專利名稱：一種傘滑刃屬線蟲的培養(yǎng)與收集方法及其裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種傘滑刃屬線蟲的培養(yǎng)與收集方法及其裝置，屬線蟲培養(yǎng)技 術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
'植物病原線蟲的培養(yǎng)是植物病理學(xué)教學(xué)與科研中重'要的實驗環(huán)節(jié)。針對傘
滑刃屬中松材線蟲和擬松材線蟲，最常用的培養(yǎng)方法是PDA培養(yǎng)基灰葡萄孢菌 培養(yǎng)法，通常在玻璃培養(yǎng)皿中進行。具體方法是先將灰葡萄孢菌接種在無菌的 固體PDA培養(yǎng)基上，培養(yǎng)灰葡萄孢長滿培養(yǎng)皿時，接種所需要的線蟲，培養(yǎng)約 兩周后當(dāng)可見大量灰葡萄孢菌絲被線蟲取食時，即可用無菌水沖洗培養(yǎng)基表面 回收線蟲，該方法存在的主要缺點是1.回收到的線蟲懸浮液中混有大量的灰 葡萄孢菌絲和孢子；2.獲得的線蟲懸浮液中死蟲占了相當(dāng)大的比例；3.獲得蟲 量相對較少。此外也有學(xué)者提出用三角瓶裝麥粒培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，此方法獲得 蟲量較大，但死蟲數(shù)量較多，菌絲碎片和孢子混雜的缺點依然存在。因此在后 續(xù)實M中，不得不從大量的線蟲懸浮液中逐條挑取以獲得干凈的健康活蟲，從 而加大實驗難度，延長實驗時間，費工費時。因此，線i的培養(yǎng)及實驗用蟲的 選取成為研究植物病原線蟲的一個重要難題。
經(jīng)文獻檢索，未見與本發(fā)明相同的公開報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之不足，提供一種傘滑刃屬線蟲的培養(yǎng)與 收集方法及其裝置。
本發(fā)明的傘滑刃屬線蟲的培養(yǎng)與收集方法由常規(guī)的培養(yǎng)與收集方法改進
而成，具體步驟如下
a. 選用密封性較好的組織培養(yǎng)瓶；
b. 選用通用2毫升離心管，將離心管的蓋(3)和離心管(4)用小刀分開, 切除多余的部分，保證其切口平滑，用半固體膠將離心管(4)與離心管蓋(3) 的接口粘合至無縫隙，風(fēng)干、消毒，滅菌備用；
c/在組織培養(yǎng)瓶蓋(2)上選取對稱的數(shù)個位點；
d. 測量離心管蓋(3)的直徑，選用小于離心管蓋G)直徑的打孔器在組 織培養(yǎng)瓶蓋(2)上對稱位點打孔；
e. 將離心管蓋(3)鑲嵌在織培養(yǎng)瓶蓋(2)上的孔中；
f. 在組織培養(yǎng)瓶體(1).中裝入麥粒培養(yǎng)基至四分之三處，蓋上常規(guī)組織 培養(yǎng)瓶蓋(2)，常規(guī)滅菌接種灰葡萄孢和所需培養(yǎng)的蟲體；
g. 當(dāng)所培養(yǎng)線蟲開始取食灰葡萄孢時，在超凈工作臺上用權(quán)利要求2所述 的蓋子消毒后替換常規(guī)組織培養(yǎng)瓶蓋(2)，放入25"C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
h. 培養(yǎng)兩到三天后，松材線蟲爬上組織培養(yǎng)瓶瓶壁并一部分進入離心管
(4)中；
'i.將已收集到松材線蟲的離心管管體拔下，用于實驗研究；同時將滅菌備 用的未使用過離心管管體鑲嵌在織培養(yǎng)瓶蓋(2)上已打好的孔中，繼續(xù)收集；
j.經(jīng)過多次收集，在后期蟲量少的情況下，向組織培養(yǎng)瓶中噴入霧狀無菌
水促進收集；
k.當(dāng)實驗研究需要純活蟲時，提前12小時將已收集到松材線蟲的離心管 管體拔下，同時將滅菌備用的新離心管管體鑲嵌在織培養(yǎng)瓶蓋(2)上的孔中， 次日離心管管體中收集的線蟲即為活蟲。 '
本發(fā)明的傘滑刃屬線蟲培養(yǎng)與收集方法的裝置，由組織培養(yǎng)瓶體(1)和 組織堉養(yǎng)瓶蓋(2)組成，其中組織培養(yǎng)瓶蓋(2)上開有孔，孔中鑲嵌有由 離心管蓋(3)和離心管U)'構(gòu)成的離心管管體。本實用新型的離心管U) 的數(shù)量按需要確定；組織培養(yǎng)瓶選用通用的任何形狀的透明瓶。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有結(jié)構(gòu)簡單，線蟲培養(yǎng)及實驗用蟲選取的操作
程序簡便，實驗難度降低，實驗時間短，實驗用蟲的純度及實驗結(jié)果的準確性 提高等優(yōu)點?？蓮V泛用于傘清刃屬線蟲的培養(yǎng)及高純度蟲群的收集。


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附圖是本發(fā)明裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施例方式
