專(zhuān)利名稱(chēng)：丁基酸鈉的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及防霉劑技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及飼料防霉劑技術(shù)領(lǐng) 域，特別是指丁基酸鈉在祠料防霉中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
飼料在儲(chǔ)存、運(yùn)輸、銷(xiāo)售和使用過(guò)程中，由于飼料中水分的變化 和環(huán)境的影響，極易發(fā)生霉變，大量生長(zhǎng)和繁殖的霉菌污染飼料，飼 料發(fā)霉和霉菌毒素中毒癥是世界范圍內(nèi)畜禽生產(chǎn)中普遍存在的嚴(yán)重問(wèn) 題，控制飼料霉變是飼料生產(chǎn)中不可忽視的環(huán)節(jié)。
目前常用的防霉劑品種有丙酸和丙酸鹽、山梨酸及其鉀鹽、苯曱 酸及其鈉鹽和雙乙酸鈉等。這些防霉劑對(duì)保護(hù)飼料品質(zhì)、促進(jìn)畜牧業(yè) 健康發(fā)展有著十分重要的作用，其經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益得到了人們的充分 肯定。但也存在一定的問(wèn)題，如丙酸有剌激性氣味以及很強(qiáng)的腐蝕性，
受熱損失大，揮發(fā)快，使用不太方便；山梨酸及其鉀鹽防霉效果受pH值 的影響，pH值大于7.5時(shí)，幾乎無(wú)抑菌作用，對(duì)乳酸菌幾乎無(wú)效，在 水中易氧化，在塑料容器中其活性會(huì)降低，在空氣中不穩(wěn)定，能被氧 化著色，有吸濕性；苯曱酸及其鈉鹽對(duì)pH值要求很窄，只能在酸性條 件下發(fā)揮作用，pH值大于4時(shí)防霉作用開(kāi)始下降，有苦澀等不良味道； 當(dāng)飼料霉變嚴(yán)重時(shí)或雙乙酸鈉量達(dá)不到完全抑菌時(shí)，雙乙酸鈉它本身 可作為微生物的營(yíng)養(yǎng)源反而促進(jìn)了霉菌的生長(zhǎng)，相應(yīng)增加雙乙酸鈉的 量可完全抑菌，但又增加了防霉成本。
丁基酸鈉的最大特點(diǎn)是抗菌范圍廣，它通過(guò)滲透進(jìn)入微生物的細(xì) 胞壁，干擾細(xì)胞內(nèi)各種酶體系而產(chǎn)生作用，主要抵抗常易使飼料、食 品、飲料中繁殖而引起的腐敗變質(zhì)的細(xì)菌、酵母菌、霉菌等微生物，
3特別是假單孢子菌、葡萄球菌和大腸桿菌。耐光耐熱性好，受酸堿度 影響較小，有效使用濃度較低，且水溶液穩(wěn)定，不會(huì)在加工過(guò)程中受 熱分解，或隨水蒸氣揮發(fā)，但是不清楚不同條件下丁基酸鈉對(duì)幾種霉 菌的抑制濃度，妨礙了 丁基酸鈉在飼料生產(chǎn)中作為防霉劑的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的就是針對(duì)以上存在的問(wèn)題與不足，提供一種丁 基酸鈉在飼料防霉中的應(yīng)用，該應(yīng)用提供了不同條件下丁基酸鈉對(duì)幾 種霉菌的抑制濃度，為丁基酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎(chǔ)。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下 一種丁基酸鈉在飼料防霉中的應(yīng)用，其特點(diǎn)是，用于防治黃曲霉、
煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變祠料中
提取的混合霉菌。
較佳地，所述丁基酸鈉對(duì)混合霉菌的最低抑菌濃度為62mg/kg。 較佳地，所述丁基酸鈉對(duì)黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為
62mg/kg。
較佳地，所述丁基酸鈉對(duì)枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮 刀菌的最低抑菌濃度為88mg/kg。
較佳地，經(jīng)12rC高溫處理30min后，所述丁基酸鈉的最低抑菌濃 度為62mg/kg。
較佳地，pH=5.5時(shí)所述丁基酸鈉的最低抑菌濃度為88mg/kg。 較佳地，pHN7.5時(shí)所述丁基酸鈉的最低抑菌濃度為140mg/kg。 本發(fā)明主要以防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀 菌或禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌為對(duì)象，提供了 丁基 酸鈉對(duì)幾種不同霉菌的最低抑菌濃度，以及不同pH條件下的最低抑菌 濃度，為丁基酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎(chǔ)。
具體實(shí)施例方式
為更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步說(shuō)明。測(cè)定最低抑制溶度采用最低抑菌濃度(MIC)法，該方法根據(jù)防霉劑 能夠抑制霉菌生長(zhǎng)的最低抑菌濃度來(lái)判斷防霉劑抑菌效果，抑菌濃度 愈低，防霉效果愈佳。
實(shí)施例中所用到的稀釋液0.85%生理鹽水，稱(chēng)取分析NaC18.5g, 定容1000ml， 12rC高溫高壓滅菌30min。
實(shí)施例中還具體用到了下列三種培養(yǎng)基
① 高鹽察氏培養(yǎng)基硝酸鈉2g、磷酸二氫鉀lg、硫酸鎂 (MgS04.7H20) 0.5g、氯化鉀0.5g、硫酸亞鐵0.01g、氯化鈉60g、蔗糖
