一種評估基因對人體高密度脂蛋白影響的檢測試劑盒和方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因檢測，具體涉及人體高密度脂蛋白基因檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 高密度脂蛋白為血清蛋白之一。縮寫為皿L。亦稱為al脂蛋白。比較富含磯脂 質，在血清中的含量約為300mg/dl。由于可輸出膽固醇促進膽固醇的代謝，所W現(xiàn)在作為動 脈硬化預防因子而受到重視。高密度脂蛋白運載周圍組織中的膽固醇，再轉化為膽汁酸或 直接通過膽汁從腸道排出，動脈造影證明高密度脂蛋白膽固醇含量與動脈管腔狹窄程度呈 顯著的負相關。所W高密度脂蛋白是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠必病的保護 因子，俗稱"血管清道夫"。
[0003] 當血液中皿L含量高時，血脂及血垢的清運速度大于沉積速度，不但不會有新的 血脂沉積，連早已沉積的脂質斑塊也會被逐漸清除，血管越來越干凈，血流暢通無阻，大量 的皿L進入血管內膜及內皮細胞，修復內膜破損，恢復血管彈性，必腦血管病變幾率就比較 低；當皿L含量低時，血脂及血垢的清運速度小于沉積速度，血脂增高，沉積加快，硬化逐漸 加重，病變必然發(fā)生。
[0004] 世界衛(wèi)生組織研究證實，每100毫升血液中的皿L升高1毫克，可使由動脈粥樣硬 化引起的必腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率降低3-4%，世界衛(wèi)生組織（WHO)專家組宣稱；對 于必腦血管病，廣為接受而又最少爭議最重要的保護因素是體內高密度脂蛋白（皿L)含量 越局越好！ 人體內皿L水平的高低除了與日常的生活習慣有關W外，和自身的基因也密切相關。 由于皿L本身就是一種基因編碼的產(chǎn)物蛋白質，體內基因間的相互調節(jié)和表達程度的不同 也在根本上決定了皿L水平的高低。

【發(fā)明內容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明提供了一種高密度脂蛋白基因檢測試劑盒，該試劑盒對受測者 的相關基因進行檢測，分析得到其體內皿L表達水平的遺傳因素，且PCR擴增反應在同一臺 PCR儀上同步進行并具備檢測的高效性、特異性。
[0006] -種高密度脂蛋白基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，存放的 試劑包括： (1)針對4個基因 SNP多態(tài)位點的PCR反應引物組：

(3)瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。
[0007] 本發(fā)明提供的高密度脂蛋白基因檢測試劑盒的有益效果是；通過PCR引物的設計 使多個PCR擴增反應在同一臺PCR儀上同步進行，對受測者的相關基因進行檢測，并實現(xiàn)檢 測的高效性、特異性，分析得到其高密度脂蛋白的遺傳因素，評估相關的風險因素，從而為 受測者獲得一個合適的健康方案，采取相應的策略避免對其無效甚至是有害的方法。
【附圖說明】
[0008] 圖1是反應產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖。
【具體實施方式】
[0009] 高密度脂蛋白基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，存放的試劑 包括： (1)針對4個基因 SNP多態(tài)位點的PCR反應引物組：

(3)瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。
[0010] 下面將結合實施例對本發(fā)明提供的方法予W進一步的說明。
[0011] 本實施例對測試者采用高密度脂蛋白基因檢測試劑盒同時檢測4個基因的SNP 多態(tài)位點，并根據(jù)基因分型結果，分析得到其高密度脂蛋白的遺傳因素，評估相關的風險因 素，從而為受測者獲得一個合適的健康方案，采取相應的策略避免對其無效甚至是有害的 方法。
[0012] 使用到的高密度脂蛋白基因檢測試劑盒內試劑由W下組成： (1)針對4個基因 SNP多態(tài)位點的PCR反應引物組：
(2)PCR擴增試劑；lOXPCR緩沖液，該PCR緩沖液為lOOmM Tris-肥1 p冊.3,500mM KCl，15mM MgC12 ;dNTPs混合物，該dNTPs混合物為Η磯酸鳥嘿嶺脫氧核巧酸dGTP，Η磯 酸腺嘿嶺脫氧核巧酸dATP，Η磯酸胸腺嚼巧脫氧核巧酸dTTP，Η磯酸胞嚼巧脫氧核巧酸 dCTP四種核巧酸，各組分濃度為2. 5mM ;5υ/μ 1熱啟動Taq酶。
[001引（3)瓊脂糖凝膠電泳分析試劑諒脂糖、TAE緩沖液、DNA分子量標準、Goldview 染色液和DM上樣緩沖液，該緩沖液W漠酪藍為指示劑稀釋至IX后使用。
[0014] 使用上述高密度脂蛋白基因檢測試劑盒按如下步驟進行檢測： (1)提取樣本基因組DNA。
[0015] 采集該測試者唾液，向l-2ml唾液樣品中加入500ul提取緩沖溶液，該DNA提取 緩沖溶液溶劑為50mM的化is-肥1 pH7. 4、0. 5mM的邸TA和50mM的化C1，反復吹打混勻 后，8000Xg離必5分鐘，棄去上清，此步驟重復一次；得到的沉淀中加入500ul裂解液， 該裂解液溶劑為 50mM Tris-肥 1 pH7. 4,50mM Tris-肥 1 pH7. 4，150mM 化Cl，lmM 邸TA，1% Triton χ-100，1% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS,蛋白酶 K20mg/mL,徹底懸浮沉淀并 充分混勻后，室溫放置30分鐘，期間來回顛倒離必管數(shù)次；得到的混合液中，加入濃度為 lOmg/mLRNA酶的水溶液10 μ L，37°C下靜置lOmin ;得到的上清液中，加入等體積苯酪-氯 仿混合溶液，苯酪和氯仿體積比為1 : 1，充分混勻，混合液4°C，12000Xg離必5分鐘，上清 液移入干凈離必管內；加入等體積苯氛-氯仿-異戊醇混合溶液，苯酪、氯仿和異戊醇體積 比為25 : 24 : 1，充分混勻后，4°C，12000Xg離必5分鐘，上清液移入干凈離必管內；加 入等體積氯仿-異戊醇混合溶液，充分混勻后，4°C，12000Xg離必5分鐘，上清液移入干 凈離必管內；加入0. 6倍體積的冰浴異丙醇溶液及0. 1倍的3mol/L醋酸鋼溶液，-2(TC靜 置60分鐘后，4°C，12000 X g離必10分鐘，棄上清液；得到的沉淀物中加入0. 5血70 %己醇 清洗沉淀物，4°C，12000 X g離必5分鐘，棄上清液，此步驟重復一次；得到的沉淀物自然風 干，加入20 μ L無菌超純水回溶，電泳檢測，-2(TC保存。
[001 引（2)PCR 擴增 本實施例同時檢測rs2271293、rsl7145738、rs3764261和rs964184。每個SNP的檢測 需要一對上下游引物、兩條多態(tài)引物共4條PCR引物，共需要16條引物。每個SNP的檢測 需要做兩管PCR擴增，為防止出現(xiàn)假陽性之類的反應，衡量