專利名稱：植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法。具體講是以植物組織培養(yǎng)技術(shù)為手段，通過在一定的培養(yǎng)基上培養(yǎng)草莓葉片，并獲得大量再生草莓苗的方法。本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
草莓(Fragaria×ananassa Duch.)屬薔薇科草莓屬多年生草本植物，其漿果是營養(yǎng)價值極其豐富、經(jīng)濟價值很高的上等果品，素有“水果皇后”之稱，不僅含有比其他水果高十倍的維生素，而且果實中所含的鞣花酸具有抗癌效果，因此在歐美市場十分暢銷，售價是蘋果的五倍，葡萄的二倍，仍供不應(yīng)求。日本、東南亞和歐美國家都要求從我國每年進(jìn)口上萬噸速凍草莓，是我國唯一的出口水果。這是因為在日本、東南亞和歐美國家，勞動力價值很高，在日本每生產(chǎn)1公斤草莓需要的成本就達(dá)到20元人民幣。而從我國進(jìn)口1公斤草莓包括運費在內(nèi)僅為10元。因此日本、東南亞和歐美國家都紛紛要求擴大草莓進(jìn)口。所以大力發(fā)展我國草莓生產(chǎn)，滿足日益增長的出口需求將是利國富民、生產(chǎn)扶貧的重要舉措。長期以來，雖然通過常規(guī)育種對草莓產(chǎn)量、果實大小及品質(zhì)等方面有所改良，但栽培草莓是高度的雜和體，遺傳上又存在多倍性，因此這種改良是緩慢的，也是有限的。同時，遠(yuǎn)緣雜交的不親和性及有限的基因資源也阻礙了常規(guī)雜交育種的進(jìn)程，尤其在培育抗病毒、抗真菌、抗除草劑、抗逆境、耐儲藏等草莓品種方面，都因找不到適合的親本而難以實現(xiàn)。而要解決這些草莓生產(chǎn)上長期面臨的問題，就需要育種工作者開辟新的技術(shù)路線，創(chuàng)造新的育種途徑。因此，為了擴大草莓市場占有量，追求低成本，高品質(zhì)和高效益，開發(fā)新的繁育方式，已成為當(dāng)今草莓市場發(fā)展的熱點問題.運用細(xì)胞工程手段，通過植物組織培養(yǎng)方法快速繁殖草莓，固定雜種優(yōu)勢，保持品種特異性，實踐證明是可行的.利用草莓組織在合適的培養(yǎng)基上進(jìn)行離體繁殖，可加快品種繁殖速度，擴大種源生產(chǎn)，保持優(yōu)良品種的性狀，用較少得空間，較少個體和較少時間可獲得遺傳上與親本植株相同的大量再生無毒苗.這種繁殖方式為草莓的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展開拓了一條有效途徑，其社會效益和經(jīng)濟效益是巨大的.
