一種假絲酵母菌菌株及其應(yīng)用，以及加工普洱茶的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，設(shè)及一種假絲酵母菌菌株及其應(yīng)用，W及加 工普巧茶的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，酵母菌已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于人民生活當(dāng)中的很多方面， 如釀酒、發(fā)酵果汁、發(fā)酵面包、制作乳制品、制造美味等。酵母有著天然豐富的營(yíng)養(yǎng)體系，是 一種純天然、無污染、生物態(tài)的健康營(yíng)養(yǎng)源。酵母被營(yíng)養(yǎng)界譽(yù)為最有魅力的營(yíng)養(yǎng)品。據(jù)報(bào)道， 酵母中含有50多種營(yíng)養(yǎng)成分，人體健康所必須的蛋白質(zhì)、維生素 B群、礦物質(zhì)、核酸等都可 W從酵母中獲得。
[0003] 在傳統(tǒng)的普巧茶渥堆發(fā)酵中，微生物、濕熱作用、氧化及酶促反應(yīng)等綜合作用使普 巧茶內(nèi)含物質(zhì)發(fā)生一系列轉(zhuǎn)化，在6-8周的時(shí)間內(nèi)形成普巧茶所獨(dú)有的品質(zhì)特征，運(yùn)其中 微生物發(fā)揮著重要的作用。
[0004] 微生物資源豐富、代謝活躍，普巧茶發(fā)酵工藝革新的技術(shù)突破需要對(duì)微生物資源 進(jìn)行挖掘和開發(fā)利用。目前還沒有將假絲酵母菌（Candida blankii)用于普巧茶的發(fā)酵加 工中的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種假絲酵母菌菌株及其應(yīng)用，W及加工普巧茶的方法。
[0006] 具體而言，本發(fā)明提供了：
[0007] 一種假絲酵母菌（Candida blankii)菌株，其保藏編號(hào)為CGMCC No. 8682,已于 2014年1月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、（CGMCC)。
[0008] 本發(fā)明還提供了一種加工普巧茶的方法，包括將分離純化的假絲酵母菌 (Candida blankii)接種于大葉種曬青毛茶中，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
[0009] 優(yōu)選地，所述大葉種曬青毛茶為已潮水的大葉種曬青毛茶。
[0010] 優(yōu)選地，所述已潮水的大葉種曬青毛茶的含水量為基于潮水之前的曬青毛茶的總 重量計(jì)為20-40% (m/m)。
[0011] 優(yōu)選地，將處于生長(zhǎng)指數(shù)期的所述假絲酵母菌接種于所述的曬青毛茶中。
[0012] 優(yōu)選地，所述假絲酵母菌的接種量為每克所述的曬青毛茶接種5. ΟΧΙΟ4至 1. ΟΧ1〇6個(gè)。
[0013] 優(yōu)選地，在所述接種之前，對(duì)所述的曬青毛茶進(jìn)行滅菌處理。
[0014] 優(yōu)選地，所述發(fā)酵培養(yǎng)在20-50°C的條件下發(fā)酵2-6周。
[0015] 優(yōu)選地，所述發(fā)酵培養(yǎng)在25-45Γ的條件下發(fā)酵2-4周。
[0016] 優(yōu)選地，在所述發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)，對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行補(bǔ)水。
[0017] 優(yōu)選地，在所述發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)，對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行翻堆。
[0018] 優(yōu)選地，所述假絲酵母菌為保藏編號(hào)為CGMCC No. 8682的假絲酵母菌菌株。
[0019] 本發(fā)明還提供了假絲酵母菌（Candida blankii)在普巧茶加工中的應(yīng)用。
[0020] 優(yōu)選地，所述假絲酵母菌為保藏編號(hào)為CGMCC No. 8682的假絲酵母菌菌株。
[0021] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有W下優(yōu)點(diǎn)和積極效果：
