專利名稱：蕎麥三七的快速繁殖技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蕎麥三七的組培快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
植物是藥物的天然寶庫，人們利用藥用植物的歷史源遠(yuǎn)流長，全世界約有75%的 人口以植物作為治療預(yù)防疾病的藥物來源(邢建民，2001)。人類已經(jīng)從植物中發(fā)現(xiàn)了許 多具有高度生理活性的藥物，目前從植物來源的藥物占藥物總量的25%以上(鄭光植， 1987)。我國的傳統(tǒng)中草藥已有數(shù)千年的歷史，至今仍在我國和許多國家和地區(qū)廣為使用。 但由于傳統(tǒng)的中草藥獲取方法是以采集和消耗大量的野生植物資源為代價的，當(dāng)采集和消 耗量超過自然資源的再生能力時，必然會導(dǎo)致物種的瀕危甚至滅絕。同時隨著自然生態(tài)環(huán) 境的日益破壞，也進(jìn)一步導(dǎo)致藥用植物資源的匱乏。生物技術(shù)的蓬勃發(fā)展為從根本上改變 傳統(tǒng)藥材的生產(chǎn)提供了一個嶄新的方法，植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)則是其中一個重要的手 段。我國自1964年羅士韋教授首先報道了人參組織培養(yǎng)獲得成功的研究成果以來，許多 科學(xué)家先后從事了多種藥用植物的組織培養(yǎng)研究。至今，我國藥用植物的組織培養(yǎng)研究迅 速發(fā)展。目前，世界各國對植物的藥用開發(fā)和研究都十分重視，就以美國來說，其成藥中 有47%是以植物為原料制成的(謝啟昆，1986)。為了解決藥用植物的供需矛盾，人們采 用人工栽培的方法擴大藥源。但在人工栽培的藥用植物中，有不少名貴藥材等生產(chǎn)周期較 長，如人參、黃連，如果以常規(guī)方法育種或育苗，需要花費很長的時間；另有一些藥用植物 如貝母、番紅花等，因繁殖系數(shù)小、耗種量大，導(dǎo)致育種速度很慢，生產(chǎn)成本增加。利用植物 的有性繁殖方式對其有效成分含量波動比較大，所以利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)解決藥用植物 的植株再生與繁殖問題迫在眉睫。近年來，國內(nèi)外在這方面已做了大量工作，已成功離體 培養(yǎng)獲得試管植株的藥用植物至少有200種，如云南黑節(jié)草、延齡草、高山紅景天、莪術(shù)、 水母雪蓮、星花繡線菊、溪黃草、玉葉金花、遼東榴木等；其中包括一些具有抗癌有效成分 的珍稀植物，如紅豆杉、艾、黃楊、大戟屬植物、長春花、米仔蘭、狗牙花和香榧等。蕎麥三七 Fagopyrum esculentum Moench 屬于蓼禾斗 Polygonaceae 養(yǎng)麥屬 Fagopyrum 一至多年生草 本。高50-120cm。莖直立，多分枝，有棱，中空，光滑，幼莖實心。淡綠色，后漸變紫紅色，成 熟后為紅褐色。下部葉有長柄，上部葉近無柄；葉片三角形或卵狀三角形，先端漸尖，基部心 形或戟形，全線；托葉鞘短筒狀，無毛，頂端斜而截平，早落?？偁罨驁A錐花序，頂生或腋生， 花淡粉紅色或白色，蜜集。瘦果卵狀三棱形，褐色或灰色，光滑。分布于河南、江蘇、安徽、浙 江、江西、湖北、湖南、廣東、廣西、陜西、甘肅、西藏等省區(qū)。研究表明，蕎麥三七含有很高的藥用成分_生物類黃酮，莖、葉中的含量比種子中 多，苦蕎含量比甜蕎多。槲皮素及其苷類是類黃酮化合物，具有抗炎、止咳和祛痰作用，苦蕎 中含量約1. 6%左右，已制成槲皮素藥品。蕎麥三七的蘆丁和其他多酚含量豐富，蘆丁是槲 皮素-3-0-蕓香糖苷，可以防治毛細(xì)血管脆弱性引起的各種出血病，并用作高血壓的輔助 治療劑。蕎麥三七中含有大量的銅，為小麥、大米的2到4倍，銅能促進(jìn)鐵的作用，有益于防 治貧血病。蕎麥三七含有其他糧食稀缺的硒，有利于防癌。蕎麥三七還含有較多的胱氨酸和半胱氨酸，有較高的放射性保護(hù)特性。蕎麥三七種子中含有8種蛋白酶阻化劑，這是蛋白 分解酶的一種阻礙物質(zhì)，能夠阻礙白血病細(xì)胞增殖。