我們經(jīng)多年的時間，在分析、研究國內(nèi)外草莓研究成果的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)地研究了植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用到草莓生產(chǎn)的理論、工藝及可行性，包括從材料選擇、外植體誘導(dǎo)、高頻再生和定植等過程，完成了實驗室和中試研究，使下一步產(chǎn)業(yè)化更具有實際意義，并為此提供了可能與保障。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種提高植物組織培養(yǎng)草莓苗生產(chǎn)率，使其達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平。本項目經(jīng)多年研究，根據(jù)植物葉片再生原理，首創(chuàng)了以葉片為外植體，建立高頻穩(wěn)定再生體系。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，采用下述技術(shù)方案選擇具有30——45天苗齡的草莓幼嫩葉片，在其葉片中部切斷，近軸面向下至于再生培養(yǎng)基上誘導(dǎo)胚狀體發(fā)生。在上述基礎(chǔ)上，葉片再生不定芽培養(yǎng)15天為一個周期。
培養(yǎng)溫度25℃±1，光照強度2500lux，光照時間14h/d。
誘導(dǎo)和再生培養(yǎng)基組成是MB基本培養(yǎng)基，即MS培養(yǎng)基的大量元素B5培養(yǎng)基的微量元素組合，同時附加6-BA 0——4.0mg/l，IBA0——1.5mg/l。
再生的草莓苗培養(yǎng)40天后，可直接轉(zhuǎn)到MB培養(yǎng)基上生根。
所添加的6-BA、IBA用量為6-BA 0-4.0mg/l、IBA 0——1.5mg/l。
上述的培養(yǎng)基中需添加蔗糖1.5-3.0％，并調(diào)PH值4.5-6.5。
上述的培養(yǎng)條件為14h/d光照，2500Lx光照強度，溫度25℃±1。
本發(fā)明的最佳離體再生培養(yǎng)條件是MB培養(yǎng)基附加6-BA 3.0mg/l+IBA 0.5mg/l+蔗糖2.5％。
本發(fā)明提供了一種草莓離體快繁的方法，是在MB培養(yǎng)基上培養(yǎng)草莓葉片，再生草莓幼苗，得到草莓無性系。草莓再生率達(dá)到97.0％以上，生根率達(dá)100％。該方法不僅能明顯提高草莓再生苗的數(shù)量和質(zhì)量，具有生產(chǎn)成本低、不污染環(huán)境，達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平的特點，其發(fā)展前景十分看好。
實施例本項技術(shù)以不同基因型品種哈尼，寶交，麗寶，豐香，美香莎和早豐進(jìn)行培養(yǎng)。外植體均選擇具有30——45天苗齡的草莓幼嫩葉片。在無菌下將其葉片中部切斷，近軸面向下至于再生培養(yǎng)基MB附加6-BA 3.0mg/l mg/l+IBA0.5mg/l+蔗糖2.5％上，PH值為5.5±1。培養(yǎng)15天后葉片再生不定芽。在再生培養(yǎng)基MB上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，再生苗約培養(yǎng)40天后，可直接轉(zhuǎn)到MB培養(yǎng)基上生根。整個培養(yǎng)過程條件為培養(yǎng)溫度25±1℃，光照強度2500lux，光照時間14h/d。
不同品種葉片在MB培養(yǎng)基上的再生結(jié)果品種 單葉片平均再生芽數(shù) 平均再生頻率(％) 生根率(％)哈尼 15.4 99.6 100寶交 13.0 97.1 100麗寶 12.8 97.0 100豐香 14.7 98.8 100美香莎 13.5 97.5 100早豐 13.3 97.3 100在MB培養(yǎng)基上6個草莓品種的單葉片平均再生芽數(shù)在13％以上，平均再生率在97％以上，再生苗生根率均達(dá)到100％。
權(quán)利要求
1.一種植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征在于該方法包括在MB培養(yǎng)基上進(jìn)行葉片培養(yǎng)，在MB培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，獲得草莓無性系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是選取的草莓葉片是具有30——45天苗齡的幼嫩葉片，在其葉片中部切斷，近軸面向下至于再生培養(yǎng)基上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是葉片再生不定芽培養(yǎng)15天為一個周期。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是培養(yǎng)溫度25±1℃，光照強度2500lux，光照時間14小時/天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是誘導(dǎo)和再生培養(yǎng)基組成是MB基本培養(yǎng)基，即MS培養(yǎng)基的大量元素B5培養(yǎng)基的微量元素組合，同時附加6-BA O——4.Omg/l，IBA 0——1.5mg/l。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是PH值為5.5±1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是再生的草莓苗培養(yǎng)40天后，可直接轉(zhuǎn)到MB培養(yǎng)基上生根。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種采用植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法。該方法是在MB培養(yǎng)基上培養(yǎng)草莓葉片，再生草莓幼苗，得到草莓無性系。草莓再生率達(dá)到97.0％以上，生根率達(dá)100％。本發(fā)明方法生產(chǎn)成本低，不污染環(huán)境，達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平。
文檔編號A01H4/00GK1423927SQ03110849
公開日2003年6月18日 申請日期2003年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月13日
發(fā)明者賈景明 申請人:賈景明