[0022] 1.本發(fā)明從渥堆普巧茶發(fā)酵樣品中分離得到假絲酵母菌（Candida blankii)， 并且首次將假絲酵母菌應(yīng)用于普巧茶的發(fā)酵加工中。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，將該假絲酵母菌接種 到大葉種曬青毛茶中，經(jīng)過一段時(shí)間的發(fā)酵后，可W得到湯色深紅略渾、甜感明顯、具有槐 花香高揚(yáng)持久特點(diǎn)的普巧熟茶。在20-50°C條件下發(fā)酵2-4周，普巧茶中的茶氨酸含量為 1. 5-2. 1 % (m/m)，茶褐素含量為7. 4-12. 4% (m/m)，可溶性糖含量為1. 2-2. 9% (m/m)，水浸 出物含量為26. 3-38. 8% (m/m)。將假絲酵母菌（Candida blankii)用于普巧茶的加工不 僅能保持普巧茶原有的品質(zhì)，而且能增加普巧茶的特殊香氣和湯色的明亮程度，而且縮短 了發(fā)酵的周期。此外，本發(fā)明通過進(jìn)一步摸索和優(yōu)化該假絲酵母菌應(yīng)用于普巧茶加工時(shí)的 發(fā)酵條件，進(jìn)一步改善了上述有益效果。運(yùn)為普巧茶滋味的豐富和新產(chǎn)品的開發(fā)提供了重 要的應(yīng)用基礎(chǔ)，對(duì)普巧茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展發(fā)揮了積極的作用。
[0023] 2.本發(fā)明提供了一種假絲酵母菌（Candida blankii)菌株，其保藏編號(hào)為CGMCC No. 8682。該菌株在普巧茶的發(fā)酵加工中尤其能夠提供上述有益效果。
[0024] 生物材料保藏信息
[00巧]本發(fā)明提供的假絲酵母菌（Candida blankii)TMCC 70011菌株已于2014年1月 6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、（CGMCC)，保藏地址：北京市朝 陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，郵編：100101,保藏編號(hào)為：CGMCC No. 8682。
【具體實(shí)施方式】
[00%] W下通過【具體實(shí)施方式】的描述對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但運(yùn)并非是對(duì)本發(fā)明的限 審IJ，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可W做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本 發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0027] 本發(fā)明一個(gè)方面提供了一種假絲酵母菌（Candida blankii)菌株（即，TMCC 70011菌株）。該菌株已于2014年1月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微 生物中屯、（CGMCC，北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)），保藏編號(hào)為CGMCC No. 8682。
[0028] 本發(fā)明所述的假絲酵母菌（Candida blankii)是一種布朗克假絲酵母菌。下文將 該假絲酵母菌（Candida blankii)統(tǒng)稱為"布朗克假絲酵母菌"。
[0029] 本發(fā)明的發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)研究，應(yīng)用羅氏高通量454測(cè)序技術(shù)和Miseq測(cè) 序技術(shù)對(duì)普巧茶不同時(shí)期的渥堆發(fā)酵樣品進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)了布朗克假絲酵母菌的存在， 之后通過純培養(yǎng)技術(shù)得到了所述TMCC 70011菌株。
