專利名稱：：微生物溶菌酶在飼料中替代抗生素的應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及畜牧行業(yè)，尤其涉及一種微生物溶菌酶在詞料中替代抗生素的應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
：20世紀(jì)50年代，動(dòng)物學(xué)家發(fā)現(xiàn)在飼料中添加低劑量的抗生素可以明顯的促進(jìn)畜禽的生長(zhǎng)，隨即其在飼料中廣泛的使用。據(jù)統(tǒng)計(jì)在世界上有20多種的抗生素以及十幾種的合成抗菌藥物在飼料中的使用。詞料抗生素在預(yù)防動(dòng)物疾病，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高飼料報(bào)酬都起到了積極的作用。但是，隨著時(shí)間的發(fā)展，細(xì)菌的抗藥性的增加、畜產(chǎn)品的藥物殘留等問(wèn)題已經(jīng)對(duì)人體健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅，詞用抗生素所導(dǎo)致的負(fù)面的效應(yīng)成為人們灌注的焦點(diǎn)。綠色、無(wú)污染、有效的的抗生素的替代產(chǎn)品是未來(lái)畜牧業(yè)發(fā)展的趨勢(shì)，這對(duì)促進(jìn)我國(guó)畜牧業(yè)的發(fā)展，保障人們身體健康具有深遠(yuǎn)的意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種可以避免在飼料中加入抗生素的微生物溶菌酶在飼料中替代抗生素的應(yīng)用方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下微生物溶菌酶在飼料中替代抗生素的應(yīng)用方法，在飼料中加入溶菌酶，添加量為60400克/噸飼料。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)化方案是，微生物溶菌酶在飼料中替代抗生素的應(yīng)用方法，在豬詞料中加入溶菌酶，添加量為150300克/噸飼料。本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)化方案如下所述的微生物溶菌酶在詞料中替代抗生素的應(yīng)用方法，在水產(chǎn)養(yǎng)殖的飼料中添加溶菌酶，添加量為100-400g/噸飼料。本發(fā)明的再一個(gè)優(yōu)化方案是，所述的微生物溶菌酶在飼料中替代抗生素的應(yīng)用方法，在肉禽養(yǎng)殖的詞料中添加溶菌酶，添加量為60-120g/噸飼料。進(jìn)一步，所述的在肉禽養(yǎng)殖的飼料中添加溶菌酶，在肉禽生長(zhǎng)的前期飼料中的添加量為80-120g/噸飼料。進(jìn)一步，所述的在肉禽養(yǎng)殖的飼料中添加溶菌酶，在肉禽生長(zhǎng)的后期飼料中的添加量為60-90g/噸飼料。本發(fā)明的有益效果如下溶菌酶具有良好的抗菌殺菌效果，有效對(duì)抗炎癥、感染，對(duì)那些抗生素已產(chǎn)生耐藥性的菌株也有很強(qiáng)的殺滅作用，保證動(dòng)物的腸道的健康，防治動(dòng)物下痢，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能。其療效好、安全性高，成本低廉，無(wú)耐藥性、無(wú)藥物殘留、無(wú)毒副作用、是綠色環(huán)保的活性物質(zhì)。具體實(shí)施例方式溶菌酶是能溶解細(xì)菌細(xì)胞壁的一種酵，是一類物質(zhì)的的總稱。作為非特異性免疫的重要成員，溶菌酶在防御外源微生物入侵方面發(fā)揮重要的作用，其在動(dòng)物的免疫細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中含量比較高。溶菌酶對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、好氣性孢子形成的菌、枯草桿菌、耐輻射微球菌均具有良好的分解作用，對(duì)大腸桿菌、普通變球菌和副血性弧菌等革蘭氏陰性菌也具有溶解作用。其具有抗生素的殺菌的促生長(zhǎng)的作用，是飼料中替代抗生素的使用的首選。