專利名稱：一種防治桃紅頸天牛的大型真菌殺蟲劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物農(nóng)藥，特別是涉及一種防治園林蛀干害蟲桃紅頸天牛的微生 物源大型真菌殺蟲劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
桃紅頸天牛是一類危害性十分嚴(yán)重的蛀干害蟲，它的危害主要是幼蟲蛀蝕桃樹、 杏樹和櫻桃等核果類樹干，在木質(zhì)部形成彎曲的隧道，破壞韌皮部和木質(zhì)部，造成樹皮脫 落、樹勢衰弱、枝干易折，常引起整株樹枯死，是公認(rèn)的、最難防治的害蟲。目前用于防治桃紅頸天牛的微生物源真菌殺蟲劑主要是白僵菌殺蟲劑，此殺蟲劑 是由白僵菌孢子粉制成的活菌制劑，作用機(jī)理是白僵菌的活孢子侵入桃紅頸天牛幼蟲體內(nèi) 后形成大量菌絲并產(chǎn)生生物毒素使昆蟲死亡。此殺蟲劑具有易降解、無藥物殘留、不殺害蟲 的天敵、害蟲不產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，但是存在以下不足1、致死率不高，幼蟲死亡率低，僅為 22. 6% ；2、對桃紅頸天牛的幼蟲毒殺選擇性差，而對菜青蟲和松毛蟲針對性強(qiáng)；3、藥效時間 短，不耐高溫，當(dāng)溫度高于時孢子即失活，高溫季節(jié)使用效果不好。大型真菌是菌物中能形成大型子實(shí)體的一類真菌，子實(shí)體的大小足以讓肉眼辨識 和徒手采摘。大型真菌種類繁多，有些種類可以食用，具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值，如 香菇、金針菇、靈芝、冬蟲夏草等；還有些種類不能食用，因?yàn)楹猩锒舅兀谴笮陀卸菊?菌，俗稱毒蘑菇。據(jù)統(tǒng)計(jì)已知的大型有毒真菌有1 種，這些大型真菌雖然不能食用，但是 具有較高的藥用價值，如有的種類含有忌避、拒食、毒殺害蟲的生物毒素，這些毒素是天然 產(chǎn)物，具有易降解、種類多、活性強(qiáng)、與環(huán)境相容性好、易與其他藥物混配、合理使用對人畜 安全等優(yōu)點(diǎn)，倍受人們高度重視，研制開發(fā)大型真菌殺蟲劑將成為生物農(nóng)藥研究的熱點(diǎn)。目 前尚未發(fā)現(xiàn)大型真菌殺蟲劑在防治桃紅頸天牛中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供的是一種防治桃紅頸天牛的大型真菌殺蟲劑，該大型真菌殺蟲劑對防 治桃紅頸天牛具有致死率高、選擇性強(qiáng)、藥效時間長和耐高溫的特點(diǎn)。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種防治桃紅頸天牛的大型真菌殺蟲劑，其組分及 含量為40%褐鱗環(huán)柄菇毒肽類毒素粗品，35%條紋毒鵝膏菌毒肽類毒素粗品和25%10目的 菌糠粉?！N防治桃紅頸天牛的大型真菌殺蟲劑，其制備方法為 1、大型真菌的篩選
從大型真菌中篩選含有毒肽類毒素的褐鱗環(huán)柄菇和條紋毒鵝膏菌母種試管各1支。2、搖床液體深層發(fā)酵
