專利名稱：：兔頸動脈經(jīng)皮動脈成形術(shù)后再狹窄模型的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于動物實驗領(lǐng)域，具體涉及一種兔頸動脈經(jīng)皮動脈成形術(shù)后再狹窄模型的建立方法。
背景技術(shù)：
：目前兔頸動脈經(jīng)皮動脈成形術(shù)后再狹窄模型通常采用單純高脂飲食方法建立，這和方法建立模型時間長，效果不穩(wěn)定，病變與人類再狹窄病變差異大和不易形成特定部位再狹窄(RS)病灶。本實驗?zāi)軌驈?fù)制出比較滿意的動物模型。
發(fā)明內(nèi)容針對單純用高脂飲食模型時間長，效果不穩(wěn)定，病變與人類再狹窄病變差異大和不易形成特定部位RS病灶的不足，本發(fā)明提供一種新的方法復(fù)制出了比較滿意的再狹窄和動脈粥樣動物模型。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是—種兔頸動脈經(jīng)皮動脈成形術(shù)后再狹窄模型的建立方法，是將兔飼以高脂飼料飲食一周后，行頸動脈球囊內(nèi)皮剝脫術(shù)，再繼續(xù)高脂飲食。上述所說的高脂飼料配方各組分按重量計為1%膽固醇、7.5%蛋黃粉、8%豬油、83.5%普通飼料。每日每只家兔飼喂高脂飼料100g和普通飼料100g。本模型克服了單純用高脂飲食模型時間長，效果不穩(wěn)定，病變與人類再狹窄病變差異大和不易形成特定部位RS病灶的缺點，能構(gòu)建成與人類動脈粥樣硬化和PTCA術(shù)后再狹窄病變相似的進(jìn)展性病變，為以后經(jīng)皮動脈成形術(shù)后再狹窄的研究提供幫助。圖1.正常家兔頸動脈(HEX100)圖2.RS組頸動脈(HEX100)具體實施例方式在本發(fā)明中所使用的術(shù)語，除非有另外說明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。下面結(jié)合具體的制備實施例和應(yīng)用實施例，并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例只是為了舉例說明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實施例1—、材料和方法(—)實驗材料和主要儀器1.實驗動物2.5Kg左右的雄性新西蘭純種大白兔(第二軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心)。2.主要試劑膽固醇，蛋黃粉，豬油，鹽酸氯胺酮注射液，地西泮注射液。(二)實驗方法1.高脂飼養(yǎng)除正常對照組外，其余兔(RS組)均飼以高脂飼料(配方1%膽固醇、7.5%蛋黃粉、8%豬油、83.5%普通飼料；每日每只家兔需高脂飼料100g+普通飼料100g)。2.家兔頸動脈球囊損傷模型的建立(1)經(jīng)家兔耳緣靜脈注射鹽酸氯胺酮注射液O.lg+地西泮注射液10mg麻醉。將頭及四肢固定于實驗手術(shù)臺上、頸部剪毛、常規(guī)消毒及鋪洞巾。(2)沿家兔頸動脈走向切開皮膚及皮下組織，鈍性分離暴露頸總動脈及頸內(nèi)、外動脈。(3)將頸外動脈遠(yuǎn)心端結(jié)扎，近心端用線提起，無創(chuàng)血管夾阻斷頸總動脈和頸內(nèi)動脈，剪開頸外動脈，逆行插入4FPTCA球囊導(dǎo)管(導(dǎo)管直徑1.2mm，球囊膨脹直徑2.0mm，球囊長度20mm)至頸總動脈段40mm處，球囊內(nèi)充以0.5_0.7ml肝素生理鹽水至3個大氣壓，緩慢會拉導(dǎo)管至近切口處后回抽球囊內(nèi)液體，使壓力降為零，再將導(dǎo)管送入，重復(fù)3次后拔出導(dǎo)管，取下無創(chuàng)血管夾。(4)結(jié)扎頸外動脈近心端，縫合皮膚。繼續(xù)高脂飲食飼養(yǎng)。3.血清學(xué)指標(biāo)檢測見表1。表1.