本發(fā)明涉及動物腸道菌群的收集技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及自由狀態(tài)下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法。

背景技術(shù)：

人體腸道是一個(gè)多元化和充滿活力的微生態(tài)系統(tǒng)，擁有很多種細(xì)菌腸道菌群。腸道菌群對人類健康有著重要的影響，已被報(bào)道與心腦血管疾病、肥胖、糖尿病、艾滋病、自閉癥、抑郁癥及老年癡呆癥等有密切關(guān)聯(lián)，因此，腸道菌群研究成為近年來的研究熱點(diǎn)。

非人靈長類動物(主要為猴)由于其在親緣關(guān)系上與人最接近，與人類的遺傳物質(zhì)有75％-85％的同源性，在生理結(jié)構(gòu)以及免疫代謝方面與人類高度的相似，在腦科學(xué)腦認(rèn)知研究中相比其他的實(shí)驗(yàn)動物具有強(qiáng)大的優(yōu)勢。因此在腸道菌群的研究當(dāng)中，作為最接近人類的動物模型，非人靈長類腸道菌群(又稱“糞便細(xì)菌”、“糞菌”)的收集就至關(guān)重要。

目前非人靈長類腸道菌群收集的方法包括：1)撿拾自由活動動物的糞便；2)麻醉狀態(tài)下用藥棉簽插入肛門采取直腸內(nèi)的糞菌；3)尸體解剖時(shí)直接在小腸、直腸處取樣。方法1)通常是在固定時(shí)間(每天早晨)撿拾猴籠底部的糞便，該方法可以長期重復(fù)采樣、采樣量高；但存在的缺點(diǎn)是掉落在猴籠底部的糞便通常已與尿液混合在一起，變成糊狀，其潮濕的質(zhì)地和長時(shí)間的存放不利于保持腸道菌群基因樣本的完整性。方法2)通常是用棉簽深入肛門到達(dá)直腸采取糞菌，該方法可以短時(shí)間內(nèi)可以將腸道菌群樣品迅速冷凍，保證菌群基因樣本的完整性，但藥棉簽采樣量小，采樣效率低。方法3)既可以保證菌群基因樣本的完整性也 能保證采樣量，但由于動物已處死，無法長期重復(fù)取樣，長時(shí)程對動物腸道菌群的檢測變得不可能。

因此，有必要提供一種取樣效率高、可重復(fù)采用、可保持在菌群基因樣本完整性的腸道菌群采集方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種自由狀態(tài)下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法。該方法可以在對自由活動狀態(tài)下的非人靈長類動物的腸道菌群進(jìn)行取樣時(shí)，避免腸道菌群樣品與尿液混合變成糊狀，有效提高菌群基因樣本完整性，從而使該方法兼具重復(fù)采樣性好、采樣量高、菌群基因樣本完整性好的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明提供的自由狀態(tài)下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法，包括以下步驟：

(1)在非人靈長類動物的飼養(yǎng)容器的底部放置一柔性墊巾，以及承載所述柔性墊巾的硬質(zhì)墊板，其中，所述柔性墊巾包括吸水層和防水層，所述防水層與所述硬質(zhì)墊板接觸；

(2)觀察到所述動物排便后，從所述飼養(yǎng)容器中取出所述硬質(zhì)墊板及柔性墊巾，收集所述柔性墊巾上的腸道菌群樣品。

本發(fā)明中，所述柔性墊巾的上層為吸水層，下層為防水層，當(dāng)自由活動狀態(tài)下的動物排便、排尿掉落到所述飼養(yǎng)容器底部后，尿液可被吸水層吸收，避免帶腸道菌群的糞便與尿液混合變成糊狀，以免造成部分腸道菌群的死亡，同時(shí)下層的防水層又可避免帶腸道菌群的糞便中原有的水分被吸干，便于保持糞便原有的干燥度，所述柔性墊巾可有效保持糞菌樣品的形態(tài)完整性，提高菌群基因樣本的完整性；下層的硬質(zhì)墊板起承托柔性墊巾的作用，在拖拉所述硬質(zhì)墊板的過程中，由于所述柔性墊巾被支撐在所述硬質(zhì)墊板上，帶有腸道菌群樣品的柔性墊巾也被帶出所述飼養(yǎng)容器，便于進(jìn)行腸道菌群樣品的收集和低溫存儲，同時(shí)也利于同一動物的不同糞便堆的分別取樣、儲存和分析。

