專利名稱：一種燒傷動物模型的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用石油煉油殘料制作燒傷動物模型的方法，用于人類燒傷的病理機制、藥物的篩選和治療作用的研究。本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)及生命科學(xué)試驗研究領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
燒傷是物理、化學(xué)、放射線、激光等諸多因素作用于機體而造成的一種極其復(fù)雜的外傷性疾病，盡管人類努力預(yù)防燒傷的發(fā)生，但急診室每年接收的燒傷病人數(shù)量仍然很大。 據(jù)統(tǒng)計，美國每年的燒傷病例可達50萬之多。由于臨床積累經(jīng)驗的局限性和燒傷發(fā)生發(fā)展的復(fù)雜性使燒傷的病理機理、治療藥物的研究仍然是醫(yī)藥學(xué)研究的重點方向之一。受道義上和方法學(xué)上的種種限制，許多實驗不能也不應(yīng)該以病人作為試驗對象，導(dǎo)致深入探討疾病的發(fā)病機理及藥物等治療效果觀察等極大困難。動物模型可克服上述不足，在生物醫(yī)學(xué)研究中發(fā)揮著獨特的作用。故建立燒傷動物模型是現(xiàn)代燒傷研究領(lǐng)域基礎(chǔ)與應(yīng)用研究中的一個極為重要的實驗方法和手段。一個理想的燒傷模型將有助于更科學(xué)、更準確地認識燒傷后機體各系統(tǒng)及局部創(chuàng)面的發(fā)展演變規(guī)律，探索針對性的防治措施。55°C以上的溫度作用于動物表面組織一定時間后，即可引起實驗性燒傷。因此，有關(guān)燒傷動物模型的制作方式種類較多，主要是火焰燒傷、電光源法、熱燙傷等。實驗性熱燙傷分點狀溫?zé)釥C傷法、直接熱水燙傷法和熱蒸汽燙傷法三類。點狀溫?zé)釥C傷法由kvitt于 1949年創(chuàng)建。模型動物不麻醉，背部固定于燙板下，用點狀燙傷器底端借助燙傷器自重，緊貼于實驗動物擬燙傷區(qū)實施燙傷。該法具有燙傷面積和深度較易控制，重復(fù)性高，大小動物均適用等優(yōu)點，被認為是標準的燙傷模型制作方法；直接熱水燙傷法將實驗動物擬燙傷區(qū)直接置于恒溫?zé)崴兄聜?，致傷深度易于控制，重?fù)性好，但燙傷面積較難控制；熱蒸汽燙傷法多用于建立動物吸入性損傷模型?？傮w而言，燙傷的溫度容易控制，作用均勻，面積較易掌握，一般比其它燒傷模型穩(wěn)定、準確、重復(fù)性好?，F(xiàn)實生活中或軍事戰(zhàn)爭中由燃料等化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致的火焰燒傷較熱燙傷更為常見，對這些原因引起的燒傷進行相關(guān)研究實屬必要?；鹧鏌齻饕唐蛷?fù)制燒傷模型和混合燃料復(fù)制燒傷模型。但目前常用的燒傷模型燃料均難以購買，且大多沒有確切用量及燒傷時間，燒傷程度不易控制。因此穩(wěn)定、 準確、重復(fù)性好的火焰燒傷動物模型的建立十分重要。實驗性燒傷的損害程度取決于致傷溫度的高低、致傷時間的長短、燒傷組織的傷前情況以及實驗動物的機體反應(yīng)性。為保持致傷條件恒定一致，復(fù)制出損害程度一致的模型，以便于進行重復(fù)和對比，應(yīng)針對致傷時間、致傷溫度和致傷后各種可能的影響因素，采取相應(yīng)的措施，最大限度地減少各種因素的影響。使用本法制造模型時可用軟刷均勻涂布混合燃料于動物皮膚表面，嚴格控制燒傷時間，達到一次同時滅火，即可復(fù)制出所需的燒傷面積與深度，模擬人類燒傷的癥狀和體征，并避免燒傷創(chuàng)面深度不一致，能滿足進一步實驗的要求。