(1)、液體培養(yǎng)基馬鈴薯200克、葡萄糖20克、NaN0s3克、KH2PO4I克、KC10. 5克、 MgSO4 · 7Η200· 05 克、FeSO4O. 01 克、蒸餾水 1000 毫升、ΡΗ7. 0。(2)、取兩個容量為1000毫升的三角瓶，貼上標(biāo)簽，標(biāo)明A瓶、B瓶，然后分別向A瓶、B瓶中加入液體培養(yǎng)基500毫升。在121°C ^126°C,0. 1兆帕下滅菌15 20分鐘。(3)、接種在超凈工作臺上操作。首先用移液管分別取5毫升無菌水加入到褐鱗 環(huán)柄菇和條紋毒鵝膏菌母種試管種中，隨后用接種針在試管斜面上刮取菌落，洗脫菌絲制 成褐鱗環(huán)柄菇和條紋毒鵝膏菌菌懸液各5. 5毫升，然后將褐鱗環(huán)柄菇菌懸液倒入A瓶中，將 條紋毒鵝膏菌菌懸液倒入B瓶中。(4)、搖床液體深層發(fā)酵將A瓶褐鱗環(huán)柄菇菌懸液和B瓶條紋毒鵝膏菌菌懸液置 于搖床上，在溫度^T28°C、轉(zhuǎn)速110轉(zhuǎn)/分鐘的條件下深層發(fā)酵7 10天。3、超聲破碎、冷凍離心處理發(fā)酵液
將A瓶褐鱗環(huán)柄菇發(fā)酵液和B瓶條紋毒鵝膏菌發(fā)酵液分別用JY99-2D超聲波細(xì)胞粉碎 機(jī)，在功率200瓦，工作間歇1秒/ 1秒的條件下對菌絲和細(xì)胞進(jìn)行破碎處理，再以10000 轉(zhuǎn)/分鐘冷凍離心，分離上清液，濾渣用廣3倍量無菌水清洗三次，最后合并上清液，棄去 殘?jiān)?，A瓶褐鱗環(huán)柄菇發(fā)酵液離心得上清液486毫升；B瓶條紋毒鵝膏菌發(fā)酵液離心得上清 液483毫升。4、毒肽類毒素粗品的提取
首先向486毫升褐鱗環(huán)柄菇的上清液和483毫升條紋毒鵝膏菌的上清液中分別加5、 倍量95%甲醇，在室溫下充分?jǐn)嚢鑿V3小時，然后在5(T60°C下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀加熱減壓濃縮， 結(jié)果得褐鱗環(huán)柄菇的毒肽類毒素粗品18. 4克，回收率3. 8% ；條紋毒鵝膏菌的毒肽類毒素粗 品20. 2克，回收率4. 2%。5、載體的選擇與處理
載體選用袋料栽培香菇的廢料菌糠。首先將菌糠烘干粉碎，然后過篩成10目的菌糠粉6、成型
首先按40%、35%依次稱取褐鱗環(huán)柄菇和條紋毒鵝膏菌的毒肽類毒素粗品，然后混合均 勻，最后添加25% 10目的菌糠粉作載體進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，待均勻后即成白色粉狀大型真菌?蟲劑。下面通過兩個實(shí)驗(yàn)來說明大型真菌殺蟲劑在防治園林蛀干害蟲桃紅頸天牛中的 有益效果。實(shí)驗(yàn)例1、大型真菌殺蟲劑對桃紅頸天牛幼蟲的毒殺效果實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)材料
按如下方法得到大型真菌殺劑將褐鱗環(huán)柄菇菌懸液和條紋毒鵝膏菌菌懸液置于搖床 上，在溫度^rc、轉(zhuǎn)速no轉(zhuǎn)/分鐘的條件下深層發(fā)酵7天。再將褐鱗環(huán)柄菇發(fā)酵液和條紋 毒鵝膏菌發(fā)酵液分別用JY99-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，在功率200瓦，工作間歇1秒/ 1秒的 條件下對菌絲和細(xì)胞進(jìn)行破碎處理，再以10000轉(zhuǎn)/分鐘冷凍離心，去殘?jiān)?，留上清夜。?后各取褐鱗環(huán)柄菇上清液和條紋毒鵝膏菌上清液200毫升。分別加1000毫升95%甲醇，在 室溫下充分?jǐn)嚢?小時，然后在55°C下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀加熱減壓濃縮，得褐鱗環(huán)柄菇毒肽類 毒素粗品，回收率4. 2% ；條紋毒鵝膏菌毒肽類毒素粗品，回收率3. 8%。最后稱取0. 4克褐鱗 環(huán)柄菇毒肽類毒素粗品、0. 35克條紋毒鵝膏菌毒肽類毒素粗品與0. 25克的10目菌糠粉混 勻即成大型真菌殺蟲劑。另從遼寧省昌圖白僵菌廠引進(jìn)白僵菌殺蟲劑，作陽性試驗(yàn)。