專利名稱：一種極東錦雞兒的微繁方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微繁方法。
背景技術(shù)：
極東錦雞兒(Caragana fruticosa)是豆科錦雞兒屬的一種分布范圍極狹、資源量極少的瀕危樹種，喜光、耐寒、耐干旱、耐瘠薄，適宜于作綠化觀賞、蜜源和飼料植物及荒山綠化和水土保持林造林樹種。極東錦雞兒在我國主要分布于黑龍江省尚志市帽兒山山頂?shù)膸r石裸露處，分布面積很小，是黑龍江省特有種，已處于滅絕邊緣。開發(fā)極東錦雞兒規(guī)?；敝臣夹g(shù)，不但可以有效擴(kuò)大極東錦雞兒資源數(shù)量，而且可以增加?xùn)|北地區(qū)尤其是干旱、瘠薄、寒冷地帶的可利用樹種資源，生態(tài)和經(jīng)濟(jì)意義重大。極東錦雞兒用種子繁殖。但是由于極東錦雞兒數(shù)量稀少，導(dǎo)致可采種資源嚴(yán)重不足。同時(shí)，極東錦雞兒育性很差，果莢內(nèi)經(jīng)常無種子或僅有1粒種子，種實(shí)害蟲嚴(yán)重，種子被害率很高，并且利用種子繁殖存在苗木生長速度較慢，長勢(shì)不齊，很難在短時(shí)間內(nèi)繁殖出大量、優(yōu)質(zhì)的苗木的問題。因此，依靠種子繁殖進(jìn)行資源擴(kuò)繁是不現(xiàn)實(shí)的。如果利用嫩枝扦插或嫁接的方式進(jìn)行繁殖，存在可利用植物材料不足，繁殖周期長，增殖效率低的問題，因此很難在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)極東錦雞兒苗木的資源擴(kuò)繁，使極東錦雞兒的種質(zhì)資源保存和生態(tài)經(jīng)濟(jì)利用受到了限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決極東錦雞兒數(shù)量稀少、繁殖周期長、增殖效率低的問題， 而提供的一種極東錦雞兒的微繁方法。極東錦雞兒的微繁方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、切取極東錦雞兒植株個(gè)體的帶芽莖段進(jìn)行預(yù)處理，然后接種到含0. 1 lmg/L細(xì)胞分裂素、20 40g/L蔗糖和5 7g/ L瓊脂的增殖培養(yǎng)基上，在溫度為20 30°C、濕度為40 % 80 %、光照強(qiáng)度為20 100 μ mol · πΓ2 · S—1、每天光照12 Mh、每10 30天更換新鮮培養(yǎng)基的條件下培養(yǎng)1 3個(gè)月，獲得叢生芽苗；二、挑選健壯的叢生芽苗，以單個(gè)芽苗為單位進(jìn)行切離，將切離后的單個(gè)芽苗切割成長度為1. 5 5. Ocm的帶頂芽的莖段，然后將帶頂芽的莖段接種到含有0. 05 0. 5mg/ L生長素、20 40g/L蔗糖和5 7g/L瓊脂的生根培養(yǎng)基上，在溫度為20 30°C、濕度為 40% 80%、光照強(qiáng)度為20 100 μ mol · πΓ2 · s_1、每天光照12 24h、每10 30天更換新鮮培養(yǎng)基的條件下培養(yǎng)1 2個(gè)月，獲得再生植株；三、將株高達(dá)如m、根系發(fā)達(dá)、葉片展開的再生植株在培養(yǎng)室內(nèi)敞口煉苗3d，然后洗凈根系附著的培養(yǎng)基，再移植到栽培基質(zhì)中并澆透水，在溫度為20 30°C、濕度為 60% 80%、光照強(qiáng)度為40 100 μ mol · πΓ2 · s—1、每天光照12 18h的條件下用塑料薄膜覆蓋容器口培養(yǎng)至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得極東錦雞兒苗木， 即完成極東錦雞兒的微繁方法；
其中步驟一中增殖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基、1/2MS培養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基中大量元素濃度減半)、DKff培養(yǎng)基、WPM培養(yǎng)基或QL培養(yǎng)基，pH值均為5 6 ；步驟一中細(xì)胞分裂素為芐基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)、激動(dòng)素(KT)或噻苯隆 (TDZ)；步驟二中生根培養(yǎng)基為V2MS培養(yǎng)基、DKW培養(yǎng)基或WPM培養(yǎng)基，pH值均為5 6 ；步驟二中生長素為萘乙酸(NAA)或吲哚丁酸(IBA)；步驟三中栽培基質(zhì)按體積份數(shù)比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠巖組成。