一種用液相色譜法分離測定琥珀酸曲格列汀及其光學(xué)異構(gòu)體的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及用液相色譜法分離測定琥珀酸曲格列汀及其 光學(xué)異構(gòu)體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 琥珀酸曲格列汀是一種質(zhì)量糖尿病的新藥，其分子式為C1SH20FN 502 ·(；氏04，其結(jié)構(gòu)式為：
琥珀酸曲格列汀分子屮貧有1個中性碳原于，通過小對稱合成生成不同的手性異構(gòu)體， 在藥物合成過程中需要對光學(xué)異構(gòu)體進行質(zhì)量控制。含有手性碳原子的對映異構(gòu)體的分離是 手性藥物合成和制劑過程中質(zhì)量控制的難點，因此，實現(xiàn)琥珀酸曲格列汀及其手性異構(gòu)體的 分離測定在琥珀酸曲格列汀的合成和制劑過程的質(zhì)量控制方面具有重要的現(xiàn)實意義。
[0003] 經(jīng)反復(fù)試驗，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，用三(S)-ci -甲基苯基氨基甲酸酯直鏈淀粉為填料的手性 色譜柱，以正己燒一f氏級醇溶液為流動相即可以將琥珀酸曲格列汀手性異構(gòu)體進行有效分離，該 方法下基線平穩(wěn)，主峰峰形較好，檢測限較高，從而可以準確控制琥珀酸曲格列汀的質(zhì)量。
[0004]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種采用高效液相色譜分離測定琥珀酸曲格列汀及其手 性異構(gòu)體的方法，該方法可有效實現(xiàn)琥珀酸曲格列汀與其手性異構(gòu)體的分離與測定，基線 平穩(wěn)，主峰峰形較好，檢測限較高。
[0006] 為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，提供如下實施方案： 在一實施方案中，本發(fā)明的采用液相色譜法分離測定琥珀酸曲格列汀及其光學(xué)異構(gòu) 體的方法，包括以三（S)-ct-甲基苯基氨基甲酸酯直鏈淀粉為填料的手性色譜柱，以正己 燒一低級醇溶液為流動相，其中，正己烷與低級醇的體積比為25:75~75:25。
[0007] 在上述實施方案中，本發(fā)明的方法，所說的手性色譜柱選自牌號為Daicel CHIRALPAK AS、Daicel CHIRALPAK AS-H 和 Daicel CHIRALPAK AS-3 的色譜柱，所說的低級 醇選自以下化合物：甲醇、無水乙醇、丙醇和異丙醇，優(yōu)選為無水乙醇或異丙醇，正己烷中還 進一步含有微量改性劑，所述改性劑選自三乙胺、二乙胺、三氟乙酸和乙二胺，優(yōu)選乙二胺， 所述微量為〇. 01-1%，優(yōu)選為〇. 02-0. 1%。
[0008] 在上述實施方案中，本發(fā)明的方法，還進一步包括以下步驟： (1) 稱取琥珀酸曲格列汀樣品適量，用無水乙醇溶解樣品，配制成每lml含琥珀酸曲格 列汀0. lmg~5mg的樣品溶液； (2) 設(shè)置流動相流速為0. 5~2. Oml/min，優(yōu)選為1. 0 ml/min ;檢測波長為 205nnT300nm，優(yōu)選為276nm，色譜柱的柱溫箱溫度為25°C ~45°C，優(yōu)選為40°C ; (3) ?。?)的樣品溶液，設(shè)置進樣量為5ml~100ml，優(yōu)選20μ 1注入色譜儀，完成琥珀酸 曲格列汀與光學(xué)異構(gòu)體的分離測定。
[0009] 在一具體實施方案中，本發(fā)明的采用液相色譜分離測定琥珀酸曲格列汀及其光 學(xué)異構(gòu)體的方法，包括以三（S)-a-甲基苯基氨基甲酸酯直鏈淀粉為填料的手性色譜柱， 以正己烷一低級醇溶液為流動相，其中，正己烷與低級醇的體積比為60 :40,所述低級醇選 自甲醇、無水乙醇、丙醇和異丙醇，優(yōu)選為無水乙醇，其中，正己烷中含有微量改性劑，所述 改性劑選自三乙胺、二乙胺、三氟乙酸和乙二胺，優(yōu)選乙二胺，所述微量為0.01-1%，優(yōu)選為 0. 02-0. 1%，該方法包括以下步驟： (1) 稱取琥珀酸曲格列汀樣品適量，用無水乙醇溶解樣品，配制成每lml含琥珀酸曲格 列汀0. lmg~5mg的樣品溶液； (2) 設(shè)置流動相流速為0. 5~2. Oml/min，優(yōu)選為1. 0 ml/min ;檢測波長為 205nnT300nm，優(yōu)選為276nm，色譜柱的柱溫箱溫度為25°C ~45°C，優(yōu)選為40°C ; (3) 取（1)的樣品溶液，設(shè)置進樣量為5ml~100ml，優(yōu)選20 μ 1注入色譜儀，完成琥珀酸 曲格列汀與光學(xué)異構(gòu)體的分離測定。