優(yōu)選地，所述吸水層的材質(zhì)包括植物性纖維材料絨毛漿、棉花和高分子吸水 樹脂中的一種或多種，但不限于此。

優(yōu)選地，所述防水層包括油氈、聚乙烯膜和無紡布中的一種或多種，但不限于此

優(yōu)選地，所述吸水層和防水層是通過粘附或縫合而連接在一起。

本發(fā)明一實(shí)施方式中，所述柔性墊巾可以為常用的紙尿墊或手術(shù)墊巾。

優(yōu)選地，所述硬質(zhì)墊板包括木板、pvc板、硬質(zhì)塑料板和硬質(zhì)合金板的一種或多種，但不限于此。

優(yōu)選地，所述飼養(yǎng)容器包括飼養(yǎng)籠。

本發(fā)明的有益效果是：

(1)柔性墊巾的上層吸水，下層防水，自由活動狀態(tài)下的動物排便、排尿掉落到柔性墊巾后，尿液被吸水層吸收，避免糞便與尿液混合變成糊狀，防水層又可保持糞菌的原有干燥度，利于保持腸道菌群樣品的完整性；

(2)觀察到動物排便后，下層硬質(zhì)墊板可便于承托并取出柔性墊巾，便于收集附著在吸水層上的腸道菌群樣品，同時(shí)也利于同一個(gè)動物的不同糞便堆的分別取樣，儲存和分析。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例中自由狀態(tài)下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法的示意圖，1為飼養(yǎng)猴籠，2為柔性墊巾(吸水層和防水層結(jié)構(gòu)未示出)，3為硬質(zhì)墊板，4為獼猴糞便。

具體實(shí)施方式

以下所述是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

一種自由狀態(tài)下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法，包括以下步驟：

(1)在非人靈長類動物的飼養(yǎng)容器的底部放置一硬質(zhì)墊板，并在所述硬質(zhì)墊板之上放置一柔性墊巾，其中，所述柔性墊巾包括吸水層和防水層，所述防水層與所述硬質(zhì)墊板接觸；

(2)觀察到非人靈長類動物排便后，從所述飼養(yǎng)容器中中拖拉所述硬質(zhì)墊板，硬質(zhì)墊板及支撐在其上的柔性墊巾被帶出猴籠，收集所述柔性墊巾上的腸道菌群樣品。

本發(fā)明實(shí)施例中，所述非人靈長類動物為獼猴，所述飼養(yǎng)容器為飼養(yǎng)猴籠。

本發(fā)明實(shí)施例中，所述吸水層的材質(zhì)包括植物性纖維材料絨毛漿、棉花和高分子吸水樹脂中的一種或多種。

本實(shí)施方式中，所述吸水層為純木漿和高吸水樹脂(sap)構(gòu)成的復(fù)合結(jié)構(gòu)。

本發(fā)明實(shí)施例中，所述防水層包括油氈、聚乙烯膜和無紡布中的一種或多種。

本實(shí)施方式中，所述防水層為防水無紡布。

本實(shí)施方式中，所述吸水層和防水層是縫合在一起。

作為本發(fā)明的另外一種實(shí)施可能，可采用醫(yī)院用紙尿墊作為所述柔性墊布。

本發(fā)明實(shí)施例中，所述硬質(zhì)墊板包括木板、pvc板、硬質(zhì)塑料板和硬質(zhì)合金板的一種或多種。

本實(shí)施方式中，所述硬質(zhì)墊板為聚氟乙烯(pvc)。

本發(fā)明中，所述柔性墊巾的上層為吸水層，下層為防水層，當(dāng)自由活動狀態(tài)下的猴子的排便、排尿掉落到飼養(yǎng)猴籠底部后，尿液可被吸水層吸收，避免帶腸道菌群的糞便與尿液混合變成糊狀，以免造成部分腸道菌群的死亡，同時(shí)下層的防水層又可避免帶腸道菌群的糞便中原有的水分被吸干，便于保持糞便原有的干燥度，即所述柔性墊巾可有效保持糞菌樣品的形態(tài)完整性，提高菌群基因樣本的完整性；下層的硬質(zhì)墊板起承托柔性墊巾的作用，在拖拉所述硬質(zhì)墊板的過程中，帶有腸道菌群樣品的柔性墊巾也被帶出所述飼養(yǎng)容器，便于進(jìn)行腸道菌群樣品的收集和低溫存儲，同時(shí)也利于同一動物的不同糞便堆的分別取樣、儲存和分析。

本發(fā)明中提供的所述腸道菌群收集方法，可以兼具腸道菌群樣品重復(fù)采樣性高、采樣量高、菌群基因樣本完整性好的優(yōu)點(diǎn)。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的一種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。