本專利所用的溶菌酶的要求為通過(guò)藥敏試驗(yàn)，在100ppm時(shí)應(yīng)有明顯的抑菌圈，即抑菌圈的直徑M0mm。藥敏試驗(yàn)過(guò)程如下做不同細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)可選擇不同的培養(yǎng)基，如做大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)可選擇普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂或麥糠凱培養(yǎng)基。做沙門氏菌可選擇血清培養(yǎng)基。一、一般LB培養(yǎng)基的配制1、液體培養(yǎng)基的配制蛋白胨lg、NaCllg、酵母提取物0.5g(建議選用國(guó)外公司產(chǎn)品)溶于100ml水中。2、固體培養(yǎng)基的配制在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上每100ml中添加瓊脂1.7g或瓊脂粉2g。二、滅菌整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所用的培養(yǎng)基、平板、槍頭、棉簽、生理鹽水以及緩沖溶液均需要滅菌。三、操作過(guò)程1、將指示菌(大腸桿菌、沙門氏菌等等)從培養(yǎng)液(基)中接種于平板活化培養(yǎng)，待菌落長(zhǎng)出后在平板上挑選典型菌落接種于試管中的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6小時(shí)后比濁。2、用涂菌棒(或者滅菌棉簽)將待檢細(xì)菌混懸液涂抹于平皿培養(yǎng)基表面，要求涂布均勻致密。3、以無(wú)菌操作將滅菌的不銹鋼小管(也可用玻璃管、瓷管)，放置在培養(yǎng)基上打孔，將孔中的培養(yǎng)基用針頭挑出，并以火焰封底，使培養(yǎng)基能充分的與平皿融合(以防藥液滲漏，影響結(jié)果)。4、將配制好的待測(cè)樣品液80微升加入樣孔中，樣品加完后放入30-37'C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12-18小時(shí)后觀察結(jié)果。注意試驗(yàn)的過(guò)程在無(wú)菌的條件下操作。四、溶菌酶樣品液的配制1、粉狀樣品的配制取溶菌酶樣品用滅菌好的生理鹽水逐級(jí)稀釋到濃度梯度為300卯m，200ppm，100ppm，50ppm然后分別取80微升稀釋好的溶液置于樣品孔中。(注在溫度較低的情況下，可能會(huì)出現(xiàn)稍微的不溶的情況，可加熱至35-40'C即可溶解)2、注意事項(xiàng)1)配置好的樣品液不要放在冷凍的條件下保存，也不能放在無(wú)菌操作臺(tái)上被紫外線照射；2)樣品液在配制稀釋過(guò)程中注意要逐級(jí)稀釋。根據(jù)上述方法檢驗(yàn)合格的溶菌酶可以用于本專利。因不同的動(dòng)物的種類差異，不同動(dòng)物飼料中需要添加的溶菌酶的量而有所不同，下面分別針對(duì)豬、肉禽、水產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)，將溶菌酶制劑添加到不同的動(dòng)物的飼料中，替代原有飼料中的抗生素的使用，研究溶菌酶制劑在不同的動(dòng)物不同階段的飼料中替代抗生素使用的最佳的使用比例，本專利所用的溶菌酶的要求為通過(guò)藥敏試驗(yàn)，在100ppm時(shí)應(yīng)有明顯的抑菌圈，即抑菌圈的直徑HOmm。一、針對(duì)仔豬的試驗(yàn)(1)試驗(yàn)設(shè)計(jì)60頭28日齡仔豬隨機(jī)分成六組，每組10頭。分別為對(duì)照組(不添加溶菌酶)試驗(yàn)1組(每噸添加150g)、試驗(yàn)2組(每噸添加200g)、試驗(yàn)3組(每噸添加300g)，試驗(yàn)4組(每噸添加400g)，每組設(shè)一個(gè)重復(fù)組，試驗(yàn)期4周。(2)觀測(cè)指標(biāo)與管理觀測(cè)各組耗料量、增重、腹瀉頭次數(shù)等，并作記錄。