尤其是食用苦蕎及其制品可顯著降低 人體血液中的膽固醇、血脂和血糖，對高血壓、冠心病、中風(fēng)等病人都有輔助療效作用，對糖 尿病及并發(fā)癥有良好的治療和緩解作用，對腸胃疾病及口腔潰瘍等也有較好的療效。蕎麥 三七藥用、保健、功能性產(chǎn)品主要有生物類黃酮(1號)膠襄、生物類黃酮(2號)膠襄、生 物類黃酮散、生物類黃酮軟膏、生物類黃酮牙膏、生物類黃酮口香糖、苦蕎膠襄、黃帝膳(中 日合作)、蕎麥三七抗癌藥品、苦蕎沖劑、苦蕎速效粉、苦蕎顆粒粉、苦蕎營養(yǎng)保健糊、各類苦 蕎化妝品，如苦蕎護(hù)發(fā)素、苦蕎浴液、苦蕎護(hù)膚霜、苦蕎防輻射面膏及蕎麥三七系列飲料，如 苦蕎清肺潤喉飲料、苦蕎祛暑飲料、苦蕎滋補飲料等?，F(xiàn)有的蕎麥三七野生資源根本難以滿 足日益增長的醫(yī)藥領(lǐng)域的需要。因此，為了滿足日益增大的藥用需求，同時保護(hù)蕎麥三七的 野生資源，利用組培快繁技術(shù)，實現(xiàn)人工栽培是最好的解決方法。迄今為止，在國內(nèi)外尚未見關(guān)于蕎麥三七組織培養(yǎng)快繁成功的報道。我們通過大 量試驗，終于摸索出一套成熟的方法，成功實現(xiàn)了蕎麥三七的組培快繁，可以快速培育出大 量幼苗，為實現(xiàn)工業(yè)化人工栽培蕎麥三七提供可能。蕎麥三七的組培快繁技術(shù)方法的成功 建立，可以為大規(guī)模人工栽培藥用植物蕎麥三七提供種苗，為現(xiàn)代科技農(nóng)業(yè)提供了一種切 實可行的開發(fā)項目。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種蕎麥三七的組培快速繁殖方法。方法的步驟如下1)外植體的選取與處理選用蕎麥三七的莖段作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水 洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75%酒精中處理10-30秒，然后再經(jīng)0. 的升汞 消毒10分鐘后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；2)誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)使用MS+2，4-D2mg/L+6-BA0. 5mg/L作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所 選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強 度 1000LX ；3)分化培養(yǎng)將生長于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于MS+KT1. 5mg/L+6_BAl. 5mg/L 上進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX ；4)生根培養(yǎng)選擇MS+NAA 0. 5mg/L作為生根培養(yǎng)基，pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度 23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX ；5)移栽將已生根的植株取出，移栽到珍珠巖和泥炭混合的基質(zhì)上，珍珠巖泥炭 土的體積比為1. 1-1.5。技術(shù)效果(1)蕎麥三七的生產(chǎn)可以在人為控制條件下進(jìn)行，不受季節(jié)、氣候條件與土壤等因 素的制約，可排除病蟲害的侵襲和農(nóng)藥殘留的影響，嚴(yán)格控制蕎麥三七的質(zhì)量。(2)增殖速度快，生產(chǎn)周期短，設(shè)備簡單，占地面積少，能節(jié)省人力、物力等，便于工 廠化生產(chǎn)。(3)該技術(shù)方法解決了蕎麥三七快速繁殖及其穩(wěn)定生根的重要技術(shù)環(huán)節(jié)，達(dá)到了 技術(shù)穩(wěn)定，繁殖系數(shù)高的要求，可應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)的目的。