[0010] 在上述具體實施方案中，本發(fā)明的方法，所說的手性色譜柱選自牌號為Daicel CHIRALPAK AS、Daicel CHIRALPAK AS-H 和 Daicel CHIRALPAK AS-3 的色譜柱，所說的低級 醇為無水乙醇，正己烷中含有0. 02%的改性劑，所述改性劑為乙二胺。
[0011] 在上述具體實施方案中，本發(fā)明的方法，優(yōu)選的，其中： 高效液相色譜儀:Agilent 1100型高效液相色譜儀 色譜柱：Daicel CHIRALPAK AS-H 手性柱（250mmX4. 6mm, 5 μ m) 柱溫：40°C 流動相：正己烷(含0. 02%乙二胺）-無水乙醇（60 :40V/V) 流速：1.0ml/min 檢測波長：276nm 進樣量：20 μ 1 本發(fā)明的方法，能夠有效分離測定琥珀酸曲格列汀及其光學(xué)異構(gòu)體；選用低級醇，特別 是無水乙醇為流動相和溶劑溶解樣品，保證了溶液的穩(wěn)定性；優(yōu)選進樣體積為20 μ 1，柱溫 為40°C，可獲得對稱性更好的色譜峰。本發(fā)明解決了琥珀酸曲格列汀與其光學(xué)異構(gòu)體分離 困難的定問題，很好的實現(xiàn)了琥珀酸曲格列汀與其光學(xué)異構(gòu)體的基線分離和測定，特別是 在正己烷中加入微量的改性劑后，避免峰出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，基線分離更穩(wěn)定，從而更好的保證 了琥珀酸曲格列汀的質(zhì)量可控。
[0012]
【附圖說明】
[0013] 圖1 :空白溶劑的高效液相色譜圖 圖2 :琥珀酸曲格列汀原料和琥珀酸曲格列汀對映異構(gòu)混合液的高效液相色譜圖 圖3 :琥珀酸曲格列汀原料的高效液相色譜圖 圖4 :空白輔料的高效液相色譜圖 圖5 :琥珀酸曲格列汀片的高效液相色譜。
【具體實施方式】
[0014] 以下實施例用于進一步闡明和解釋本發(fā)明的實質(zhì)，但不以此限制本發(fā)明的范圍。
[0015] 實施例1 儀器和條件 高效液相色譜儀:Agilent 1100型高效液相色譜儀 色譜柱：Daicel CHIRALPAKAS-H 手性柱（250mmX4.6mm，5μπι) 柱溫：40°C 流動相：正己烷（含〇· 02%乙二胺）-無水乙醇（60 :40) 流速：1. 〇ml/min 檢測波長：276nm 進樣量：20 μ 1 實施步驟 分別取琥珀酸曲格列汀原料20mg和琥珀酸曲格列汀對映異構(gòu)體20mg，置同一 10ml量 瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至25ml量瓶中，無水乙醇稀釋至 刻度，搖勻，作為供試品溶液。
[0016] 分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖，結(jié)果見圖1和圖2,圖1為空白溶劑的高效液相色譜圖，圖2為琥珀酸曲格列汀原料和 琥珀酸曲格列汀對映異構(gòu)混合液的高效液相色譜圖。圖2中保留時間為8. 111分鐘的色譜 峰為琥珀酸曲格列汀對映異構(gòu)體的色譜峰，保留時間為6. 910分鐘的色譜峰為琥珀酸曲格 列汀的色譜峰，由圖可以看出，琥珀酸曲格列汀與其對映異構(gòu)體達到基線分離度。
[0017] 實施例2 儀器和條件 高效液相色譜儀:Agilent 1100型高效液相色譜儀 色譜柱：Daicel CHIRALPAKAS-H 手性柱（250mmX4. 6mm, 5 μ m) 柱溫：40°C 流動相：正己烷（含〇· 02%乙二胺）-無水乙醇（60 :40) 流速：1.0ml/min 檢測波長：276nm 進樣量：20 μ 1 實施步驟 取琥珀酸曲格列汀原料25mg，置50ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作 為供試品溶液。
[0018] 取供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖3。
[0019] 圖3表明，琥珀酸曲格列汀的光學(xué)純度達到原料藥用級要求，本發(fā)明的方法可以 用于琥珀酸曲格列汀原料藥的質(zhì)量檢測和控制。
[0020] 實施例3 儀器和條件 高效液相色譜儀:Agilent 1100型高效液相色譜儀 色譜柱：Daicel CHIRALPAKAS-H 手性柱（250mmX4.6mm，5μπι) 柱溫：40°C 流動相：正己烷（含〇· 02%乙二胺）-無水乙醇（60 :40) 流速：1. 〇ml/min 檢測波長：276nm 進樣量：20 μ 1 實施步驟 取琥珀酸曲格列汀片適量，約相當(dāng)于琥珀酸曲格列汀20mg，置10ml量瓶中，加無水乙 醇超聲處理使溶解，并用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml至25ml量瓶中，無水乙 醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