桃紅頸天牛是在沈陽城區(qū)園林的桃樹和行道的京桃樹上捕捉到的。捕捉頭數(shù)22頭，其中雌性成蟲9頭，雄性成蟲13頭。將捕捉到的桃紅頸天牛進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，雌雄共成 功配對7對。約10天左右配對成功的天牛產(chǎn)卵，總產(chǎn)卵數(shù)目約1200 1400頭。天牛產(chǎn)卵 位置不一，或?qū)⒙旬a(chǎn)在枝干縫隙處或?qū)⒙旬a(chǎn)在沙土上或?qū)⒙旬a(chǎn)在樹皮翹起處或?qū)⒙旬a(chǎn)在紗 布上。待卵孵化為初齡幼蟲后開始對幼蟲進(jìn)行毒殺活性實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)方法
首先將大型真菌殺蟲劑用無菌水配成0. 5毫克/毫升、1. 0毫克/毫升、1. 5毫克/毫 升、2. 0毫克/毫升不同濃度的藥液；用無菌水將白僵菌殺蟲劑配成2. 0毫克/毫升濃度的 藥液作陽性實(shí)驗(yàn)；用無菌水作空白對照。然后將新鮮桃樹枝條用粉碎機(jī)粉碎成木屑。稱取5 克木屑置于小號培養(yǎng)皿中。用移液管量取1毫升不同濃度的藥液于培養(yǎng)皿中的木屑上。用 一次性牙簽將藥液與木屑混勻平鋪于培養(yǎng)皿中。選取20頭剛孵化好的正常生長的天牛初 齡幼蟲置于處理后的混合物上，設(shè)3個重復(fù)。將培養(yǎng)皿放在陰暗處培養(yǎng)。3天后進(jìn)行觀察， 記錄蟲體死亡個數(shù)、毒殺效果、死亡率和校正死亡率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。表1.不同濃度大型真菌殺蟲劑對桃紅頸天牛初齡幼蟲的毒殺實(shí)驗(yàn)結(jié)果
從表1可以看出，大型真菌殺蟲劑的四種濃度對桃紅頸天牛的初齡幼蟲均有明顯的毒 殺作用，且均高于白僵菌的殺蟲效果，呈現(xiàn)隨著濃度增加死亡率增高的趨勢，其中以濃度為 2. 0毫克/毫升時桃紅頸天牛幼蟲的死亡率88. 33%為最高。另外還可以看出初齡幼蟲死 亡率隨給藥時間延長而升高。說明大型真菌殺蟲劑對桃紅頸天牛初齡幼蟲具有顯著毒殺效
果ο實(shí)驗(yàn)例2、大型真菌殺蟲劑對桃紅頸天牛幼蟲的樹干注射堵孔毒殺效果實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)材料同實(shí)驗(yàn)例1。實(shí)驗(yàn)方法
2010年9月27日在沈陽大學(xué)京桃樹林選擇正在被天牛幼蟲蛀蝕的樹木5株，分別將 五株樹木進(jìn)行編號Dp D2、D3、D4、D5。在每株樹上隨機(jī)選擇若干個正在被天牛幼蟲蛀蝕的孔 洞，將天牛幼蟲排泄的新鮮蟲糞和碎木屑用鐵絲鉤掏凈，用大號注射器分別吸取5毫升2. 0 毫克/毫升、3. 0毫克/毫升、4. 0毫克/毫升、5. 0毫克/毫升、6. 0毫克/毫升的大型真菌 殺蟲劑依次注入Dp D2、D3、D4、D5五株樹木的蛀孔內(nèi)，最后用黃泥封住孔口。10天后進(jìn)行觀 察。表2.大型真菌殺蟲劑對桃紅頸天牛幼蟲的樹干注射堵孔實(shí)驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種防治桃紅頸天牛的大型真菌殺蟲劑，其特征是其組分及含量為40%褐鱗環(huán)柄 菇毒肽類毒素粗品，35%條紋毒鵝膏菌毒肽類毒素粗品和25%10目的菌糠粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治桃紅頸天牛的大型真菌殺蟲劑，其特征是其制備 方法為(1)、大型真菌的篩選從大型真菌中篩選含有毒肽類毒素的褐鱗環(huán)柄菇和條紋毒 鵝膏菌母種試管各1支；(2)、搖床液體深層發(fā)酵①、液體培養(yǎng)基馬鈴薯200克、葡萄糖20 克、NaN033 克、KH2PO4I 克、KC10. 