(4)使用本發(fā)明提供的組培快繁技術(shù)得到的蕎麥三七幼苗進(jìn)行人工栽培，可以得 到個體差異小，品質(zhì)均一的蕎麥三七成品，可以為生產(chǎn)鬼白毒素提供品質(zhì)穩(wěn)定的原材料。(5)可以保存蕎麥三七的種質(zhì)資源，同時有利于保護(hù)蕎麥三七野生資源，減少對自 然資源的破壞。


圖1 蕎麥三七被接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基 圖2 蕎麥三七在誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出愈傷組織 圖3 蕎麥三七的愈傷組織在繼代培養(yǎng)基上增殖 圖4 蕎麥三七的愈傷組織在分化培養(yǎng)基上長芽體 圖5 蕎麥三七的芽體組織在生根培養(yǎng)基上長根 圖6 蕎麥三七生根后進(jìn)行開瓶 圖7 洗凈生根培養(yǎng)基后蕎麥三七全株情況 圖8 蕎麥三七在營養(yǎng)土上生長情況 圖9.蕎麥三七移載時大田情況 圖10.蕎麥三七在大田生長情況 圖11 蕎麥三七的組培苗在大田開花情況 圖12 蕎麥三七的組培苗在大田移載一年后根莖情況
具體實施例方式下面，本發(fā)明將用實施例進(jìn)行進(jìn)一步的說明，但是它并不限于這些實施例的任一 個或類似實例。實施例1 取采自湖南懷化的蕎麥三七鮮嫩芽、莖段等幼嫩組織，用自來水洗凈，70%酒精浸 泡30s后，用無菌水沖洗兩次，再用0. 升汞100ml消毒lOmin，最后用無菌水沖洗三次。 接入滅菌后的培養(yǎng)基MS+2，4-D2mg/L+6-BA0. 5mg/L上(見圖1)。黑暗條件下培養(yǎng)4 5 天，再轉(zhuǎn)入40W單管日光燈下培養(yǎng)，光強為1000LX，溫度保持在25士2°C，培養(yǎng)15天，外植體 周圍出現(xiàn)很多綠色的組織(見圖2)，誘導(dǎo)愈傷組織成功率達(dá)98%以上；然后轉(zhuǎn)移至MS+2， 4-D2mg/L +6-BA0.5mg/L繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)一個月，得到大量愈傷組織(見圖3) 后然后轉(zhuǎn)移至MS+KT1. 5mg/L+6-BAl. 5mg/L分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng)，15天可以大量長 出幼苗(見圖4)；將1.5-3. 5厘米左右的苗轉(zhuǎn)入無激素的MS生根培養(yǎng)基，在12天左右生 根，生根率達(dá)100% (見圖5)；打開培養(yǎng)瓶的蓋子培養(yǎng)三天(見圖6)，取出蕎麥三七的組培 苗，洗凈生根培養(yǎng)基(見圖7)，移栽到溫室大棚中用組培專用的營養(yǎng)土上生長(見圖8)，成 活率達(dá)95%。三個月后移栽到大田中進(jìn)行大規(guī)模的種植(見圖9、圖10)。本發(fā)明方法具有 穩(wěn)定好，操作簡便繁殖速度快，生產(chǎn)成本低，達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平等優(yōu)點。實施例2:取采自湖南懷化的蕎麥三七鮮嫩芽、莖段等幼嫩組織，用自來水洗凈，70%酒精 浸泡30s后，用無菌水沖洗兩次，再用0. 升汞100ml消毒lOmin，最后用無菌水沖洗三 次。接入滅菌后的培養(yǎng)基Ms+KTl. 5mg/L+6-BAl. 5mg/L上。在光強為2000LX，溫度保持在 25士2°C，培養(yǎng)15天，可見每個外植體上有5左右個新芽出現(xiàn)。將長有芽的外植體在無菌條件下取出，將每個芽用解剖刀分開，分別置于裝有上述連續(xù)培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中培養(yǎng)，在 10-20天內(nèi)，各培養(yǎng)容器內(nèi)的芽可再生出數(shù)個新芽。將需要生根的蕎麥三七植株轉(zhuǎn)移至MS 無激素培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。在12天左右生根，生根率達(dá)100% ；打開培養(yǎng)瓶的蓋子培 養(yǎng)三天，取出蕎麥三七的組培苗，洗凈生根培養(yǎng)基，移栽到溫室大棚中在組培專用的營養(yǎng)土 上生長，成活率達(dá)98%。三個月后移栽到大田中進(jìn)行大規(guī)模的種植。