[0030] 所述TMCC 70011菌株在普巧茶的渥堆發(fā)酵過程中，利用傳統(tǒng)渥堆普巧茶發(fā)酵樣 品，經(jīng)平板稀釋涂布、初篩、復(fù)篩、純化培養(yǎng)等工序而獲得。TMCC 70011菌株可使用常規(guī)的 PDA培養(yǎng)基（葡萄糖20g，±豆200g，瓊脂糖2g，蒸饋水1000血，pH自然化8-7. 3))、ISP2號(hào) 培養(yǎng)基（蛋白腺4g，葡萄糖4g，酵母浸膏5g，瓊脂糖2g，蒸饋水lOOOmL，抑自然化.8-7. 3)) 等多種培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)蘇活化。
[0031] 所述TMCC 70011菌株的形態(tài)學(xué)特征為：在ISP 2號(hào)培養(yǎng)基上培養(yǎng)48小時(shí)后觀察， 菌落整齊呈奶油色，表面濕潤(rùn)有光澤，邊緣無權(quán)皺，直徑約0. 5mm左右。顯微鏡下觀察，細(xì)胞 呈長(zhǎng)楠圓形，有假絲菌。在無氧條件下也能緩慢生長(zhǎng)，為兼性厭氧菌，生長(zhǎng)溫度在20-5(TC之 間。
[0032] 所述TMCC 70011菌株的理化特征為：
[0033] (1)對(duì)TMCC 70011菌株進(jìn)行唯一碳源或唯一氮源利用實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性的物質(zhì)如下：
[0034]
[0035] (2)TMCC 70011菌株的酶活性實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果如下：
[0036]
[0037] 通過測(cè)序，所述TMCC 70011菌株的18S rRNA基因序列如序列表中的序列1所示， ITS序列如序列表中的序列2所示。
[0038] 本發(fā)明的TMCC 70011菌株在普巧茶的發(fā)酵加工中具有特別良好的效果，其不僅 能保持普巧茶原有的品質(zhì)，而且能增加普巧茶的特殊香氣和湯色的明亮程度，得到湯色深 紅略渾、甜感明顯、具有槐花香高揚(yáng)持久特點(diǎn)的普巧熟茶。此外還能縮短發(fā)酵的周期。運(yùn)為 普巧茶滋味的豐富和新產(chǎn)品的開發(fā)提供了重要的應(yīng)用基礎(chǔ)，對(duì)普巧茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展發(fā)揮了積 極的作用。
[0039] 然而，傳統(tǒng)的普巧茶發(fā)酵需要大概6-8周的時(shí)間，且剛出堆的熟茶堆味較重，湯色 紅褐略混，需要經(jīng)過一段時(shí)間的純化才能達(dá)到較好的品質(zhì)。
[0040] 本發(fā)明另一個(gè)方面提供了一種加工普巧茶的方法，包括將分離純化的假絲酵母 菌（Candida blankii)接種于大葉種曬青毛茶中，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
[0041] 本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)當(dāng)將布朗克假絲酵母菌接種到已潮水的普巧曬青毛茶中，經(jīng) 過一段時(shí)間的發(fā)酵后，可W得到湯色深紅略渾、甜感明顯、具有槐花香高揚(yáng)持久特點(diǎn)的普巧 熟茶。將布朗克假絲酵母菌用于普巧茶的加工不僅能保持普巧茶原有的品質(zhì)，而且能增加 普巧茶的特殊香氣和湯色的明亮程度，而且縮短了發(fā)酵的周期。因此，本發(fā)明首次將純化的 布朗克假絲酵母菌應(yīng)用到了普巧茶的發(fā)酵加工中。
[0042] 本發(fā)明的布朗克假絲酵母菌是普巧茶發(fā)酵中的優(yōu)勢(shì)菌群之一，其發(fā)達(dá)的酶系對(duì)普 巧茶內(nèi)含物質(zhì)的轉(zhuǎn)化發(fā)揮著重要的作用，同時(shí)酵母還有著豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、維生 素等，運(yùn)對(duì)普巧茶品質(zhì)的形成有著重要的意義。
[0043] 優(yōu)選地，在本發(fā)明的方法中，所述大葉種曬青毛茶為已潮水的大葉種曬青毛茶。 所述已潮水的大葉種曬青毛茶的含水量?jī)?yōu)選為基于潮水之前的曬青毛茶的總重量計(jì)為 20-40% (m/m)。
[0044] 本文所用的術(shù)語(yǔ)"潮水"是指在渥堆前對(duì)曬青普巧毛茶人為加水至一定含水量。如 本領(lǐng)域已知的，大葉種曬青毛茶是由大葉種茶樹鮮葉經(jīng)攤驚、殺青、揉搶、渥黃、干燥等工序 制作而成。
[0045] 在提及已潮水的大葉種曬青毛茶的含水量時(shí)，其含水量按照W下公式計(jì)算：
[0046] 含水量=所加水的質(zhì)量/加水之前曬青毛茶的總質(zhì)量