'本發(fā)明方法采用的裝置，由組織培養(yǎng)瓶體(1)和組^U咅養(yǎng)瓶蓋(2)組成， 其中組織培養(yǎng)瓶蓋(2)上開有孔，孔中鑲嵌有由離心管蓋(3)和離心管(4)
構(gòu)成的離心管管體。本實用新型的離心管(5)的數(shù)量按需要確定；組織培養(yǎng)
瓶選用通用的任何形狀的透明瓶。
本發(fā)明的傘滑刃屬線蟲的培養(yǎng)與收集方法由常規(guī)的培養(yǎng)與收集方法改進
而成，具體步驟如下
a. 選用密封性較好的組織培養(yǎng)瓶；
b. 選用通用2毫升離心管，將離心管的蓋(3)和離心管(4)用小刀分開， 切除多余的部分，保證其切口平滑，用半固體膠將離心管(4)與離心管蓋(3) 的接口粘合至無縫隙，風(fēng)干、'消毒，滅菌備用；
c. 在組織培養(yǎng)瓶蓋(2)上選取對稱的3個位點；
d. 測量離心管蓋(3)的直徑，選用小于離心管蓋(3)直徑的打孔器在組 織培養(yǎng)瓶蓋(2)上對稱位點打孔；
e. 將離心管蓋(3)鑲嵌在織培養(yǎng)瓶蓋(2)上的孔中；
f. 在組織培養(yǎng)瓶體(1)中裝入麥粒培養(yǎng)基至四分之三處，蓋上常規(guī)組織
培養(yǎng)瓶蓋(2)，常規(guī)滅菌接種灰葡萄孢和所需培養(yǎng)的松材線蟲；
g. 當(dāng)所培養(yǎng)松材線蟲開始取食灰葡萄孢時，在超凈工作臺上用權(quán)利要求2 所述的蓋子消毒后替換常規(guī)組織培養(yǎng)瓶蓋(2)，放入25"C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
.h.培養(yǎng)兩到三天后，松材線蟲爬上組織培養(yǎng)瓶瓶寧并一部分進入離心管 (4)中；
i.將已收集到松材線蟲的離心管管體拔下，用于實驗研究；同時將滅菌備 用的未使用過離心管管體鑲嵌在織培養(yǎng)瓶蓋(2)上已打好的孔中，再次收集;
j.經(jīng)過多次收集，在后期蟲量少的情況下，向組織培養(yǎng)瓶中噴入霧狀無菌 水促進收集；
k.當(dāng)實驗研究需要純活蟲時，提前12小時將已收集到松材線蟲的離心管 管體拔下，同時將滅菌備用的新離心管管體鑲嵌在織培養(yǎng)瓶蓋(2)上的孔中， 次曰離心管管體中收集的線蟲即為活蟲。
權(quán)利要求
1、一種傘滑刃屬線蟲的培養(yǎng)與收集方法，由常規(guī)的培養(yǎng)與收集方法改進而成，其特征在于a.當(dāng)所培養(yǎng)線蟲開始取食灰葡萄孢時，在超凈工作臺上用權(quán)利要求2所述的蓋子消毒后替換常規(guī)組織培養(yǎng)瓶蓋(2)，放入25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；b.培養(yǎng)兩到三天后，線蟲爬上組織培養(yǎng)瓶瓶壁并一部分進入離心管(4)中；c.將已收集到線蟲的離心管管體拔下，用于實驗研究；同時將滅菌備用的未使用過離心管管體鑲嵌在織培養(yǎng)瓶蓋(2)上已打好的孔中，繼續(xù)收集；d.經(jīng)過多次收集，在后期蟲量少的情況下，向組織培養(yǎng)瓶中噴入霧狀無菌水促進收集；e.當(dāng)實驗研究需要純活蟲時，提前12小時將已收集到線蟲的離心管管體拔下，同時將滅菌備用的新離心管管體鑲嵌在織培養(yǎng)瓶蓋(2)上的孔中，次日離心管管體中收集的線蟲即為活蟲。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種傘滑刃屬線蟲的培養(yǎng)與收集方法及其裝置，屬線蟲培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。裝置是由組織培養(yǎng)瓶體(1)、組織培養(yǎng)瓶蓋(2)、鑲嵌在組織培養(yǎng)瓶蓋(2)上由離心管蓋(3)和離心管(4)構(gòu)成的離心管管體組成。方法由常規(guī)的培養(yǎng)與收集方法改進而成。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有結(jié)構(gòu)簡單，簡化了常規(guī)線蟲培養(yǎng)及實驗用蟲選取復(fù)雜的操作程序，實驗難度降低，節(jié)省了實驗時間，實驗用蟲的純度及實驗結(jié)果的準確性提高等優(yōu)點?？蓮V泛用于傘滑刃屬線蟲的培養(yǎng)及高純度蟲群的收集。
文檔編號A01K67/033GK101347110SQ200810058860
公開日2009年1月21日 申請日期2008年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月28日
發(fā)明者喻盛甫, 姚茹瑜, 李維蛟, 揚 王, 陳志星 申請人:云南農(nóng)業(yè)大學(xué)