同棟分欄飼養(yǎng)，飼喂顆粒飼料，分餐飼喂，每天四次(時(shí)間分別為7:00、11:00、15:00、19:00)，按常規(guī)仔豬飼養(yǎng)管理，出現(xiàn)腹瀉立刻用抗生素治療。(3)對(duì)腹瀉的影響從表1可以看出,對(duì)照組的平均腹瀉率為65%，試驗(yàn)1組的平均腹瀉率為15%，比對(duì)照組平均腹瀉率降低了78%，試驗(yàn)2組腹瀉率10%,試驗(yàn)3組和4組的平均腹瀉率為0%。從以上結(jié)果可以看出，斷奶仔豬中不添加任何抗菌素或其它抗腹瀉的添加劑，腹瀉嚴(yán)重，在斷奶仔豬日糧中添加溶菌酶300g/t基本可以控制腹瀉，可以替代抗生素，超過(guò)300g/t對(duì)預(yù)防腹瀉沒(méi)有貢獻(xiàn)，造成原料的浪費(fèi)，故將加入量控制在150300克/噸飼料。腹瀉率=化沐:7S工躲x100%仔豬總頭數(shù)x天數(shù)表l腹瀉情況組別欄號(hào)腹瀉頭次數(shù)腹瀉率(％)平均腹瀉率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>二、針對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖的試驗(yàn)(1)試驗(yàn)設(shè)計(jì)選取體重為50g左右的鯽魚2400尾隨機(jī)分為4組，即對(duì)照組、50mg/kg溶菌酶、100mg/kg溶菌酶組和150mg/kg溶菌酶組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)200尾。(2)飼養(yǎng)管理試驗(yàn)期間日投料2次，換水1次。(3)試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定生長(zhǎng)性能指標(biāo)主要測(cè)試驗(yàn)魚的增重率和餌料系數(shù)。于試驗(yàn)始末稱量空腹試驗(yàn)魚體重。(4)試驗(yàn)期試驗(yàn)期為30天。(5)試驗(yàn)結(jié)果表4溶菌酶對(duì)鯽魚生長(zhǎng)性能的影響項(xiàng)目對(duì)照組溶菌酶50mg/kg溶菌酶100mk/kg溶菌酶150mg/kg<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>餌料系數(shù)3.67a3.03b2.71c2.70c注同一行上標(biāo)字母相同表示差異不顯著(P>0.05);字母相鄰表示差異顯著(P<0.05);字母相間表示差異顯著(PO.Ol)。下同。由表4可知,添加溶菌酶組鯽魚的增重率和佴料系數(shù)顯著優(yōu)于對(duì)照組，其中添加lOOmg/kg溶菌酶組和添加150mg/kg溶菌酶組鯽魚的增重率比對(duì)照組分別提高了43.73%和52.98%，餌料系數(shù)分別下降26.18%和26.43%，差異極顯著(P<0.01);添加lOOmg/kg溶菌酶組和添加150mg/kg溶菌酶組鯽魚的增重率比50mg/kg溶菌酶添加組分別提高了14.36%和21.72%,餌料系數(shù)分別下降10.56%和10.89%，差異極顯著(P<0.05)。添加150mg/kg溶菌酶組和添加100mg/kg溶菌酶組相比鯽魚的增重率提高6.44%，餌料系數(shù)下降0.37%,差異不顯著(PX).05)。所以在鯽魚的飼料中的添加量大于100m^g為宜?；诂F(xiàn)有水產(chǎn)飼料可承受成本壓力建議小于400mg/kg。三、針對(duì)肉雞的試驗(yàn)(1)試驗(yàn)設(shè)計(jì)選取3200羽1日齡艾維茵肉仔雞隨機(jī)分為四組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)200羽。