權(quán)利要求
蕎麥三七的快速繁殖技術(shù)，其特征在于1)外植體的選取與處理選用蕎麥三七的莖段作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10 30分鐘后，置于75％酒精中處理10 30秒，然后再經(jīng)0.1％的升汞消毒10分鐘后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；2)誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)使用MS+2，4 D2mg/L+6 BA0.5mg/L作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中，pH值為5.8，培養(yǎng)溫度23 27℃，每天光照16小時，光照強度1000LX；3)分化培養(yǎng)將生長于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于MS+KT1.5mg/L+6 BA1.5mg/L上進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)，pH值為5.8，培養(yǎng)溫度23 27℃，每天光照16小時，光照強度1000LX；4)生根培養(yǎng)選擇MS+NAA 0.5mg/L作為生根培養(yǎng)基，pH值為5.8，培養(yǎng)溫度23 27℃，每天光照16小時，光照強度1000LX；5)移栽打開培養(yǎng)瓶的蓋子培養(yǎng)三天，取出蕎麥三七的組培苗，洗凈生根培養(yǎng)基，移栽到溫室大棚中在組培專用的營養(yǎng)土上生長，成活率達(dá)98％。三個月后移栽到大田中進(jìn)行大規(guī)模的種植。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所說的蕎麥三七的快速繁殖方法，其特征在于所說的外植體為蕎麥 三七的葉片、莖。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種蕎麥三七的快速繁殖技術(shù)。該方法是在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)蕎麥三七鮮嫩芽、莖段等幼嫩組織，先接種在MS+2，4-D2mg/L+6-BA0.5mg/L培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)愈傷成功率達(dá)98％以上；然后轉(zhuǎn)移至MS+KT1.5mg/L+6-BA1.5mg/L分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng)，15天可以大量長出幼苗；將1.5-3.5厘米左右的苗轉(zhuǎn)入無激素的MS生根培養(yǎng)基，在12天左右生根，生根率達(dá)100％；打開培養(yǎng)瓶的蓋子培養(yǎng)三天，取出蕎麥三七的組培苗，洗凈生根培養(yǎng)基，移栽到溫室大棚中在組培專用的營養(yǎng)土上生長，成活率達(dá)98％。三個月后移栽到大田中進(jìn)行大規(guī)模的種植。本發(fā)明方法具有穩(wěn)定好，操作簡便，繁殖速度快，生產(chǎn)成本低，達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平等優(yōu)點。
文檔編號A01G31/00GK101946698SQ20101016795
公開日2011年1月19日 申請日期2010年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月11日
發(fā)明者石國榮 申請人:石國榮