Zoarenone在制備治療腎綜合征出血熱藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明設(shè)及化合物Zoarenone的新用途，尤其設(shè)及Zoarenone在制備治療腎綜合征 出血熱藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 世界上人類(lèi)病毒性出血熱共有13種，根據(jù)該病腎臟有無(wú)損害，分為有腎損及無(wú)腎 損兩大類(lèi)，在我國(guó)主要為腎綜合征出血熱化FRS)，又稱(chēng)流行性出血熱化HF);在朝鮮稱(chēng)朝鮮 出血熱化HF);在蘇聯(lián)稱(chēng)出血性腎病腎炎化NN);由于特異性血清學(xué)診斷的確立及病原學(xué)的 解決，1982年世界衛(wèi)生組織統(tǒng)一定名為腎綜合征出血熱。
[0003] 本病是由朝鮮出血熱病毒(或稱(chēng)漢坦病毒）引起，W鼠類(lèi)為主要傳染源的自然疫源 性疾病;可通過(guò)呼吸道、消化道、接觸傳播、母嬰傳播和蟲(chóng)媒傳播；W發(fā)熱、出血傾向及腎臟 損害為主要臨床特征的急性病毒性傳染病，典型的出血熱一般有發(fā)熱、低血壓、少尿、多尿 及恢復(fù)五期經(jīng)過(guò)，如處理不當(dāng)病死率很高;HFRS病毒的傳播幾乎遍及世界各大洲。在我國(guó)已 有半個(gè)世紀(jì)的流行時(shí)，八十年代中期W來(lái)，我國(guó)本病年發(fā)病數(shù)逾已10萬(wàn)，已成為除病毒性肝 炎外，危害最大的一種病毒性疾病。
[0004] 研究表明，腎綜合征出血熱的致病機(jī)理主要有：（1)早期發(fā)病可能是由于病毒直接 作用結(jié)果，與感染病毒株的型別、毒力、數(shù)量W及病毒結(jié)構(gòu)蛋白不同有關(guān)。本病毒為單鏈、負(fù) 性RNA型，分大化）、中(M)、小(S)S不同片段屬布尼亞病毒科的一個(gè)新屬，稱(chēng)為漢坦病毒屬， 病毒蛋白有四個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白組成，即G1、G2為包膜糖蛋白，NP為核蛋白，L蛋白可能為多聚酶。 G1、G2蛋白上存在中和抗原和血凝素抗原，并能誘導(dǎo)中和抗體；（2)由病毒啟動(dòng)的免疫損傷。 病毒在機(jī)體內(nèi)大量復(fù)制，同時(shí)刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體，并能激活補(bǔ)體系統(tǒng)產(chǎn)生組胺等活性 物質(zhì)使血管擴(kuò)張，血漿外滲進(jìn)而形成免疫復(fù)合物在血管、腎小球基底膜、血小板等表面沉 積，形成變態(tài)反應(yīng)；（3)微循環(huán)障礙。目前對(duì)腎綜合征出血熱主要采用綜合性治療，特別應(yīng)早 期抓好抗病毒治療及液體療法，對(duì)重癥患者要及時(shí)抓緊抗休克、預(yù)防出血及腎功能衰竭的 治療，早期積極地抗病毒治療，對(duì)減輕病毒損傷、阻斷病情進(jìn)展具有重要作用。迄今尚缺乏 可治愈腎綜合征出血熱的特異藥物。臨床上多采用病毒挫、干擾素等抗病毒治療，效果尚不 能肯定。因此，在臨床實(shí)踐中，發(fā)展了多種對(duì)腎綜合征出血熱有一定療效的重要或中西藥復(fù) 方制劑，臨床應(yīng)用表明，運(yùn)些藥物對(duì)緩解癥狀，減少西藥用量，或在一定時(shí)期作為主要治療 藥物等均有一定的積極作用。
[000引 本發(fā)明設(shè)及的化合物Zoarenone是一個(gè)2014年發(fā)表(Francisco Cen-化checo，et al.，Zoaramine，a Zoanthamine - like Alkaloid with a New Skeleton . Organic Letters，2014，16，2880-2883.)的新化合物，該化合物擁有全新的骨架類(lèi)型，目前的用途僅 僅涉及、冶療骨質(zhì)疏松（Francisco Cen-Pacheco，et al.