本發(fā)明中極東錦雞兒的微繁(即為極東錦雞兒芽增殖途徑的植株再生)，對(duì)母本破壞小，繁殖周期短，繁殖速度快，增殖效率高(每1個(gè)月增殖30 40倍)，而且產(chǎn)生的后代遺傳穩(wěn)定性好；苗木成活率高達(dá)80% 85% ；可以實(shí)現(xiàn)縮短繁殖周期、提高繁殖效率、有效擴(kuò)大極東錦雞兒資源數(shù)量的目標(biāo)。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式極東錦雞兒的微繁方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、切取極東錦雞兒植株個(gè)體的帶芽莖段進(jìn)行預(yù)處理，然后接種到含0. 1 lmg/L細(xì)胞分裂素、20 40g/L蔗糖和5 7g/L瓊脂的增殖培養(yǎng)基上，在溫度為20 30°C、濕度為40% 80%、光照強(qiáng)度為20 100 μ mol ·πΓ2 · s—1、每天光照12 Mh、每10 30天更換新鮮培養(yǎng)基的條件下培養(yǎng)1 3個(gè)月，獲得叢生芽苗；二、挑選健壯的叢生芽苗，以單個(gè)芽苗為單位進(jìn)行切離，將切離后的單個(gè)芽苗切割成長度為1. 5 5. Ocm的帶頂芽的莖段，然后將帶頂芽的莖段接種到含有0. 05 0. 5mg/ L生長素、20 40g/L蔗糖和5 7g/L瓊脂的生根培養(yǎng)基上，在溫度為20 30°C、濕度為 40% 80%、光照強(qiáng)度為20 100 μ mol · πΓ2 · s_1、每天光照12 24h、每10 30天更換新鮮培養(yǎng)基的條件下培養(yǎng)1 2個(gè)月，獲得再生植株；三、將株高達(dá)如m、根系發(fā)達(dá)、葉片展開的再生植株在培養(yǎng)室內(nèi)敞口煉苗3d，然后洗凈根系附著的培養(yǎng)基，再移植到栽培基質(zhì)中并澆透水，在溫度為20 30°C、濕度為 60% 80%、光照強(qiáng)度為40 100 μ mol · πΓ2 · s—1、每天光照12 18h的條件下用塑料薄膜覆蓋容器口培養(yǎng)至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得極東錦雞兒苗木， 即完成極東錦雞兒的微繁方法；其中步驟一中增殖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基、1/2MS培養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基中大量元素濃度減半)、DKff培養(yǎng)基、WPM培養(yǎng)基或QL培養(yǎng)基，pH值均為5 6 ；步驟一中細(xì)胞分裂素為芐基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)、激動(dòng)素(KT)或噻苯隆 (TDZ)；步驟二中生根培養(yǎng)基為V2MS培養(yǎng)基、DKW培養(yǎng)基或WPM培養(yǎng)基，pH值均為5 6 ；步驟二中生長素為萘乙酸(NAA)或吲哚丁酸(IBA)；步驟三中栽培基質(zhì)按體積份數(shù)比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠巖組成。
本實(shí)施方式步驟一中極東錦雞兒植株個(gè)體的帶芽莖段為無菌組織培養(yǎng)苗的帶芽莖段或野外多年生植株的帶芽莖段。本實(shí)施方式步驟一中每10 30天更換新鮮培養(yǎng)基，在每次更換新鮮培養(yǎng)基前可將已經(jīng)形成的叢生芽分割成小的叢芽群，然后分別接種到新鮮培養(yǎng)基上，可循環(huán)重復(fù)進(jìn)行， 以獲得更多增殖倍數(shù)的芽苗，直至產(chǎn)生能夠滿足需求的芽苗數(shù)量。本實(shí)施方式步驟三中移植后的培養(yǎng)過程中每天用噴霧器噴水1次。本實(shí)施方式中涉及的MS培養(yǎng)基、1/2MS培養(yǎng)基、DKW培養(yǎng)基、WPM培養(yǎng)基和QL培養(yǎng)基的成分如表1所示。表 權(quán)利要求
1.一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于極東錦雞兒的微繁方法按以下步驟實(shí)現(xiàn) 一、切取極東錦雞兒植株個(gè)體的帶芽莖段進(jìn)行預(yù)處理，然后接種到含0. 1 lmg/L細(xì)胞分裂素、20 40g/L蔗糖和5 7g/L瓊脂的增殖培養(yǎng)基上，在溫度為20 30°C、濕度為40% 80%、光照強(qiáng)度為20 100 μ mol · πΓ2 · s—1、每天光照12 Mh、每10 30天更換新鮮培養(yǎng)基的條件下培養(yǎng)1 3個(gè)月，獲得叢生芽苗；二、挑選健壯的叢生芽苗，以單個(gè)芽苗為單位進(jìn)行切離，將切離后的單個(gè)芽苗切割成長度為1. 