其中在肉仔雞生長(zhǎng)前期對(duì)照組為基礎(chǔ)日糧組，試驗(yàn)1組是在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加溶菌酶80g，試驗(yàn)2組是在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加溶菌酶90g，試驗(yàn)3組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加溶菌酶120g，試驗(yàn)4組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加溶菌酶150g;在肉仔雞生長(zhǎng)后期對(duì)照組為基礎(chǔ)日糧組，試驗(yàn)1組是在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加溶菌酶40g，試驗(yàn)2組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加溶菌酶60g，試驗(yàn)3組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加溶菌酶90g，試驗(yàn)4組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加溶菌酶120g。試驗(yàn)全程為42天。(2)結(jié)果與分析表2溶菌酶對(duì)肉仔雞前期生長(zhǎng)性能的影響項(xiàng)目對(duì)照組試驗(yàn)1組試驗(yàn)2組試驗(yàn)3組試驗(yàn)4組SE平均日增重(g)76.19a76.95a81.71b83.33b83.56b1.32日采食量(g)98.60a94.95b95.65ab94.91b95.01b1.12料重比1.294a1.243a1.162b1.139b1.140b0.03成活率(％)98.4797.8798.8799.2199.25—注同一行不同字母表示差異顯著(p<0.05)。從表2可以看出在肉仔雞的前期的飼料中添加溶菌酶可以有效提高肉仔雞的生產(chǎn)性肯l其中添加量在80-120g/T即能達(dá)到明顯的效果。表3溶菌酶對(duì)肉仔雞后期生長(zhǎng)性能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注同一行不同字母表示差異顯著(p<0.05)。從表3可以看出在肉仔雞后期的飼料中添加溶菌酶制劑60-90g/T可以達(dá)到一個(gè)良好的生產(chǎn)性能，肉仔雞的料重比及成活率都有很好的體現(xiàn)。權(quán)利要求1、微生物溶菌酶在飼料中替代抗生素的應(yīng)用方法，在飼料中加入溶菌酶，添加量為60～400克/噸飼料。2、權(quán)利要求1所述的微生物溶菌酶在詞料中替代抗生素的應(yīng)用方法，在豬詞料中加入溶菌酶，添加量為150300克/噸飼料。3、權(quán)利要求1所述的微生物溶菌酶在詞料中替代抗生素的應(yīng)用方法，在水產(chǎn)養(yǎng)殖的飼料中添加溶菌酶，添加量為100-400g/噸飼料。4、權(quán)利要求1所述的微生物溶菌酶在飼料中替代抗生素的應(yīng)用方法，在肉禽養(yǎng)殖的飼料中添加溶菌酶，添加量為60-120g/噸飼料。5、權(quán)利要求4所述的微生物溶菌酶在飼料中替代抗生素的應(yīng)用方法，所述的在肉禽養(yǎng)殖的飼料中添加溶菌酶，在肉禽生長(zhǎng)的前期飼料中的添加量為80-120g/噸飼料。6、權(quán)利要求4所述的微生物溶菌酶在飼料中替代抗生素的應(yīng)用方法，所述的在肉禽養(yǎng)殖的飼料中添加溶菌酶，在肉禽生長(zhǎng)的后期飼料中的添加量為60-90g/噸飼料。全文摘要本發(fā)明公開了一種微生物溶菌酶在飼料中替代抗生素的應(yīng)用方法，通過(guò)把添加量控制在60～400克/噸飼料，可以起到良好的效果，并對(duì)不同的動(dòng)物的飼料中的添加量作相應(yīng)的調(diào)整。使用本方法，利用溶菌酶具有的良好的抗菌殺菌效果，能夠有效對(duì)抗炎癥、感染，對(duì)那些抗生素已產(chǎn)生耐藥性的菌株也有很強(qiáng)的殺滅作用，可以保證動(dòng)物的腸道的健康，防治動(dòng)物下痢，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能。使用本方法療效好、安全性高，成本低廉，無(wú)耐藥性、無(wú)藥物殘留、無(wú)毒副作用、是綠色環(huán)保的活性物質(zhì)。文檔編號(hào)A23K1/165GK101611765SQ20091014777公開日2009年12月30日申請(qǐng)日期2009年6月19日優(yōu)先權(quán)日2009年6月19日發(fā)明者潘宏濤申請(qǐng)人:杭州康源飼料科技有限公司