，Zoaramine，a Zoanthamine-like Mkaloid with a New Skeleton.Organic Letters，2014,16,2880-2883·)，對(duì)于本發(fā)明涉 及的Zoarenone在制備治療腎綜合征出血熱藥物中的用途屬于首次公開(kāi)，由于屬于全新的 結(jié)構(gòu)類(lèi)型，而且其對(duì)于治療腎綜合征出血熱活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出 任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于腎綜合征出血熱的防治顯然具有顯著 的進(jìn)步。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有Zoarenone研究中未發(fā)現(xiàn)其具有治療腎綜合征出血熱 活性的報(bào)道的現(xiàn)狀，提供了 Zoarenone在制備治療腎綜合征出血熱藥物中的應(yīng)用。
[0007] 所述化合物Zoarenone結(jié)構(gòu)如式（I)所示：
[000引
式（[)
[0009] 本發(fā)明設(shè)及的Zoarenone在制備治療腎綜合征出血熱藥物中的用途屬于首次公 開(kāi)，由于骨架類(lèi)型屬于全新的骨架類(lèi)型，而且其對(duì)于治療腎綜合征出血熱活性強(qiáng)得意想不 到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于治療腎綜 合征出血熱顯然具有顯著的進(jìn)步。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 本發(fā)明所設(shè)及化合物Zoarenone的制備方法參見(jiàn)文獻(xiàn)(FranciSCO Cen-F*acheco， et al.，Zoaramine，a Zoanthamine-1ike Alkaloid with a New Skeleton . Organic Letters，2014，16，2880-2883·)
[0011] W下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加 W限定。
[0012] 實(shí)施例1:本發(fā)明所設(shè)及化合物Zoarenone片劑的制備：
[001引取20克化合物Zoarenone加入制備片劑的常規(guī)輔料180克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成 1000 片。
[0014] 實(shí)施例2:本發(fā)明所設(shè)及化合物Zoarenone膠囊劑的制備：
[0015] 取20克化合物Zoarenone加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉180克，混勻，裝膠囊 制成1000粒。
[0016] 下面通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明其藥物活性。
[0017] Zoarenone抗腎綜合征出血熱病毒的實(shí)驗(yàn)研究
[0018] ( - )對(duì)腎綜合征出血熱病毒體外抑制實(shí)驗(yàn)
[0019] 1 材料
[0020] (1)病毒株:國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)腎綜合征出血熱病毒76-118株，由中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院研究 所保存。實(shí)驗(yàn)用每毫升含100個(gè)病毒感染性滴度的病毒(l〇〇TCID50/ml)。
[0021 ] (2)細(xì)胞:非洲綠猴腎Vero傳代的E6克隆系，139~141代。其中含3%小牛血清維持 液。
[0022] (3)藥物:Zoarenone，各稀釋度均用維持液配制。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中設(shè)立空白對(duì)照。
[0023] 2 方法
[0024] (1)藥物對(duì)Vero E6細(xì)胞的毒性作用。將已長(zhǎng)成單層的Vero E6細(xì)胞分別W Zoarenone 在 0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、7.5、10.0ug/ml 的藥物濃度處理培養(yǎng) 2 周后， 觀察細(xì)胞形態(tài)。