[0021] 取供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，并同法進行空白 輔料試驗，結(jié)果見圖4、圖5。
[0022] 圖4為空白輔料的高效液相色譜圖，圖4表明，空白輔料不干擾琥珀酸曲格列汀及 其手性異構(gòu)體的測定，圖5為琥珀酸曲格列汀片的高效液相色譜圖，圖5表明本發(fā)明的方法 可以用于琥珀酸曲格列汀片的質(zhì)量檢測和控制。
[0023] 實施例4 參照實施例1的試驗操作和條件參數(shù)，分別改變色譜條件中的流動相的比例、改性劑 的比例和色譜柱，其它條件及參數(shù)不變，考察琥珀酸曲格列汀與對映異構(gòu)體的分離情況。結(jié) 果見下表：
根據(jù)上表的結(jié)果表明，本發(fā)明的方法均能使琥珀酸曲格列汀與對映異構(gòu)體達到有效分 離，從而實現(xiàn)琥珀酸曲格列汀與對映異構(gòu)體有效的分離測定。本發(fā)明的方法專屬性強，準確 度高，操作簡便。
【主權(quán)項】
1. 一種采用高效液相色譜法分離測定琥珀酸曲格列汀及其對映異構(gòu)體的方法，包括以 三（S) - Ct -甲基苯基氨基甲酸酯直鏈淀粉為填料的色譜柱，和以正己烷-低級醇溶液為流 動相，其中，正己烷與低級醇的體積比為25:75~75:25。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述手性色譜柱選自下列牌號的色譜柱：Daicel CHIRALPAKAS、Daicel CHIRALPAKAS-H 和 Daicel CHIRALPAKAS-3。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述低級醇選自甲醇、無水乙醇、丙醇和異丙醇。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，所述低級醇為無水乙醇或異丙醇。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，所述流動相，其中，正己烷中含有0. 01%-1%的改性劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述正己烷與低級醇的體積比為60:40,其中，正己烷 中含有0. 02%的改性劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，所述改性劑選自三乙胺、二乙胺、三氟乙酸和乙二 胺。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離測定方法，還包含以下步驟： a) 供試品溶液的配制：稱取琥珀酸曲格列汀或含琥珀酸曲格列汀的制劑，加無水乙醇 溶解樣品，配制成每lml含琥拍酸曲格列汀0. lmg至5mg的樣品溶液作為供試品溶液； b) 設(shè)置流動相的流速為0· 5~2. Oml/min，設(shè)置檢測波長為200nm至300nm，設(shè)置色譜 柱的柱溫為25°C至45°C ; c) 取a)的樣品溶液設(shè)置進樣量為5ml~100ml，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，完成琥 珀酸曲格列汀與光學(xué)異構(gòu)體的分離測定。9. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的分離測定方法，其特征在于步驟b)所述的柱溫箱溫度為 40。。。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的分離測定方法，其特征在于步驟b)所述的檢測波長為 276nm，或步驟c)的進樣量為20ml。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種采用高效液相色譜法分離測定琥珀酸曲格列及其汀光學(xué)異構(gòu)體的方法，包括以三（S）-α-甲基苯基氨基甲酸酯直鏈淀粉為填料的色譜柱，和以正己烷-低級醇溶液為流動相，其中，正己烷與低級醇的體積比為25:75~75:25，分離測定琥珀酸曲格列汀及其手性異構(gòu)體的含量。采用該方法可以很好的將琥珀酸曲格列汀與其對映異構(gòu)體進行有效分離和測定。該本法用于琥珀酸曲格列汀的質(zhì)量控制，專屬性強，準確度高，操作簡便。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號】CN105675733
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】熊娟, 張道林, 彭良臣, 但春燕
【申請人】重慶醫(yī)藥工業(yè)研究院有限責(zé)任公司
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2014年11月17日