本模型具有造模簡單，取材方便，且模型穩(wěn)定，成功率高，重現(xiàn)性好，燒傷程度易于控制等特點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種以石油煉油殘料和汽油為混合燃料制作動物燒傷模型的方法，該方法具有造模簡單、取材方便、模型穩(wěn)定、成功率高、重現(xiàn)性好、燒傷程度易于控制等特點，可用于人類燒傷的病理機制、治療藥物的篩選和評價等研究的動物模型。混合燃料配方按重量百分比計為20 60%石油煉油殘料即常壓渣油，40 80%汽油。模型制作方法將石油煉油殘料溶于汽油中，混勻，-20°C冷凍，取出，攪拌，反復(fù)冷凍攪拌3 7次至均勻膠狀；將此混合燃料涂于動物皮膚表面，點火，持續(xù)燃燒15 30秒， 造成不同程度的燒傷。傷后立即補液復(fù)蘇，分籠飼養(yǎng)，自由飲食；采用創(chuàng)面組織病理切片，光鏡下病理診斷并確定燒傷等級。本模型所用的動物包括大鼠、小鼠、豚鼠、家兔、豬和狗等，可以模擬各種原因如火焰、電光、放射線、熱水等導(dǎo)致的人類燒傷的癥狀和體征，為科研和臨床治療提供必須的動物燒傷疾病模型。
具體實施例方式下面列舉典型實施例，對本發(fā)明進一步說明，但不以任何形式構(gòu)成對本發(fā)明的限制。實施例1 混合燃料致大鼠20%體表面積淺II度燒傷混合燃料的配制準確稱量35g石油煉油殘料即常壓渣油，加入93#汽油至100g， 置磨口瓶內(nèi)，充分攪拌。至冰箱內(nèi)，每日充分振蕩IOmin，共7天，呈均勻膠狀。實驗動物SD大鼠，雌雄不拘，體重200 250g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物研究中心提供。皮膚處理(1)祛毛3%戊巴比妥鈉30mg/kg ip麻醉，將大鼠固定在板上，用電推子除去被毛，略大于擬燒傷面積。( 脫毛用硫化鈉糊劑脫毛，待用。體表面積計算準確稱量體重，稱重前禁食16h。按以下公式計算體表面積 B= K* V^Wi ·
9S =體表面積(cm2)，W =晨間體重(g)，K =常數(shù)(12. 54)。燒傷面積計算燒傷面積(cm2)=體表面積(cm2) X擬燒面積％。模型制作動物3%戊巴比妥鈉30mg/kg ip麻醉，將預(yù)燒皮膚周圍用濕布遮蓋。用毛刷將混合燃料均勻的涂于預(yù)燒傷區(qū)，涂料面積與預(yù)燒傷面積一致，周圍用耐火材料或濕紗布保護，立即點燃并以秒表計時，燒傷時間設(shè)定為15秒，到時用濕紗布滅火；燃燒需在氣流穩(wěn)定的環(huán)境進行。傷后立即腹腔注射乳酸林格液5ml，分籠飼養(yǎng)，自由飲食。確定燒傷深度燒傷創(chuàng)面分別于傷后Ih以內(nèi)和Mh，將大小IcmX Icm的燒傷皮膚取下作組織病理學(xué)檢查以確定燒傷深度，切取對照組全層皮膚，標本固定于10%的甲醛溶液中，經(jīng)脫水、常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色。診斷結(jié)果創(chuàng)面紅腫，出現(xiàn)水皰或表皮與真皮分離。組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)表皮破壞，真皮淺層損傷，診斷為淺II度燒傷。實施例2 混合燃料致大鼠20%體表面積深I(lǐng)I度燒傷混合燃料配制、實驗動物、皮膚處理等均同實施例1。