5 5. Ocm的帶頂芽的莖段，然后將帶頂芽的莖段接種到含有0. 05 0. 5mg/L生長素、20 40g/L蔗糖和5 7g/L瓊脂的生根培養(yǎng)基上，在溫度為20 30°C、濕度為40% 80%、光照強(qiáng)度為20 100 μ mol · πΓ2 · s—1、每天光照12 Mh、每10 30天更換新鮮培養(yǎng)基的條件下培養(yǎng)1 2個(gè)月，獲得再生植株；三、將株高達(dá)4cm、根系發(fā)達(dá)、葉片展開的再生植株在培養(yǎng)室內(nèi)敞口煉苗3d，然后洗凈根系附著的培養(yǎng)基，再移植到栽培基質(zhì)中并澆透水，在溫度為20 30°C、濕度為60% 80%、光照強(qiáng)度為40 100 μ mol · m_2 · s_\每天光照12 18h的條件下用塑料薄膜覆蓋容器口培養(yǎng)至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得極東錦雞兒苗木，即完成極東錦雞兒的微繁方法；其中步驟一中增殖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基、1/2MS培養(yǎng)基、DKW培養(yǎng)基、WPM培養(yǎng)基或QL培養(yǎng)基，pH值均為5 6 ；步驟一中細(xì)胞分裂素為芐基腺嘌呤、玉米素、激動(dòng)素或噻苯??；步驟二中生根培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基、DKW培養(yǎng)基或WPM培養(yǎng)基，pH值均為5 6 ；步驟二中生長素為萘乙酸或吲哚丁酸；步驟三中栽培基質(zhì)按體積份數(shù)比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠巖組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于步驟一中極東錦雞兒植株個(gè)體的帶芽莖段為帶有頂芽或腋芽、且長度為1. 0 2. Ocm的莖段。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于步驟一中預(yù)處理的過程為用體積濃度為70% 80%的乙醇溶液浸泡20 60s后再用另一份體積濃度為70% 80%的乙醇溶液浸泡20 60s，然后用無菌水沖洗3 7次，再用質(zhì)量濃度為 0. 05% 0. 2%的氯化汞溶液攪拌浸泡8 15min，然后用無菌水沖洗3 7次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于步驟一中在溫度為 25°C、濕度為60%、光照強(qiáng)度為50 μ mol · πΓ2 · s—1、每天光照16h、每15天更換新鮮培養(yǎng)基的條件下培養(yǎng)2個(gè)月，獲得叢生芽苗。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于步驟二中在溫度為 27°C、濕度為70%、光照強(qiáng)度為60 μ mol ·πΓ2· s—1、每天光照18h、每20天更換新鮮培養(yǎng)基的條件下培養(yǎng)1. 5個(gè)月，獲得再生植株。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于步驟三中在溫度為 25°C、濕度為70%、光照強(qiáng)度為40μπιΟ1 · πΓ2 · s—1、每天光照16h的條件下用塑料薄膜覆蓋容器口培養(yǎng)至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得極東錦雞兒苗木。
全文摘要
一種極東錦雞兒的微繁方法，它涉及一種微繁方法。它解決了極東錦雞兒數(shù)量稀少、繁殖周期長、增殖效率低的問題。方法一、帶芽莖段預(yù)處理后進(jìn)行增殖培養(yǎng)，得叢生芽苗；二、叢生芽苗切離后進(jìn)行生根培養(yǎng)，得再生植株；三、再生植株進(jìn)行移植培養(yǎng)至長出的新葉完全展開，獲得極東錦雞兒苗木即完成。本發(fā)明中極東錦雞兒的微繁，對(duì)母本破壞小，繁殖周期短，繁殖速度快，增殖效率高(每1個(gè)月增殖30～40倍)，而且產(chǎn)生的后代遺傳穩(wěn)定性好；苗木成活率高達(dá)80％～85％；可以實(shí)現(xiàn)縮短繁殖周期、提高繁殖效率、有效擴(kuò)大極東錦雞兒資源數(shù)量的目標(biāo)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102228002SQ201110108969
公開日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月28日
發(fā)明者楊玲, 沈海龍, 翟曉杰 申請(qǐng)人:東北林業(yè)大學(xué), 楊玲, 沈海龍