[00巧](2)藥物對(duì)腎綜合征出血熱病毒侵入細(xì)胞的阻斷作用。W0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、 5.Oug/ml的藥物濃度預(yù)處理細(xì)胞12小時(shí)后，再W腎綜合征出血熱病毒攻擊，培養(yǎng)2周后用免 疫巧光法檢查。
[0026] (3)對(duì)腎綜合征出血熱病毒的直接殺滅作用。^0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、7.加邑/1111 的藥物濃度和100TCID50/0.1ml的病毒等量混合，作用不同時(shí)間后，再將其感染細(xì)胞，用免 疫巧光法檢查。
[0027] (4)對(duì)腎綜合征出血熱病毒的增殖抑制作用。病毒感染細(xì)胞24小時(shí)后，W不同的藥 物濃度加入細(xì)胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)2周后用免疫巧光法檢查。
[002引3觀察指標(biāo)
[0029] W免疫巧光法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)病毒抗原，如果感染細(xì)胞未見(jiàn)巧光陽(yáng)性，表示病毒已被 殺滅或抑制，同時(shí)計(jì)算抗病毒指數(shù)。
[0030] 4 結(jié)果
[0031] (1) 10.0 ug/ml的藥物濃度組培養(yǎng)5天后細(xì)胞顆粒增多，折光性差，細(xì)胞形態(tài)明顯改 變，部分細(xì)胞脫落，其余各濃度未見(jiàn)藥物對(duì)Vero E6細(xì)胞的毒性作用。
[0032] (2)各濃度在不同時(shí)間預(yù)先處理的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞與未用藥處理的對(duì)照組細(xì)胞均出現(xiàn) 特異性巧光，病毒感染性滴度為105/0.1ml，抗病毒指數(shù)1。表明Zoarenone不能阻斷病毒侵 入細(xì)胞。
[0033] (3)3. Oug/ml藥物濃度的Zoarenone對(duì)病毒有直接的滅殺作用，此濃度W上各組， 其感染滴度和對(duì)照組比均有顯著差異(P<〇.05)，藥物濃度增加，抗病毒作用增強(qiáng)(見(jiàn)表1)。
[0034] (4)0.加 g/ml藥物濃度的Zoarenone對(duì)病毒增殖有抑制作用，此濃度W上各組，其 感染滴度和對(duì)照組比均有顯著差異(P<〇.05)，藥物濃度增加，抗病毒作用增強(qiáng)(見(jiàn)表2)。 [00巧]表1 Zoarenone對(duì)腎綜合征出血熱病毒的直接殺滅作用(X±s)
[0036]
[0037] 與對(duì)照組比較，*p<0.05。
[003引表2 Zoarenone對(duì)腎綜合征出血熱病毒增殖的抑制作用(X±s)
[0039]
[0041 ] 與對(duì)照組比較，*p<0.05。
[0042]總結(jié)：Zoarenone對(duì)細(xì)胞的毒性作用低;對(duì)腎綜合征出血熱病毒有直接殺滅作用； 對(duì)腎綜合征出血熱病毒的增殖有明顯抑制作用，藥物濃度增加，抗病毒效力增加。
【主權(quán)項(xiàng)】
1 .Zoarenone在治療腎綜合征出血熱藥物中的應(yīng)用，所述化合物Zoarenone結(jié)構(gòu)如式 (I)所示：
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了Zoarenone在制備治療腎綜合征出血熱藥物中的新用途。Zoarenone在對(duì)腎綜合征出血熱病毒體外、體內(nèi)抑制實(shí)驗(yàn)研究顯示，Zoarenone對(duì)細(xì)胞的毒性作用低、對(duì)腎綜合征出血熱病毒有直接殺滅作用并能明顯抑制該病毒的增值；對(duì)感染該病毒的地鼠有明顯保護(hù)作用，使其發(fā)病時(shí)間推遲、病程延長(zhǎng)、死亡率降低。因此Zoarenone是治療腎綜合征出血熱有效、安全的藥物。
【IPC分類(lèi)】A61K31/56, A61P31/14, A61P13/12
【公開(kāi)號(hào)】CN105596351
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510756937
【發(fā)明人】田麗華
【申請(qǐng)人】淄博齊鼎立專(zhuān)利信息咨詢(xún)有限公司
【公開(kāi)日】2016年5月25日
【申請(qǐng)日】2015年11月10日