5 克、MgSO4 · 7Η200· 05 克、FeSO4O. 01 克、蒸餾水 1000 毫升、 ΡΗ7. 0 ；②取兩個容量為1000毫升的三角瓶，貼上標(biāo)簽，標(biāo)明A瓶、B瓶，然后分別向A瓶、B 瓶中加入液體培養(yǎng)基500毫升；在121°C ^126°C,0. 1兆帕下滅菌15 20分鐘；③接種在超 凈工作臺上操作；首先用移液管分別取5毫升無菌水加入到褐鱗環(huán)柄菇和條紋毒鵝膏菌母 種試管種中，隨后用接種針在試管斜面上刮取菌落，洗脫菌絲制成褐鱗環(huán)柄菇和條紋毒鵝 膏菌菌懸液各5. 5毫升，然后將褐鱗環(huán)柄菇菌懸液倒入A瓶中，將條紋毒鵝膏菌菌懸液倒入 B瓶中；④搖床液體深層發(fā)酵將A瓶褐鱗環(huán)柄菇菌懸液和B瓶條紋毒鵝膏菌菌懸液置于搖 床上，在溫度^T28°C、轉(zhuǎn)速110轉(zhuǎn)/分鐘的條件下深層發(fā)酵7 10天；(3)、超聲破碎、冷凍 離心處理發(fā)酵液將A瓶褐鱗環(huán)柄菇發(fā)酵液和B瓶條紋毒鵝膏菌發(fā)酵液分別用JY99-2D超 聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，在功率200瓦，工作間歇1秒/ 1秒的條件下對菌絲和細(xì)胞進(jìn)行破碎處 理，再以10000轉(zhuǎn)/分鐘冷凍離心，分離上清液，濾渣用廣3倍量無菌水清洗三次，最后合并 上清液，棄去殘?jiān)?，A瓶褐鱗環(huán)柄菇發(fā)酵液離心得上清液486毫升；B瓶條紋毒鵝膏菌發(fā)酵液 離心得上清液483毫升；(4)、毒肽類毒素粗品的提取首先向486毫升褐鱗環(huán)柄菇的上清 液和483毫升條紋毒鵝膏菌的上清液中分別加5、倍量95%甲醇，在室溫下充分?jǐn)嚢鑿V3 小時，然后在5(T60°C下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀加熱減壓濃縮，結(jié)果得褐鱗環(huán)柄菇的毒肽類毒素粗品 18. 4克，回收率3. 8% ；條紋毒鵝膏菌的毒肽類毒素粗品20. 2克，回收率4. 2% ； (5)、載體的 選擇與處理載體選用袋料栽培香菇的廢料菌糠；首先將菌糠烘干粉碎，然后過篩成10目 的菌糠粉備用；(6)、成型首先按40%、35%依次稱取褐鱗環(huán)柄菇和條紋毒鵝膏菌的毒肽類 毒素粗品，然后混合均勻，最后添加25% 10目的菌糠粉作載體進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，待均勻后?成白色粉狀大型真菌殺蟲劑。
全文摘要
一種防治桃紅頸天牛的大型真菌殺蟲劑，其組分及含量為40%褐鱗環(huán)柄菇毒肽類毒素粗品，35%條紋毒鵝膏菌毒肽類毒素粗品和25%10目的菌糠粉。其制備方法為1、大型真菌的篩選；2、搖床液體深層發(fā)酵；3、超聲破碎、冷凍離心處理發(fā)酵液；4、毒肽類毒素粗品的提??；5、載體的選擇與處理；6、成型。本發(fā)明對防治桃紅頸天牛具有致死率高、選擇性強(qiáng)、藥效時間長和耐高溫的特點(diǎn)。
文檔編號A01P7/04GK102090422SQ20101057994
公開日2011年6月15日 申請日期2010年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月9日
發(fā)明者楊紹斌, 王軍, 韓俊艷 申請人:沈陽大學(xué)