30g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml;稀釋液0.85%生理鹽水。
② 查氏培養(yǎng)基蒸餾水1000ml、硝酸鈉3g、磷酸氫二鉀lg、硫酸 鎂0.5g、氯化鉀0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g、瓊脂15g。
③ 馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯去皮切成薄片，每200g馬鈴薯加自來(lái) 水1000ml，置電爐上80。C溫浸lh,用紗布過(guò)濾，稀釋到1000ml， 15磅 30min滅菌即為20。/。的馬鈴薯浸汁。每100ml馬鈴薯浸汁加葡萄糖2g，加 瓊脂1.5-2g, 15磅30min滅菌即得固態(tài)馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基。
這三種培養(yǎng)基的pH值調(diào)成4.5。 實(shí)施例l 丁基酸鈉對(duì)飼料中霉菌最低抑制溶度(MIC)測(cè)定 1.1制備霉菌孢子懸液
稱(chēng)取有霉菌的雞飼料25g，該飼料購(gòu)自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 飼料加工實(shí)驗(yàn)室，放入含有滅菌的生理鹽水250ml的三角瓶中，置振蕩 器上振蕩30min，用10ml移液管吸取10ml的上述帶霉菌的生理鹽水l: 10稀釋于25ml試管中，用洗耳球及l(fā)ml移液管反復(fù)吹吸50次，使霉菌孢 子分散開(kāi)。取lml此帶霉菌的稀釋液加入9ml生理鹽水，充分混合得l: IOO帶霉菌的稀釋液。取l: lOO帶霉菌的稀釋液lml,力口到100ml滅菌生 理鹽水中，充分混合得l: IOOOO帶有霉菌的稀釋液(此稀釋液每毫升 含有霉菌菌落數(shù)大致100個(gè))。
1.2制備含不同丁基酸鈉溶度的平板分別取防霉劑丁基酸鈉0.1g、 (U25g、 0.15g、 0,175g、 0.2g置于250ml 滅菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100ml，放置振蕩器30min取下， 置電爐上加溫至50。C左右3min 5min,使防霉劑的有效成分充分溶解， 分別加入無(wú)菌培養(yǎng)皿各lml,倒入約45。C滅菌的培養(yǎng)基①19ml，充分混 勻待其凝固后，最終溶度為40mg/Kg、 50mg/Kg、 60mg/Kg、 62mg/kg、 88mg/kg。同時(shí)設(shè)對(duì)照組，每組做兩個(gè)平板作重復(fù)。
1.3接種用移液槍加入步驟l.l制備的lmll: IOOOO帶霉菌的稀釋 液于平板中，涂布均勻后，將平板倒置于28 。C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí) 后觀察，培養(yǎng)觀察一周。無(wú)微生物生長(zhǎng)的最低濃度為其最低防霉?jié)舛取?br> 1.4結(jié)果
表l: 丁基酸鈉最低抑菌濃度
丁基酸鈉濃度mg/kg空白4050607080
霉菌生長(zhǎng)情況++++++++++--
由表1可見(jiàn)，隨著丁基酸鈉濃度的提高，霉菌數(shù)目逐漸減少；在丁 基酸鈉溶度達(dá)到62mg/kg時(shí)霉菌就不能生長(zhǎng)，所以得出當(dāng)培養(yǎng)劑的pH值 在4.5時(shí)，丁基酸鈉對(duì)飼料中霉菌最小抑制溶度為62mg/kg。
實(shí)施例2 丁基酸鈉對(duì)六種不同霉菌的抑制效果
六種標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)菌黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、 禾谷鐮刀菌購(gòu)于中國(guó)普通微生物保藏中心。 1.1菌抹恢復(fù)培養(yǎng)
用無(wú)菌吸管，吸取0.3-0.4ml適宜的液體培養(yǎng)基葡萄糖蛋白胨湯，滴 入買(mǎi)來(lái)的具有相應(yīng)菌抹的安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸
浮狀；取約0.2ml菌體懸浮液，移植于指定的瓊脂斜面/平板培養(yǎng)基上， 培養(yǎng)5d。
1.2平板制備分別取丁基酸鈉0.1g、 0.125g、 0.15g、 0.175g、 0.2g置于250毫升滅 菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100毫升，放置振蕩器30min取下， 置電爐上加溫至50。C左右3min 5min, 4吏丁基酸鈉充分溶解分別加入 無(wú)菌培養(yǎng)皿各lml,倒入約45 。C滅菌的培養(yǎng)基19ml，充分混勻待其凝固 后，最終濃度為40mg/kg、 50mg/kg、 60mg/kg、 62mg/kg、 88mg/kg。 其中，黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉使用②培養(yǎng)基，串珠鐮刀菌、 禾谷鐮刀菌使用③培養(yǎng)基。
1.3接種