模型制作動物3%戊巴比妥鈉30mg/kg ip麻醉，將預(yù)燒皮膚周圍用濕布遮蓋。用毛刷將混合燃料均勻的涂于預(yù)燒傷區(qū)，涂料面積與預(yù)燒傷面積一致，立即點燃并以秒表計時，燒傷時間設(shè)定為25秒，到時用濕紗布滅火；燃燒需在氣流穩(wěn)定的環(huán)境進行。傷后立即腹腔注射乳酸林格液5ml，分籠飼養(yǎng)，自由飲食。確定燒傷深度同實施例1。診斷結(jié)果燙傷后創(chuàng)面立即變白，輕度腫脹，光澤差，肉眼可明顯區(qū)分燒傷部位與正常皮區(qū)；24h后創(chuàng)面色澤加深，邊界清晰。組織學(xué)檢查表皮全部壞死脫落，真皮層膠元纖維結(jié)構(gòu)不清，深層上部也有上述改變，但可見一些殘存的皮膚附件存在，再下有較多的中性粒細咆浸潤，血管擴張充血，診斷為深I(lǐng)I度燒傷。實施例3 混合燃料致大鼠20%體表面積III度燒傷混合燃料配制、實驗動物、皮膚處理等均同實施例1。模型制作動物3%戊巴比妥鈉30mg/kg ip麻醉，將預(yù)燒皮膚周圍用濕布遮蓋。用毛刷將混合燃料均勻的涂于預(yù)燒傷區(qū)，涂料面積與預(yù)燒傷面積一致，立即點燃并以秒表計時，燒傷時間設(shè)定為30秒，到時用濕紗布滅火。燃燒需在氣流穩(wěn)定的環(huán)境進行。傷后立即腹腔注射乳酸林格液5ml，分籠飼養(yǎng)，自由飲食。確定燒傷深度同實施例1。診斷結(jié)果傷后皮膚面積顯著縮小，顏色焦黃并有焦臭味。肉眼見燒傷皮膚凝固變薄。病理切片顯示網(wǎng)狀層下半部分以至全部或大部分被毀，毛囊及皮脂腺全部壞死，未見殘余毛囊，病變符合III度燒傷創(chuàng)面特征。
權(quán)利要求
1.一種用混合燃料制造動物燒傷模型，其混合燃料配方的特征在于含有重量百分比的 20% 60%石油煉油殘料即常壓渣油、40 80%汽油。
2.按照權(quán)利要求1所述制造燒傷動物模型使用的混合燃料，其配制方法的特征在于將石油煉油殘料溶于汽油中，混勻，-20°C冷凍，取出，攪拌，反復(fù)冷凍攪拌3 7次至均勻膠狀，備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的制造動物燒傷模型采用的混合燃料配方及其配制方法，其制造動物燒傷模型的方法特征在于可選用小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、豬和狗等實驗動物，將混合燃料用軟刷均勻涂于動物脫毛預(yù)燒皮膚表面，周圍用濕布遮蓋，點火，持續(xù)燃燒15 30 秒，造成不同程度的燒傷；傷后立即補液復(fù)蘇，分籠飼養(yǎng)，自由飲食；采用創(chuàng)面組織病理切片光鏡下形態(tài)觀察，診斷并確定燒傷等級。
4.按照權(quán)利要求1 3所述的用混合燃料制造的燒傷動物模型，其病理改變和臨床體征特征在于該模型與各種原因如火焰、電光、放射線、熱水等導(dǎo)致的人體燒傷病理改變、癥狀和體征等非常相似，為研究燒傷的發(fā)病機制和評價燒傷的治療藥物等提供了動物燒傷模型；本模型具有操作簡便，重現(xiàn)性好，成功率高，燒傷程度易于控制等顯著優(yōu)點。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用混合燃料制造燒傷動物模型方法，其特征在于混合燃料由20％～60％石油煉油殘料，40％～80％汽油組成，配制方法是將石油煉油殘料溶于汽油中，混勻，-20℃冷凍，取出，攪拌，反復(fù)冷凍攪拌3～7次至均勻膠狀；將混合燃料均勻涂于大鼠、小鼠、豚鼠、家兔、豬和狗等動物脫毛預(yù)燒皮膚表面，點火，持續(xù)燃燒15～30秒；傷后立即補液復(fù)蘇，分籠飼養(yǎng)，自由飲食；采用創(chuàng)面組織病理切片光鏡下觀測并確定燒傷分級；本模型具有操作簡便，重現(xiàn)性好，成功率高，燒傷程度易于控制等優(yōu)點，可用于人類燒傷的病理機制、治療藥物的篩選和評價等研究。
文檔編號A61D1/00GK102274084SQ20111012322
公開日2011年12月14日 申請日期2011年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月12日
發(fā)明者康榮, 曹蔚, 楊倩, 王四旺, 謝艷華 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)