同的分化培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，光照16h/天，光照強(qiáng)度15001x， 25°C。在分化培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)20-100天產(chǎn)生不定芽。實(shí)例2
選取自行采集的桉樹(shù)廣林九號(hào)三年生植株，除了在愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟所使用培養(yǎng)基為含有1. Omg/L N-苯基-N-1，2，3-噻二唑-5-脲+0. lmg/L萘乙酸的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基之外，其余步驟和實(shí)例1對(duì)應(yīng)步驟相同。實(shí)例3
選取購(gòu)買的桉樹(shù)DH3249三年生植株，除了在愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟所使用培養(yǎng)基為含有2. Omg/L N-苯基-N-1，2，3-噻二唑-5-脲+0. 15mg/L萘乙酸的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基之外，其余步驟和實(shí)例1對(duì)應(yīng)步驟相同。上述三個(gè)實(shí)例分別所獲得的分化愈傷組織數(shù)量如下表1所示 表1 實(shí)例廣3中實(shí)驗(yàn)材料的分化效果
權(quán)利要求
1.一種誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，其特征在于，包括如下步驟獲取腋芽步驟從生長(zhǎng)3-5年、生長(zhǎng)正常無(wú)病蟲(chóng)害的雜交種桉樹(shù)上剪取萌芽條，所得萌芽條經(jīng)消毒處理后再接入培養(yǎng)基中進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)長(zhǎng)出腋芽；生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟切取腋芽轉(zhuǎn)移到添加有0. 1-1. Omg/L 6-芐基嘌呤和0. 01-0. 5mg/ L萘乙酸的MS培養(yǎng)基上在光照條件下進(jìn)行繼代培養(yǎng)，并每隔21- 天轉(zhuǎn)移到相同的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出符合要求的新芽，再切取新芽轉(zhuǎn)移到添加有0. 1-1. Omg/L 3-吲哚丁酸的1/2MS培養(yǎng)基上在光照條件下進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)至獲得生根苗；新生芽培養(yǎng)步驟將生根苗切掉頂芽，保留根和基部的1-4個(gè)腋芽，接種在含質(zhì)量百分比3-10%蔗糖的MS改良培養(yǎng)基上進(jìn)行新生芽培養(yǎng)；愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟以新生芽切段為外植體，接種在含0. 1-2. Omg/L N-苯基-N-1, 2，3-噻二唑-5-脲、0. 01-0. 15mg/L 萘乙酸、20. 0-200. Omg/L 腐胺和 3. 0-30. Omg/ L亞精胺的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)5-10天，再轉(zhuǎn)移到弱光照培養(yǎng)12-14天，獲得愈傷組織；分化不定芽步驟將獲得的愈傷組織，轉(zhuǎn)移到含0.2-2. Omg/L 6-芐基嘌呤、0.05-0. 5mg/L萘乙酸、10. 0-40. 0mg/L腐胺和0. 5-3. 0mg/L亞精胺的分化培養(yǎng)基上在光照條件下繼代培養(yǎng)，且每隔21天轉(zhuǎn)移到相同的分化培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)14-100天即獲得不定芽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，其特征在于獲取腋芽步驟中，對(duì)所得萌芽條進(jìn)行如下消毒處理將萌芽條剪去葉片置于自來(lái)水下沖洗30分鐘，然后再將萌芽條截為每段包含1-2個(gè)腋芽的小段，用體積百分比為75%乙醇浸泡20-30秒，再用無(wú)菌水沖洗2次以及用質(zhì)量百分比為0. 1%升汞浸泡5分鐘， 倒出升汞，用無(wú)菌水沖洗萌牙條小段4-6次；修剪成0. 5-1. Ocm長(zhǎng)的帶腋芽的莖段，質(zhì)量百分比為0. 1%升汞浸泡2分鐘；倒出升汞，用無(wú)菌水沖洗4-6次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，其特征在于獲取腋芽步驟中，接入培養(yǎng)基的萌芽條在溫度為2318°C的條件下暗培養(yǎng)21- 天，等待腋芽萌發(fā)，所采用的培養(yǎng)基是MS基本培養(yǎng)基+質(zhì)量百分比3%蔗糖+質(zhì)量百分比0. 7%瓊脂，pH5. 8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，其特征在于生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟，所切取的腋芽長(zhǎng)0. 5^1. 0cm,而切取的新芽長(zhǎng)1.5 2· Ocm0
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，其特征在于生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中，腋芽的繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是光照16h/天，光照強(qiáng)度1500-100001x，且溫度為2348°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，其特征在于生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中，生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是14-30天，光照16h/天， 光照強(qiáng)度1500-100001x，且溫度為2348°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，其特征在于新生芽培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是暗培養(yǎng)14-35天且溫度為2348°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，其特征在于愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中，暗培養(yǎng)及弱光照培養(yǎng)的溫度范圍均為 23-28°C，弱光照培養(yǎng)時(shí)，光照16h/天且光照強(qiáng)度為20-1001x。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，其特征在于愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中，新生芽切段成長(zhǎng)度為3-10mm的外植體。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，其特征在于分化不定芽步驟中，培養(yǎng)條件為光照16h/天，光照強(qiáng)度500-30001X且溫度為 23-280C ο
全文摘要
本發(fā)明涉及一種誘導(dǎo)雜交種桉樹(shù)離體器官通過(guò)愈傷組織分化不定芽的方法，包括獲取腋芽步驟從雜交種桉樹(shù)上剪取萌芽條，消毒處理后接入培養(yǎng)基中萌發(fā)培養(yǎng)長(zhǎng)出腋芽；生根誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟切取腋芽轉(zhuǎn)移到MS培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)長(zhǎng)出合要求的新芽，切取新芽轉(zhuǎn)移到1/2MS培養(yǎng)基上進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)至獲得生根苗；新生芽培養(yǎng)步驟將生根苗切掉頂芽，保留根和基部的1-4個(gè)腋芽，接種在MS培養(yǎng)基上進(jìn)行新生芽培養(yǎng)；愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟以新生芽切段為外植體接種在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，先暗培養(yǎng)再弱光照培養(yǎng)獲得愈傷組織；分化不定芽步驟將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，獲得不定芽。本發(fā)明以無(wú)性系成年桉樹(shù)的萌芽條為基礎(chǔ)，再生效率達(dá)60%左右。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102428873SQ201110426499
公開(kāi)日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2011年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月19日
發(fā)明者孫長(zhǎng)斌, 孟麗娜, 張?zhí)m英, 江淑珍, 郭棣, 陳方 申請(qǐng)人:普羅米綠色能源(深圳)有限公司