將已活化的菌種分別接入無(wú)菌生理鹽水，制成含菌量(孢子量)為 100cfu/ml的菌懸液，用移液槍加入lml菌懸液涂布均勻后，霉菌于28。C 培養(yǎng)72h,細(xì)菌于37。C培養(yǎng)24h,酵母于37。C培養(yǎng)72h后，丁基酸鈉對(duì)黃 曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為62mg/kg,對(duì)枯青霉、島青霉、串珠鐮 刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為88mg/kg, 丁基酸鈉對(duì)這六種特定 霉菌具有很好的抑制作用。 實(shí)施例3 pH值對(duì)丁基酸鈉抑制效果的影響
1.1不同pH值的培養(yǎng)基配制
用0.1mol/L氫氧化鈉把培養(yǎng)基(種類(lèi))的pH分別調(diào)成5.5、 7.5。 1.2制備平板分別取丁基酸鈉(江蘇天成生化制品有限公司，批 號(hào)20071011，規(guī)格25kg/袋)0.1g、 0.125g、 0.15g、 0.175g、 0.2g、 0.225g、 0.25g、 0.275g、 0.3g、 0.325g、 0.35g置于250毫升滅菌的三角 瓶中，加滅菌后的生理鹽水100毫升，放置振蕩器30min取下，置電爐 上加溫至50。C左右3 5min,使丁基酸鈉充分溶解，分別加入無(wú)菌培養(yǎng) 皿各lml，倒入約45 。C滅菌的各pH培養(yǎng)基19ml，充分混勻待其凝固后， 最終濃度為40mg/kg、 50mg/kg、 60mg/kg、 62mg/kg、 88mg/kg、 90 mg/kg、 100mg/kg、 110mg/kg、 120 mg/kg、 130mg/kg、 140mg/kg。分別設(shè)各 pH值的對(duì)照組，每組做兩個(gè)平板作重復(fù)。 1.3接種用移液槍加入實(shí)施例l制備的lml 1: 10000帶霉菌的稀釋液于平板 中，涂布均勻后，將平板倒置于28 。C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后觀察， 培養(yǎng)觀察一周。
當(dāng)培養(yǎng)基pH二5.5時(shí)，丁基酸鈉的最低抑菌濃度為88mg/kg;當(dāng)培養(yǎng) 基pH-7.5時(shí)，丁基酸鈉的最低抑菌濃度為140mg/kg。當(dāng)培養(yǎng)基呈弱酸 性時(shí)，丁基酸鈉的防霉效果最佳；當(dāng)培養(yǎng)基呈中性或弱堿性時(shí)，丁基 酸鈉的防霉效果減弱，隨著培養(yǎng)基pH值增大，丁基酸鈉的防霉?jié)舛戎?漸升高；pH大于7.5時(shí)仍有一定的防霉作用，與常用的化學(xué)防霉劑的有 效pH值(苯曱酸鈉pHS4，山梨酸鉀pH^7)相比丁基酸鈉的防霉效果更 具有實(shí)用性。
綜上所述，本發(fā)明提供了不同條件下丁基酸鈉對(duì)幾種霉菌的抑制濃 度，為丁基酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎(chǔ)。
權(quán)利要求
1.一種丁基酸鈉在飼料防霉中的應(yīng)用，其特征在于，用于防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，所述丁基酸鈉對(duì)混合霉菌 的最低抑菌濃度為62mg/kg。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，所述丁基酸鈉對(duì)黃曲霉、 煙曲霉的最低抑菌濃度為62mg/kg 。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，所述丁基酸鈉對(duì)枯青霉、 島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為SSmg/kg。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，經(jīng)121。C高溫處理30min 后，所述丁基酸鈉的最低抑菌濃度為62mg/kg。
6. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，pH-5.5時(shí)所述丁基酸鈉的 最低抑菌濃度為88mg/kg。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，pH-7.5時(shí)所述丁基酸鈉的 最低抑菌濃度為140mg/kg。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種丁基酸鈉在飼料防霉中的應(yīng)用，用于防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌，丁基酸鈉對(duì)混合霉菌的最低抑菌濃度為62mg/kg，對(duì)黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為62mg/kg，對(duì)枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為88mg/kg，經(jīng)121℃高溫處理30min后，丁基酸鈉的最低抑菌濃度為62mg/kg，pH＝5.5、7.5時(shí)，丁基酸鈉的最低抑菌濃度分別為88mg/kg、130mg/kg、140mg/kg，本發(fā)明提供了不同條件下丁基酸鈉對(duì)幾種霉菌的抑制濃度，為丁基酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)A23K1/00GK101675766SQ200810157188
公開(kāi)日2010年3月24日 申請(qǐng)日期2008年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月19日
發(fā)明者胡金來(lái) 申請(qǐng)人:胡金來(lái)