脂蛋白(a)定量測(cè)定試劑盒及其使用方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測(cè)和診斷領(lǐng)域。具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及定量測(cè)定人血清或血漿 中脂蛋白（a)的試劑盒以及所述試劑盒的使用方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 脂蛋白（a) (Lp(a))是人血漿中的一類特別的脂蛋白顆粒，最早由merg于 1963年發(fā)現(xiàn)，主要由低密度脂蛋白顆粒和富含糖鏈的高度親水的apo(a)組成；其中每個(gè) apo(a)分子通過(guò)一個(gè)二硫鍵和一分子的apoB-100共價(jià)交聯(lián)。Apo(a)由三個(gè)完全不同的結(jié) 構(gòu)組成：未激活的蛋白酶區(qū)域、一個(gè)拷貝的K5環(huán)餅和多拷貝的K4環(huán)餅區(qū)。
[0003] 研究表明，人血漿中Lp (a)濃度的升高與心血管功能的紊亂及腦血管疾病相關(guān)， 血漿中Lp(a)濃度的升高通常預(yù)示著早期的冠狀動(dòng)脈和梗阻風(fēng)險(xiǎn)的增加，同時(shí)由于Lp(a) 基本濃度具有高度的遺傳性，因此，Lp(a)是早期冠心病（CHD)的重要預(yù)示因子，對(duì)其進(jìn)行 檢測(cè)對(duì)于心血管疾病的預(yù)測(cè)具有重要意義。
[0004] 目前，已知的檢測(cè)脂蛋白（a)濃度的方法有酶聯(lián)免疫法、放射免疫法、熒光免疫測(cè) 定法等檢測(cè)方法，但上述測(cè)定方法的操作比較復(fù)雜，檢測(cè)用時(shí)長(zhǎng)，過(guò)度浪費(fèi)資源的缺點(diǎn)，不 適合做常規(guī)檢測(cè)。例如，CN103149370A公開(kāi)了一種脂蛋白（a)定量測(cè)定試劑盒，該試劑盒 利用脂蛋白（a)的多克隆抗體包被乳膠顆粒并且在試劑R2中利用阿斯巴甜減輕血清中類 風(fēng)濕因子對(duì)于檢測(cè)的干擾，但該試劑盒以及目前市場(chǎng)上的脂蛋白（a)定量測(cè)定試劑盒大都 采用脂蛋白（a)多克隆抗體；CN102749459A公開(kāi)了一種脂蛋白（a)的檢測(cè)試劑盒，其利用 結(jié)合有脂蛋白（a)單克隆抗體的乳膠顆粒；CN103604930A公開(kāi)了一種脂蛋白（a)的檢測(cè)試 劑盒，其利用脂蛋白（a)單抗乳膠微球，能夠解決與纖溶酶原有交叉反應(yīng)以及類風(fēng)濕因子 對(duì)于檢測(cè)的干擾的問(wèn)題；CN103454193A公開(kāi)了利用包被有脂蛋白（a)單克隆抗體的乳膠懸 液的脂蛋白（a)的檢測(cè)試劑盒。但這些申請(qǐng)均并公開(kāi)采用的是何種單克隆抗體，而且這些 試劑盒無(wú)法同時(shí)確保高靈敏度和低值區(qū)域的重復(fù)性。
[0005] 因此，本領(lǐng)域急需穩(wěn)定性好、檢測(cè)方便、同時(shí)具備高靈敏度和低值區(qū)域重復(fù)性的脂 蛋白（a)定量測(cè)定試劑盒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種人脂蛋白（a)的單克隆抗體標(biāo)記的顆粒，以及包含所 述顆粒的檢測(cè)試劑盒，所述人脂蛋白（a)的單克隆抗體標(biāo)記的顆粒以及檢測(cè)試劑盒的穩(wěn)定 性好、檢測(cè)方便、同時(shí)具備高靈敏度和低值區(qū)域重復(fù)性。
[0007] 在第一方面，本發(fā)明提供一種鼠抗人脂蛋白（a)單克隆抗體標(biāo)記的顆粒，所述鼠 抗人脂蛋白（a)單克隆抗體是美國(guó)ABGENT公司生產(chǎn)的單克隆抗體（克隆號(hào)為A01237a)。
[0008] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述鼠抗人脂蛋白（a)單克隆抗體標(biāo)記的顆粒在37°C保存 3天后，定標(biāo)穩(wěn)定性良好。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明的鼠抗人脂蛋白（a)單克隆抗體標(biāo) 記的顆粒在37°C保存3天后，測(cè)試20mg/L樣本的吸光度差值（ΛΑ)彡0. 04A。
[0009] 在第二方面，本發(fā)明提供一種鼠抗人脂蛋白（a)單克隆抗體標(biāo)記的顆粒的組合， 所述鼠抗人脂蛋白（a)單克隆抗體是美國(guó)ABGENT公司生產(chǎn)的單克隆抗體（克隆號(hào)為 A01237a);并且所述顆粒是具有不同粒徑的兩種或多種顆粒。
[0010] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述顆粒包括但不限于乳膠顆粒、磁珠；優(yōu)選乳膠顆粒；更 優(yōu)選表面帶羧基的聚苯乙烯膠乳顆粒。
[0011] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述顆粒的粒徑選自60-300nm。
[0012] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述顆粒是具有不同粒徑的兩種顆粒。
[0013] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述顆粒的粒徑分別選自60-150nm和150-280nm。
[0014] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述顆粒的粒徑分別是105nm和200nm。
[0015] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述具有不同粒徑的兩種顆粒的比例為40:60 - 60:40。