各組血清學(xué)指標(biāo)檢測(n=8，x士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>vsRS在各組家兔髙脂飲食飼養(yǎng)前，髙脂飲食飼養(yǎng)后5周、10周分別于耳緣靜脈抽血，檢測總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(1DL-C)等血脂指標(biāo)。4.病理形態(tài)學(xué)檢查麻醉同前。沿頸動脈走向切開皮膚，分離血管，觀察頸動脈外形、質(zhì)地、硬度，剪下頸動脈約40mm，于10%中性福爾馬林液中固定，常規(guī)酒精脫水，石蠟包埋，制成6ym厚連續(xù)切片，光鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化(圖1、圖2)，并經(jīng)微機(jī)圖像分析儀測定管腔面積，內(nèi)膜厚度，內(nèi)膜面積和狹窄程度。同時取主動脈、心、肺、肝、腎、脾、腦等組織，置于10%中性福爾馬林液中固定。5.透射電鏡觀察頸動脈標(biāo)本在4t:下于2%戊二醛固定24小時，經(jīng)二甲砷酸鈉緩沖液漂洗后，用1%餓酸固定，梯度酒精脫水，3%飽和醋酸鈾塊染，包埋于環(huán)氧樹脂內(nèi)，超薄切片，透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)。6.頸動脈血管造影經(jīng)股動脈逆行插入造影導(dǎo)管至主動脈弓處，先快速注射3ml安射力(碘佛醇)注射液，見兩側(cè)頸總動脈顯影良好，對比清晰，再快速注射10ml安射力注射液，并攝片。三、結(jié)論家兔高脂飲食結(jié)合動脈內(nèi)皮剝脫術(shù)能造成與人類動脈粥樣硬化和PTCA術(shù)后再狹窄病變相似的進(jìn)展性病變，它克服了單純用高脂飲食模型所帶來的時間長、效果不穩(wěn)定、病變與人類再狹窄病變差異大和不易形成特定部位RS病灶等特點。我們采用家兔高脂飲食結(jié)合動脈內(nèi)皮剝脫術(shù)的方法，復(fù)制出比較滿意的再狹窄和動脈粥樣動物模型。本實驗結(jié)果還表明，家兔高脂飲食結(jié)合動脈內(nèi)皮剝脫術(shù)的方法，復(fù)制的RS動物模型，其頸動脈病變處管腔不規(guī)則，內(nèi)膜向心性肥厚，管腔明顯狹窄，甚至完全閉塞，血管內(nèi)膜下遷移并大量增殖，增殖的平滑肌細(xì)胞以合成型為主，胞內(nèi)含有豐富的細(xì)胞器，但肌絲和致密斑少見，有泡沫細(xì)胞。加用殼聚糖后病變較RS組和AS組明顯減輕(雖然殼聚糖對血脂影響很小)，表明殼聚糖具有抗家兔頸動脈球囊損傷后再狹窄的作用。權(quán)利要求一種兔頸動脈經(jīng)皮動脈成形術(shù)后再狹窄模型的建立方法，其特征在于，兔飼以高脂飼料飲食一周后，行頸動脈球囊內(nèi)皮剝脫術(shù)，再繼續(xù)高脂飲食。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的兔頸動脈經(jīng)皮動脈成形術(shù)后再狹窄模型的建立方法，其特征在于，所說的高脂飼料配方各組分按重量計為1%膽固醇、7.5%蛋黃粉、8%豬油、83.5%普通飼料。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的兔頸動脈經(jīng)皮動脈成形術(shù)后再狹窄模型的建立方法，其特征在于，每日每只家兔飼喂高脂飼料100g和普通飼料100g。全文摘要本發(fā)明涉及一種兔頸動脈經(jīng)皮動脈成形術(shù)后再狹窄模型的建立方法。該方法是將兔飼以高脂飼料飲食一周后，行頸動脈球囊內(nèi)皮剝脫術(shù)，再繼續(xù)高脂飲食。本發(fā)明克服了單純用高脂飲食模型時間長，效果不穩(wěn)定，病變與人類再狹窄病變差異大和不易形成特定部位RS病灶的缺點，能構(gòu)建成與人類動脈粥樣硬化和PTCA術(shù)后再狹窄病變相似的進(jìn)展性病變，為以后經(jīng)皮動脈成形術(shù)后再狹窄的研究提供幫助。文檔編號A01K67/02GK101743932SQ200910264240公開日2010年6月23日申請日期2009年12月31日優(yōu)先權(quán)日2009年12月31日發(fā)明者李雪萍,王大新,駱瑩瑩申請人:揚州大學(xué)