[0016] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述具有不同粒徑的兩種顆粒的比例為50:50。
[0017] 在第三方面，本發(fā)明提供一種脂蛋白（a)定量測(cè)定試劑盒，所述試劑盒包含：
[0018] (1)樣品預(yù)處理劑；
[0019] (2)檢測(cè)劑；和
[0020] (3)任選的校準(zhǔn)品；
[0021] 其中，所述檢測(cè)劑包含本發(fā)明第一方面所述的鼠抗人脂蛋白（a)單克隆抗體標(biāo)記 的顆粒，或本發(fā)明第二方面所述的鼠抗人脂蛋白（a)單克隆抗體標(biāo)記的顆粒的組合。
[0022] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述樣品預(yù)處理劑使得樣品的抗原位點(diǎn)充分暴露。
[0023] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述校準(zhǔn)品含有去脂脂蛋白（a)高值人血血漿、緩沖液、防 腐劑、穩(wěn)定劑以及胰蛋白酶抑制劑。
[0024] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述樣品預(yù)處理劑含有50-100mmol/L緩沖液、2-4%增敏 劑、1-2%穩(wěn)定劑、0. 1-0. 2%表面活性劑、200-500mmol/L電解質(zhì)、0. 03-0. 1%防腐劑。
[0025] 在具體的實(shí)施方式中，所述校準(zhǔn)品含有去脂脂蛋白（a)高值人血血漿、緩沖液、防 腐劑、穩(wěn)定劑以及胰蛋白酶抑制劑。
[0026] 在具體的實(shí)施方式中，所述顆粒的粒徑選自60_300nm。
[0027] 在具體的實(shí)施方式中，所述顆粒是具有不同粒徑的兩種或多種顆粒；優(yōu)選地，所述 顆粒是具有不同粒徑的兩種顆粒。
[0028] 在具體的實(shí)施方式中，所述顆粒的粒徑分別選自80-150nm和150-280nm ;優(yōu)選地， 所述顆粒的粒徑分別是l〇5nm和200nm。
[0029] 在具體的實(shí)施方式中，所述具有不同粒徑的兩種顆粒的比例為40:60 - 60:40 ;優(yōu) 選地，所述具有不同粒徑的兩種顆粒的比例為50:50。
[0030] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述脂蛋白（a)定量測(cè)定試劑盒的檢測(cè)靈敏度為> 0. 04A。
[0031] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述檢測(cè)劑含有50-100mmol/L緩沖液、0. 1-0. 5%鼠抗人 脂蛋白（a)單克隆抗體致敏的聚苯乙烯膠乳顆粒、1-2%穩(wěn)定劑、0.03-0. 1%防腐劑。
[0032] 在第四方面，本發(fā)明提供本發(fā)明第一方面所述的鼠抗人脂蛋白（a)單克隆抗體標(biāo) 記的顆粒、本發(fā)明第二方面所述的鼠抗人脂蛋白（a)單克隆抗體標(biāo)記的顆粒的組合、或本 發(fā)明第三方面所述的試劑盒在定量測(cè)定脂蛋白（a)中的用途。
[0033] 在第五方面，本發(fā)明提供一種定量測(cè)定脂蛋白（a)的方法，所述方法利用本發(fā)明 第一方面所述的鼠抗人脂蛋白（a)單克隆抗體標(biāo)記的顆粒、本發(fā)明第二方面所述的鼠抗人 脂蛋白（a)單克隆抗體標(biāo)記的顆粒的組合、或本發(fā)明第三方面所述的試劑盒來(lái)定量測(cè)定待 測(cè)樣品中的脂蛋白（a)。
[0034] 在第六方面，本發(fā)明提供一種校準(zhǔn)品，所述校準(zhǔn)品含有去脂脂蛋白（a)高值人血 血漿、緩沖液、防腐劑、穩(wěn)定劑以及胰蛋白酶抑制劑。
[0035] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述校準(zhǔn)品含有去脂脂蛋白（a)高值人血血漿、蔗糖、賴氨 酸和胰蛋白酶抑制劑。
[0036] 在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述校準(zhǔn)品利用LP(A)高值大袋血漿配制，得到終濃度為 15%的鹿糖，18mg/mL的L-賴氨酸，0. 8mg/mL的胰蛋白酶抑制劑。
[0037] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實(shí)施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說(shuō)明】
[0038] 圖1顯示了各單抗與去脂人血漿樣本反應(yīng)的特異性，抗體可以達(dá)到1/8稀釋倍數(shù) 的效價(jià)，符合相應(yīng)靈敏度的要求。
【具體實(shí)施方式】
[0039] 發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，出乎意料地發(fā)現(xiàn)將特定的鼠抗人脂蛋白（a)單克 隆抗體標(biāo)記在膠乳顆粒上，以及進(jìn)一步采用具有特定粒徑的膠乳顆粒，特別是具有特定比 例的不同粒徑的膠乳顆粒得到的脂蛋白（a)定量測(cè)定試劑盒具有檢測(cè)靈敏度高，低值區(qū)域 的重復(fù)性好，批間均一性和試劑儲(chǔ)存穩(wěn)定性良好，校準(zhǔn)穩(wěn)定性長(zhǎng)等等優(yōu)點(diǎn)，從而能夠操作簡(jiǎn) 便、準(zhǔn)確地定量測(cè)定脂蛋白（a)。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
[0040] 術(shù)語(yǔ)定義
[0041] 顆粒
[0042] 本文所用的術(shù)語(yǔ)"顆粒"是指用于定量測(cè)定的脂蛋白（a)，具有一定粒徑的粒子。 鑒